专利名称：Asia 1型口蹄疫抗体水平检测试纸及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种快速检测用的检测物，具体讲是一种用于偶蹄类动物Asia 1 型口蹄疫抗体水平进行快速检测的试纸条，这种试纸条的制备，以及用这种纸 条对偶蹄类动物Asial型口蹄疫抗体水平进行具体检测的方法。
背景技术：
口蹄疫(Foot-and-Mouth， FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、 高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疫病。侵染对象是猪、牛、羊等主 要畜种及其他家养和野生偶蹄动物，易感动物多达70余种。口蹄疫的发病率为 100%，爆发可使农场破产，发病地区和国家的畜牧业乃至整个国民经济遭受巨 大打击。因此，世界动物卫生组织(OIE)将该病列在15个A类动物疫病之首， 我国政府也将口蹄疫排在14个一类动物传染病的第一位。鉴于口蹄疫可造成的巨大经济损失和社会影响，各国政府都非常重视口蹄 疫的防治研究，我国也有专门的机构研究口蹄疫。但口蹄疫病毒的变异性极强， 目前有7个血清型，Asia I型被发现的最晚，因其血清型病毒分离于亚洲而得 以冠名。尽管Asia I型口蹄疫在世界已流行近50年，但基本只流行于亚洲较 贫穷国家，由于这些国家的经济实力与科技水平较低，对AsiaI型的流行传播 特点及病毒生物学特征研究较少，有参考价值的资料缺乏。目前Asial型口蹄 疫的流行呈现上升趋势，简单、快速、有效的免疫抗体水平监测方法，是防治 口蹄疫爆发和流行的保障，也是制定口蹄疫免疫程序的重要依据。由于口蹄疫 病毒7种血清型间不能交叉免疫，等于面对7种不同的传染病。同型内不同的 病毒株的抗原性也不同，而新毒株又不断出现，这就使得口蹄疫的防治包括疫 苗防治工作产生极大的困难。现采用的抗体检测方法主要有CFT、 VNT、凝集试验、免疫扩散和ELISA 等，其中最常用于FMDV抗体检测的方法是VNT和ELIS A方法。VNT诊断FMD 方法准确、可靠，但要动用活毒，需要在专门的实验室进行试验，而且工作量 大、实验周期长。液相阻断ELISA具有与VNT相同的灵敏度和特异性，且重复 性好，尤其适合于大批量血清样品的检测。是国际认可的一种标准化诊断技术。但该方法同样操作繁复，而且需要相应的检测设备才能判定结果，面对我国基 层检测机构及广大的畜禽养殖场缺少检测设备与专业技术人员的现状，发展一 种快速、简便、无需专业人员和仪器，可在野外、田间进操作的新型诊断方法 已成为一项急需解决的课题。中国发明专利申请200610043143.6公开了一种口蹄疫病毒定型试纸条及其 制备和使用方法。该专利申请是由O、 A、 Asia I、 C四种血清型检测试纸条组 成，试纸条由PVC衬板、硝酸纤维素膜、吸收垫、金标垫、样品垫部分组成， 所述PVC衬板设在最底部，衬板上部中段设有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上 部左端贴有吸收垫，硝酸纤维素膜上部右端设有金标垫，金标垫的上部右端设 有样品垫。该试纸条可以用于确定口蹄疫病毒的O、 A、 Asia I、 C型四种血清 型抗原，以确定被检动物是否感染口蹄疫病毒。该试纸条操作快速简便，判定 直观容易，结果敏感特异，费用低廉，运输保存方便，非常适用于基层人员在 田间检测使用。但这一专利申请所公开的试纸条却无法检测被检动物经人工免 疫或自然免疫产生抗体的水平，以及免疫动物抗体与保护力的关系。由于FMD流行带来的严重危害性，目前发达国家大多采取扑杀销毁的措施， 而发展中国家以疫苗免疫接种为主要手段。FMDV抗原变异频繁，亚型之间的 抗原差异性也很大，因此往往造成诊断困难。制备诊断抗原应近可能与FMDV 的分子流行病学的研究为基础。为避免口蹄疫病毒的大面积流行，对人工饲养的偶蹄类动物进行人工免疫 是现发展中国家多采用的方法。经人工免疫后，被免疫动物是否产生抗体，能 否有效抵抗病毒的感染，需要提供一种有效快捷的手段进行检测。口蹄疫疫苗免疫动物血清抗体效价与攻毒保护具有相关性，己在国内外许 多实验室得到验证，数十年前就证实了免疫动物中和抗体滴度与攻毒保护有很 好的相关性，其最高的相关性在免疫后3-4周的牛和猪血清抗体检测中得到验 证，后期要达到与前期相同的保护程度，则需要加强免疫，获得更高的抗体滴 度。因此确定免疫动物抗体效价与保护力的关系，对于田间动物的免疫效力评 价具有实际意义。发明内容本发明提供一种可克服现有技术不足，可以以对偶蹄类动物亚洲1型(Asia1) 口蹄疫抗体水平进行快速检测的试纸条，同时提供这种试纸条的制备方法和 使用方法。本发明的检测试纸条是在一不透水材料的底板上呈线性排列固定于其上 的用多孔纤维材料构成的加样吸收垫、位于加样吸收垫尾端并与加样吸收垫相 连的免疫金标层、与免疫金标层的尾端相连由硝酸纤维膜构成的检测段和位于 检测段尾端与检测段相连的用吸水材料构成的吸收段，检测段上包被有用抗Asia 1型口蹄疫病毒的兔或豚鼠IgG抗体形成的质控线，检测段上处于质控线的 上游包被有Asia 1型口蹄疫病毒形成的检测线，检测段的检测线和免疫金标层 吸附的胶体金标记的Asia 1型口蹄疫病毒是天然病毒，或者是基因重组表达口 蹄疫病毒，或者是口蹄疫病毒的分解抗原。本发明的检测试纸条的检测线和免疫金标层的Asia 1型口蹄疫病毒最好是 天然全病毒。本发明的检测Asial型口蹄疫抗体水平检测试纸条的制备方法是首先制 备出15 50纳米的胶体金溶液，然后1) 制备免疫金标层先将胶体金溶液的pH值调至8.0 8.4，再在其中按每100ml胶体金溶液加 入0.1 0.4mg经纯化处理的Asial型口蹄疫全病毒，搅拌均匀后，再在溶液中 按0.2 lg/100ml加入动物血清蛋白，4。C静置2 4小时，再将上述胶体金溶液 离心去除沉淀物，得上清液，将上清液再经离心处理得沉淀物，所得沉淀物按4 10ml/100ml溶于含重量比0.2 0.6%的动物血清蛋白和0.01 0.06%叠氮钠的 0.02M pH7.4 Tris-Hcl的缓冲液中得到胶体金标记的病毒溶液，将胶体金溶液浸 入玻璃纤维至液体开始渗出为止，或者采用喷膜机将前述的Asial型口蹄疫全 病毒与动物血清蛋白和叠氮钠的缓冲液喷在玻璃纤维上，形成金标抗体层，将 金标抗体层进行干燥处理后待用；2) 制备检测段用喷膜机在硝酸纤维素膜中段喷检测线，再取兔抗或鼠抗Asia 1型口蹄疫 IgG调浓度为1.5 2.5mg/ml，，用喷膜机在纤维素膜中段，距检测线0.5 lcm 处，喷质控线，喷膜量按10 15ul/lcm设置，然后干燥处理，再用0.01mPH7.0 含小牛血清的磷酸缓冲液在37r下封闭30分钟，O.Olml pH7.0的PBS漂洗后再次进行干燥处理，得到检测段待用； 3)试纸组装将不透水材料的底板材料、金标抗体层、检测段及吸收垫材料和吸收段材 料分别按设计长度裁取，依次将金标抗体层、检测段及吸收垫材料和吸收段固 定于底板材料上，制成试纸条。组装时应注意使检测段的检测线靠近试纸条的 加样吸收垫一侧。本发明的试纸条制备方法中采用蔗糖密度梯度离心来纯化口蹄疫病毒。 本发明的Asia 1型口蹄疫抗体水平检测试纸条的使用方法是是取牛、羊、 猪等偶蹄类动物血液或血清，将血液或血清用磷酸缓冲液稀释，再将经稀释的 血液或血清滴于加样端样品吸收垫，或者将加样端吸收垫插入被检动物的血液 或血清稀释液中，然后观察检测线和质控线的阳性结果，得到被检测动物是否 具有抗体的结果。本发明的检测Asia 1型口蹄疫抗体水平检测试纸条使用中，如果是取牛、 羊、猪等偶蹄类动物血液或血清用pH7.4 0.02M磷酸缓冲液稀释，将经稀释的 血液或血清滴于加样端样品吸收垫，或者将加样端吸收垫插入被检动物的血液 或血清稀释液中，如果血清在^1:16稀释后，检测层硝酸纤维素膜上形成质控 线和检测线双线阳性结果，则表示该检测血清该检测血清Asia l型口蹄疫抗体 水平达到99%保护范围，被检动物能耐受同源强毒攻击，不需要进行免疫；如 果被检测血清在《1:4稀释后，则表示该检测血清Asial抗体水平属于不保护范 围，被检动物不能耐受同源强毒攻击，需要进行基础免疫；如被检测血清在1:4 ~1:16之间稀释后，检测层硝酸纤维素膜上形成质控线和检测线双线阳性结果， 则表示该检测血清Asia 1型口蹄疫抗体抗体水平属于50%保护范围，被检动物 不能完全耐受同源强毒攻击，需要进行加强免疫。由前述内容可知，本发明的试纸条中，检测段的检测线和免疫金标层吸附 的胶体金标记的Asia 1型口蹄疫病毒可以是基因重组表达口蹄疫病毒，或者是 口蹄疫病毒的分解抗原。采用基因重组表达抗原具有如下优点重组DNA技术 生产的抗原较之从其他生物源分离的抗原有诸多的优越性，如纯度高，特异性 强。由于蛋白是在遗传修饰实验室生长细胞中合成的，故每批蛋白制品与前一 次制备是相同的，可以保证各批次质量一致。自然抗原很少有完全纯净的，往往会产生针对污染多肽的抗体，而导致产生假阳性结果，而采用基因重组表达 病毒能完全避免这些问题。本发明认为最好使用Asia 1型口蹄疫全病毒纯化抗原作为中和抗体水平的 检测抗原。资料显示FMDV的免疫原性主要取决于完整的病毒粒子。在FMDV 粒子表面的抗原位点有线性位点和构象位点两种。前者主要与表位的一级结构 (氨基酸序列)有关，而后者主要与病毒结构有关，对FMDV抗原位点的研究 表明，FMDV的结构蛋白均参与抗原位点的构成，其线性位点少，构象位点多。 而表达抗原多选用FMDV某一段基因序列，使用的是其线性位点。同时利用原 核或真核系统表达，产生的蛋白与天然蛋白构象差异很大，特别是抗原决定簇 重要的糖基化位点不能得到很好的修饰，使其免疫原性较差，不能很好的产生 中和抗体，这也是现在多数重组抗原不能替代全病毒抗原作为疫苗生产的原因。 而作为诊断动物免疫或感染产生中和抗体水平的检测抗原，其必须具备充分的 抗原决定簇和完整构象位点才能更好的捕获血清中的抗体，并与其进行特异性 反应，以提高其检测的灵敏度。另一方面，Asial型口蹄疫天然全病毒纯化生产工艺简单，大规模细胞培 养技术成熟稳定，纯化过程简单易行，得到的抗原效价稳定。由于本专利使用 了蔗糖密度梯度离心来纯化病毒，使诊断抗原具有较好的特异性和敏感性，同 时保存方便。本发明制备诊断抗原即采用了近可能与国内FMDV的分子流行病学的研究 为基础的Asial型口蹄疫全病毒，克服了FMDV抗原变异频繁，亚型之间的抗 原差异性大，易造成诊断困难的不足。其次，本发明的试纸条不仅可以半定量 检测出免疫或感染动物的(免疫)抗体水平，同时可确定免疫动物抗体效价与 保护力的关系，这是现有技术不能胜任的。本发明具有如下优点1、 本发明首次用口蹄疫天然全病毒标记胶体金颗粒，建立了可检测Asial 型口蹄疫抗体水平的试纸条，可对血液或血清中的Asial型口蹄疫抗体水平进行 快速检测。2、 本发明与目前监测抗体水平的病毒中和试验，正向间接血凝试验，及液相阻断ELISA相比，检测样品仅需15分钟即可判定结果。具有检测过程迅速、 快捷、方便，无须配备专门仪器设备和技术人员，结果判定直观容易等优点。 非常适于兽医基层工作人员进行临床检验、流行病学调查和场地检疫等多种场 合，同时还可在口岸通关大批量快速检验时使用。3、 本发明特异性、再现性好，结果稳定。可应用于猪、牛群等O型口蹄疫 抗体水平监测，了解整个猪、牛群口蹄疫抗体的状况，为决定是否开展免疫， 选择制定Asial型口蹄疫疫苗适宜的免疫剂量、程序提供依据。4、 本发明使用安全，无放射性同位素与苯二胺等有害物质参与，没有生物 安全隐患。，不会污染环境。5、 本发明质量稳定，具有可在常温运输保存的优点。6、 本发明制备方法简便、成本低廉，检测费用低。
图l为本发明的试纸条整体示意图。图2为试纸条纵向结构的示意图，其 中的4端位于图1中的2的位置。图3为试纸条结果判定图。图4为120头免 疫牛金标试纸条检测抗体效价与同源强毒攻毒保护/发病分布图；图中空条表 示发病；点状条表示部分保护；实条表示完全保护。
具体实施方式
以下提供发明的具体实施例。(一)试纸条的制备 1)制备免疫金标层i胶体金的制备取100mg氯金酸溶于1000ml三蒸水中，加入20ml浓度 为1%的柠檬酸三钠，煮沸15分钟，冷却后得到40纳米的胶体金溶液；ii胶体金标记细胞培养口蹄疫病毒，取100ml胶体金溶液，用0.2mol/L碳 酸钾溶液调PH8.0，加入0.15mgAsial型口蹄疫全病毒，搅拌20分钟，再加入 500mg牛血清蛋白，继续搅拌15分钟，4。C静置2小时，这里所用的Asia 1型 口蹄疫全病毒可以是经纯化的天然病毒，也可以是基因重组表达Asia 1型口蹄 疫病毒再经过差速离心或蔗糖密度梯度离心纯化；iii将上述胶体金溶液经2000转/分钟离心10分钟，去沉淀物，得上清液；iv将上清液经10000转/分钟离心60分钟，得沉淀物；v将沉淀物按6ml/100ml溶于0.02M PH7.4 Tris-Hcl缓冲液得到胶体金溶 液，该缓冲液中含0.25%的牛血清白蛋白和0.02%叠氮钠；vi将胶体金溶液浸入玻璃纤维或无纺布至液体开始渗出为止，在37'C下2 小时干燥而形成免疫金标层。免疫金标层的制备也可以采用在玻璃纤维上用喷膜机喷膜的方法，其喷膜 量应保证胶金溶液的最终浓度符合要求。2) 检测层制备这一阶段主要是制备形成检测段8的质控线6和检测线7的包被。所述的 检测段8是在纤维膜上形成基因表达口蹄疫病毒构成的检测线和抗口蹄疫病毒 兔lgG抗体形成的质控线6。其制备方法是取基因表达口蹄疫全病毒，调整浓度 为0.1mg/ml，用喷膜机在纤维素膜中段喷检测线7;再取兔抗口蹄疫IgG调浓度 为1.5mg/m1，，用喷膜机在纤维素膜中段，距检测线0.5cm处，喷质控线6，按 喷膜量10pl/lcm进行喷膜，喷膜温度为37'C。喷膜后干燥2小时，再用O.Olm PH7.0含小牛血清的PBS，在37。C下封闭30分钟，用0.01ml PH7.0的PBS漂 洗，再在37"C干燥处理。3) 试纸条组装本阶段是在衬板IO上组合口蹄疫病毒金标层和检测段，最终形成试纸条。 将不透水材料的底板材料、金标抗体层、检测段及吸收垫材料和吸收段材 料分别按设计长度裁取，依次将金标抗体层、检测段及吸收垫材料和吸收段固 定于底板材料上，组装成试纸条。组装中所采用的不透水材料为PVC塑料板， 加样吸水层采用玻璃纤维。在塑料垫板10的两端分别粘贴玻璃纤维的加样端吸 收垫4和吸水层9;在其中段粘贴包被有检测线7和质控线6的硝酸纤维膜层8，' 在加样端吸水层4与硝酸纤维素膜层8的交接部位，夹贴含免疫金标层5的玻 璃纤维的一端沿其长度的1/5部分应与加样端吸水纸层4相重叠，其另一端沿其 长度的1/5应与纤维素膜层8相重叠，以保证免疫金标层与其两端的所设的加样 层4、检测段8间有良好的接触。然后按4mm宽、8cm长规格切条，再组装在 塑料盒内。盒盖上加样孔2正对测试条的加样端吸水纸层4，观察孔3正对纤维 素膜的检测层8。所制成的试纸条结构参见附图1和附图2。本发明的试纸条制备方法中对天然病毒建议采用蔗糖密度梯度离心来进行 纯化处理。本发明的试纸条采用疫苗效力检验的国际标准方法PD5o测定法，采用国际标准攻毒方法攻毒，测定了 Asia 1型口蹄疫金标试纸条检测抗体效价与保护力 的关系。试验所用疫苗为免疫用口蹄疫Asia l型疫苗，为兰州兽医研究所生物制品 厂生产，攻毒用口蹄疫Asial型毒株为疫苗同源强毒株。1 Asia 1型口蹄疫抗体检测试纸条操作步骤及判定标准1. 2待检样品的处理将待检血清用0.02 mol/LPBS作对倍稀释， 分别稀释1:4、 1:8、 1:16三个稀释度。1. 2样品检测将Asia l型抗体检测试纸条插入到每个稀释度样品中。 注意将试纸条有标志线的一端插入待检样品中，样品液面不可超过标志线。当 液体全部浸湿硝酸纤维素膜后，取出试纸条，平放于干净的桌面上，5-15分钟 内观察结果。1. 3单支试纸条结果判定阳性质控带与检测带都出现清晰可见红色条带。血清中的抗体水平越高， 检测带红色带颜色越深。(++:强阳性清晰可见的红色；+:肉眼可见的红色) 阴性只有质控带出现清晰可见红色条带。可疑质控带出现一条颜色清晰可见的红色线，而在检测带出现一条颜色 很浅，若隐若显的红色带。无效质控带不出现红色条带。 以上参见附图3。2. 4血清效价判定试纸条抗体效价^稀释度试纸条在该抗体稀释度显示阳性结果。 试纸条抗体效价《稀释度试纸条在该抗体稀释度显示阴性或可疑结果。 试纸条抗体效价=无效试纸条在该抗体稀释度显示无效结果。 2攻毒试验所用动物为牛。对120头免疫用牛在免疫前用液相阻断ELISA进行了检测， 均为口蹄疫Asial型和O型抗体阴性牛。血清样品及试验方法120份不同剂量免疫牛血清样品，采自4批疫苗PD50测定免疫21日牛。 疫苗PDso测定疫苗免疫剂量分别为2ml (全剂量)，0.67ml (1/3剂量)， 0.22ml (1/9剂量)。每个剂量5头牛，肌肉注射，免疫第21日采血，然后用同 源强毒10000ID5。攻毒，舌面注射2点，O.lml/点。观察12日，以蹄部出现水泡 等临床症状判为发病。按Karber法计算50%保护剂量(PD50)。 3结果120份不同剂量免疫牛第21日血清样品试纸要抗体滴度和同源强毒 10000IDs。攻毒后免疫牛保护与发病状况见图4。图4显示了动物免疫后21日，用同源强毒10000ID5o攻击，ELISA滴度各个 范围内保护与未保护数。由图4.4可见，试纸条抗体滴度^1:16时，免疫动物能 耐受同源强毒10000ID5。攻击，属于全部保护范围，ELISA抗体滴度《1:4时， 免疫动物不能耐受同源强毒lOOOOIDso攻击，属于不保护范围；介于两者之间， 即试纸条抗体滴度在1:4-1:16时，免疫动物不能完全耐受同源强毒100001050攻 击，属于不完全保护范围。4 讨论用PD5o进行疫苗效力检验，是国际动物卫生组织(OIE)推荐的标准方法， 我们采用疫苗效检PD5。试验方法，通过对120份不同免疫剂量免疫牛血清样品 的测定，确定了口蹄疫Asia 1型金标试纸条抗体滴度与保护的关系。用同源强 毒10000ID5。攻击，试纸条抗体滴度^1:16时免疫动物能耐受同源强毒10000ID50 攻击，属于全部保护范围，试纸条抗体滴度《1:4时，免疫动物属于不完全保护 范围，免疫动物不能耐受同源强毒攻击，需要进行基础免疫；试纸条抗体滴度 在l:4 kl6时，免疫动物既有发病，也有保护，不能完全耐受同源强毒攻击， 需要加强免疫，这一区域属于不完全保护范围，称为50%以上保护区。
权利要求
1、一种Asia 1型口蹄疫抗体水平检测试纸条，包括呈线性排列的固定于不透材料制成的底板上的用多孔纤维材料构成的加样吸收垫、位于加样吸收垫尾端并与加样吸收垫相连的免疫金标层、与免疫金标层的尾端相连由硝酸纤维膜构成的检测段和位于检测段尾端与检测段相连的用吸水材料构成的吸收段，检测段上包被有用抗Asia 1型口蹄疫病毒的兔或豚鼠IgG抗体形成的质控线，其特征在于检测段上处于质控线的上游包被有Asia 1型口蹄疫病毒形成的检测线，检测段的检测线和免疫金标层吸附的胶体金标记的Asia 1型口蹄疫病毒是天然病毒，或者是基因重组表达口蹄疫病毒，或者是口蹄疫病毒的分解抗原。
2、 根据权利要求1所述的检测Asia 1型口蹄疫抗体水平检测试纸条，其特 征在于构成检测线和免疫金标层的Asia 1型口蹄疫病毒是天然全病毒。
3、 根据权利要求1或2所述的检测Asia 1型口蹄疫抗体水平检测试纸条的 制备方法，首先制备出15 50纳米的胶体金溶液，其特征是1) 制备免疫金标层先将胶体金溶液的pH值调至8.0 8.4，再在其中按每100ml胶体金溶液加 入0.1 0.4mgAsial型口蹄疫病毒，搅拌均匀后，再在溶液中按0.2 lg/100ml 加入动物血清蛋白，4"C静置2 4小时，再将上述胶体金溶液离心去除沉淀物， 得上清液，将上清液再经离心处理得沉淀物，所得沉淀物按4 10ml/100ml溶于 含重量比0.2 0.6%的动物血清蛋白和0.01 0.06%叠氮钠的0.02M pH7.4 Tris-Hcl的缓冲液中得到胶体金标记的病毒溶液，将胶体金溶液浸入玻璃纤维至 液体开始渗出为止，形成金标抗体层，将金标抗体层进行干燥处理后待用；2) 制备检测段用喷膜机在硝酸纤维素膜中段喷检测线，再取兔抗或鼠抗Asia l型口蹄疫 IgG调浓度为1.5 2.5mg/ml，，用喷膜机在纤维素膜中段，距检测线0.5 lcm 处，喷质控线，喷膜量按10 15ul/lcm设置，然后干燥处理，再用0.01mPH7.0 含小牛血清的磷酸缓冲液在37i:下封闭30分钟，O.Olml pH7.0的PBS漂洗后再 次进行干燥处理，得到检测段待用；3) 试纸组装将不透水材料的底板材料、金标抗体层、检测段及吸收垫材料和吸收段材料分别按设计长度裁取，依次将金标抗体层、检测段及吸收垫材料和吸收段固 定于底板材料上。
4、 根据权利要求3所述的制备方法，其特征是采用蔗糖密度梯度离心纯化 Asial型口蹄疫天然病毒。
5、 权利要求1或2所述的检测Asia 1型口蹄疫抗体水平检测试纸条的使用 方法，其特征是取牛、羊、猪等偶蹄类动物血液或血清，将血液或血清用磷酸 缓冲液稀释，再将经稀释的血液或血清滴于加样端样品吸收垫，或者将加样端 吸收垫插入被检动物的血液或血清稀释液中，然后观察检测线和质控线的阳性 结果。
6、 根据权利要求5所述的使用方法，其特征是将采集的被检动物血液或血 清用pH7.4 0.02M磷酸缓冲液稀释，将经稀释的血液或血清滴于加样端样品吸 收垫，或者将加样端吸收垫插入被检动物的血液或血清稀释液中，如果血清在 21:16稀释后，检测层硝酸纤维素膜上形成质控线和检测线双线阳性结果，则表 示该检测血清Asia 1型口蹄疫抗体水平达到99%保护范围；如果被检测血清在 3:4稀释后，检测层硝酸纤维素膜上形成质控线单线阴性结果，则表示该检测 血清抗体水平属于不保护范围；如被检测血清在1:4 1:16之间稀释后，检测层 硝酸纤维素膜上形成质控线和检测线双线阳性结果，则表示该检测血清Asia 1 型口蹄疫抗体水平属于50%保护范围。
全文摘要
本发明涉及一种用于对偶蹄类动物Asia 1型口蹄疫抗体水平进行快速检测的胶体金试纸条，这种试纸条的制备，以及其具体检测的方法。试纸条的底板上固定有多孔纤维材料构成的加样吸收垫、位于加样吸收垫尾端并与加样吸收垫相连的免疫金标层、和由硝酸纤维膜构成的检测段，以及位于检测段尾端与检测段相连的用吸水材料构成的吸收段，质控线为抗Asia 1型口蹄疫病毒的兔或豚鼠IgG抗体，检测线包由Asia 1型口蹄疫病毒构成，检测段的检测线和免疫金标层吸附的胶体金标记的Asia 1型口蹄疫病毒是天然病毒，或者是基因重组表达口蹄疫病毒，或者是口蹄疫病毒的分解抗原。
文档编号G01N33/52GK101241138SQ20071019466
公开日2008年8月13日 申请日期2007年11月29日 优先权日2007年11月29日
发明者任维维, 刘在新, 刘湘涛, 刘西兰, 卫广森, 军 张, 才学鹏, 智晓莹, 杨亚民, 仲 梁, 王超英, 祁光宇, 翟国元, 韬 蒋, 涓 陈 申请人:中国农业科学院兰州兽医研究所