专利名称：：使用连接寡核苷酸调节tlr介导的免疫应答的利记博彩app
技术领域：
：本发明涉及使用特定的核酸调节TLR介导的免疫应答。
背景技术：
：与细菌DNA中的某些基序的反应为天然免疫的重要功能。长期以来已知细菌DNA对哺乳动物B淋巴细胞(B细胞)而言为促有丝分裂的，而哺乳动物DM—般不是这样。这一免疫识别定向于位于包含未甲基化的CpG二核苷酸的基序上中心位置的特异性DNA序列的发现打开了通向分子免疫学手段的领域。KriegAM等(1995)374:546-9。可以使用包含某些优选侧翼序列范围内的CpG二核苷酸，即CpG基序的合成寡脱氧核苷酸(ODN)再现所谓的CpGDNA的免疫刺激作用。已经报道了含CpG的ODN(CpG-ODN)对免疫系统的各种类型的细胞发挥许多作用，包括防止初级B细胞发生细胞凋亡，促进细胞周期进入和使免疫应答偏向于Thl-类免疫应答，例如，诱导白细胞介素6(IL-6)，白细胞介素12(IL-12)，Y干扰素(IFN"7)，活化抗原特异性溶细胞T淋巴细胞(CTL)和诱导小鼠的IgG2a。近来已经报道了CpGDNA的免疫调节作用涉及通过Toll样受体9(TLR9)进行信号传导。认为CpGDNA经序列非特异性途径摄入细胞并且输送至内体区室，其中它与TLR9以序列特异性方式发生相互作用。TLR9信号传导途径导致大量免疫功能相关基因诱导，包括值得注意的NF-icB。TLR为识别存在于病原体中的特异性分子结构的大受体家族(病原体相关分子模式或PAMP)并且也称作模式识别受体(PRR)。表达PRR的免疫细胞在识别PAMP时被活化并且引起最佳适应免疫应答产生。已经描述了由IO种不同的TLR亚型TLR1-TLR10组成的PRR。已经描述了这类TLR参与识别双链RM(TLR3)，脂多糖(LPS)(TLR4)，细菌鞭毛蛋白(TLR5)，小抗病毒化合物(TLR7和TLR8)和细菌DNA或CpG0DN(TLR9)。(参见Uhlmann等的综述(2003)C"rrZ7/"or/ere/6:204-17)。此外，已经鉴定了认为与和通过TLR7和TLR8与信号发生相互作用的RNA分子(参见国际专利申请PCT/US03/10406)。认为这类免疫刺激RNA分子具有包括至少一个鸟嘌呤和至少一个尿嘧啶的碱基序列。富含G，U的免疫刺激RNA无需如对TLR9所述的CpG基序。认为实际发现的相应RNA分子类别存在于核糖体RM(rRNA)，转移RNA(tRNA)，信使RNA(mRNA)和病毒RNA(vRNA)中。在发现免疫刺激CpGDNA后，出现了大量描述具有免疫抑制作用的短DM序列的报道。已知聚-G序列为免疫抑制性的。公布的PCT专利申请WO00/14217中描述了包含抑制基序M2GN3G的ODN，其中N"&和&中的至少两种为G(鸟苷)。Krieg和同仁描述了一组具有3或4个连续G的抑制性15-merODN,它们可阻断刺激性ODN诱导的细胞凋亡保护和细胞周期进入。LenertP等(2001)j/2〃s謝e铷/e/cZr"g/7er11:247—56;StunzLL等(2002)///mz/u/zo/32:1212-22;LenertP等(2003)h〃se雄肠/e/c爿c//e卩13:143-50。据报道这些ODN的免疫抑制作用对CpG-ODN具有特异性并且涉及非单纯竟争细胞摄取的机制。StunzLL等(2002)fwr///mzzw/zo/32:1212-22。Klinman和同仁独立地报道了单免疫抑制性ODN。ZeunerRA等(20(J2)^rMr/〃VA力e咖46:2219-24;YamadaH等(2002)169:5590-4。发明概述本发明提供了调节TLR介导的免疫应答的方法和组合物，包括抑制某些应答，加强其它应答或其某些组合。本发明部分涉及如下发现某些寡核苷酸显然能够改变TLR配体的TLR信号传导特性。因此，按照一个实施方案，这些"连接"寡核苷酸能够主要将TLR7配体转化成TLR8配体，而按照另一个实施方案，它们主要将TLR7/8配体转化成TLR8配体。因此，本发明在一个方面中提供了刺激TLR8介导的免疫应答的方法，包括对有此需要的受试者给予有效刺激TLR8介导的免疫应答的用量的TLR7/8配体和连接寡核苷酸。本发明在另一个方面中提供了使TLR7介导的免疫应答重定向为TLR8介导的免疫应答的方法，包括对经历TLR7介导的免疫应答的受试者给予有效使TLR7介导的免疫应答重定向为TLR8介导的免疫应答的用量的连接寡核苷酸。本发明在另一个方面中提供了包含TLR7/8配体和连接寡核苷酸的組合物。在一个实施方案中，TLR7/8配体为TLR7配体，诸如TLR7特异性配体。TLR7配体可以为鸟苷类似物，诸如，但不限于C8-取代的鸟苷。TLR7配体可以为3M-001。TLR7配体可以为基于腺普的化合物，诸如，但不限于6-氨基-9-千基-2-(3-羟基-丙氧基)-9H-噤呤-8-醇或6-氨基-9-苄基-2-丁氧基-9H-嘌呤-8-醇。TLR7配体可以为7-脱氮杂-鸟苷。C8-取代的鸟苷的实例包括7-烯丙基-7，8-二氢-8-氧代-鸟苷(洛索立宾)，7-硫杂-8-氧代鸟普(immunosine，艾沙托立宾，AM245,7-硫杂-8-氧代-7，8-二氢鸟苷，5-氨基-3-(P-D-呋喃核糖基)-3H，6H-噢唑[4，5-d]嘧啶-2,7-二酮)，8-巯基鸟苷，8-溴鸟普，8-曱基鸟苷，8-氧代-7，8-二氢鸟苷，C8-芳氨基-2'-脱氧鸟苷，C8-丙炔基-鸟苷，C8-和N7-取代的鸟噪呤核糖核苷，7-曱基-8-氧代鸟苷，8-氨基鸟苷，8-羟基-2'-脱氧鸟苷，7-脱氮杂-8-取代的鸟苷和8-羟基鸟苷。在某些实施方案中，C8-取代的鸟苷为洛索立宾，immunosine或7-脱氮杂鸟苷。在另一个实施方案中，TLR7/8配体为TLR8配体，包括TLR8特异性配体。TLR8配体可以为3M-002。在配体为TLR8配体的实施方案中，TLR8介导的免疫应答可以比没有连接寡核苷酸存在下获得的免疫应答水平增强至少2-倍，3-倍，4-倍，5-倍，10-倍，15-倍，20-倍或20-倍以上。在另一个实施方案中，TLR7/8配体为TLR7配体TLR8配体。这类TLR7/8配体的实例为咪唑并喹啉。咪唑并喹啉类的实例包括咪唑并喹啉胺，咪唑并吡啶胺，6,7-稠合的环烷基咪唑并吡啶胺，1，2桥连咪唑并喹啉胺，R-848(S-28463或瑞喹莫德)，4-氨基-2乙氧基甲基-a，a-二曱基-lH-咪唑并[4，5-c]喹啉-l-乙醇，1-(2-曱基丙基)-IH-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺(R-837或咪喹莫特)或S-27609。在某些重要的实施方案中，咪唑并会啉为R848。TLR7/8配体可以为3M-003。在配体为TLR7和TLR8配体的实施方案中，TLR8介导的免疫应答可以比没有连接寡核苷酸存在下获得的TLR8介导的免疫应答水平增强至少2-倍，3-倍，4-倍，5-倍，10-倍，15-倍，20-倍或20-倍以上。在一个实施方案中，连接寡核苷酸包含式5'X-N广X3'或式5'X-N43'，其中X可以为任何核苷酸并且可以存在或不存在且化和Ns表述4或5个连续的T(胸苷)，U(尿嘧咬)或A(腺嘌呤)，使得N4或Ns中的每个N相同。根据实施方案的不同，寡核苷酸为7,8，9，10，11，12,13，14，15，16，17或17个以上核苷酸长度。在重要的实施方案中，它包含至少一个硫代磷酸酯核苷酸间键(直到并且包括完全硫代磷酸化主链)。在一个相关的实施方案中，连接寡核苷酸包含式5'Xa-TTTTT-Xb3'，其中Xa和Xb可以独立为任何核苷酸并且可以存在或不存在。Xa和Xb可以为一个或多个核苷酸(例如，1-IOO个核苷酸)。在一个实施方案中，寡核苷酸包含6，7或7个以上连续的T。在一个重要的实施方案中，连接寡核苷酸为(dT)均聚物，其任选为17个核苷酸长度。在另一个实施方案中，连接寡核苷酸包含式5'Xa-UUUUU-Xb3、其中Xa和Xb可以独立为任何核苷酸并且可以存在或不存在。L和Xb可以为一个或多个核苷酸(例如，i-ioo个核苷酸)，在一个实施方案中，寡核苷酸可以包含6，7或7个以上连续的U。在一个重要的实施方案中，寡核苷酸为尿嘧啶(dU)均聚物，其任选为17个核苷酸长度。在另一个实施方案中，连接寡核苷酸包含式5'Xa-AAAAA-Xb3'，其中Xa和Xb可以独立为任何核苷酸并且可以存在或不存在。Xa和Xb可以为一个或多个核苷酸(例如，i-ioo个核苷酸)。在一个实施方案中，寡核苷酸可以包含6，7或7个以上连续的A。在一个重要的实施方案中，寡核苷酸为腺嘌呤(dA)均聚物，其任选为17个核苷酸长度。在另一个实施方案中，连接寡核苷酸包含式5'Cn-Tffl-Cp3、其中n为0-100的整数，p为0-100的整数和m为0-100的整数。在一个实施方案中，n和p之和为等于或低于m的值，使得整个寡核苷酸的C含量为50%,低于50%，低于45%，低于40%，低于35%，低于30%,低于25%,低于20%，低于15%，低于10%,低于5%或更低。在某些实施方案中，n在3-7，m在2-10且p在4-8，只要满足上述百分比。实例包括5'"1\。(;43'(SEQIDNO:1)和5'。1^53'(SEQIDNO:2)。连接寡核苷酸包含CpG基序或它可以缺乏这样的基序。该基序可以为未甲基化的CpG基序。在一个实施方案中，对受试者分别给予TLR7/8配体和连接寡核苷酸。在这些和其它实施方案中，可以将配体和寡核苷酸彼此同时给予。在另一个实施方案中，使寡核苷酸和TLR7/8配体彼此缀合。在一个实施方案中，使连接寡核苷酸与TLR7/8配体共价结合。在一个实施方案中，连接寡核苷酸为DNA，而在另一个实施方案中，它为RNA。在一个实施方案中，当单独使用时，连接寡核苷酸不为免疫刺激性的。在一个实施方案中，单独的连接寡核苷酸不刺激TLR7-或TLR8介导的免疫应答。在一个实施方案中，所述的组合物进一步包含抗原和/或所述的方法进一步包含对受试者给予抗原。在一个实施方案中，受试者具有感染。在另一个实施方案中，受试者具有癌症。在另一个实施方案中，受试者具有过敏反应或哞喘。所述的组合物可以为包含药学上可接受的载体的药物制剂。本发明在一个方面中提供了如上所述的TLR配体和连接寡核苷酸组合在制备用于对受试者预防接种的制剂中的应用。本发明在一个方面中提供了制备疫苗的方法。该方法包括将如上所述的TLR配体和连接寡核苷酸组合与抗原和任选药学上可接受的栽体紧密结合的步骤。本发明在一个方面中提供了如上所述的TLR配体和连接寡核苷酸组合在制备治疗受试者感染的制剂中的应用。本发明在一个方面中提供了用于治疗感染的组合物，它包括如上所述的TLR配体和连接寡核苷酸组合和抗病毒药或药剂。本发明在一个方面中提供了如上所述的TLR配体和连接寡核苷酸组合在制备治疗受试者癌症的药剂中的应用。本发明在一个方面中提供了用于治疗癌症的组合物，它包括如上所述的TLR配体和连接寡核苷酸组合和癌症用药剂。本发明在一个方面中提供了如上所述的TLR配体和连接寡核苷酸组合在制备治疗受试者过敏性疾病的药剂中的应用。本发明在一个方面中提供了用于治疗过敏性疾病的组合物，它包括如上所述的TLR配体和连接寡核苷酸组合在制备治疗受试者过敏反应用药剂。本发明在一个方面中提供了如上所述的TLR配体和连接寡核苷酸组合在制备治疗受试者哮喘的药剂中的应用。本发明在一个方面中提供了用于治疗哮喘的組合物，它包括如上所述的TLR配体和连接寡核苷酸组合在制备治疗受试者哮喘用药剂。本发明在其它方面中提供了鉴定TLR7/8配体和连接寡核苷酸的方法。因此，本发明在一个方面中提供了鉴定TLR8配体的方法，包括使表达TLR8的细胞在有和没有连接寡核苷酸存在下接触测试配体，并且测定在有和没有连接寡核苷酸存在下响应该测试配体的表达TLR8的细胞的刺激。根据在有连接寡核苷酸存在下刺激的增加鉴定TLR8配体。刺激的增加优选超过没有连接寡核苷酸存在下非零的刺激水平。本发明在另一个方面中提供了TLR7配体的方法，包括使表达TLR7的细胞和表达TLR8的细胞在有和没有连接寡核苷酸存在下接触测试配体，并且测定在有和没有连接寡核苷酸存在下响应该测试配体的表达TLR7的细胞和表达TLR8的细胞的刺激。根据在有连接寡核苷酸存在下表达TLR7的细胞中的刺激减少和表达TLR8的细胞中的刺激增加鉴定TLR7配体。在该方面中，刺激的增加优选超过没有连接寡核香酸存在下的零刺激水平。本发明在另一个方面中提供了鉴定连接寡核苷酸的方法，包括使并且测定在有和没有测试连接寡核苷酸存在下响应该TLR7配体的表达TLR8的细胞的刺激。可以将刺激水平与在没有测试寡核苷酸存在下的水平，在没有TLR7配体存在下的水平和在有测试寡核苷酸存在下的水平和/或在有TLR7配体和已知连接寡核苷酸存在下的水平进行比较。在一个实施方案中，根据在有连接寡核苷酸存在下比其没有时的对表达TLR8的细胞刺激增加鉴定连接寡核苷酸，条件是该寡核苷酸自身并不介导TLR8介导的免疫应答(如通过上述对照试验测定的)。TLR7和TLR8配体和连接寡核苷酸可以为前述方面和实施方案中所述那些中的任一种。表达TLR7或TLR8的细胞可以为天然表达TLR7或TLR8的细胞或它们可以为经改造以表达(例如异位地)TLR7或TLR8的细胞。可以通过经TLR7或TLR8的信号传导及其下游效应测定刺激，包括，但不限于基因表达增加(例如，如使用与TLR7或TLR8下游靶的启动子元件结合的报道构建体显现的)，生长因子(细胞因子)表达，产生或分泌增加等。本发明的这些和其它方面在下文中更详细地描述。附图简述图1A-1B表示0DN选择性强化和抑制R-848介导的对人TLR8和TLR7的活性。图1A表示0DN6056(SEQIDNO:3)和1982(SEQIDNO:4)(就序列而言，参见表1和2)抑制R-848对人TLR7的活性。将稳定表达TLR7和NF-kB荧光素酶报道构建体的HEK293细胞与2R-848在有或没有所示量的寡(dT)n均聚物ODN6056或杂聚物ODN1982存在下孵育。将单独R-848的活性设定为100%。一式三份测定所有数据点并且展示平均值(+Z-SD)。所示结果为两次以上独立实验之一。图1B表示寡(dT)nODN序列-选择性强化R-848对人TLR8的活性。将稳定表达hTLR8和NF-kb-焚光素酶报道构建体的HEK293细胞与增加量的R-848在没有或有0.1，1和5jiM寡(dT)n均聚物0DN6056或杂聚物0DN1982存在下孵育。参比培养基本底计算NF-kB活化刺激。一式三份测定所有数据点并且展示平均值(+/-SD)。所示结果为四次独立实验之一。图2A-C表示与寡(dT)nODN联用时TLR7配体，洛索立宾和7-脱氮杂-鸟苷改变的靶特异。在图2A中，将稳定表达hTLR7，hTLR8或hTLR9的HEK293细胞与增加量的洛索立宾孵育。通过测定16小时后的荧光素酶活性测定NF-kB活化并且展示为高于培养基本底的倍增刺激。在图2B中，将表达hTLR8的HEK293细胞与增加量的洛索立宾在有或没有所示浓度均聚物ODN6056或杂聚物ODN1982存在下孵育。将NF-kB活化指定为高于培养基本底的倍增诱导。在图2C中，在没有(实心圆圏)或有(空心圆圏)5jiM0DN6056存在下对表达hTLR8的HEK293细胞测定增加量的7-脱氮杂-鸟苷(左面的小组)和肌苷(右面的小组)并且计算高于培养基本底的NF-kB刺激。一式三份测定所有数据点。所示数据来自三次实验之一。图3A-3B表示0DN6056抑制HEK293细胞中TLR7介导的NF-kB活化。将稳定表达hTLR7和NF-kb-荧光素酶报道构建体的HEK293细胞在有或没有所示浓度的0DN6056存在下与2.5mM洛索立宾(图3A)或2jiMR-848(图3B)孵育16小时。参比培养基本底计算NF-kB活化刺激。一式三份测定所有数据点并且展示平均值(+/-SD)。所示结果来自两次独立实验之一。图4A-4D表示特异性0DN使洛索立宾诱导的细胞因子产生重定向。将人PBMC与1mM洛索立宾在没有或有增加量的ODN6056和ODN1982存在下孵育。24小时后收集上清液并且上清液并且通过ELISA测定IFN-a(图4A)，IL一12p40(图4B)，IFN，(图4C)和TNF-a(图4D)的量。数值代表3个供体的平均值(+/-SEM)。数据来自四次实验中的一次有代表性的实验。图5A-5F表示在与洛索立宾和寡(dT)nODN共培养时对人单核细胞产生IL-12p40和TNF-a的刺激。将人PBMC与所示量的洛索立宾和ODN孵育。使用抗IL-12p40/p70(图5A)和抗TNF-a(图5B)抗体进行胞内染色。用抗CD14和抗CD19抗体同时染色细胞。对细胞门控CD14-阳性细胞并且计算IL-12p40/p70-或TNF-a-阳性细胞百分比。结果表示三个供体的平均值(+/-SEM)。图5C-5F表示有代表性的流式细胞计量斑点印迹。显示的是两次独立实验之一。图6A-6L表示在与洛索立宾和寡(dT)nODN6056共培养时对人NK细胞产生IFN-y的刺激。将人PBMC与所示量的洛索立宾和ODN孵育。使用抗IFN-Y抗体进行胞内染色。用抗CD56和抗CD3抗体同时染色细胞。对细胞门控cd56-阳性/cd3阴性细胞(NK细胞)并且计算IFN-y-阳性细胞百分比并且在流式细胞计量斑点印迹内展示。显示的是五个中两个有代表性的供体。图7A和7B表示洛索立宾与ODN共孵育对细胞因子从分离细胞群中产生的影响。在图7A中，使用CD14mAb从人PBMC中分裂单核细胞(96%纯度)并且与所示量的洛索立宾在有或没有ODN存在下孵育。通过ELISA测定上清液中IL-12p40的量。数据展示了两个单独供体的结果(灰色和黑色条)。表示为3次类似的实验之一。在图7B中，使用BDCA-4mAb从2个供体(灰色和黑色条)的人PBMC中富集PDC(85%纯度)并且与所示的洛索立宾和ODN组合孵育24小时。通过ELISA检测上清液中的IFN-a。显示的是来自3次类似的实验之一的数据。图8A表示对在有所示量的ODN存在下与50jiMR-848孵育16小时的hTLR8-LUC-293细胞的作用。通过测定荧光素酶活性测定NF-kB刺激。将由单独的50R-848诱导的NF-kB活性设定为100%.图8B表示在有1pM所示ODN存在下与增加浓度的R-848孵育16小时的hTLR8-LUC-293细胞。通过测定荧光素酶活性测定NF-kB刺激。图9A和9B表示使用TLR7特异性配体6-氨基-9-节基-2-丁氧基-9H-噤呤-8-醇与ODN6056的组合的TLR7和TLR8信号传导。图9A表该组合对TLR7信号传导的作用。图9B表示该组合对TLR8信号传导的作用。图IO表示对两种不同RMs的TLR8信号传导的作用。聚(rU)^(SEQIDNO:5)在没有TLR7/8配体存在下刺激TLR8。混合的RNA寡(SEQIDNO:16)不能单独刺激TLR8。图11表示在有TLR7/8配体存在下两种RNAs对R-848TLR8信号传导的作用。图12表示TLR8介导的ODN6056对TLR7配体(洛索立宾，immunosine)和化合物的作用，所述的配体既可以为TLR7，又可以为TLR8配体(R-848),而所述的化合物不为TLR7/8配体(利巴韦林)。图13A-D表示immunosine(A),可以为在3'末端或在内部(B)或在5'末端(C)结合的两种immunosine变体/单体(B和C)的寡核苷酸和6-氨基-9-苄基-2-丁氧基-9H-嘌呤-8-醇(D)的结构，图14表示包含连接基的immunosine-寡核苷酸缀合物的结构。图15A-C表示R-848(A)，CL-029(B)和immunosine(C)的结构和可以结合连接基和/或寡核苷酸的点。发明详述本发明部分涉及某些寡核苷酸能够调节TLR介导的免疫应答的发现。本文所用的调节TLR介导的免疫应答意指操纵一种或多种TLR信号传导的能力。例如，本发明能够改变特定TLR配体的TLR特性，使得在有某些寡核苷酸存在下，这些配体通过不同的TLR传导信号。作为另一个实例，在有某些寡核苷酸存在下，已知通过一种以上TLR传导信号的TLR配体表现出仅通过一种TLR进行信号传导，并且在许多情况下，这样的信号传导得到增强。在另一个实例中，在有某些寡核苷酸存在下，TLR信号传导的效能和功效得到显著增加。因此，本发明能够通过TLR7，TLR8和TLR9中任一种或通过其中任何的组合选择性抑制和/或增强信号传导。本发明部分涉及如下观察结果通过自身活化TLR7和TLR8的咪唑并喹啉衍生物瑞喹莫德(R-848)与寡(dT)17均聚物寡核苷酸(0DN6056)共孵育显著增加了R-848对表达TLR8的HEK293细胞的活性，而TLR7介导的信号传导被消除。类似地，通过自身活化TLR7的鸟苷类似物洛索立宾与寡(dT)uODN6056的组合以序列选择性方式诱导TLR8介导的信号传导并且消除TLR7介导的信号传导。通过与寡(dT)17共孵育还改变了洛索立宾在人免疫细胞种诱导的细胞因子分布。IL-12,TNF-a或IFN-y大量分泌，而IFN-a产生被消除。尽管并不预计受到任何特定机制约束，但是推定在诱导细胞因子中观察到的改变是因单独的洛索立宾使从类浆细胞DC活化的细胞类型转移至通过其与ODN组合活化的单核细胞所致，并且表明单核细胞不表达功能性TLR7。本发明由此用于调节一定范围的免疫应答。在一个具体的实施方案中，本发明用于抑制TLR7信号传导(和相关的TLR7介导的免疫应答)，任选同时诱导TLR8信号传导(和相关的TLR8介导的免疫应答)。在另一个具体的实施方案中，本发明提供了TLR8信号传导(和相关的TLR8介导的免疫应答)的诱导(包括增强)。根据连接寡核苷酸性质的不同，能够同时诱导TLR9信号传导(和相关的TLR9介导的免疫应答)。例如，包含CpG基序的连接寡核苷酸与TLR7配体，诸如洛索立宾的组合可以诱导TLR8和TLR9信号传导(及其相关的免疫应答)。本发明还可用于治疗一系列疾病，它们可以得益于任选在没有或有TLR9介导的免疫应答存在下TLR7介导的免疫应答的抑制和/或TLR8介导的免疫应答的诱导(包括增强)。可以得益于TLR7介导的免疫应答的抑制的疾病包括自身免疫疾病，诸如，但不限于狼疮和类风湿性关节炎，特别是那些与DNA病毒感染相关的疾病。可以使用TLR7介导的免疫应答的抑制，伴随TLR8介导的免疫应答的诱导，其中需要增强由T调节细胞抑制的T细胞应答。这类疾病包括，但不限于某些形式的癌症以及HCV，HBV和HIV感染。联合的TLR7抑制和TLR8诱导还可能有益于治疗自身免疫疾病，或其中需要诱导免疫应答，但避免TLR7相关毒性。不依赖于TLR7介导的免疫应答调节的TLR8介导的免疫应答的诱导(包括增强)尤其可用于在疫苗或非疫苗环境中治疗癌症和感染。本发明还可用于治疗可以得益于细胞因子产生的疾病，或其中受试者对某些细胞因子的作用难以控制或变得对其难以控制(例如，IFN-a，正如有时在治疗病毒感染中观察到的)。TLRTol1样受体(TLR)为在哺乳动物先天免疫性中起决定性作用的高度保守的多肽类家族。目前鉴定了10个家族成员，命名为TLR1-TLR10。各种TLR的胞质域的特征在于Tol1-白细胞介素1(IL-1)受体(TIR)结构域。MedzhitovR等(1998)Molcell2:253-8。TLR识别微生物侵入引起果蝇属(Drosophila)和哺乳动物中进化保守的信号传导级联活化。已经报道了包含TIR结构域的连接蛋白MyD88与TLR结合并且将IL-1受体相关激酶(IRAK)和肿瘤坏死因子(TNF)受体相关因子6(TRAF6)补充给TLR。认为MyD88依赖性信号传导途经导致NF-kB转录因子和c-JunNH2末端激酶(Jnk)促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)活化，免疫活化中的关键步骤和炎性细胞因子产生。就综述而言，参见AderemA等(2000)A^wre406:782-87。认为TLR在不同组织和各种类型的免疫细胞中差别表达。例如，据报道人TLR7在胎盘，肺，脾，淋巴结，扁桃体中和在类浆细胞前体树突细胞(pDCs)上表达。ChuangT-H等(2000)五i/rO^oir/zze;Ve11:372—8);KadowakiN等(2001)/加M194:863-9。据报道人TLR8在肺，外周血白细胞(PBL)，胎盘，脾，淋巴结中和在单核细胞上表达。KadowakiN等(2001)/^r/;194:863-9;ChuangT-H等(2000)fi/rC7"h'/7e11:372-8。据报道人TLR9在脾，淋巴结，骨髓，PBL中和在pDC和B细胞上表达。KadowakiN等(2001)JExpMed194:863-9;BauerS等(2001)/VocY"/JcacT美萄98:9237-42;ChuangT-H等(2000)新C/^/力e淑"l:372-8。已知人和鼠TLR7的核苷酸和氨基酸序列。例如，参见GenBank登记号AF240467,AF245702,NM画016562，AF334942,NM一133211;和AAF60188,AAF78035,NP-057646,AAL73191和AAL73192，将所用这些的内容引入本文作为参考。据报道人TLR7为1049个氨基酸长度。据报道鼠TLR7为1050个氨基酸长度。TLR7多肽类包括具有富含亮氨酸的重复单位的胞外域，跨膜结构域和包括TIR结构域的胞内域。已知人和鼠TLR8的核苷酸和氨基酸序列。例如，参见GenBank登记号AF246971,AF245703,NNL016610,XM一045706，AY035890，NM一133212;和AAF64061,AAF78036,NP-057694,XP-045706,AAK62677和NP-573475,将所用这些的内容引入本文作为参考。据报道人TLR8为以至少两种同种型存在，一种为1041个氨基酸长度，而另一种为1059个氨基酸长度。鼠TLR8为1032个氨基酸长度。TLR8多肽类包括具有富含亮氨酸的重复单位的胞外域，跨膜结构域和包括TIR结构域的胞内域。已知人和鼠TLR9的核苷酸和氨基酸序列。例如，参见GenBank登记号NM-017442,AF259262，AB045180，AF245704，AB045181,AF348140，AF314224，NM—031178;和NP一059138，AAF72189，BAB19259,AAF78037,BAB19260,AAK29625，AAK28488和NP一112455,将所用这些的内容引入本文作为参考。据报道人TLR9为以至少两种同种型存在，一种为1032个氨基酸长度，而另一种为1055个氨基酸长度。鼠TLR9为1032个氨基酸长度。TLR9多肽类包括具有富含亮氨酸的重复单位的胞外域，跨膜结构域和包括TIR结构域的胞内域。TLR介导的免疫应答本文所用的术语"TLR信号传导"意指与通过TLR的信号传导相关的胞内信号传导的任何方面。本文所用的术语"TLR介导的免疫应答"意指与TLR信号传导相关(例如，作为其结果)的免疫应答。TLR7介导的免疫应答为与TLR7信号传导相关的应答。TLR7介导的免疫应答的特征一般在于IFN-a和IFN诱导型细胞因子，诸如IP-IO和I-TAC诱导。在TLR7介导的免疫应答中诱导的细胞因子IL-la/P,IL-6，IL-8，MIP-la/P和MIP-3a/P水平低于在TLR8介导的免疫应答中诱导的那些水平。TLR8介导的免疫应答为与TLR8信号传导相关的应答。该应答的特征在于促炎细胞因子，诸如IFN-y，IL-12p40/70，TNF-a，IL-la/P,IL-6，IL-8，MIP-la/P和MIP-3a/P的诱导。TLR9介导的免疫应答为与TLR9信号传导相关的应答。该应答的特征至少在于IFN，和IL-12产生和/或分泌，不过在水平上低于通过TLR8介导的免疫应答获得的水平。TLR7/8配体本文所用的"TLR7/8配体，，共同意指能够增加TLR7和/或TLR8信号传导的任何活性剂(即TLR7和/或TLR8激动剂)。因此，当没有本发明的连接寡核苷酸存在下使用时，某些TLR7/8配体诱导单独的TLR7信号传导(例如，TLR7特异性配体)，某些诱导单独的TLR8信号传导(例如，TLR8特异性配体)，而其它诱既诱导TLR7，又诱导TLR8信号传导。本发明已经发现当将这类配体与连接寡核苷酸联用时，这些配体的TLR信号传导特性改变。在某些实例中，TLR7信号传导受到抑制且TLR8信号传导得到诱导。在其它实例中，TLR8信号传导得到诱导(即从本底水平增加)或增强(即从非本底水平增加)，而在其它实施方案中，TLR8和TLR9信号传导得到诱导或增强。本文所用的术语"TLR7配体"意指能够增加TLR7信号传导的任何活性剂(即TLR7的激动剂)。在这方面，TLR7信号传导水平可以比预先存在的信号传导水平增强，或其诱导可以超过信号传导的本底水平。TLR7配体包括，但不限于鸟苷类似物，诸如C8-取代的鸟苷，主要由G和U组成的核糖核苷的混合物，鸟苷核苷酸和RNA或RNA-类分子(PCT/US03/10406)和基于腺苷的化合物(例如6-氨基-9-千基-2-(3-羟基-丙氧基)-9H-嘌呤-8-醇(CL-029，Sumitomo),6-氨基-9-节基-2-丁氧基-9H-嘌呤-8-醇(如图13D中所示)和其它相关化合物，诸如US6310070Bl中所述的那些)。TLR7配体还披露在Gorden等J.Immunol.2005，174:1259-1268(例如，3M-001，N-[4-(4-氨基-2-乙基-lH-咪唑并[4，5-c]喹啉-l-基)丁基-]甲磺酰胺;C17H23N502S;mw361)。本文所用的术语"鸟苷类似物"意指具有涉及鸟嘌呤碱基，鸟苷核苷糖或鸟嘌呤碱基和鸟苷核苷糖的化学修饰的鸟苷-类核苷酸(不包括鸟苷)。鸟苷类似物特别包括，但不限于7-脱氮杂-鸟苷。鸟苷类似物进一步包括C8-取代的鸟苷，诸如7-硫杂-8-氧代鸟苷(immunosine),8-巯基乌苷，8-溴鸟苷，8-甲基鸟苷，8-氧代-7，8-二氢鸟苷，C8-芳氨基-2'-脱氧鸟苷，C8-丙炔基-鸟苷，C8-和N7-取代的鸟嘌呤核糖核苷，诸如7-烯丙基-8-氧代鸟苷(洛索立宾)和7-曱基-8-氧代鸟苷，8-氨基乌苷，8-羟基-2'-脱氧鸟苷，8-羟基鸟苷和7-脱氮杂8-取代的鸟苷。本文所用的术语"TLR8配体"意指能够增加TLR8信号传导的任何活性剂(即TLR8的激动剂)。在这方面，TLR8信号传导水平可以比预先存在的信号传导水平增强，或其诱导可以超过信号传导的本底水平。TLR8配体包括主要由G和U组成的核糖核苷混合物，鸟苷核苷酸和RNA或RNA-类分子(PCT/US03/10406)。额外的TLR8配体还披露在Gorden等J.Immunol.2005,174:1259-1268中(例如，3M-002，2-丙基噻唑并[4，5-c]喹啉-4-胺；C13H13N3S;mw243)。某些TLR7/8配体为TLR7和TLR8配体。它们包括咪唑并喹啉类，主要由G和U组成的核糖核苷混合物，鸟苷核苷酸和RM或RNA-类分子(PCT/US03/10406)。额外的TLR7/8配体还披露在Gorden等J.Immunol,2005,174:1259-1268中(例如，3M-003，4-氨基-2-(乙氧基甲基)-a,a-二甲基-6，7，8，9-四氢-lH-咪唑并[4，5-c]喹啉-l-乙醇水合物；C17H26N402;mw318)。咪唑并喹啉类免疫应答调节剂，认为它们诱导几种细胞因子的表达，包括千扰素(例如，IFN-a)，TNF-a和某些白细胞介素(例如，IL-1，IL-6和IL-12)。咪唑并喹啉能够刺激Thl免疫应答，正如根据其诱导IgG2a水平增加的能力所证实的。据报道咪唑并喹啉活性剂还能够抑制Th2细胞因子，诸如IL-4,IL-5和IL-13产生。咪唑并喹啉类诱导的某些细胞因子由巨噬细胞或树突细胞产生。据报道咪唑并喹啉的某些种类增加NK细胞裂解活性并且刺激B细胞增殖和分化，由此诱导抗体产生和分泌。本文所用的咪唑并喹啉类包括咪唑并会啉胺类，咪唑并吡啶胺类，6，7-稠合的环烷基咪唑并吡啶胺类和1，2桥连咪唑并喹啉胺类。这些化合物描述在美国专利US4689338，4929624，5238944,5266575,5268376,5346905，5352784，5389640，5395937，5494916，5482936，5525612,6039969和6110929中。咪唑并会啉类的具体种类包括R-848(S-28463);4-氨基-2乙氧基甲基-a，ot-二甲基-lH-咪唑并[4，5-c]喹啉-l-乙醇；1-(2-甲基丙基)-lH-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺(R-837或咪喹莫特)和S-27609。咪喹莫特目前用于局部治疗疣，诸如生殖器和肛门疣，并且还在基底细胞癌的局部治疗中进行了测试。本文所用的术语"TLR9配体"意指意指能够增加TLR9信号传导的任何活性剂(即TLR9的激动剂)。TLR9配体特别包括，但不限于免疫刺激核酸且特别是CpG免疫刺激核酸。本文所用的术语"免疫刺激CpG核酸"意指能够活化免疫细胞的含CpG的任何核酸。至少CpG二核苷酸中的C一般为，但不一定未甲基化。免疫刺激CpG核酸描述在许多授权专利和公布的专利申请中，包括美国专利US6,194,388;6,207,646;6,218,371;6,239,116;6，339，068;6,406,705;和6，429，199。在某些实施方案中，TLR配体为特异性配体。本文所用的TLR7特异性配体为在没有本发明连接寡核苷酸存在下使用时通过TLR7，但并非TLR8或TLR9传导信号的配体。类似地，TLR8特异性配体为在没有本发明连接寡核苷酸存在下使用时通过TLR8,但并非TLR7或TLR9传导信号的配体。优选TLR7特异性配体在没有连接寡核苷存在下使用时通过TLR7而不是TLR传导信号，而TLR8特异性配体在没有连接寡核苷酸存在下使用时通过TLR8而不是TLR传导信号。在某些实施方案中，TLR配体不是RNA。TLR7/8配体与连接寡核苷酸的应用可以刺激TLR8和TLR9，同时产生来自两种受体的下游效应。例如，寡核苷酸刺激TLR9可以导致，例如IFN-a产生，而寡核苷酸刺激TLR8可以导致，例如IL-12，TNF-a和IFN-y产生。配体和寡核苷酸可以彼此缀合或可以以物理方式彼此分离。连接寡核苷酸本发明将TLR7/8配体与连接寡核苷酸联用。本文所用的连接寡核苷酸为与TLR7/8配体一起使用时通过抑制经TLR7配体的TLR7信号传导，诱导经TLR7配体的TLR8信号传导和/或增强经为TLR7和TLR8配体的配体的TLR8信号传导添加该配体活性的寡核苷酸。本文所用的术语寡核苷酸与术语核酸可以互换使用。优选该术语不包括质粒，栽体和/或反义核酸。在某些实施方案中，寡核苷酸可以为免疫刺激性的，而在其它实施方案中，它在单独使用时可以为非免疫刺激性的。寡核苷酸可以为任何长度，优选7或8个至100个核苷酸长度。一类广泛的连接寡核苷酸包含式5'X-N4-X3'或5'X-N广X3'，其中X可以为任何核苷酸并且可以存在或不存在和凡和A表示4和5个连续的T(胸苷)，U(尿嘧啶)或A(腺噤呤)，使得N4或Ns中的每个N均相同。寡核苷酸可以为7，8，9，10，11，12，13，14，15，16,17或17个以上核苷酸长度。它优选包含至少一个硫代磷酸酯核苷酸间键(直到并且包括完整的硫代磷酸化主链)。因此，一类连接寡核苷酸包含式5'Xa-TTTTT-Xb3、其中Xa和Xb可以独立为任何核普酸并且可以存在或不存在。Xa和Xb可以表示一个或多个核苷酸(例如，l-100个核苷酸)。寡核苷酸可以为7，8，9，10，11,12,13，14，15，16，17,18，19，20，21，22，23或23个以上核苷酸长度。寡核普酸可以饱和6，7或7个以上连续的T。优选连接寡核苷酸为dT均聚物(即本文所述长度的寡dT)。甚至更优选连接寡核苷酸为胸苷(dT)均聚物17个核苷酸长度。最优选它包含至少一个硫代磷酸化核苷酸间键(直到并且包括完整的硫代磷酸化主链)。根据实施方案的不同，连接寡核普酸可以由100%T，99%T，98%T,97%T，96%T，95%T,94%T，93%T，92%T，91%T,90%T，85%T，80%T，75%T，70%T，65%T，60%T，55%T,50%T，45%T或45。/。以下T组成。另一类连接寡核苷酸包含式5'Xa-UUUUU-Xb3'，其中Xa和Xb可以独立为任何核苷酸并且可以存在或不存在。Xa和Xb可以表示一个或多个核苷酸(例如，l-100个核苷酸)。寡核苷酸可以为7，8，9，10，11，12,13，14，15，16，17，18，19,20,21,22，23或23个以上核苷酸长度。寡核苷酸可以饱和6，7或7个以上连续的U。在一个重要的实施方案中，寡核苷酸为dU均聚物，其优选为17个核苷酸长度并且具有至少一个硫代磷酸化核苷酸间键(直到并且包括完整的硫代磷酸化主链)。根据实施方案的不同，连接寡核苷酸可以由100%U，99%U，98%U，97%U，96%U，95%U，94%U，93%U，92%U，91%U，90%U，85%U，80%U,75%U，70%U,65%U，60%U，55%U，50%U,45%U或45。/。以下U组成。另一类连接寡核苷酸含式5'Xa-AAAAA-Xb3'其中Xa和Xb可以独立为任何核普酸并且可以存在或不存在。Xa和Xb可以表示一个或多个核苷酸(例如，l-100个核苷酸)。寡核苷酸可以为7，8,9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23或23个以上核苷酸长度。寡核普酸可以饱和6，7或7个以上连续的A。在一个重要的实施方案中，寡核苷酸为dA均聚物，其优选为17个核苷酸长度并且具有至少一个硫代磷酸化核苷酸间键(直到并且包括完整的硫代磷酸化主链。根据实施方案的不同，连接寡核苷酸可以可以由100%A，99%A,98%A，97%A，96%A，95%A，94%A，93%A，92%A,91%A,90%A，85%A，80%A,75%A,70%A，65%A,60%A，55%A,50%A，45%A或45%以下A组成。另一类连接寡核苷酸包含式Cn-Tm-Cp3、其中n为0-100的整数(例如，3-7),p为0-100的整数(例如，4-8)和m为0-100的整数(例如，2-10)。优选n与p之和等于或低于m的值，使得C含量为50%,低于50%,低于45°/。，低于40%，低于35%，低于30°/。，低于25%，低于20%，低于15%，低于10%，低于5%或更低。在某些实施方案中，n在3-7，m在2-10和p在4-8，只要满足上述百分比。该式的某些种类如图8中所示。实例5'(Vr!。C43'(SEQIDNO:1)，5'CJ8C5(SEQIDNO:2)，5'CsLC^(SEQIDNO:6)，5'CJ4C7(SEQIDNO:7)和5'C7T2C83'(SEQIDNO:8)。在某些实施方案中，连接寡核苷酸饱和免疫刺激CpG基序。该基序可以为曱基化或未甲基化的。在后一种情况中，完整寡核苷酸可以未甲基化的或部分可以为未甲基化的，但至少5'CG3'的C必须未曱基化。未甲基化基序及其对免疫调节的作用广泛描述在下列文献中美国专利，诸如US6,194,388Bl;US6,207,646Bl;US6,239,116Bl;和US6，218，371Bl;和^>布的专利申请，诸如PCT/US98/03678,PCT/US98/10408，PCT/US98/04703和PCT/US99/09863。将这些专利权和专利申请的全部内容引入本文作为参考。如上所述术语"寡核苷酸"和"核酸"可以互换使用以便指连接或脱i核糖二所述的碱基为A嘧咬(例:，胞嘧咬(c)，胸苷("或丄嘧啶(U))或噪呤(例如，腺嘌呤(A)或鸟嘌呤(G))。因此，该术语包括DNA和RNA寡核苷酸。该术语还应包括多核苷(即减去磷酸的多核苷酸)和任何其它含聚合物的碱基。寡核苷酸可以获自现存的核酸来源(例如，基因组或cDNA)，但优选合成的(例如，用核酸合成仪产生)。寡核苷酸可以为双链或单链。在某些实施方案中，当寡核苷酸为单链时，它能够形成形成二级和三级结构(例如通过在其自身上折回或通过在其本体自始至终或沿其长度在选择片段上与其自身杂交)。因此，尽管这类寡核苷酸的初级结构可以为单链的，其高级结构可以为双链或三链的。寡核苷酸可以具有一定长度范闺，但它们优选等于或低于100个核苷酸(或碱基)长度。连接寡核苷酸优选不为质粒或载体。它们还优选不能具有反义活性或本发明表现出的作用至少不与任何反义活性相关。寡核苷酸可以具有修饰的主链。例如，它们可以包含至少一个不为磷酸二酯键的核苷酸间键合。这类键可以为硫代磷酸酯键。在某些实施方案中，寡核苷酸可以具有嵌合主链(即由证实两种不同类型的核苷酸键合组成的主链)。本文所用的术语"硫代磷酸酯主链"意指寡核苷酸的稳定糖磷酸主链，其中非桥连磷酸氧被至少一个核普酸间键上的硫取代。在一个实施方案中非桥连磷酸氧被每个核苷酸间键上的硫取代。寡核苷酸的来源和制备本发明的寡核苷酸可以与天然RNA和DNA相比包括各种化学修饰和取代，包括磷酸二酯核苷间桥，P核糖单元和/或天然核苷碱基(腺嘌呤，鸟嘌呤，胞嘧啶，胞嘧啶，尿嘧啶)。本领域技术人员已知化学修饰的实例并且描述在下列文献中，例如UhlmannE等(1990)90:543;"ProtocolsforOligonucleotidesandAnalogs"SynthesisandProperties&SynthesisandAnalyticalTechniques,S.Agrawal,Ed,HumanaPress,Totowa，美国1993;CrookeST等(1996)爿/2/i/Wer尸/wr边aco/7bx/co/36:107—29;和HunzikerJ等(1995)#od5yi3M7:331-417。本发明的寡核苷酸可以具有一种或多修饰，其中每种修饰与由天然DNA或RNA组成的相同序列的寡核苷酸位于特定的磷酸二酯核苷间桥和/或特定的P-D-核糖单元和/或特定天然核苷碱基位置上。例如，寡核苷酸可以包括一种或多种修饰，并且其中每种修饰独立地选自a)位于核苷的3'和/或5'末端上的磷酸二酯核苷间桥被修饰的核苷桥取代；b)位于核苷的3'和/或5'末端上的磷酸二酯核苷间桥被脱磷酸桥取代；c)来自糖磷酸主链的糖磷酸单元被另一种单元取代；d)D-核糖单元被修饰的糖单元取代；和e)天然核苷碱基被修饰的核苷碱基取代。用于寡核苷酸化学修饰的更具体的实例如下。寡核苷酸可以包括修饰的核苷酸间键合，诸如上述(a)或(b)中所述的那些。这些修饰的键可以部分耐受降解(例如稳定)。"稳定的寡核苷酸"应指相对耐受体内因这类修饰导致的降解(例如通过外-或内-切核酸酶)的寡核苷酸。在某些实施方案中，具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸可以提供最大活性并且防止寡核苷酸发生因胞内外-或内-切核酸酶导致的降解。位于核苷的3'和/或5'末端上的磷酸二酯核苷间桥可以被修饰的核苷间桥取代，其中修饰的核苷间桥例如选自硫代磷酸，二硫代磷酸酯，NRf-氨基磷酸酯，硼烷磷酸酯(boranophosphate)，a-羟基节基膦酸酯，磷酸-(d-C21)-0-烷基酯，磷酸-[(C6-C12)芳基-(d-C21)-0-烷基]酯，(C广Cs)烷基膦酸酯和/或(C6-C12)芳基膦酸酯鍵，(C7-C12)-a-羟甲基-芳基(例如，披露在WO95/01363中)，其中(C「d2)芳基，(C6-C2。)芳基和(C6-Cu)芳基任选被卣素，烷基，烷氧基，硝基，氰基取代，且其中W和y彼此独立为氢，(d-ds)-烷基，(C6-C2。)-芳基，(C「C")-芳基-(CrC8)-烷基，优选氢，(C广C8)-烷基，优选(d-C4)-烷基和/或甲氧基乙基，或W和R2与携带它们的氮一起构成包含另一个选自0,S和N的杂原子的5-6-元杂环。位于核苷的3'和/或5'末端上的磷酸二酯核苷间桥可以被脱磷酸桥取代(脱磷酸桥披露在，例如UhlmannE和PeymanA的"MethodsinMolecularBiology",Vol.20，"ProtocolsforOligonucleotidesandAnalogs",S.Agrawal，Ed.，HumanaPress,Totowa1993，Chapter16，pp.355ff中)，其中脱磷酸桥例如选自脱磷酸桥缩曱醛(formacetal)，3，-硫代缩甲酪，曱基羟基胺，肟，亚甲基二曱基-亚肼基，二亚甲基砜和/或曱硅烷基。(即彼此构成糖磷酸单元的D-核糖和磷酸二酯核苷间桥)可以被另一种单元取代，其中另一种单元例如适合于构成"吗啉代-衍生物"寡聚体(例如，如StirchakEP等(1989)肠/e/ch油k17:6129-41中所述)，即，例如，被吗啉代-衍生物单元取代或构成聚酰胺核酸("PNA";例如，如NielsenPE等(1994)"/oco/力gC力咖5:3-7中所述)，即，例如，被PNA主链单元，例如被2-氨基乙基甘氨酸取代。寡核苷酸可以具有其它碳水化合物主链修饰和取代，诸如具有磷酸基(PH0NA)的肽核酸，锁定核酸(LNA)和具有带有烷基连接基或氨基连接基的主链部分的寡核苷酸。烷基连接基可以为支链或非支链的，取代或未被取代的和手性纯或外消旋混合物。P-核糖单元或P-0-2'-脱氧核糖单元可以被修饰的糖单元取代，其中修饰的糖单元例如选自P-D-核糖，orD-2'-脱氧核糖，L-2'-脱氧核糖，2'-F-2'-脱氧核糖，2'-F-阿拉伯糖，2'-0-(C广Cj烷基-核糖，2'-0-甲基核糖，2'-0-(C广C6)链烯基-核糖，2'--核糖，2'-冊2-2'-脱氧核糖，呋喃木糖，a-阿拉伯呋喃糖，2，4-双脱氧-p-D-赤型-吡喃己糖和羧酸(例如，描述在Froehler(1992)/h5bc114:8320)和/或开链糖类似物(例如，描述在Vandendriessche等(1993)7e"s力ei/ro/749:7223)和/或双环糖类似物(例如，描述在TarkovM等(1993)HelvChimActa76:481)。在某些实施方案中，修饰的糖为2M务饰的核糖。在某些实施方案中，糖为2'-0-甲基核糖，特别是1或2个均为通过磷酸二酯或磷酸二酯-类核苷间键连接的核苷酸。核酸还包括取代的嘌呤类和嘧啶类，诸如C-5丙炔嘧啶和7-脱氮杂-7-取代的嘌呤基修饰的碱基。WagnerRW等(1996)A^,S/0"c力/70/14:840-4。嘌呤类和嘧咬类包括，但不限于腺嘌呤，胞嘧啶，鸟嘌呤和胸腺嘧啶和其它天然和非天然存在的核碱基，取代和未被取代的芳族部分。修饰的碱基为在化学上不同于一般在DNA和RNA中发现的碱基，诸如T,C，G,A和U，但与天然存在的碱基共有基本化学结构。例如，修饰的核苷碱基可以选自次黄嘌呤，尿嘧啶，二氢尿嘧啶，假尿嘧啶，2-硫尿嘧咬，4-硫尿嘧咬，5-氨基尿嘧啶，5-(d-C6)-烷基尿嘧咬，5-(C广C6)-链烯基尿嘧啶，5-(C2-C6)-炔基尿嘧啶，5-(羟基甲基)尿嘧啶，5-氯尿嘧啶，5-氟尿嘧啶，5-溴尿嘧啶，5-羟基胞嘧啶，5-(d-C6)-烷基胞嘧啶，5-(C广C6)-链烯基胞嘧啶，5-(C2-C6)-炔基胞嘧啶，5-氯胞嘧啶，5-氟胞嘧啶，5-溴胞嘧啶，N2-二甲基鸟嘌呤，2，4-二氨基-噤呤，8-氮杂嘌呤，取代的7-脱氮杂噤呤，优选7-脱氮杂-7-取代的和/或7-脱氮杂-8-取代的噪呤，5-羟基甲基胞嘧啶，N4-烷基胞嘧啶，例如，N4-乙基胞嘧啶，5-羟基脱氧胞苷，5-羟基曱基脱氧胞普，N4-烷基脱氧胞普，例如，N4-乙基脱氧胞苷，6-硫代脱氧鸟苷和硝基吡咯的脱氧核糖核苷，C5-丙炔基嘧啶和二氨基嘌呤，例如，2，6-二氨基嘌呤，肌苷，5-甲基胞嘧啶，2-氨基嘌呤，2-氨基-6-氯嘌呤，次黄嘌呤或天然核苷碱基的其它修饰物。该目录的含义为典型的，但并不解释为起限定作用。在本文所述的具体式子中，可以掺入修饰的碱基。例如，胞嘧啶可以被修饰的胞嘧啶取代。本文所用的修饰的胞嘧啶为胞嘧啶的天然存在的或非天然存在的嘧啶碱基类似物，其可以取代该碱基，但不会损害寡核苷酸的免疫刺激活性。修饰的胞嘧啶包括，但不限于5-取代的胞嘧咬(例如，5-甲基-胞嘧啶，5-氟-胞嘧啶，5-氯-胞嘧啶，5-溴-胞嘧啶，5-碘-胞嘧啶，5-羟基-胞嗜啶，5-羟曱基-胞嘧啶，5-二氟甲基-胞嘧啶和未被取代的或取代的5-炔基-胞嘧啶)，6-取代的胞嘧啶，N4-取代的胞嘧啶(例如，N4-乙基-胞嘧啶)，5-氮杂-胞嘧啶，2-巯基-胞嘧啶，异胞嘧啶，假-异胞嘧啶，具有稠合环系的胞嘧啶类似物(例如，N，『-丙烯胞嘧咬或汾噍唤)和尿嘧咬及其衍生物(例如5-氟-尿嘧啶，5-溴-尿嘧啶，5-溴乙烯基-尿嘧啶，4-硫-尿嘧啶，5-羟基-尿嘧啶，5-丙炔基-尿嘧啶)。优选胞嘧啶中的某些包括5-甲基-胞嘧啶，5-氟-胞嘧啶，5-羟基-胞嘧啶，5-羟曱基-胞嘧啶和N4-乙基-胞嘧啶。在本发明的另一个实施方案中，胞嘧啶碱基被通用碱基(例如，3-硝基吡咯，P-碱基)，芳族环系(例如，氟苯或二氟苯)或氩原子(dSpacer)取代。作为另一个实例，鸟噤呤可以被修饰的鸟嘌呤碱基取代。本文所物，它可以取代该碱基，但不会损害寡核苷酸的免疫刺激活性。修饰的鸟嘌呤包括，但不限于7-脱氮杂鸟嘌呤，7-脱氮杂-7-取代的鸟噪呤(诸如7-脱氮杂-7-(C2-C6)炔基鸟噪呤)，7-脱氮杂-8-取代的鸟嘌呤，次黄嘌呤，N2-取代的鸟噪呤(例如，N2-甲基-鸟嘌呤)，5-氨基-3-甲基-3H，6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2，7-二酮，2，6-二氨基嘌呤，2-氨基嘌呤，嘌呤，吲哚，腺噪呤，取代的腺嘌呤(例如，N6-甲基-腺噪呤，8-氧代-腺嘌呤)，8-取代的鸟噪呤(例如，8-羟基鸟嘌呤和8-溴鸟嘌呤)和6-硫鸟嘌呤。在本发明的另一个实施方案中，鸟嘌呤碱基被通用碱基(例如，4-曱基-吲哚，5-硝基-吲哚和K-碱基)，芳族环系(例如苯并咪唑或二氯苯并咪唑，l-曱基-lH-[1，2，4]三唑-3-甲酰胺)或氢原子(dSpacer)取^R。就本发明的应用而言，可以使用本领域众所周知的许多方法中的任一种从头合成本发明的寡核苷酸，包括，例如，p-氛基乙基亚磷酰胺法(BeaucageSL等(1981)re"fl力e&加22:1859)或核普H-膦酸酯法(Garegg等(1986)re"a力e&o/zZe〃27:4051-4;FroehlerBC等(1986)iV"c/e/c14:5399-407;Garegg等(1986)7"etra力effro/227:4055—8;Gaffhey等(1988)7e^ra力^/ro/729:2619-22)。这些化学方法可以通过商购自动化核酸合成仪进行。这些寡核苷酸称作合成寡核苷酸。分离的寡核苷酸一般意指从通常实际结合的成分中分离的寡核苷酸。作为实例，分离的寡核苷酸可以为从细胞，细胞核，线粒体或染色质中分离的寡核苷酸。可以使用应用氨基磷酸酯或H-膦酸酯化学的自动化技术合成修饰的主链，诸如硫代磷酸。例如，可以如美国专利US4，469，863中所述制备芳基-和烷基-膦酸酯类；并且可以通过自动化固相合成，使用商购试剂制备烷基磷酸三酯类(其中带电荷的氧部分如美国专利US5，023，243和欧洲专利EP092，574中所述烷基化)。描述了制备其它DNA主链修饰和取代的方法(例如，UhlmannE等(1990)iw90:544;GoodchildJQ990)A/ocon乂"g"eC力e/z1:165)。分离的在某些实施方案中，分离了TLR7/8配体和/或连接寡核苷酸。分离的配体或寡核苷酸为基本上纯的或不含其它一般在天然中或在体内系统中发现达到实际应用程度和适合于其指定应用的物质的配体或寡核苷酸。特别地，配体或寡核苷酸为足够纯的并且足以不含细胞的其它生物成分，以便，例如用于生产药物制剂。因为可以将分离的配体或寡核苷酸可以与药学上可接受的载体混合在药物制剂中，所以配体或寡核苷酸可以仅占制剂重量的小百分比。尽管如此，但是分离配体或寡核苷酸，使得将其基本上从它在生物相同中结合的物质中分离。缀合物本文所用的术语"級合物"意指通过任何生理化学相互作用直接或间接彼此连接的两种或多种组成部分的任何组合。在一个实施方案中，缀合物为通过共价键合直接或间接彼此连接的两种或多种组成部分的组合。本发明在一个方面中提供了包括TLR配体和连接寡核苷酸的组合物。在一个实施方案中，通过共价键形成缀合物。在一个实施方案中，缀合物包含连接基。缀合物可以包括本发明的一种或多种连接寡核苷酸和一种或多种TLR7/8配体。可选择地或另外。缀合物可以包括一种或多种其它分子，包括，但不限于抗原或其它药物。图13-15例示了这类缀合物的许多特征，包括配体和寡核苷酸的连接点和连接基在促进这类结合中的任选的应用。在一个实施方案中，缀合物为连接寡核苷酸与某些TLR7特异性配体，诸如但不限于immunosine或洛索立宾的缀合物。连接寡核苷酸可以为，但不限于长度在8-20，优选IO-20且更优选14-18个核苷酸长度的聚(dT)寡核苷酸。在某些实施方案中，特别是如果连接寡核苷酸自身为免疫刺激性的或通过TLR9传导信号，那么不包括连接寡核苷酸与某些TLR7/8配体，诸如咪唑并喹啉类和C8-取代的鸟苷的缀合物。图13A-C例示了可以用于结合方法的immunosine的结构及其两种单体变体。图13B中所示的变体可以与寡核苷酸在内部位置或3'末端上结合。因此，可以存在这些与寡核苷酸连接的变体中的一种或多种。图13C中所示的变体可以与寡核苷酸在5'末端上结合。图14例示了使用连接基使immunosine与寡核苷酸结合。图15例示了连接基和/或寡核苷酸可以结合为R-848，CL-029和immunosine上的连接点。本发明的缀合物可以包含l，2,3，4，5或5个以上连接基，或可选择地，它们可以不含连接基。缀合物的实例为聚(dT)纩L广IM(其中L表示连接基且IM表示immunosine且下标表示缀合物中每个单元的数量)(SEQIDNO:9)。另一个实例为IM-L广(dT)"(SEQIDNO:10)。这些实例之间的差异在于在3'末端或5'末端上配置immunosine和连接基。连接基可以为寡核苷酸上的任何反应部分连接，包括，但不限于主链磷酸基团或糖羟基。例如，可以将它们通过磷酸二酯，硫代磷酸，甲基膦酸酯和/或酰胺鍵引入。连接基实际上可以为非核苷酸。它们包括，例如，碱性残基(dSpacer)，寡乙二醇，诸如三甘醇(间隔基9)或六乙二醇(间隔基18)或烷-二醇，诸如丁二醇。连接基可以通过磷酸二酯或硫代磷酸酯键彼此结合。其它连接基为烷氨基连接基，诸如C3，C6，C12氨基连接基，且还有烷基巯基连接基，诸如C3或C6巯基连接基。还可以在一种缀合物中使用不同类型的连接基。寡核苷酸可以被芳族残基连接，这些残基可以进一步被烷基或取代的烷基取代。寡核苷酸还可以包含二重或三重单元，这使得一种或不同类型的多种配体与寡核苷酸结合。寡核苷酸还可以包含由肽修饰试剂或寡核苷酸修饰试剂产生的连接基。此外，它们可以包含一种或多种通过肽(酰胺)键连接的天然或非天然氨基酸残基。通过建立的方法合成不同的寡核苷酸并且它们可以在固相合成过程中在线彼此连接。可选择地，可以在合成单个单元后使它们彼此连接。免疫应答在一个实施方案中，TLR介导的免疫应答为Thl-类免疫应答。本文所用的术语"Thl-类"意指具有Thl免疫应答的特性特征。Thl免疫应答在特征上可以包括^"导某些细胞因子，诸如IFN，，IgG2a免疫球蛋白的分泌(小鼠中)和巨噬细胞活化。术语"Thl-类"与术语"Th2-类"相反，"Th2-类"意指具有如下所述的Th2免疫应答的特性特征。Thl-类免疫应答可以包括某些特征在于与Thl免疫应答相关的细胞因子和趋化因子中的任一种的表达，包括IFN-a，IFN-P，IFN-y,TNF-a,IL-12,IL-18，IP-10及其任何组合。认为Thl免疫应答和Th2免疫应答为相反调节的。在某些实施方案中，Thl-类免疫应答可以包括某些Th2相关细胞因子，包括IL-4，IL-5，IL-10和IL-13的抑制。Thl-类免疫应答可以包括某些抗体同种型的表达，包括(在小鼠中)IgG2a，与或不与某些Th2相关抗体同种型的抑制，包括IgE和(在小鼠中)IgGl。在一个实施方案中，Thl-类免疫应答为Thl应答。Th2-类免疫应答可以包括某些特征在于与Th2免疫应答相关的细胞因子和趋化因子中的任一种的表达，包括IL-4,IL-5，IL-IO，IL-13及其任何组合。在某些实施方案中，Th2-类免疫应答可以包括某些Thl相关细胞因子的抑制。Th2-类免疫应答可以包括某些抗体同种型的表达，包括IgE和(在小鼠中)IgGl，与或不与某些Thl相关抗体同种型的抑制，包括(在小鼠中)IgG2a，在一个实施方案中，Th2-类免疫应答为Th2应答。因此，本发明在一个实施方案中提供了诱导受试者Thl-类免疫应答的方法。诱导Thl-类免疫应答包括增加或增强Thl-类免疫应答。该方法包括对受试者给予有效量的本发明TLR7/8配体和连接寡核苷酸以便诱导受试者Thl-类免疫应答的步骤。在一个实施方案中，本发明提供了抑制受试者Th2-类免疫应答的方法。该方法包括对受试者给予有效量的本发明TLR7/8配体和连接寡核苷酸以便抑制受试者Th2-类免疫应答的步骤。这类方法可以特别应用于治疗具有特征在于以Th2特性占优势的免疫应答的疾病或处于其风险中的受试者。这类疾病包括，但不限于过敏反应和津喘。在一个实施方案中，免疫应答包括免疫细胞活化的细胞表面标记，诸如CD25，CD80，CD86和CD154的增量调节。用于测定这类标记的细胞表面表达的方法为本领域众所周知的并且包括FACS分析。在一个实施方案中，为了测定细胞或细胞群中的免疫应答，细胞或细胞群表达至少一种，并且在某些情况中，仅优选TLR7，TLR8或TLR9中的一种。细胞天然表达TLR或可以操纵它以便通过将合适的TLR表达栽体导入细胞表达TLR。在一个实施方案中，细胞或细胞群作为外周血单核细胞(PBMC)获得。在一个实施方案中，细胞或细胞群作为表达TLR的细胞系获得。在一个实施方案中，细胞或细胞群作为使用TLR瞬时转染的细胞系获得。在一个实施方案中，细胞或细胞群作为使用TLR稳定转染的细胞系。此外，为了测定细胞或细胞群中的免疫应答，可以便利地将对TLR的胞内信号传导有应答的(即受其调节的)细胞报道构建体导入细胞或细胞群。在一个实施方案中，这类报道基因为在NF-KB启动子控制下配置的基因。在一个实施方案中，在该启动子控制下配置的基因为荧光素酶，不过，可以使用其它报道基因，包括绿色荧光蛋白(GFP)，P-半乳糖苷酶，碱性磷酸酶等。在适当活化的条件下，作为实例，表达焚光素酶报道构建体并且它发射可以使用发光计定量测定的可检测光信号。这些和其它报道构建体为商购的。在其它实施方案中，可以根据细胞因子，诸如IFN-a，TNF-a，IL-12，IFN，等的产生(mRNA或蛋白质)或分泌测定TLR介导的免疫应答。所述的实例表示了这些测定类型。本发明还关注检测TLR活化的不含细胞的方法的应用。本发明还包括诱导抗原特异性免疫应答(如本文更详细描述)和非特异性先天免疫性活化和对感染性攻击的广谱耐受性的方法。本文所用的术语抗原非特异性先天免疫性活化意指非B细胞的免疫细胞活化，包括NK细胞，T细胞或其它可以以不依赖抗原的方式起反应的免疫细胞或这些细胞的某些组合。诱导对感染性攻击的广i普耐受性，因为免疫细胞为活性形式并且引起对任何侵入化合物或微生物的反应。这些细胞不一定对特定抗原特异性触发。这特别用于生物战争和其它上述环境，诸如旅行者。受试者本文所用的受试者意指人或非人的脊推动物。非人脊推动物包括家畜动物，陪伴动物和实验室动物。非人受试者还特别包括非人的灵长类以及啮齿动物。非人受试者还特别包括，但不限于鸡，马，牛，猪，山羊，狗，猫，豚鼠，仓鼠，貂和兔。本文所用的处于发生疾病风险中的受试者意指已知或怀疑接触病原体的受试者，已知所述的病原体导致疾病或与之相关，或已知或怀疑易感发生疾病(例如，疾病家族史的遗传标记或疾病家族史)。本发明在一个方面中提供了治疗具有免疫系统缺陷的受试者的方法。本发明该方面的方法包括对受试者给予有效量的本发明组合物以便治疗该受试者。本文所用的免疫系统缺陷意指免疫系统支持对抗原的免疫应答的能力异常下降。在一个实施方案中，免疫系统缺陷为疾病或紊乱，其中受试者的免疫系统无法在正常能力范围内起作用，或其中它可以用于加强受试者的免疫应答，例如消除受试者肿瘤或癌症或感染。本文所用的具有免疫系统缺陷的受试者意指存在受试者免疫系统支持例如对抗原的免疫应答的能力下降的受试者。具有免疫系统缺陷的受试者包括获得性免疫缺陷的受试者和具有先天性免疫缺陷的受试者。具有获得性免疫缺陷的受试者包括，但不限于具有慢性炎性疾病的受试者，具有慢性肾功能不全或肾衰竭的受试者，具有感染的受试者，具有癌症的受试者，接受免疫抑制药的受试者，接受其它免疫抑制治疗的受试者和具有营养不良的受试者。在一个实施方案中，受试者具有抑制的CD4+T-细胞群。在一个实施方案中，受试者具有人免疫缺陷病毒(HIV)感染或具有获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。本发明该方面的方法由此为有更剧烈免疫应答需要的受试者提供了加强免疫应答或加强支持免疫应答的能力的方法本文所用的抑制应指比正常情况下的结果或效果下降。本文所用的涉及疾病或疾患的治疗应指介入这类疾病或疾患以便预防或减緩疾病或疾患发生，预防或减緩起进展，组织其进展或消除它们。例如，治疗癌症包括预防癌症发生(例如，预防癌前期状态)，减轻癌症的症状和/或抑制建立的癌症生长。^^患本发明涉及治疗得益于抑制和/或诱导某些TLR介导的免疫应答的疾病。本文所用的与TLR7介导的免疫刺激或免疫应答相关的疾病意指存在与TLR7信号传导相关的免疫活化和这类活化有害的受试者的任何疾病或其它疾患。这类疾患一般涉及TLR7信号传导活化作为对接触TLR7配体的应答。本文所用的与TLR8介导的免疫刺激或免疫应答相关的疾患意指存在与TLR8信号传导相关的免疫活化和这类活化有害的受试者的任何疾病或其它疾患。这类疾患一般涉及TLR8信号传导活化作为对接触TLR8配体的应答。本文所用的与TLR9介导的免疫刺激或免疫应答相关的疾患意指存在与TLR9信号传导相关的免疫活化和这类活化有害的受试者的任何疾病或其它疾患。这类疾患一般涉及TLR9信号传导活化作为对接触TLR9配体的应答。感染本发明可以用于直治疗诸如感染治疗疾患。感染意指受试者存在活动的胞内或胞外微生物异常集合或群体的任何疾患。这类微生物对受试者而言可以为内源性的，或它们对受试者而言可以为外源性的。具有感染的受试者为具有受试者因表浅，局部或全身受到感染性微生物侵入或受试者天然存在的内源性微生物异常增量调节生长产生的病症。感染性微生物可以为如上所述的病毒，细菌，真菌或寄生虫。各种类型的微生物可以导致感染，包括为细菌的微生物，为病毒的微生物，为真菌的微生物和为寄生虫的微生物。细菌为通过二分裂无性繁殖的单细胞生物。它们基于其形态，染色反应，营养和代谢要求，抗原结构，化学组成和遗传同源性分类和命名。可以将细菌基于其形态种型分类为三族:球形(球菌)，直-杆形(杆状菌)和弯曲或螺旋杆形(弧菌属(vibrio)，弯曲杆菌属(Campylobacter)，螺旋菌属(spirillum)和螺旋体(spirochaete))。细菌还更通常基于其染色反应分类为两类生物，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。革兰氏意指通常在微生物实验室中进行的染色方法。革兰氏阳性生物在染色操作后保持染色并且显示出深紫色。革兰氏阴性生物不保持染色，但吸收复染剂且由此显示出粉红色。感染性细菌包括，但不限于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。革兰氏阳性菌包括，但不限于巴斯德氏菌属(Pasteurella)种类，葡萄球菌属(Staphylococci)种类和链球菌属(Streptococcus)种类。革兰氏阴性菌包括，但不限于大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli)，假单胞菌属(Pseudomonas)种类和沙门菌属(Salmonella)种类。感染性细菌的具体实例包括，但不限于幽门螺杆菌(Helicobacterpyloris)，布氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferi)，侵肺军团菌(Legionellapneumophi1ia)，分枝杆菌(Mycobacteria)种类(例如结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，鸟分枝杆菌(M.avium)，胞内分枝杆菌(M.intracellulars),堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)，戈登分枝杆菌(M.gordonae)),金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)，淋病奈瑟氏球菌(Neisseriagonorrhoeae),脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriameningitidis)，单核细胞增生利斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)，酉良酒脓链球菌(Streptococcuspyogenes)(A族链球菌属)，无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)(B族链球菌属)，链球菌属(绿色链球菌族(viridansgroup))，粪肠球菌(Streptococcusfaecalis)，牛链球菌(Streptococcusbovis)，链球菌属(厌氧种类)，肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)，致病性弯曲杆菌属的种类(Campylobactersp.)，肠球菌属的种类(Enterococcussp.)，流感嗜血菌(Haemophilusinfluenzae),炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis)，白喉棒杆菌(Corynebacteriumdiphtheriae)，棒杆菌属的种类(Corynebacteriumsp.)，猪红斑丹毒丝菌(Erysipelothrixrhusiopathiae),产气夹膜梭菌(Clostridiumperfringens),破伤风梭菌(Clostridiumtetani)，产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes)，肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)，多杀巴斯德氏菌(Pasturellamultocida)，拟杆菌属的种类(Bacteroidessp.)，具梭核杆菌(Fusobacteriumnucleatum),念珠状链杆菌(Streptobacillusmoniliformis)，彻白螺旋体(Treponemapallidum),极细密螺旋体(Treponemapertenue)，钩端螺旋体属(Leptospira)，立克次体属(Rickettsia)和衣氏放线菌(Actinomycesisraelii)。细菌包括，但不限于巴斯德氏菌属种类，葡萄球菌种类，链球菌属种类，大肠埃希氏杆菌，假单胞菌属种类和沙门菌属种类。感染性细菌的具体实例包括，但不限于幽门螺杆菌，布氏疏螺旋体，侵肺军团菌，分枝杆菌种类(例如结核分枝杆菌，鸟分枝杆菌，胞内分枝杆菌，堪萨斯分枝杆菌，戈登分枝杆菌)，金黄色葡萄球菌，淋病奈瑟氏球菌，脑膜炎奈瑟氏球菌，单核细胞增生利斯特氏菌，酿酒脓链球菌(A族链球菌属)，无乳链球菌(B族链球菌属)，链球菌属(绿色链球菌族)，粪肠球菌，牛链球菌，链球菌属(厌氧种类)，肺炎链球菌，致病性弯曲杆菌属的种类，肠球菌属的种类，流感嗜血菌，炭疽芽孢杆菌，白喉棒杆菌，棒杆菌属的种类，猪红斑丹毒丝菌，产气夹膜梭菌，破伤风梭菌，产气肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌，多杀巴斯德氏菌，拟杆菌属的种类，具梭核杆菌，念珠状链杆菌，彻白螺旋体(Treponemapal1idum)，极细密螺旋体，钩端螺旋体属，立克次体属和衣氏放线菌。病毒为一般包含核酸核心和蛋白质外壳，但无法独立生存的生物体的小感染病原体。病毒还可以釆取缺乏蛋白质的感染性核酸的形式。病毒不能在没有它可以在其中复制的活细胞存在下存活。病毒通过胞吞或DNA(噬菌体)直接注射和繁殖进入特定活细胞而导致疾病。繁殖的病毒随后可以释放并且感染额外的细胞。某些病毒为含DNA的病毒，而其它病毒为含RNA的病毒。在某些方面中，本发明还涉及治疗疾病，其中在疾病进程中涉及阮病毒，诸如，例如牛海绵状脑病(即疯牛病，BSE)或动物绵羊疯痒病感染或人克-雅病。病毒包括，但不限于肠病毒(包括，但不限于细小RNA病毒科(picornaviridae)病毒,诸如脊號灰质炎病毒，柯萨奇病毒，艾柯病毒)，轮状病毒，腺病毒，肝炎病毒。已经在人中发现的具体实例包括，但不限于逆转录病毒科(Retroviridae)(例如，人免疫缺陷病毒，诸如HIV-1(也称作HTLV-III,LAV或HTLV-ni/LAV或HIV-III;和其它分离物，诸如HIV-LP;细小RNA病毒科(例如，细小RNA病毒科，甲型肝炎病毒；肠病毒，人柯萨奇病毒，鼻病毒，艾柯病毒)；Calciviridae(例如，导致胃肠炎的菌林)；披膜病毒科(Togaviridae)(例如，马脑炎病毒，风渗病毒)；黄病毒科(Flaviviridae)(例如，登革热病毒，脑炎病毒，黄热病病毒)；冠状病毒科(Coronaviridae)(例如，冠状病毒)；弹状病毒科(Rhabdoviridae)(例如，疱渗性口腔炎病毒，狂犬病病毒)；纤丝病毒科(Filoviridae)(例如，埃波拉病毒)；副粘液病毒科(Paramyxoviridae)(例如，副流感病毒，腮腺炎病毒，麻渗病毒，呼吸道合胞病毒)；正粘病毒科(Orthomyxoviridae)(例如，流感病毒)；布尼安病毒科(Bunyaviridae)(例如，汉坦病毒，布尼病毒，白蛉病毒和内罗毕绵羊病毒(Nairoviruses));沙粒病毒科(Arenaviridae)(出血热病毒)；呼肠孤病毒科(Reoviridae)(例如，呼肠孤病毒，环状病毒(orbiviurses)和轮状病毒)；双RNA病毒科(Birnaviridae);嗜肝病毒科(Hepadnaviridae)(乙型肝炎病毒)；细小病毒科(Parvoviridae)(细小病毒属(parvoviruses))5乳多空病毒科(Papovaviridae)(乳头瘤病毒，多瘤病毒)；腺病毒科(Adenoviridae)(大部分腺病毒)；疱渗病毒科(Herpesviridae)(单纯疱渗病毒(HSV)l和2，水痘带状疱渗病毒，巨细胞病毒(CMV));痘病毒科(Poxviridae)(天花病毒，痘苗病毒，痘病毒)；虹膜病毒科(Iridoviridae)(例如，非洲猪痘病毒)；和未分类病毒(例如，海绵样脑病病原，5肝炎病原(认为乙型肝炎病毒伴随体)，非曱非乙型肝炎病原体(l类=体内传播；2类=非肠道传播(即丙型肝炎)；诺瓦克病毒和相关病毒和星状病毒)。已经在人中发现的实例包括，但不限于逆转录病毒科(例如，(例如，人免疫缺陷病毒，诸如HIV-1(也称作HTLV-III，LAV或HTLV-III/LAV或HIV-III;和其它分离物，诸如HIV-LP;细小RNA病毒科(例如，细小RNA病毒科，甲型肝炎病毒；肠病毒，人柯萨奇病毒，鼻病毒，艾柯病毒)；Calciviridae(例如，导致胃肠炎的菌林)；披膜病毒科(例如，马脑炎病毒，风渗病毒)；黄病毒科(例如，登革热病毒，脑炎病毒，黄热病病毒)；冠状病毒科(例如，冠状病毒)；弹状病毒科(例如，疱渗性口腔炎病毒，狂犬病病毒)；纤丝病毒科(例如，埃波拉病毒)；副粘液病毒科(例如，副流感病毒，腮腺炎病毒，麻渗病毒，呼吸道合胞病毒)；正粘病毒科(例如，流感病毒)；布尼安病毒科(例如，汉坦病毒，布尼病毒，白蛉病毒和内罗毕绵羊病毒)；沙粒病毒科(出血热病毒)；呼肠孤病毒科(例如，呼肠孤病毒，环状病毒和轮状病毒)；双RNA病毒科；嗜肝病毒科(乙型肝炎病毒)；细小病毒科(细小病毒属)；乳多空病毒科(乳头瘤病毒，多瘤病毒)；腺病毒科(大部分腺病毒)；疱疹病毒科(单纯疱疹病毒(HSV)1和2，水痘带状疱疹病毒，巨细胞病毒(CMV));痘病毒科(天花病毒，痘苗病毒，痘病毒)；虹膜病毒科(例如，非洲猪瘟病毒)；和未分类病毒(例如，海绵样脑病病原，5肝炎病原(认为乙型肝炎病毒伴随体)，即丙型肝炎；诺瓦克病毒和相关病毒和星状病毒)。真菌为真核生物体，其中仅少数导致脊推哺乳动物感染。因为真菌为真核生物体，所以它们在大小，结构组织，生命周期和繁殖基质方面明显不同于原核细菌。一般基于形态特征，繁殖方式和培养特征分类真菌。尽管真菌可以导致受试者不同类型的疾病，诸如吸入真菌抗原后的呼吸系统过敏反应，因摄入毒性物质，诸如毒伞(Amanitaphalloides)毒素和毒蘑菇产生的毒萆肽和曲霉菌属(aspergillus)种类产生的黄曲霉毒素类导致的真菌中毒，但是并非所有的真菌均导致感染性疾病。感染性真菌可以导致全身或表浅感染。原发性全身感染可以发生在正常健康受试者中，而机会致病菌感染最常见于免疫受损受试者。导致原发性全身感染的最常见的真菌病原体包括芽生菌属(Blastomyces)，球孢菌属(Coccidioides)和組织胞浆菌属(Histoplasma)。在免疫受损或免疫抑制受试者中导致机会致病菌感染的常见真菌包括，但不限于白色假丝酵母(Candidaalbicans)，新型隐球菌(Cryptococcusneoformans)和各种曲霉菌属的种类。全身真菌感染为内脏器官的侵入性感染。生物体通常通过非，胃肠道或静脉内导管进入体内。这些类型的感染可以因原发性致病真菌或机会真菌导致。表浅真菌感染包括真菌在外表面上生长，但不侵入体内组织。典型的表浅真菌感染包括涉及皮肤，毛发或指甲的皮肤真菌感染。与真菌感染相关的疾病包括曲霉菌病，芽生菌病，念珠菌病，着色真菌病，球孢子菌病，隐球菌病，真菌性眼感染，真菌性毛发，指曱和皮肤感染，组织胞浆菌病，罗伯芽生菌病，马杜拉分枝菌病，耳真菌病，副球孢子菌病，弥散性马尼弗氏青霉(Penicilliummarneffei)，暗色丝状菌病，鼻孢子菌病，孢子丝菌病和接合菌病。真菌包括酵母和霉菌。真菌的实例包括，但不限于曲霉菌属的种类，包括烟曲霉(Aspergillusfumigatus)，皮炎芽生菌(Blastomycesdermatitidis)，假丝酵母属的种类(Candidaspp,)，包括白色假丝酵母，粗球孢菌(Coccidioidesimmitis),新型隐球酵母(Cryptococcusneoformans)，夹膜组织胞浆菌(Histoplasmacapsulatuffl)，卡氏肺囊虫(Pneumocystiscarinii)，根毛霉菌属的种类(Rhizomucorspp.)和根霉菌属的种类(Rhizopusspp.)。寄生虫为依赖于其它生物体以便存活的生物体，且由此必须进入或感染另一种生物体以持续其生命周期。感染的生物体，即宿主为寄生虫提供营养和栖息地。尽管在其最广泛的含义上，术语寄生虫可以包括所有的病原体(即细菌，病毒，真菌，原生动物和蠕虫)，但是一般而言，该术语用于仅指原生动物，蠕虫和外寄生的节肢动物(例如，蜱，蜱登)。原生动物为可以在胞内和胞外，特别是在血液，肠到或组织的胞外基质中复制的单细胞生物体。蠕虫为几乎始终在胞外的多细胞生物体(除外毛线虫属的种类(Trichinellaspp.))。蠕虫一般需要从第一寄主脱离并且传播入第二寄主以便复制。与上述这些类型相反，外寄生节肢动物与宿主身体外表面形成寄生关系。寄生虫包括胞内寄生虫和专门的胞内寄生虫。寄生虫的实例包括，但不P艮于恶性痴原虫(Plasmodiumfalciparum)，卵形痴原虫(Plasmodiumovale),三日痴原虫(Plasmodiummalariae)，间曰痴原虫(Plasmdodiumvivax)，Plasmodiumknowlesi,果氏巴贝虫(Babesiamicroti)，Babesiadivergens，克鲁斯锥虫(Trypanosomacruzi)，鼠弓形体(Toxoplasmagondii)，Trichinellaspiralis,Leishmaniamajor,杜氏利什更原虫(Leishmaniadonovani)，巴西利什曼原、虫(Leishmaniabraziliensis)，热带矛J什曼原、虫(Leishmaniatropica),冈比亚锥虫(Trypanosomagambiense)，罗德西亚锥虫(Trypanosomarhodesiense)和曼森血吸虫(Schistosomamansoni)。其它感染性生物体(即原生生物)包括疟原虫属的种类(Plasmodiumspp.)，诸如恶性痴原虫，三日痴原虫，卵形疟原虫和间日痗原虫；和鼠弓形体。血液传染的和/或血液传染包括疟原虫属的种类，果氏巴贝虫(Babesiamicroti)，Babesiadivergens，Chlamydiatrachomatis,热带利什曼原虫，利什曼原虫属的种类(Leishmaniaspp.)，巴西利什曼原虫，杜氏利什曼原虫，冈比亚锥虫和罗德西亚锥虫(非洲昏睡病)，克鲁斯锥虫(恰加斯病)和鼠弓形虫。文献中已经广泛描述了其它医学上相关的微生物，例如，参见C.G.AThomas,#/cro6/o/o^r,BailliereTindall,GreatBritain1983，将该文献的全部内容引入本文作为参考。癌症本发明在一个方面中提供了治疗具有癌症的受试者的方法。具有癌症的受试者为具有可检测到的癌细胞的受试者。癌症可以为恶性或非恶性癌症。本文所用的"癌症"意指干扰身体器官和系统的正常功能作用的细胞不受控制的生长。从其原始位置迁移并且种植在重要器官的癌症最终可以通过使受侵害器官功能退化导致受试者死亡。血癌，诸如白血病能够过度竟争受试者的正常造血室，由此造成造血衰竭(贫血，血小板减少和嗜中性白血球减少症的形式)而最终导致死亡。不同于原发性肿瘤位置，转移为因癌细胞从原发性肿瘤扩散至身体其它部分产生的癌细胞区。在诊断原发性肿瘤块时，可以监测受试者的转移灶的存在。通常可以通过单独或联用核磁共振成像(MRI)扫描，计算机X线断层摄影(CT)扫描，血液和血小板计数，肝功能研究，胸透和固扫描以及监测特定症状来检测转移灶。癌症包括，但不限于基底细胞癌，胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统(CNS)癌症；乳腺癌；乳腺癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结締组织癌；消化系统癌；子宫内膜癌；食管癌；眼癌；头颈癌；上皮内肿瘤；肾癌；喉癌；白血病；肝癌；肺癌(例如，小细胞和非小细胞)；淋巴瘤，包括何杰金和非何杰金淋巴瘤；黑素瘤；骨髓瘤；神经母细胞瘤；口腔癌(例如，唇，舌，口腔和咽)；卵巢癌；胰腺癌；胰腺癌；视网膜母细胞瘤；横紋肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌；肉瘤；皮肤癌；胃癌；睾丸癌；曱状腺癌；子宫癌；泌尿系统癌以及其它癌，腺癌和肉瘤。自身免疫疾患涉及先天性免疫应答或Thl-类免疫应答的疾患包括炎症，急性和慢性同种异体移植排斥，移植物抗宿主病(GvHD)，某些自身免疫疾病和脓毒病。考虑到本发明可以实现的对TLR信号传导的选择性抑制，本发明可以用于治疗这类疾患。自身免疫疾病一般可以分类为抗体介导的，T-细胞介导的或抗体介导的和T-细胞介导的组合。认为本发明的连接0DN和TLR配体的组合用于治疗涉及抗体介导的或T-细胞介导的免疫的各种类型的自身免疫性，包括胰岛素依赖性(I型)糖尿病，类风湿性关节炎，多发性硬化，系统性红斑狼疮(SLE)和炎性肠病(即克罗恩病和溃疡性结肠炎)。可利用这些自身免疫疾病的动物模型并且将它们用于评价本发明组合在这些疾病中的功效。其它自身免疫疾病包括，但不限于斑秃，获得性血友病，强直性脊柱炎，抗磷脂综合征，自身免疫性肝炎，自身免疫性溶血性贫血，贝切特综合征，心肌病，口炎性腹泻性皮炎，慢性疲劳免疫功能障碍综合征(CFIDS)，慢性炎症性脱髄鞘性多发性神经病，丘斯综合征，瘢痕性类天疱疮，CREST综合征，冷凝集素疾病，盘状狼疮，特发性混合性冷球蛋白血症，纤维肌痛，纤维肌炎，格-巴综合征，特发性肺纤维化，特发性血小板减少性紫癜，IgA肾病，青少年关节炎，扁平苔癣，重症肌无力，多动脉炎，多软骨炎，多腺体综合征，皮肌炎，原发性丙种球蛋白缺乏血症，原发性胆汁肝硬化，银屑病，雷诺现象，赖特综合征，结节病，僵人综合征，高安关节炎(Takayasuarthritis)，颞颥动脉/巨细胞动脉炎，眼色素层炎，血管炎和白癫风。在几种自身免疫疾病中，通常观察到针对自身抗原的抗体。例如，就系统性红斑狼掩而言，描述了单链和双链DNA或RNA的自身抗体。VallinH等(1999)//边迈""o/163:6306-13;HoetRM等(1999)//边層0/163:3304-12;venVenrooij(1990)JClinInvest86:2154-60。在自身免疫患者血清中发现的自身抗体水平与疾病的严重性相关。例如，在人SLE中产生的自身抗体的模式提示完整大分子颗粒，诸如含RNA-或DNA的复合物自身可以为免疫原性的，并且抗核酸抗体可以由此产生。LotzM等(1992)A/o/ie;16:127;MohanC等(1993)/177:1367-81。例如，这类从细胞凋王细胞或存在于自身免疫患者血清中的含DNA或RM的微生物中释放的DM或RM可以导致促成自身免疫疾病的炎症。FatenejadS(1994)///mzzu/zo/152:5523-31;MalmegrimKC等(2002)"rAsoc/4:706-12;Newkirk匪等(200DJ"力r"/"es3:253-8。实际上，可以从诱导通过认为促成组审免疫疾病发生的IFN-a分泌控制的有效免疫应答的SLE血清中鉴定含CpG的序列。MagnussonM等(2001)Sca/zf////n肌/力o/54:543-50;R6nnblomL等(2001)/加層194:F59-63。此外，可以鉴定的抗RNA抗体表位并且其由富含G，U的序列组成。TsaiDE等(1992)Jcfld美萄89:8864-8;TsaiDE等(1993)J/膽加/150:1137-45,过敏反应"过敏性疾患"或"过敏反应"意指对物质(过敏原)的获得性超敏反应。"具有过敏性疾患的受试者"应指目前发生或预先已经发生作为对过敏原应答的过敏反应的受试者。过敏性疾患包括，但不限于湿療，过敏性鼻炎或鼻炎，花粉症，过敏性结膜炎，支气管哮喘，荨麻渗(urticaria)(荨麻渗(hives))和食物过敏，其它特应性疾患，包括特应性皮炎；过敏反应；药物过敏；和血管性水肿。过敏反应一般为从对过敏原的特定类免疫球蛋白IgE产生抗体相关的发作性疾患。IgE介导的对产花粉植物发生应答也为表现出易感发生哮喘的因素。如果过敏原遇到与嗜碱细胞(血液中循环的)或肥大细胞(分散遍在于实体组织中的)表面上的IgEFc受体(FcsR)结合的特异性IgE，那么细胞被活化，导致介体诸如組胺，5-羟色胺和脂质介体产生和释放。过敏反应在IgE类组织致敏性免疫球蛋白与外源性过敏原反应时发生。IgE抗体与肥大细胞和/或嗜碱细胞结合且这些专门的细胞在受到桥连抗体分子末端的过敏原如此刺激时释放过敏反应的化学介体(血管活性胺类)。组胺，血小板活化因子，花生四烯酸代谢物和5-羟色胺为其中已知的人的最佳过敏反应介体。组胺和其它血管活性胺类一般储存在肥大细胞和嗜碱性白细胞中。这些肥大细胞分散遍在于动物组织中，且嗜碱细胞在血管系统中循环。这些细胞在细胞内生产并且储存組胺，否则涉及引起其释放的IgE结合的后果专用序列出现。过敏反应的症状根据体内位置的不同而改变，其中IgE与抗原反应。如果反应沿呼吸上皮发生，那么症状一般为打喷嚏，咳嗽和哮喘反应。就食物过敏而言，如果在消化道中发生相互作用，那么常见异常疼痛和腹泻。例如，在蜂螯伤或对过敏性受试者给予青霉素后，全身过敏反应系统可能严重并且通常威胁生命。过敏反应与Th2-类免疫应答相关，其特征至少部分在于Th2细胞因子IL-4和IL-5以及对IgE的抗体同种异型转换。Thl和Th2免疫应答彼此为反向调节的，使得对免疫应答对Thl-类免疫应答的偏移可以防止或改善Th2-类免疫应答，包括过敏反应。哞喘本文所用的"哮喘"意指呼吸系统病症，其特征在于气道炎症和狭窄以及气道对吸入病原体的反应性增加。哞喘通常与特应性或过敏性疾患相关，但并不是唯一的。哮喘的症状包括因气道阻塞导致的哮鸣，气绝，胸部紧迫感和咳嗽反复发作。可以通过观察许多生理改变检测与哮喘相关的气道炎症，诸如，气道上皮剥脱，基底膜下胶原蛋白沉积，水肿，肥大细胞活化，炎性细胞浸润，包括中性白细胞，嗜酸性粒细胞和淋巴细胞。作为气道炎症的结果，津喘患者通常发生气道高反应性，气流受限，呼吸道症状和疾病长期性。气流受限包括急性支气管收缩，气道水紳，粘液塞形成和气道重塑，这些特征通常导致支气管梗阻。在哞喘的某些情况中，可能发生基底膜下纤维化，导致肺功能持续异常。在过去几年中的研究已经揭示出哮喘可能因气道居留的炎性细胞，介体和其它细胞和组织中的复杂相互作用所导致。肥大细胞，嗜酸细胞，上皮细胞，巨噬细胞和活化T细胞均可以在与译喘相关的炎性过程中起重要作用。DjukanovicR等(1990)J迈7erie^/rZ/s142:434-457。认为这些细胞可以通过分泌形成和新近合成的可能直接或间接对局部组织起作用的介体影响气道功能。还认识到T淋巴细胞亚群(Th2)在通过释放选择性细胞因子和建立疾病长期性调节气道中的过敏性炎症方面起重要作用。RobinsonDS等(1992)iV/326:298-304。哞喘为在发生不同阶段产生的复杂病症，并且可以基于症状程度分类为急性，亚急性或慢性。急性炎症反应与细胞早期募集入气道相关。亚急性炎症反应涉及细胞募集以及导致持久性炎症模式的居留细胞活化。慢性炎症反应的特征在于持续水平的细胞损害和进行性修复过程，可能导致气道中的持久性异常。"具有哞喘的受试者"为具有呼吸系统病症的受试者，其特征在于气道炎症和狭窄以及对吸入病原体的气道反应性增加。与哮喘发生相关的因素包括，但不限于过敏原，冷温度，锻炼，病毒感染和S02。本文所迷的哞喘可以与Th2-类免疫应答相关，其特征至少部分在于Th2细胞因子IL-4和IL-5以及对IgE的抗体同种异型转换。Thl和Th2免疫应答彼此为反向调节的，使得对免疫应答对Thl-类免疫应答的偏移可以防止或改善Th2-类免疫应答，包括过敏反应。本发明TLR7/8配体和连接寡核苷酸的组合还用于改善树突细胞存活，分化和成熟。在本发明的某些方面中提供了增强表位扩散的方法。本文所用的"表位扩散，，意指从最初集中的定向于自身或外源性蛋白的优势表位优势和/或隐:k位的表位特异性多样4;表位扩散产生/种表位特异性免疫应答。抗微生物剂TLR7/8配体和连接寡核苷酸组合可以与一种或多种抗微生物剂共同使用。抗微生物剂或药物包括，但不限于抗菌剂，抗病毒剂，抗真菌剂和抗寄生虫剂。术语，诸如"抗感染剂"，"抗生素"，"抗细菌剂"，"抗病毒剂"，"抗真菌剂"，"抗寄生虫剂"和"杀寄生虫药剂"基于本领域技术人员充分确立的含义并且定义在标准医学教科书中。简言之，抗细菌剂杀伤细菌并且包括抗生素以及其它具有类似功能的合成或天然化合物。抗病毒剂可以分离自天然来源或合成并且用于杀伤或抑制病毒。抗真菌剂用于治疗表浅真菌感染和机会和原发性全身真菌感染。抗寄生虫剂杀伤或抑制寄生虫。许多抗生素为作为次级代谢产物由细胞，诸如微生物产生的低分子量分子。一般而言，抗生素干扰对微生物具有特异性并且不存在于宿主细胞中的一种或多种功能或结构。与抗感染疗法相关的问题之一在于在用抗感染剂治疗的宿主中发生的副作用。例如，许多抗感染剂可以杀伤或抑制广谱微生物并且对特定类型的种类无特异性。使用这些类型的抗感染剂治疗导致杀伤生活在宿主中的正常菌丛和感染性微生物。所述的菌丛缺失可以导致疾病并发症并且使宿主易感其它病原体，因为该菌丛与感染性病原体竟争并且作为屏障起作用。其它副作用可能作为这些化学本体对宿主的非微生物细胞或組织的特异性或非特异性在于的结果产生。与广泛使用抗感染剂的另一个问题在于发生微生物的抗生素抗性林。已经出现了万古霉素抗性肠球菌，青霉素抗性肺炎球菌，多重耐药的金黄色葡萄球菌和多重耐药的肺结核菌林，并且成为临床主要问题。广泛使用抗感染剂能够产生许多细菌的抗生素抗性菌林。作为结果，需要新的抗感染策略来抗击这些微生物。有效杀伤或抑制广泛细菌的抗细菌抗生素称作广镨抗生素。其它类型的抗细菌抗生素主要对革兰氏阳性或革兰氏阳性类细菌有效。这些类型的抗生素称作窄镨抗生素。有效对抗单一生物或疾病，但对其它类型细菌无效的其它抗生素称作有限镨抗生素。抗细菌剂有时基于其主要作用方式分类。一般而言，抗细菌剂为细胞壁合成抑制剂，细胞膜抑制剂，蛋白质合成抑制剂，核酸合成或功能抑制剂和竟争性抑制剂。细胞壁合成抑制剂抑制细胞壁合成过程且一般为细菌肽聚糖合成中的步骤。细胞壁合成抑制剂包括P-内酰胺抗生素，天然青霉素，半合成青霉素，氨节西林，克拉维酸，头孢菌素类和杆菌肽。P-内酰胺抗生素为包含4-元P-内酰胺环的抑制肽聚糖合成的最终步骤的抗生素，内酰胺抗生素可以为合成的或天然的。由青霉属(penicillium)产生的P-内酰胺抗生素为天然抗生素，诸如青霉素G或青霉素V。它们通过发酵产黄青霉(Penici11iumchrysogenum)产生。天然青霉素具有窄谱活性并且一般对链球菌属(Streptococcus)，淋球菌(Gonococcus)和葡萄球菌属(Staphylococcus)有效。还对革兰氏阳性菌有效的其它类型的天然青霉素包括青霉素F，X，K和0。半合成青霉素类一般为霉菌产生的分子6-氨基青霉烷酸的修饰物。可以通过添加侧链修饰6-氨基青霉烷酸，所述的侧链产生具有比天然青霉素更为广谱活性或各种其它有利特性的青霉素。某些类型的半合成青霉素具有对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的广谱，但被青霉素酶失活。这些半合成青霉素包括氨节西林，羧节西林，苯唑西林，阿洛西林，美洛西林和哌拉西林。其它类型的半合成青霉素对革兰氏阳性菌具有较窄的活性，但已经出现了不被青霉素酶失活的特性，它们包括，例如甲氧西林，双氯西林和萘夫西林。某些广谱半合成青霉素可以与p-内酰胺酶抑制剂，诸克拉维酸和舒巴克坦联用。内酰胺酶抑制剂不具有抗微生物作用，但它们起抑制青霉素酶的作用，由此防止半合成青霉素降解。另一种类型的P-内酰胺抗生素为头孢菌素类。它们对细菌P-内酰胺酶的降解敏感，且因此单独使用总是无效。然而，头孢菌素类耐受青霉素酶。它们对各种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有效。头孢菌素类包括，但不限于头孢瘗吩，头孢匹林，头孢氨千，头孢孟多，头孢克洛，头孢唑林，头孢呋辛，头孢西丁，头孢噻肟，头孢磺啶，头孢他美，头孢克肝，头孢曲松，头孢哌酮，头孢吡咬和拉氧头孢。杆菌肽为通过抑制胞壁肽亚单位或肽聚糖从递送该亚动物的分子释放至膜外部抑制细胞壁合成的另一类抗生素。尽管杆菌肽对革兰氏阳性菌有效，但其应用因其高毒性而一般限于局部给药。碳青霉烯为另一种能够抑制细胞壁合成的广谱P-内酰胺抗生素。碳青霉烯的实例包括，但不限于亚胺培南。单菌胺类也为广镨P-内酰胺抗生素，并且包括euztreonam。链霉菌属(Streptomyces)产生的抗生素万古霉素通过抑制细胞膜合成也对革兰氏阳性菌有效。另一类抗细菌剂为细胞膜抑制剂的抗细菌剂。这些化合物破坏细菌膜结构或抑制其功能。使用为细胞膜抑制剂的抗细菌剂的一个问题在于它们因在细菌和真核细胞膜中的磷脂类中的相似性而可以在原核细胞和细菌中产生作用。因此，这些化合物几乎没有足以允许这些化合物全身使用特异性并且防止使用高剂量局部给药。一种临床有用的细胞膜抑制剂为多粘菌素。多粘菌素通过结合膜磷脂类干扰膜功能。多粘菌素主要对革兰氏阴性菌有效并且一般用于严重的假单胞菌属感染或耐受较低毒性抗生素的假单胞菌属感染。这些与全身给予该化合物相关的副作用包括对肾和其它器官的损害。其它细胞膜抑制剂包括两性霉素B和制霉菌素，它们为主要用于治疗全身真菌感染和假丝酵母属酵母感染的抗真菌剂。咪唑类为另一类为细胞膜抑制剂的抗生素。咪唑类用作抗细菌剂和抗真菌剂，例如，用于治疗酵母感染，皮肤寄生虫感染和全身真菌感染.咪唑类包括，但不限于克霉唑，咪康唑，酮康唑，伊曲康唑和伊曲康唑。许多抗细菌剂为蛋白质合成抑制剂。这些化合物防止细菌合成结构蛋白和酶且由此导致细菌细胞生长或功能抑制或细胞死亡。一般而言，这些化合物干扰转录或翻译过程。阻断转录的抗细菌剂包括，但不限于利福平和乙胺丁醇。抑制酶RNA聚合酶的利福平具有广谱活性并且对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌和结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)有效。乙胺丁醇对结核分枝杆菌有效。阻断翻译的抗细菌剂干扰细菌核糖体以防止mRNA被翻译成蛋白质。一般而言，这种类型的化合物包括，但不限于四环素类，氯霉素，大环内酯类(例如红霉素)和氨基糖苷类(例如链霉素).氨基糖苷类为由细菌链霉菌属(Streptomyces),诸如，例如链霉素，卡那霉素，卡那霉素，阿米卡星和庆大霉素产生一类抗生素。氨基糖苷类对各种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌导致的细菌感染有用。链霉素广泛用作治疗肺结核的主要药物。庆大霉素对许多革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌菌株有用，包括假单胞菌属感染，尤其是与妥布霉素联用。卡那霉素对许多革兰氏阳性菌有用，包括青霉素抗性葡萄球菌。限制其在临床上应用的氨基糖苷类的一种副作用在于已经证实在对功效而言必不可少的剂量下，延长应用损害肾功能并且导致对听觉神经损害，从而导致耳聋。另一种类型的翻译抑制剂抗细菌剂为四环素类。四环素类为一类抗生素，它们为广谱的并且对各种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有效。四环素类的实例包括四环素，米诺环素，多西环素和金霉素。它们对治疗许多类型的细菌是重要的，但在治疗莱姆病中特别重要。作为其低毒性和最低直接副作用的结果，医学团体超量使用和误用四环素类产生问题。例如，超量使用广泛发生耐药性。抗细菌剂，诸如大环内酯类可逆结合50S核糖体亚单位并且通过肽基转移酶抑制蛋白质延长或防止不带电tRNA从细菌核糖体中释放或它们两者。这些化合物包括红霉素，罗红霉素，克拉霉素，竹桃霉素和阿奇霉素。红霉素对大部分革兰氏阳性菌具有活性，奈瑟球菌属(Neisseria)，军团菌属(Legionella)和嗜血菌属(Haemophilus)，但对肠杆菌科(Enterobacteriaceae)无效。阻断蛋白质合成过程中的肽键形成的林可霉素和克林霉素对革兰氏阳性菌有用。另一种类型的翻译抑制剂为氯霉素。氯霉素结合抑制细菌酶肽基转移酶的70S核糖体，由此防止蛋白质合成过程中的多肽链生长。与氯霉素相关的一种严重副作用为再生障碍性贫血。再生障碍性贫血在小比例(1/50，000)患者中有效治疗细菌的链霉素剂量下发生。一旦开据目前很少较高剂量处方的抗生素，那么因死于贫血的后果而几乎不使用氯霉素。它因其有效性而仍然应用于威胁生命的情况(例如，伤寒)。某些抗细菌剂破坏核酸合成或功能，例如结合DNA或RNA，使得其信息不能读取。它们包括，但不限于喹诺酮类和复方新诺明，既包括合成的化学品，又包括利福霉素类，即天然或半合成化学品。喹诺酮类通过抑制DNA促旋酶阻断细菌DNA复制，而细菌需要这种酶产生其循环DNA。它们为广镨的且实例包括诺氟沙星，环丙沙星，依诺沙星，萘啶酸和替马氟沙星。萘啶酸为结合DNA促旋酶(拓朴异构酶)的杀菌剂，所述的酶为DM复制必需的且允许超螺旋松弛和重新形成，从而抑制DM促旋酶活性。萘啶酸的主要应用在于治疗下泌尿道感染(UTI)，因为它对几种类型的革兰氏阴性菌，诸如大肠杆菌(E.coli)，产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes)，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)和变形杆菌属(Proteus)的种类有效，而这些菌为UTI的常见原因。复方新诺明为磺胺曱喁唑与曱氧节啶的联合用药，它阻断构成DNA核苷酸所需叶酸的细菌合。利福平为利福霉素衍生物，它对革兰氏阳性菌(包括结核分枝杆菌和脑膜炎奈瑟球菌(Neisseriameningitidis)导致的脑膜炎)和某些革兰氏阴性菌具有活性。利福平结合聚合酶的p-亚单位并且阻断对活化聚合酶必不可少的一级核苷酸添加，由此阻断mRNA合成。另一类抗细菌剂为作为细菌酶竟争性抑制剂的化合物。竟争性抑制剂在结构上几乎均与细菌生长因子类似并且竟争性结合，但无法完成细胞中的代谢功能。这些化合物包括磺胺类和甚至具有更高和更广镨抗菌活性的磺胺化学修饰形式。磺胺类(例如磺胺异噁唑和甲氧苄咬)用于治疗肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)，p-溶血性链球菌和大肠杆菌并且用于治疗因大肠杆菌导致的不复杂的UTI和治疗脑膜炎球菌性脑膜炎。抗病毒剂为防止病毒感染细胞或细胞内病毒复制的化合物。存在的抗病毒药远少于抗菌药，因为病毒复制过程与宿主细胞内DNA复制极为相关，使得非特异性抗病毒剂通常对宿主有毒性。在病毒感染过程中存在几个可以被抗病毒剂阻断或抑制的阶段。这些阶段包括病毒(免疫球蛋白或结合肽类)与宿主细胞附着，病毒脱壳(例如，脱壳)，病毒mRNA合成或翻译(例如，干扰素)，病毒RNA或DNA复制(例如，核苷类似物)，新病毒蛋白成熟(例如，蛋白酶抑制剂)和病毒萌发和释放。另一类抗病毒剂为核苷类似物。核苷类似物为与核苷类似，但具有不完全或异常脱氧核糖或核糖基团的合成化合物。一旦核苷类似物在细胞中，它们就被磷酸化，从而产生与正常核苷酸竟争掺入病毒DNA或RNA的三磷酸形式。一旦核苷类似物的三磷酸形式被掺入生长的核酸链，那么它就导致与病毒聚合酶不可逆地结合且由此发生链终止。核苷类似物包括，但不限于阿昔洛韦(用于治疗单纯疱渗病毒和水痘带状疱渗病毒)，更昔洛韦(用于巨细胞病毒)，碘苷，利巴韦林(用于治疗呼吸道合胞病毒)，双脱氧肌苷，双脱氧胞苷和齐多夫定(叠氮胸腺嘧咬)。另一类抗病毒剂包括细胞因子，诸如干扰素。干扰素为病毒感染的细胞以及免疫细胞分泌的细胞因子。千扰素通过结合与感染细胞相邻的细胞上的特异性身体起作用，导致防止其被病毒感染的细胞中的改变，a和p-干扰素还诱导感染细胞上的I类和II类MHC分子表达，导致将增加的抗原呈递以便宿主免疫细胞识别，可利用作为重组形式的a和p-干扰素将已经用于治疔慢性乙型肝炎和丙型肝炎。在有效用于抗病毒疗法的剂量下，干扰素具有严重副作用，诸如发热，不适感和体重减轻。免疫球蛋白疗法用于预防病毒感染。用于病毒感染的免疫球蛋白疗法不同于细菌感染，因为它不是抗原特异性的，免疫球蛋白疗法通过结合胞外病毒体并且防止其附着和进入对病毒感染敏感的细胞起作用。该疗法用于预防病毒感染抗体存在于宿主中的时间期限，一般而言，存在两种类型的免疫球蛋白疗法，即一般的免疫球蛋白疗法和超免疫球蛋白疗法。一般免疫清蛋白疗法使用由正常血液供体血清制备和采集的抗体产品。这种采集的产品包含对广泛人病毒，诸如甲型肝炎，细小病毒，肠病毒(尤其是在新生嬰儿中)而言低滴度的抗体。超免疫球蛋白疗法使用由对特定病毒具有高抗体的滴度的个体血清制备的抗体。那些抗体随后对特定病毒有用。超免疫球蛋白的实例包括带状疱渗免疫球蛋白(用于预防免疫受损儿童和新生嬰儿的水痘)，人狂犬病免疫球蛋白(用于被患狂犬病的动物咬伤的受试者的咬伤后预防)，乙型肝炎免疫球蛋白(用于预防乙型肝炎，尤其是接触病毒的受试者)和RSV免疫球蛋白(用于治疗呼吸道合胞病毒感染)。抗真菌剂用于治疗和预防感染性真菌。抗真菌剂有时根据其作用机制分类。某些抗真菌剂作为细胞壁抑制剂通过抑制葡萄糖合酶起作用。它们包括，但不限于basiungin/ECB。其它抗真菌剂通过使膜完整性失稳起作用。它们包括，但不限于咪唑类，诸如克霉唑，丝他康唑，氟康唑，伊曲康唑，酮康唑，咪康唑和优立康唑以及FK463，两性霉素B，BAY38-9502，MK991，普拉米星，UK292,布替那非和特比萘芬。其它抗真菌剂通过分解壳多糖(例如，壳多糖酶)或免疫抑制(501霜)起作用。杀寄生虫药为直接杀伤寄生虫的活性剂。这类化合物为本领域中公知的并且一般商购获得。用于人体给药的杀寄生虫药的实例包括，但不限于阿苯达唑，两性霉素B，千硝唑，硫氯酚，氯喹HC1，磷酸氯喹，克林霉素，去氢依米丁，乙胺嗪，糠酸二氯尼特，依氟鸟氨酸，呋喃唑酮，糖皮质激素类，卣泛群，双碘喹啉，伊维菌素，甲苯达唑，甲氟喹，锑酸葡甲胺，美拉胂醇，美曲膦酯，甲硝唑，氯硝柳胺，硝呋莫司，奥沙尼喹，巴龙霉素，羟乙基磺酸喷他脒，哌嗪，吡喹酮，磷酸伯氨喹，氯胍，双鞋萘酸噢嘧啶，乙胺嘧啶-磺胺类，乙胺嘧咬-磺胺多辛，奎纳克林HC1,硫酸奎宁，葡糖酸奎尼丁，螺旋霉素，葡萄糖酸锑钠(葡糖酸锑钠)，舒拉明，四环素，多西环素，塞苯哒唑，替硝唑，甲氧节啶-磺胺甲喝唑和锥虫胂胺。抗癌疗法本发明的TLR7/8配体和连接寡核苷酸组合可以与抗癌疗法联用。抗癌疗法包括癌症用药，放射和外科手术。本文所用的"癌症用药，，意指对受试者给药以便治疗癌症的活性剂。本文描述了用于治疗癌症的各种类型的药物。就本说明书的目的而言，将癌症用药分类为化疗剂，免疫治疗剂，癌症疫苗，激素疗法和生物应答调节剂。化疗剂可以选自甲氨蝶呤(methotrexate)，长春新碱，阿霉素，顺铂，不含糖的氯乙基亚硝基脲类，5-氟尿嘧啶，丝裂霉素C，博来霉素，多柔比星，达卡巴噢，泰素，fragyline,MeglamineGLA，戊柔比星，卡莫司汀(ca簡staine)和poliferposan，MMI270,BAY12-9566，RAS法尼基转移酶抑制剂，法尼基转移酶抑制剂，醒P，MTA/LY231514,力比泰，LY264618/lometexo1，Glamolec，CI—994，TNP-470，和美新/托泊替康，PKC412，伐司朴达/PSC833，诺肖林/米托蒽醌(Mitroxantrone)，Metaret/舒拉明，巴马司他，E7070，BCH-4556，CS-682，9-AC,AG3340,AG3433,Incel/VX-710，VX-853，ZD0101,ISI641,ODN698,TA2516/Marmistat，BB2516/Marmistat，CDP845,D2163,PD183805，DX8951f，乳杆菌制剂DP2202，FK317，溶链菌制剂/OK-432，AD32/戊柔比星，氯化锶/锶衍生物，Temodal/替莫唑胺，阿霉素脂质体/多柔比星脂质体，Yewtaxan/紫杉醇，泰素/紫杉醇，Xeload/卡培他滨，氟铁龙/去氧氟尿苷，Cyclopax/口服紫杉醇，口服紫杉烷，SPU-077/顺铂，HMR1275/Flavopiridol，CP-358(774)/EGFR,CP-609(754)/RAS癌基因抑制剂，BMS-182751/口服賴，UFT(替加氟/尿嘧啶)，左旋咪唑(Ergamisol)/左旋咪唑(Levamisole)，恩尿嘧啶/776C85/5FU增强剂，开普拓/左旋咪唑，盐酸伊立替康和山梨醇注射剂/伊立替康，Tumodex/Ralitrexed，克拉立平/克拉屈滨，Paxex/紫杉醇，盐酸多柔比星脂质体/多柔比星脂质体，楷莱/多柔比星脂质体，福达华/氟达拉滨，Pharmarubicin/表柔比星，DepoCyt，ZD1839，LU79553/Bis-Naphtalimide，LU103793/Dolastain，Caetyx/多柔比星脂质体，健择/吉西他滨，ZD0473/Anormed,YM116,碘源，CDK4和CDK2抑制剂，PARP抑制剂，D4809/Dexifosamide，Ifes/美钠针剂/Ifosamide，威猛/替尼泊苷，伯尔定/卡铂，顺铂(Plantinol)/顺铂(cisplatin),依托泊苷(Vepeside)/依托泊苷(Etoposide)，ZD9331，泰素帝/多西他赛，鸟嘌呤阿糖胞苷前体药物，紫杉烷类似物，亚硝基脲，烷化剂，诸如美法仑(melphelan)和环磷酰胺，氨鲁米特，天冬酰胺酶，白消安，卡賴，苯丁酸氮芥，阿糖胞苷HC1，放线菌素D，柔红霉素HC1，磷酸雌莫司汀钠，依托泊苷(VP16-213)，氟尿苷，氟尿嘧啶(5-FU),氟他胺，幾基脲(Hydroxyurea)(羟基脲(hydroxycarbamide))，异环磷酰胺，干扰素a-2a,a-2b，醋酸亮丙瑞林(LHRH-释放因子类似物)，洛莫司汀(CCNU)，氮芥HC1(氮芥)，巯基嘌呤，美司钠，米托坦(o.p'-DDD)，米托蒽醌HC1，奥曲肽，普卡霉素，丙卡巴肼HC1，链佐星，枸橼酸他莫昔芬，硫鸟噤呤，塞替派，硫酸长春碱，安吖啶(m-AMSA)，阿扎胞苷，红细胞生成素(Erthropoietin),六甲蜜胺(H醒)，白细胞介素2，米托胍腙(甲基-GAG;甲基乙二醛双-丙咪腙；MGBG),喷司他丁(2'喷司他丁)，司莫司汀(曱基-CCNU)，替尼泊苷(VM-26)和硫酸长春地辛，但不限于此。免疫治疗剂可以选自3622W94,4B5,ANAAb,抗FLK-2,抗VEGF，ATRAGEN，AVASTIN(贝伐珠单抗;Genentech)，BABS，BEC2,BEXXAR(托西莫单抗；GlaxoSmithKline)，C225,CAMPATH(阿仑珠单抗;GenzymeCorp.)，CEACIDE，CMA676，EMD-72000,ERBITUX(西妥昔单抗;ImClone系统，Inc.),Gliomab-H，GNI-250,HERCEPTIN(曲妥珠单抗；Ge謹tech),IDEC-Y2B8，ImmuRAIT-CEA,iorc5,ioregf.r3，ior16，LDP-03,LymphoCide，MDX-11，MDX-22，MDX-210，MDX-220,MDX-260,MDX-447，MEL麗UNE-1，MEL麗腿-2，Monopharm-C，NovoMAb-G2，0ncolym，0V103，0varex，Panorex，Pretarget，Quadramet，Ributaxin，RITUXAN(利妥昔单抗;Genentech)，SMART1D10Ab，SMARTABL364Ab，SMARTM195,TNT和ZENAPAX(达克珠单抗；Roche)，但不限于此。癌症疫苗可以选自EGF抗独特型癌症疫苗，Gp75抗原，GMK黑素瘤疫苗，MGV神经节苷脂结合疫苗，Her2/neu，Ovarex，M-Vax，0-Vax，L-Vax，STn-KHL癌疫苗，BLP25(MUC-1)，脂质体独特型疫苗，黑素瘤疫苗，肽抗原疫苗，毒素/抗原疫苗，基于MVA的疫苗，PACIS，BCG疫苗，TA-HPV，TA-CIN，DISC-病毒和ImmuCyst/TheraCys，但不限于此。抗过敏反应药本发明的TLR7/8配体和连接寡核苷酸可以与抗过敏反应药联用。用于治疗或预防过敏反应的常用方法包括使用过敏反应用药或脱敏疗法。用于治疗或预防过敏反应的某些进化疗法包括使用中和抗IgE抗体。抗组胺类和其它阻断过敏反应化学介体作用的药物有助于调节过敏症状的严重性，但无法预防过敏反应并且对随后的过敏应答无作用。脱敏疗法通过指定小剂量的过敏原，通常通过在皮下注射，以便诱导对该过敏原的IgG-类应答来进行。认为存在IgG抗体有助于中和因诱导IgE抗体产生的介体产生。最初使用极低剂量的过敏原治疗受试者以避免诱导严重反应并且緩慢增加该剂量。这种类型的疗法是危险的，因为对受试者实际给予了导致可能产生过敏应答和严重过敏反应的化合物。过敏反应用药包括，但不限于抗组胺类，皮质类固醇和前列腺素诱导物。抗组胺类为抵消取大细胞或嗜碱细胞释放的组胺的化合物。这些化合物为本领域众所周知的并且常用于治疗过敏反应。抗組胺类包括，但不限于阿伐斯汀，阿司咪唑，阿扎他定，氮卓斯汀，betatastine，溴苯那敏，布克力溱，西替利漆，西替利唤类似物，朴尔敏，氯马斯汀，CS560，赛庚啶，地氯雷他定，右氯苯那敏，依巴斯汀，依匹斯汀，非索非那定，HSR609，羟嗪，左卡巴斯汀，氯雷他定，甲东^菪碱，咪唑斯汀，去甲阿司咪唑，苯茚胺，异丙嗪，美吡拉敏，特非那定和曲尼司特。皮质类固醇包括，但不限于甲泼尼龙，泼尼松龙，泼尼松，倍氯米松，布地奈德，地塞米松，氟尼缩松，丙酸氟替卡松和曲安西龙。尽管地塞米松为具有抗炎作用的皮质类固醇，但是它并不定期以吸入形式用于治疗过敏反应或译喘，因为它吸收显著并且在有效剂量下具有长期抑制性副作用。然而，可以按照本发明使用地塞米松治疗过敏反应或哞喘，因为当将其与本发明的组合物联用时，可以将其以低剂量给药以便减轻副作用。与皮质类固醇使用相关的某些副作用包括咳嗽，发声困难，鵝口疮(假丝酵母病)，并且在较高剂量下，为全身作用，诸如肾上腺抑制，葡萄糖耐受不良，骨质疏松症，骨无菌性坏死，白内障形成，生长抑制，高血压，肌肉虚弱，皮肤细线化和易擦伤。Barnes&Peterson(1993)j边细p!'rZ/"48:S1-S26;和KamadaAK等(1996)J边/Aes;72'rCr"Care#ed153:1739-48。抗译喘药本发明的TLR7/8配体和连接寡核苷酸组合可以与抗哞喘药联用。用于治疗哮喘的药物(即抗哞喘药)一般分成两类，即速释药剂和长效控制药剂。哮喘患者以每日为基础服用长效控制药剂，以便实现和维持对持久性哞喘的控制。长效控制药剂包括抗炎剂，诸如皮质类固醇，chromolynsodium和奈多罗米；长效支气管扩张药，诸如长效P广激动剂和甲基黄嘌呤类；和白细胞三烯调节剂。速释药物包括短效P2激动剂，抗胆碱能药和全身用皮质类固醇。存在与这些药物各自相关的许多副作用，并且化学药物中没有一种药物单独或以组合方式能够预防或完全治疗哞喘。哞喘用药包括，但不限于PDE-4抑制剂，支气管扩张药/p-2激动剂，K+通道开放剂，VLA-4拮抗剂，烯丙异戊酰脲拮抗剂，血栓烷A2(TXA2)合成抑制剂，黄噪呤类，花生四烯酸拮抗剂，5脂氧合酶抑制剂，TXA2受体拮抗剂，TXA2拮抗剂，5-lipox活化蛋白抑制剂和蛋白酶抑制剂。支气管扩张药/P2激动剂为一类导致支气管扩张或平滑肌松弛的化合物。支气管扩张药/p2激动剂包括，但不限于沙美特罗，舒喘灵，沙丁胺醇，特布他林，D2522/福莫特罗，非诺特罗，比托特罗，吡布特罗，曱基黄嘌呤类和奥西那林。长效P2激动剂和支气管扩张药为除用于抗炎疗法外还用于长期预防症状的化合物。长效Pr激动剂包括，但不限于沙美特罗和沙丁胺醇。这些化合物常与皮质类固醇联用并且如果不使用任何抗炎疗法，一般就不使用它们。它们在超剂量下与副作用相关，诸如心动过速，骨骼肌颤动，低钾血症和QTc间隔延长。甲基黄嘌呤类，包括，例如茶碱已经用于长期控制和预防症状。这些化合物因磷酸二酯酶抑制和可能的腺苷拮抗作用而导致支气管扩张。剂量相关急性毒性为使用这些类型化合物的具体问题。作为结果，:窄治疗范围。副作用包括心动过速，快速性二律^^常，恶心和呕吐，中枢神经系统刺激，头痛，癫痫发作，呕血，高血糖症和低钾血症。短效Pr激动剂包括，但不限于沙丁胺醇，比托特罗，吡布特罗和特布他林。与给予短效P2激动剂相关的某些不良作用包括心动过速，骨骼肌颤动，低钾血症，乳酸增加，疼痛和高血糖症。Chromolynsodium和奈多罗米用作主要预防因锻炼导致的译喘症状或因过敏原产生的过敏症状的长效控制药物。认为这些化合物可以阻断因感染氯化物通道功能对过敏原的早期和晚期反应。它们还稳定肥大细胞膜并且抑制活化和介体活化和从inosineophil和上皮细胞中释放。一般需要给药4—6周期限以便获得最大有益性。抗胆碱能药一般用于緩解急性支气管痉挛，认为这些化合物通过竟争性抑制毒萆碱性胆碱能受体起作用。抗胆碱能药包括，但不限于异丙托溴铵。这些化合物仅逆转胆碱能介导的支气管痉享，但不改变任何对抗原的反。副作用包括口干和呼吸分泌物，在某些个体中喘鸣增加，如果喷眼则导致视力模糊。本发明的组合物还可以用于治疗气道重塑。气道重塑因平滑肌细胞增殖和/或气道中粘膜下层增厚导致且最终导致造成气流受限的气道狭窄。本发明的组合物可以进一步预防重塑且甚至进一步减少因重塑过程产生的组织叠加。佐剂本发明的TLR7/8配体和连接寡核苷酸可以与其它试剂联用，诸如佐剂。本文所用的佐剂意指非抗原，TLR7/8配体和连接寡核苷酸的增强对抗原应答，例如，体液和/或细胞免疫应答的免疫细胞活化的物质。佐剂促进辅助细胞累积和/或活化以便增强抗原特异性免疫应答。佐剂用于增强疫苗功效，即含抗原的用于应答对抗原的保护性免疫的组合物。佐剂一般包括产生长效作用的佐剂，免疫刺激佐剂和产生长效作用和刺激免疫系统的佐剂。本文所用的产生长效作用的佐剂为导致可以在体内緩慢释放的佐剂，由此延长免疫细胞与抗原的接触。这种类型的佐剂包括，但不限于铝(例如，氢氧化铝，磷酸铝)；基于乳剂的制剂，包括矿物油，非矿物油，油包水型或水包油型乳剂，水包油型溶剂，诸如SeppicISA系列Montanide佐剂(例如，MontanideISA720;AirLiquide，Paris,France);MF-59(用Span85和Tween80稳定的7K包角鲨烯乳剂；ChironCorporation,Emeryville,Calif.);和PROVAX(包含稳定洗涤剂和胶束成形剂的水包油型溶剂；IDECPharmaceuticalsCorporation,SanDiego,Calif.)。免疫-刺激剂为导致免疫系统细胞活化的佐剂。例如，它可以导致免疫细胞产生和分泌细胞因子。这种类型的佐剂包括，但不限于纯化自Q.saponaria树的树皮的皂苷类，诸如QS21(使用HPLC分级分离在笫21个峰上洗脱的糖月旨；AquilaBiopharmaceuticals，Inc.,Worcester,Mass.);聚[二(羧酸苯氧基)磷腈(PCPP聚合物；VirusResearchInstitute,美国)；脂多糖类的衍生物，诸如一磷酰基脂质A(MPL;RibiI咖unoChemResearch,Inc.,Hamilton,Mont.)，胞壁酰二肽(MDP;Ribi)和苏氨酰-胞壁酰二肽(t-MDP;Ribi);0M-174(与月旨质A相关的葡糖胺二糖；0MPharmaSA，Meyrin，Switzerland);和利什曼原虫属伸长因子(纯化的利什曼原虫属蛋白；CorixaCorporation,Seattle,Wash.)。这种类型的佐剂还包括CpGDNA。产生长效作用和刺激免疫系统的佐剂为那些基于上述确定的功能的两者的化合物。这种类型的佐剂包括，但不限于ISCOMS(包含混合的皂苷类，脂质并且形成具有可以保持可以的孔病毒大小的颗粒免疫刺激复合物；CSL，Melbourne,Australia);SB-AS2(SmithKlineBeecham佐剂系统#2，其为包含MPL和QS21的水包油型乳剂SmithKlineBeechamBiologicals[SBB]，Rixensart，Belgium);SB-AS4(包含铝和MPL的SmithKlineBeecham佐剂系统#4;SBB，Belgium);形成胶束的非离子型嵌段共聚物，诸如CRL1005(它们包含位于聚氧乙烯链侧翼的疏水性聚氧丙烯直链；Vaxcel，Inc.,Norcross,Ga.);和Syntex佐剂制品(SAF，包含Tween80和非离子型嵌段共聚物的水包油型乳剂；SyntexChemicals,Inc.,Boulder,Colo.)。佐剂还与可以为脂肽，诸如Pam3Cys;阳离子型多糖，诸如脱乙酰壳多糖；或阳离子肽，如鱼精蛋白。细胞因子本发明的TLR7/8配体和连接寡核苷酸组合还可以与细胞因子联用。细胞因子是由介导炎症和免疫反应的许多类型细胞产生的可溶性蛋白和糖蛋白。细胞因子介导免疫系统细胞之间的通信，在局部和全身起作用以便募集细胞和调节其功能和增殖。细胞因子类别包括先天免疫性的介体和调节剂，适应性免疫的介体和调节剂和造血刺激剂。细胞因子中包括白细胞介素(例如，IL-1，IL-2,IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8,IL-9，IL-IO，IL-ll，IL-12,IL-13,IL-14，IL-15，IL-16，IL-17，IL-18和白细胞介素19-32(IL-19-IL-32)等),趋化因子(例如，IP-IO，RANTES，MIP-la，MIP-lj3，MlP-3a，MCP-1，MCP-2，MCP-3，MCP-4，嗜酸细胞活化趋化因子，I-TAC和BCA-1等)和其它细胞因子，包括l型千扰素(例如，IFN-a和IFN-13)，2型干扰素(例如，IFN-y)，肿瘤坏死因子-a(TNF-a)，转化生长因子-p(TGF-j3)和各种集落刺激因子(CSFs)，包括GM-CSF，G-CSF和M-CSF。抗原本发明的TLR7/8配体和连接寡核苷酸组合可以任选在疫苗制品中与抗原联用。本文所用的"抗原"意指能够被T-细胞抗原受体或B-细胞抗原受体识别的任何分子。该术语广泛包括被作为异物被宿主免疫系统识别的任何类型的分子。抗原一般包括，但不限于细胞，细胞提取物，蛋白质，多肽类，肽类，多糖类，多糖缀合物，多糖类和其它分子的肽和非肽模拟物，小分子，脂质，脂蛋白，糖脂类，多糖类，碳水化合物，病毒和病毒提取物和多细胞生物，诸如寄生虫和过敏原。就为蛋白质，多肽类或肽类的抗原而言，这类抗原可以包括编码这类抗原的核酸分子。更具体地说，抗原包括，但不限于癌抗原，包括癌细胞和在癌细胞内或其上表达的分子；微生物抗原，包括微生物和在微生物内或其上表达的分子；和过敏原。因此，本发明在某些实施方案中提供了用于癌症，病原体和过敏原的疫苗。在各种实施方案中，抗原为微生物抗原，癌抗原或过敏原。本文所用的"微生物抗原"为微生物的抗原，并且包括，但不限于病毒，细菌，寄生虫和真菌。这类抗原包括完整微生物及其天然分离物和片有^异性的免疫;答的合成化合^。J^诱导(体液和/或细胞)对天然微生物抗原的免疫应答，化合物与天然微生物抗原类似。这类抗原在本领域中常用并且为本领域技术人员众所周知。本发明指定包括来源于本文所述的病原体中的任一种的抗原。本文所用的术语"癌抗原"和"胂瘤抗原"可以互换使用，其指的是化合物，诸如肽，蛋白质，脂蛋白或糖蛋白，它在主要组织相容性复合物(MHC)分子环境下在抗原-呈递细胞上表达时与肿瘤或癌细胞结合并且能够引起免疫应答。癌抗原由癌细胞差别表达且由此可以利用靶向癌细胞。癌抗原为能够刺激明显的肿瘤特异性免疫应答的抗原。这些抗原中的某些由正常细胞编码，但不一定由其表达。这些抗原的特征在于在正常细胞中通常为静息的(即不被表达)，仅在分化的某些阶段被表达和暂时表达，诸如胚胎抗原和胎儿抗原。其它癌抗原由突变细胞基因编码，诸如癌基因(例如，活化的ras癌基因)，抑制基因(例如，突变体p53)，因内在缺失或染色体易位产生的融合蛋白。其它癌抗原可以由病毒基因，诸如RNA和DM肿瘤病毒上携带的那些基因编码。例如，可以如CohenPA等(1994)Ca/3C"b54:1055-8中所述通过制备癌细胞的粗提取物，通过部分纯化抗原，通过重组技术或通过从头合成已知抗原由癌细胞制备癌抗原。癌抗原包括，但不限于重组表达的抗原，完整胂瘤或癌或其细胞的免疫原性部分。这类抗原可以通过重组方式或本领域技术人员公知的任何其它方式分类或制备。肿瘤抗原的实例包括MAGE，MART-1/Melan-A，gp100,二肽基肽酶IV(DPPIV)，腺苷脱氨酶结合蛋白(ADAbp),亲环蛋白b，结肠直肠相关抗原(CRC)-C017-1A/GA733，癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-l和CAP-2，etv6，amll，前列腺特异性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-1，PSA-2和PSA-3，前列腺特异性膜抗原(PSMA)，T-细胞受体/CD3-^链，MAGE家族胂瘤抗原(例如，MAGE-Al,MAGE-A2，MAGE-A3，MAGE-A4，MAGE-A5，MAGE-A6，MAGE-A7，MAGE-A8，MAGE-A9，MAGE-AIO，MAGE-All，MAGE-A12，MAGE-Xp2(MAGE-B2)，MAGE-Xp3(MAGE-B3),MAGE-Xp4(MAGE-B4)，MAGE-C1，MAGE-C2，MAGE-C3,MAGE-C4，MAGE-C5)，GAGE家族肿瘤抗原(例如，GAGE-1，GAGE-2，GAGE-3，GAGE-4，GAGE-5，GAGE-6，GAGE-7，GAGE-8，GAGE-9)，BAGE，RAGE，LAGE-1，NAG，GnT-V，MUM-1，CDK4，酪氨酸酶，p53，MUC家族，HER2/neu，p21ras，RCAS1，a-甲胎蛋白，E-钙粘蛋白，a-连环蛋白，P-连环蛋白和厂连环蛋白，pl20ctn，gpl00pme1117，PRAME，M-ES0-1，cdc27，腺瘤结肠息肉蛋白(APC)，胞衬蛋白，连接蛋白37，Ig-独特型，p15，gp75，GM2和GD2神经节苷脂类，病毒产品，诸如人乳头瘤病毒蛋白，Smad族肿瘤抗原，lmp-l，PU,EBV-编码的抗原(EBNA)-1，脑糖原磷酸化酶，SSX-l,SSX-2(H0M-MEL-40)，SSX-1，SSX-4，SSX-5，SCP-1和CT-7和c-erbB-2。该目录并非意味着起限定作用。本文所用的"过敏原"为能够引起特征在于IgE产生的免疫应答的分子。过敏原还为可以在易感受试者中诱导过敏性或哮喘性反应的物质。因此，在本发明的上下文中，术语过敏原意指可以引起由IgE抗体介导的过敏反应的具体类型的抗原。过敏原的目录为大量的并且可以包括花粉，昆虫毒液类，动物毛皮垢屑粉尘，真菌孢子和药物(例如，青霉素)。天然动物和植物过敏原的实例包括对下列属具有特异性的蛋白质犬属(Canis)(家犬(Canisfamiliaris));表皮螨属(Dermatophagoides)(例如，粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae));猫属(Felis)(Felisdomesticus);豚草属(Ambrosia)(豚草(Ambrosiaartemisiifolia));黑麦草属(Lolium)(例如，黑麦草(Loliumperenne)和多花黑麦草(Loliummultiflorum));柳杉属(Cryptomeria)(曰本柳杉(Cryptomeriajaponica));链格孢属(Alternaria)(互格链格孢(Alternariaalternata));Aider,桤木属(Alnus)(欧洲桤木(Almisgultinosa));桦木属(Betula)(祝皮桦(Betulaverrucosa));栎属(Quercus)(白栎(Quercusalba));洋橄榄属(Olea)(油橄榄(Oleaeuropa));蒿属(Artemisia)(艾萬(Artemisiavulgaris));车前属(Plantago)(例如,长叶车前(Plantagolanceolata));蔷草属(Parietaria)(例如，Parietariaofficinalis和Parietariajudaica);蜚蠊(Blattella)(例如，德国小蠊(Blattellagermanica));蜜蜂属(Apis)(例如，Apismultiflorum);柏属(Cupressus)(例如,地中海柏木(Cupressussempervirens)，绿干^白(Cupressusarizonica)和大果柏木(Cupressusmacrocarpa));刺柏属(Jimiperus)(例如，Jimiperussabinoides，Juniperusvirginiana，欧洲刺柏(Juniperuscommunis)和阿希刺柏(Juniperusashei));Thuya(例如，Thuyaorientalis);扁柏属(Chamaecyparis)(例如，曰本扁柏(Chamaecyparisobt美国))；大嫌属(Periplaneta)(例如，美洲大蠊(Periplanetaamericana));冰草属(Agropyron)(例如，偃麦草(Agropyronrepens));黑麦属(Secale)(例如，黑麦(Secalecereale));小麦属(Triticum)(例如，小麦(Triticumaestivum));鸭茅属(Dactylis)(例如，鸭茅(Dactylisglomerata));羊茅属(Festuca)(例如，牛尾草(Festucaelatior));早熟禾属(Poa)(例如，草地早熟禾(Poapratensis)和加拿大早熟禾(Poacompressa));燕麦属(Avena)(例如，燕麦(Avenasativa));绒毛草属(Holcus)(例如，绒毛草(Holcuslanatus));黄花茅属(Anthoxanthum)(例如，黄花茅(Anthoxanthumodoratum));燕麦草属(Arrhenatherum)(例如，燕麦草(Arrhenatherumelatius));剪股草属(Agrostis)(例如，小糠草(Agrostisalba));梯牧草属(Phleum)(例如，梯牧草(Phleumpratense));錄草属(Phalaris)(侈寸:i口，箱草(Phalarisarundinacea));雀稗属(Paspalum)(命J:fi口，Paspalumnotatum);高粱属(Sorghum)(例如，Sorghumhalepensis);和雀麦属(Bromus)(例如，无芒雀麦(Bromusinermis))。抗体和ADCC本发明的TLR7/8配体和连接寡核苷酸组合还增加天然杀伤细胞裂解活性和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。可以使用对细胞靶，诸如癌细胞具有特异性的抗体的组合进行ADCC，使得受试者免疫系统杀伤肿瘤细胞。用于ADCC操作的抗体包括与体内细胞发生相互作用的抗体。本领域中已经描述了许多这类对细胞靶具有特异性的抗体并且许多为商购的。在一个实施方案中，抗体为IgG抗体。用于本发明的治疗抗体可以对抗原(例如，细菌，病毒，寄生虫或真菌抗原)，癌或肿瘤相关抗原和自身抗原具有特异性。优选的抗体为那些识别和结合存在于细胞上或其中的抗原的那些。合适的抗体的实例包括，但不限于RituxanTM(利妥昔单抗，抗CD20抗体)，赫赛汀(曲妥珠单抗)，Quadramet，Panorex，IDEC-Y2B8，BEC2，C225，Oncolym，SMARTM195，ATRAGEN，Ovarex，Bexxar，LDP-03,iort6，MDX-210，MDX-11，MDX-22，OV103，3622W94,抗VEGF,Zenapax，MDX-220，MDX-447，MELMMUNE-2，MELI腿UNE-1，CEACIDE，Pretarget，NovoMAb-G2，TNT，Gliomab-H，GNI-250，EMD-72000,LymphoCide,CMA676，Monopharm-C,4B5，ioregf.r3，iorc5，BABS，抗FLK-2，MDX-260,ANAAb，SMART1D10Ab,SMARTABL364Ab，CC49(mAbB72.3)，ImmuRAIT-CEA，抗IL-4抗体，抗IL-5抗体，抗IL-9抗体，抗Ig抗体，抗IgE抗体，血清-衍生的乙型肝炎抗体，重组乙型肝炎抗体等。类似地可用于本发明的其它抗体包括阿仑珠单抗(B细胞慢性淋巴细胞白血病)，吉妥珠单抗奥佐米星(CD33+急性髓性白血病，)，hP67.6(CD33+急性髄性白血病，)，英夫利西单抗(炎性肠病和类风湿性关节炎)，依那西普(类风湿性关节炎)，依那西普，MDX-210，oregovomab，抗EGF受体mAb，MDX-447，抗组织因子蛋白(TF)，(Sunol);ior-c5,c5，依决洛单抗，替伊莫单抗，神经节苷脂GD3表位的抗独特型mAb模拟物，抗HLA-DrlOmAb,抗CD33人源化mAb，抗CD52humAb，抗CDlmAb(iort6)，MDX-22，西洛果瓦，抗17-lAmAb，贝伐珠单抗，达克珠单抗，抗TAG-72(MDX-220)，高分子量蛋白聚糖抗独特型mAb模拟物(I-Mel-1)，高分子量蛋白聚糖抗独特型mAb模拟物(I-Mel-2)，抗CEAAb，hmAbHll，抗DNA或DNA相关蛋白(组蛋白)mAb，Gliomab-HmAb,GNI-250mAb，抗CD22，CMA676)，GD2神经节苷脂的抗独特型人mAb，ioregf/r3，抗iorc2糖蛋白mAb，iorc5，抗FLK-2/FLT-3mAb，抗GD-2双特异性mAb,抗细胞核的自身抗体，抗HLA-DRAb，抗CEAmAb，帕利珠单抗，贝伐珠单抗，阿仑珠单抗，BLyS-mAb,抗VEGF2,抗Trail受体；B3mAb,mAbBR96,乳腺癌;和Abx-Cbl迈Ab。免疫球蛋白疗法本发明的活性剂还可以与标准和超免疫球蛋白疗法联用。标准免疫球蛋白疗法使用由正常血液供体血清制备和采集的抗体产品。这种采集的产品包含对广泛抗原，诸如感染性病原体中的那些(例如，细菌，病毒，诸如甲型肝炎，细小病毒，肠病毒，真菌和寄生虫)的低滴度的抗体。超免疫球蛋白疗法使用由对特定病毒具有高抗体的滴度的个体血清制备的抗体。超免疫球蛋白的实例包括带状疱渗免疫球蛋白(用于预防免疫受损儿童和新生嬰儿的水痘)，人狂犬病免疫球蛋白(用于被患狂犬病的动物咬伤的受试者的咬伤后预防)，乙型肝炎免疫球蛋白(用于预防乙型肝炎，尤其是接触病毒的受试者)和RSV免疫球蛋白(用于治疗呼吸道合胞病毒感染)。给药剂量和给药合物中。例如，可以将连接寡核苷酸和TLR7/8配体彼此混合并且对受试者给药或保持作为组合基本上同时接触细胞。作为另一个实例，可以将连接寡核苷酸和TLR7/8配体在不同时间对受试者给药或保持与细胞接触。作为另一个实例，可以对受试者的不同部位给予连接寡核苷酸和TLR7/8配体。如上所述，术语"有效量"一般指的是必需或足以实现所需生物作用的用量。通过在各种活性化令物和加权因素，诸如功效，相对生物利用度，患者体重，不良副作用的严重性和优选的给药方式中进行选择，可以结合本文提供的教导计划有效预防或治疗方案，它不会产生明显的毒性并且完全有效地治疗特定受试者。用于任何特定应用的有效量根据诸如所治疗的疾病或疾患，给予的特定寡核苷酸，受试者的大小或所治疗疾病或疾患的严重性这类因素的不同而改变。本领域技术人员可以根据经验而不必使用过度实验确定特定连接寡核苷酸和TLR7/8配体和/或抗原和/或其它治疗剂的有效量。用于全身或局部递送本文所述化合物的受试者剂量一般在每次给药约10ng-10mg,这取决于是每日，每周，还是每个月和它们之间的任何其它时间给予施用，否则就根据需要进行。更一般的是，全身或局部剂量范围在每次给药约1mg，且最一般的是在约10pg-IOOng，其中间隔几天或几周给药2-4次。高剂量可能是非肠道给药所需的。然而，在某些实施方案中，可以使用高于上述典型剂量5-10，OOO倍范围的用于这些目的的非肠道剂量。就本文所述的任何化合物而言，最初可以根据动物模型测定治疗有效量。可以基于相对生物利用度和给予化合物的功效调整所施用的剂量。基于上述方法和其它作为本领域众所周知的方法将剂量调整至最大功效充分属于本领域技术人员的能力范围。给药途径就临床应用而言，可以将本发明的TLR7/8配体和连接寡核苷酸组合单独给予或将其配制成通过任何合适的有效性实现所需治疗效果的给药途径的递送复合物。给药途径包括肠道和非肠道给药途径。肠道给药途径的实例包括口腔，胃，肠和直肠。非肠道给药途径的限制性实例包括静脉内，肌内，皮下，腹膜内，鞘内，局部注射，局部，鼻部，粘膜和肺。递送栽体可以单独(例如，在盐水或緩冲液中)或使用本领域中公知的任何递送载体给予所述的接寡核苷酸和TLR7/8配体和/或抗原和/或其它治疗剂。例如，可以将本发明的TLR7/8配体和连接寡核苷酸组合直接给予受试者或与核酸递送复合物一起给予。核酸递送复合物应指使用靶向方式结合(例如，离子或共价结合；或包嚢在其中)的核酸分子(例如，导致对乾细胞较高的亲和结合。核酸递送载体的实例包括与固醇(例如，胆固醇)，脂质(例如，阳离子脂质，病毒体或脂质体)或靶细胞特异性结合剂(例如，靶细胞特异性身体识别的配体)结合的核酸。优选的复合物在体内可以保持充分稳定以防止在靶细胞摄入前的显著解偶联。然而，该复合物可以在细胞内的适当条件下裂解，以便以功能形式释放寡核苷酸。本发明已经描述并且可以使用的其它递送载体包括螺旋状物(Gould-Fogerite等，1994，1996);emulsomes(Vancott等，1998,Lowell等，1997);ISCOMs(Mowat等，1993，Carlsson等，1991，Hu等，1998,Morein等，1999);脂质体(Childers等，1999，Michalek等，1989，1992，deHaan1995a，1995b);活细菌栽体(例如，沙门菌属，大肠埃希氏杆菌，卡介苗，埃希氏杆菌(Shigella)，乳杆菌属(Lactobacillus))(Hone等，1996，Pouwels等，1998，Chatfield等，1993，Stover等，1991，Nugent等，1998);肝病毒载体(例如，牛痘，腺病毒，单纯疱渗)(Gallichan等，1993，1995，Moss等，1996，Nugent等，1998，Flexner等，1988，Morrow等，1999);微球(Gupta等，1998，Jones等，1996，Maloy等，1994，Moore等，1995，O'Hagan等，1994，Eldridge等，1989);核酸疫苗(Fynan等，1993，Kuklin等，1997，Sasaki等，1998,Okada等，1997，Ishii等，1997);聚合物(例如，羧甲基纤维素，脱乙酰壳多糖)(Hamajima等，1998，Jabbal-Gill等，1998);聚合物环(Wyatt等，1998);蛋白体(Vancott等，1998，Lowell等，1988，1996,1997);氟化钠(Hashi等，1998);转基因植物(Tacket等，1998，Mason等，1998，Haq等，1995);病毒体(Gluck等，1992，Mengiardi等，1995,Cryz等，1998);病毒样颗粒(Jiang等，1999，Leibl等，1998)。其它递送栽体为本领域中药物组合物可以将本发明的TLR7/8配体和连接寡核苷酸组合配制成还包含药学上可接受的载体的药物组合物。药学上可接受的载体意指一种或多种相容性固体或液体填充剂，稀释剂或包囊物质，它们适合于对人或其它脊推动物给予。载体为天然或合成的有机或无机组分，将它们与活性组分合并有利于所需作用。以一种方式共同混合药物组合物的成分，使得不存在明显损害所需药物功效的相互作用。就口服给药而言，易于通过将活性化合物与本领域众所周知的药学上可接受的载体合并配制化合物(即连接寡核苷酸和TLR7/8配体，抗原和/或其它治疗剂)。这类载体能够将本发明的化合物配制成由所治疗的受试者口服摄取的片剂，丸剂，锭剂，胶嚢，液体，凝胶，糖浆剂，骨剂，混悬液等。可以获得作为固体赋形剂的药物制剂，任选研磨所得混合物并且如果需要，在加入合适的助剂后加工颗粒混合物而得到片芯或锭芯。合适的赋形剂特别为填充剂，诸如糖类，包括乳糖，蔗糖，甘露糖醇或山梨醇；纤维素制品，诸如，例如，玉米淀粉，小麦淀粉，稻米淀粉，马铃薯淀粉，明胶，黄蓍树胶，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解剂，诸如交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂或藻酸或其盐，诸如藻酸钠。任选还可以在盐水或緩冲液中配制口服制剂，以便中和内部酸性条件，或可以在不使用任何载体的情况下给药。给锭芯包合适的包衣层。为了这一目的，可以使用浓糖溶液，它可以任选包含阿拉伯树胶，滑石粉，聚乙烯吡咯烷酮，卡波普凝胶，聚乙二醇和/或二氧化钛，漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或色素加入到片剂或锭剂包衣层中以便鉴定或表征不同活性化合物剂量的组合。可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推入-配合式胶囊以及由明胶和增塑剂，诸如甘油或山梨醇制成的软密封胶囊。推入-配合式胶嚢可以包含活性组分与填充剂，诸如乳糖，粘合剂，诸如淀粉和/或润滑剂，诸如滑石粉或硬脂酸，镁和任选的稳定剂的混合物。在软胶嚢中，可以将活性化合物溶于或悬浮于合适的液体，诸如脂肪酸，液体石蜡或液体聚乙二醇中。此外，可以加入稳定剂。还可以使用为口服给药配制的微球。这类微球为本领域中充分定义的。所有口服给药用制剂在剂量上均应适合于这类给药。就口含给药而言，组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。可以通过使用标准吸入装置吸入肺道，尤其是支气管，且更具体地说是吸入深部肺的肺泡给予所述的化合物。可以来自加压药包或喷雾器的气雾剂形式，借助于使用合适的抛射剂递送化合物，所述的抛射剂，例如，二氯二氟曱烷，三氯氟甲烷，二氯四氟乙烷，二氧化碳或其它合适的气体。就加压气溶胶而言，可以通过配备递送经计量用量的阀门测定剂量单位。本文所用的吸入装置为给药气溶胶，诸如干粉形式的化合物的任何装置。这种类型的设备为本领域众所周知的并且在诸如Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,19thEdition,1995，MacPublishingCompany,Easton，Pennsylvania,1676-1692页中找到的描述中详细描述。许多美国专利中也描述了吸入装置，诸如美国专利US6,116,237。本文所用的"粉末"意指由细分散固体颗粒组成的组合物。优选化合物可相对自由流动并且能够分散于吸入装置中和随后倍受试者吸入，使得化合物达到肺以便能够透入肺泡。"干粉"意指具有含湿量的粉末组合物，使得颗粒易于分散于吸入装置中而形成气溶胶。含湿量一般低于约10y。重量(。/flW)水，并且在某些实施方案中为低于约5%w和优选低于约3%w。可以使用聚合物配制粉末或可以任选使用其它材料，诸如脂质体，清蛋白和/或其它载体配制。本领域技术人员可以为具体治疗应用选择气溶胶剂量和递送系统，诸如在下歹ij文献中所述，例如Gonda,I."Aerosolsfordeliveryoftherapeuticanddiagnosticagenttotherespiratorytract,"CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems，6:273-313(1990);和Moren，"Aerosoldosageformsandformulations,"AerosolsinMedicine.Principles,DiagnosisandTherapy,Moren等,Eds.，Elsevier,Amsterdam,1985。当需要全身递送时，可以为通过注射，例如通过快速浓注或连续输注进行非肠道给药配制化合物。可以将注射用制剂制成单位剂型，例如，添加了防腐剂的安瓿或多剂量容器形式。这些组合物可以采用诸如在油或含水载体中的混悬液，溶液或乳剂形式并且可以包含配制助剂，诸如悬浮剂，稳定剂和/或分散剂。用于非肠道给药的药物制剂包括在水溶性形式的活性化合物的水溶液。另外，可以将活性化合物的混悬液制备成适当的油注射混悬液。合适的其中溶剂或载体包括脂肪油，诸如芝麻油或合成脂肪酸酯类，诸如油酸乙酯或甘油三酯类或脂质体。含水注射混悬液可以包含增加混悬液粘度的物质，诸如羧曱基纤维素钠，山梨醇或葡聚糖。任选该混悬液还可以包含合适的稳定剂或增加化合物溶解度的试剂以便制备高浓缩溶液。可选择地，活性化合物可以为在使用前用合适的载体，例如无菌无热原水溶解的粉末形式。还可以将化合物配制成直肠或阴道用组合物，诸如栓剂或保留灌肠剂，例如，其包含常用栓剂基质，诸如可可脂或其它甘油酯类。除上述制剂外，还可以将化合物配制成长效制剂。可以使用合适的聚合物或疏水性材料(例如配制成在可接受油中的乳剂)或离子交换树脂或为难溶性衍生物，例如，作为难溶性盐配制这类长效制剂。药物组合物还可以包括合适的固体或凝胶相栽体或赋形剂。这类载体或赋形剂的实例包括，但不限于碳酸钙，磷酸钙，各种糖类，淀粉，纤维素衍生物，明胶和聚合物，诸如聚乙二醇类。合适的液体或固体药物剂型为例如，吸入用含水或盐水溶液，将其微嚢化，内螺旋化，包衣在微观金颗粒上，包含在脂质体上，雾化；气溶胶；用于植入皮肤的颗粒或使其在锋利的物体上干燥以划入皮肤中。药物组合物还包括颗粒，粉末，片剂，包衣片，(微)胶嚢，栓剂，糖浆剂，乳剂，混悬液，霜剂，滴加或具有延长释放活性化合物的制剂，在该制剂中通常如上所述使用制备赋形剂和添加剂和/或助剂，诸如崩解剂，粘合剂，包衣剂，溶胀剂，润滑剂，矫味剂，甜味剂或增溶剂。药物组合物适用于各种递药系统。就递药方法的简单综述，参见LangerR(1990)Science249:1527-33，将该文献引入本文作为参考。可以将本发明的活性剂和任选的其它治疗剂和/或抗原本身(净)或以药学上可接受的盐的形式给予。当用于药物中时，这些盐应为药学上可接受的，但非药学上可接受的盐也可以便利性地用于制备其药学上可接受的盐。这类盐包括，但不限于由下列酸制备的那些盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，马来酸，乙酸，水杨酸，对-甲苯磺酸，酒石酸，柠檬酸，曱磺酸，甲酸，丙二酸，琥珀酸，萘-2-磺酸和苯磺酸。此外，可以将这类盐制备成碱金属或碱土金属盐，诸如羧酸基团的钠，甲或钾盐。合适的緩沖剂包括乙酸和盐(1-2%w/v);柠檬酸和盐(1-3%w/v);硼酸和盐(O.5-2.5%w/v);和磷酸和盐(0.8-2%w/v)。合适的防腐剂包括苯扎氯铵(O.003-0.03%w/v);三氯叔丁醇(0.3-0.9%w/v);对羟基苯甲酸酯类(0.01-0.25%w/v)和硫柳汞(0.004-0.02%w/v)。本发明的药物组合物包含任选在药学上可接受的栽体中包括的有效量的本发明活性剂和任选的抗原和/或其它治疗剂。术语药学上可接受的载体意指一种或多种相容性固体或液体填充剂，稀释剂或包囊物质，它们适合于对人或其它脊推动物给药。术语载体表示天然或合成的有机或无机组分，将它们与活性组分合并以便有利于施用。以一种方式将药物组合物的成分与本发明的化合物掺合并且彼此混合，使得不存在明显损害所需药物功效的相互作用。筛选方法
技术领域：
：本发明在其它粉末中提供了鉴定TLR7/8配体和/或连接寡核苷酸的方法。该方法的步骤根据鉴定的活性剂(即配体与寡核苷酸)的不同而改变，无论配体为TLR7，TLR8或TLR7/8配体，还是用于该方法的细胞类型等。基于本文所述的教导，TLR7配体可以根据其刺激单独的TLR7信号传导，在有连接寡核苷酸存在下刺激TL8信号传导(从本底水平开始)和/或在有连接寡核苷酸存在下TLR7刺激抑制来鉴定。TLR8配体可以根据在与为连接寡核苷酸联用时增强(从高于本底水平开始)的TLR8信号传导来鉴定。配体TLR7和8(在单独使用时)的刺激可以根据这些活性的任何组合来鉴定。连接寡核苷酸可以根据其通过TLR7配体抑制TLR7，通过TLR7配体诱导TLR8刺激和/或增强来自TLR8配体的TLR8刺激的能力来鉴定。这些方法可以在体内或体外进行。体外测定记录在实施例中。合适的读出结果包括，但不限于用于TLR8刺激的IL-12，TNF-a和/或ifn-y和用于TLR7刺激的ifn-a。这些测定法可选择地使用具有^l道基因的报道构建体，所述的报道基因与对TLR7和/或TLR8信号传导有应答的转录调节元件(例如，NF-kB应答元件)连接。这些构建体描述在实施例中。这些测定法可以测定转录增量或减量调节，翻译增量或减量调节，蛋白质表达和/或分泌等。作为实例，TLR8配体测定法可以包括使表达TLR8的细胞(或细胞群)在有或没有连接寡核苷酸存在下接触测试配体。细胞优选为表达TLR8，但不表达TLR7或TLR9的细胞。根据细胞对测试配体在有或免疫寡核苷酸存在下的应答测定TLR8信号传导。然后将具有与没有寡核苷酸存在下相比在有寡核苷酸存在下增强的TLR8信号传导特性的测试配体鉴定为TLR8配体。该测定法还包括使用不表达TLR8或TLR9的表达TLR7的细胞分析TLR7信号传导。后一种分析可以用于排除配体为在有寡核苷酸存在下转换成TLR8信号传导的TLR7配体的可能性。来自使用已知配体的类似测定结果如图12中所示。洛索立宾和immunosine(TLR7特异性配体)在有0DN6056存在下刺激TLR8信号传导。可以预计推定的TLR7特异性配体具有定性的类似特性。R-848(TLR7和TLR8配体)的TLR8信号传导在有0DN6056存在下得到增强。可以预计推定的TLR8配体具有定性的类似特性。既非TLR7，又非TLR8配体的利巴韦林在有或没有0DN6056存在下均不会刺激TLR8信号传导，表示所述测定法对TLR7/8配体的特异性。连接寡核苷酸测定法包括以包括使表达TLR8的细胞(或细胞群)在有或没有TLR7，TLR8或TLR7/8配体存在下接触测试寡核苷酸。如果配体为TLR7配体(单独使用时)，那么该测定法可以测定TLR7信号传导抑制和/或在寡核苷酸与配体联用时诱导的TLR8信号传导。如果配体为TLR8配体(单独使用时)，那么该测定法可以测定在寡核苷酸与配体联用时与单独使用配体时的作用相比增强的TLR8信号传导。如果配体刺激TLR7和TLR8(单独使用时)，那么该测定法测定上述读出结果中的一种或多种。可以将该测定结果与阳性对照测定比较(例如使用已知连接寡核苷酸的测定法)等。该方法还可以包括用于测定寡核苷酸自身是否为TLR7和/或TLR8配体的测定法。这些方法可以用于鉴定配体，其在单独使用时为弱刺激性的，但在与寡核苷酸联用时具有新的和/或增强的信号传导特性。通过下列实施例进一步解释本发明，但这些实施例决不应被视为进一步的限定。实施例材料和方法寡核苷酸和试剂所有的寡核苷酸均购自Biospring(Frankfurt,德国)或由ColeyPharmaceuticalGmbH(Langenfeld，德国)提供，鉴定和纯度由ColeyPharmaceuticalGmbH控制并且具有通过鲎试验测定的不可检测到的内毒素水平(<0.lEU/ml)(BioWhittaker,Verviers，比利时)。将寡核苷酸悬浮于无菌无内毒素的Tris-EDTA(Sigma,Deisenhofen，德国)中并且在无菌条件下储存和操作，以防止微生物和内毒素污染。使用不含内毒素Tris-EDTA进行所有稀释。将寡核苷酸序列列在表1和2。首先将洛索立宾(7-烯丙基-7，8-二氢-8-氧代-鸟苷)(Sigma)溶于INNaOH，在RPMI-培养基中稀释并且使用INHC1将pH调整至7.4(19)。R-848(1-(2-羟基2-甲基丙基)-2-甲基-lH-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺)在商业上由GLSynthesis(Worcester,MA，美国)合成并且溶于10%DMS0。将7-脱氮杂-鸟苷(ChemGenes，Wilmington,MA，美国)以在INNa0H中1M溶解。将肌苷(Sigma)溶于H20。在不含内毒素的Tris-EDTA中进行所有稀释。TLR测定表达人TLR9,TLR8或TLR7的稳定转染的HEK293细胞如上所述(16，20)。简言之，通过使用表达相应人TLR和6xNF-kb-荧光素酶报道质粒的载体电穿孔转染HEK293细胞。将稳定转化体(3xl(^个细胞/孔)与洛索立宾或R-848在没有或有ODN存在下在37X:下和加湿孵育箱中孵育16小时。每个数据点按一式三份进行。裂解细胞并且测定荧光素酶基因活性(使用来自Perkin-Elmer,Zaventem，Belgium的BriteLite试剂盒)。参比不添加寡核普酸的培养基的报道基因活性计算刺激指数。细胞增殖来自健康人供体的外周血血沉棕黄层制品获自BloodBankoftheUniversityofDiisseldorf(德国)并且通过用Fico11-Hypaque(Sigma)离心纯化PBMC。将细胞在371C下的RPMI1640培养基中培养细胞，该培养基中补充了5。/。(v/v)加热灭活的人AB血清(BioWhittaker)或10Uv/v)加热灭活的FCS，2mML-谷氨酰胺，100U/ml青霉素和100ng/ml链霉素(均来自Sigma)。细胞因子检测和流式细胞测定分析以5xl(^个细胞/ml的浓度悬浮PBMC并且加入到96孔圆底平板中(250nl/孔)。将PBMC与不同ODN和/或洛索立宾浓度一起孵育并且在所示时间点采集培养物上清液(SN)。如果不即刻使用，那么将SN储存在-20"C下，直到需要为止。使用商购ELISA试剂盒(就IL-12p40而言，来自BDBiosciences,Heidelberg,德国)，IFN-y和TNF-a(来自Diaclone，Besancon，France)或使用商购抗体(PBL，NewBrunswick,NJ，美国)研发的IFN-y的内部ELISA评价SN中的细胞因子的量。就胞内染色而言，在含有所示量寡核苷酸和/或洛索立宾浓度的96孔圆底平板(250jil/孔)中以5xl()S个细胞/ml孵育PBMC并且加入布雷菲德菌素A溶液(BDBiosciences),将PBMC孵育6小时。就胞内IFN"7染色而言，将细胞与寡核苷酸和/或洛索立宾一起孵育16小时，此后添加布雷菲德菌素A溶液。采集细胞并且使用Intraprep试剂，按照制造商方案(Beckman-Coulter，Neuss，德国)进行胞内染色。用鉴定单核细胞(CD14+)，B细胞(CD19+)和NK细胞(CD56+，CD3—)的合适抗体染色细胞。使用FACSCalibur获取流式细胞计数数据并且使用计算机程序CellQuest分析(均来自BDBiosciences)。用于流式细胞检测分析的所有单克隆抗体(mAb)均购自BDBiosciences,除外来自Diaclone的CDllc，来自Immunotech(Marsei1le，France)的CD14和来自Miltenyi(BergischGladbach，德国)的CD123。使用CD14细胞分离试剂盒如制造商(Miltenyi)所述从完整的PBMC中分离人单核细胞。为了测定纯度，使用对CDllc和CD14的mAb染色细胞并且通过流式细胞计量术鉴定。在所有实验中，单核细胞纯度超过95%。将纯化的单核细胞(4xl(^个细胞/ml)与增加浓度的0DN—起孵育24小时。使用BDCA-4pDC分离试剂盒如制造商(Miltenyi)所述富集PDC。通过用对CD123(来自Miltenyi)，HLA-DR和CDllc(来自BDBiosciences)的mAb染色证实PDC纯化。纯度约为85%。将细胞(5xl05个细胞/ml,250pl/孔)与或不与寡核苷酸和洛索立宾一起培养24小时。如上所述测定SN中的IFN-a或IL-12p40。结果通过与均聚物寡核苷酸共孵育对TLR8介导的信号传导的序列选择性强化将稳定表达hTLR8和NF-kb-荧光素酶报道构建体的HEK293细胞与R-848(1-(2-羟基-2-曱基丙基)-2-甲基-lH-咪唑并[4，5-c]喹啉-4胺)在有或没有寡核普酸存在下孵育。然后分析与不同寡核苷酸共孵育对TLR8介导的NF-kB活化的影响。鉴定了含有硫代磷酸主链的寡(dT)n均聚物0DN，即ODN6056，其显著增加R-848刺激的NF-kB活化水平(图1B)。单独的0DN6056在达25jiM浓度下不会在表达TLR8的细胞中刺激明显的NF-kB活化(不超过本底2.5倍)(未公布的数据)。作用表现为寡核苷酸依赖性的，因为并非所有测试的寡核苷酸均同样充分增强TLR8信号传导(例如，不相关的杂聚物(0DN1982)不会强烈影响R-848的NF-kB活化)。R-848与ODN6056共孵育不仅增加了TLR8功效，而且显著提高了TLR8活化效能。R-848的EC50在有0.1ODN6056(0.1ODN6056:EC50(R-848)=4.9jiM，即来自三次实验的平均值；单独的EC50(R-848)>3(VM)存在下已经显著下降。然而，高浓度的ODN6056更加降低了EC50(1jaMODN6056:EC50(R-848)=1.4juM;5一ODN:EC50(R-848)=0.4^M)。这种作用对ODN6056为特异性的，因为对ODN1982而言EC50下降得相当低(5jiM1982:EC50(R-848)=19.0jiM)。与对TLR8的刺激作用相反，ODN6056(或ODN1982)与表达hTLR9的HEK293细胞上的TLR9配体CpGODN2006共孵育不会影响CpG介导的NF-kB刺激(未公布的数据)。研究了用于观察到的增强作用的可能的序列要求并且测试了几种不同的硫代磷酸酯均聚物(表1)。寡(dT)(ODN6056)具有最强的促进特性，随后是寡(dU)n(SEQIDNO:11)和寡(dA)17(SEQIDNO:12)。对寡(dC)n(SEQIDNO:13)和随机化寡(dN)15检测到了显著性的增强下降。杂聚物ODN1982仅表现出最低的活性增强，而寡(dG)"(SEQIDNO:14)不具有增强活性，而是抑制R-848介导的NF-kB刺激。具有磷酸二酯主链的ODN6056的序列不影响TLR8介导的刺激。寡核苷酸的长度也表现出具有影响寡(dA)"(SEQIDNO:15)与R-848表现出的协同作用低于寡(dA)n(SEQIDNO:12)。在有均聚物T寡核苷酸存在下TLR7特异性配体对表达TLR8的细胞的刺激作用R-848为hTLR7和hTLR8的配体(16)，而将洛索立宾(7-烯丙基-7，8-二氢-8氧代-鸟苷)描述为TLR7特异性配体(18)。浓度达10mM的洛索立宾不会活化用hTLR8或hTLR9转染的HEK293细胞中的NF-kB信号传导，但活化hTLR7介导的信号传导(图2A)。尽管为TLR7配体，但是将表达hTLR8的HEK293细胞与洛索立宾和寡核苷酸共孵育活化了NF-kb信号传导(图2B)。这种浓度依赖性作用仅在有ODN6056，而非ODN1982存在下观察到(图2B)。使用另一种TLR7配体，7-脱氮杂-鸟苷进行类似的观察(18)。单独的7-脱氮杂-鸟苷在达5mM浓度和没有ODN6056存在下对表达hTLR8的细胞无活性，但在有ODN6056存在下刺激TLR8介导的NF-kB活化。还将表现出以非特异性方式活化HEK293细胞中的NF-kb信号传导的化合物肌苷(未公布的数据)与表达的hTLR8的HEK293细胞上的ODN6056共孵育(图2C)。肌苷在有ODN6056存在下对NF-kB的活化与达10mM浓度的肌苷的非特异性活化相比未改变。使用基于腺苷的化合物6-氨基-9-节基-2-丁氧基-9H-嘌呤-8-醇观察到了类似的作用。在单独使用时，该化合物为TLR7配体，但不是TLR8配体(图9A和9B)。在有聚(dT)17连接寡核苷酸存在下使用时，它浓度刺激TLR8信号传导(图9B)。TLR7信号传导的序列依赖性抑制这些数据表示小分子TLR7配体在有某些寡核苷酸存在下诱导TLR8依赖性NF-kB信号传导。尽管如此，但是在表达TLR7的HEK293细胞中，作用相反。寡核苷酸实际上如图1A，3和9A中所示抑制通过TLR7特异性配体和TLR7/8配体的TLR7介导的NF-kB活化。这种作用表现为序列-非特异性，因为迄今为止所有测试的硫代磷酸寡核苷酸内抑制hTLR7活化(未公布的数据)。使用RNA连接寡核苷酸的TLR8配体信号传导增强使用R-848为TLR7/8配体和基于RNA的连接寡核苷酸进行类似的实验。图10表示混合的序列寡核苷酸和聚(rUK寡核苷酸对hTLR8-LUC-293细胞中，NF-kB刺激的作用。聚(rU)u寡核苷酸(rU'rU*rU'rU.rirrU'rU*rlTrU.rU*rU*rU*rU.rU.rU.rU.rU*rU;SEQIDNO:5)在单独使用时通过TLR8传导信号，正如使用该寡核苷酸使NF-kB轻度活化所证实的(图10)。混合的序列RNA寡核苷酸(rG*rC*rC*rA.rC.rC.rG.rA'rG'rC'rC*rG.rA.rA'rG'rG*r(TrA.rC.rC;SEQIDNO:16)在单独使用时不会通过TLR8传导信号。在图11中，将hTLR8-LUC-HEK293细胞与增加量的R-848在有如下物质存在下孵育(a)TE和50pg/mlD0TAP，或(b)5所示ORN，在有50ng/mlD0TAP存在下。在16小时后通过测定荧光素酶活性确定NF-kB的刺激。参比仅有培养基存在下的本底计算刺激指数。该图表示聚(rll)is寡核苷酸对TLR8信号传导的作用在该寡核苷酸与R-848联用时得到显著增强(图11)。既非TLR7，又非TLR8配体的混合的序列RNA寡核苷酸也如图11中所示通过R-848增强TLR8信号传导。数据表明基于RNA的寡核苷酸也可以作为连接物起作用。洛索立宾与寡(dT)170DN共孵育改变人PBMC产生的细胞因子特性研究了洛索立宾与ODN6056和1982共孵育对人免疫细胞的作用。与单独的洛索立宾孵育刺激了人PBMC产生IFN-a(图4A)。然而，在有增加浓度的ODN存在下，洛索立宾诱导的IFN-a降至本底水平。尽管使用ODN均观察到了这种作用，但是ODN6056看起来基于更强的抑制作用。还研究了其它细胞因子的产生。单独的洛索立宾仅诱导最少量的IL-12p40从人PBMC中分泌(图4B)。相反，在有ODN6056存在下，IL-12p40大量产生，而相同浓度的ODN1982与洛索立宾不会诱导高于使用单独培养基的本底的IL-12p40。对IL-12p70(未公布的数据)和IFN-Y获得了类似的结果(图4C)。在将洛索立宾和ODN6056共孵育时也刺激了TNF-a产生。然而，当将ODN1982与洛索立宾共孵育时观察到了TNF-a产生，不过，明显低于与ODN6056共孵育获得的结果。单独的ODN和洛索立宾中没有一种可诱导显著水平的TNF-a分泌(图4D)。在使用洛索立宾和寡(dTLODN共刺激时单核细胞产生IL-12p40和TNF-a洛索立宾与0DN的组合活化了表达TLR8的HEK293细胞，但抑制了TLR7介导的信号传导。据推定人TLR8-阳性免疫细胞为IL-12和TNF-a的主要来源并且TLR7-阳性pDCs为IFN-a的主要来源。不胞内FACS染色揭示出大部分CD14+细胞在人PBMC与洛索立宾和ODN6056共孵育时产生TNF-a(图5A)。单独的洛索立宾或与ODN1982组合仅产生少量TNF-阳性单核细胞。IL-12-阳性单核细胞的百分比低于TNF-a的百分比。然而，洛索立宾与ODN6056组合的协同作用对胞内IL-12而言可明显检测到(图5B)。在使用ODN和洛索立宾刺激时，三次实验中没有一次可以在CD19+B细胞中检测到胞内IL-12或TNF-a(未公布的数据)。还研究了IFN-Y的细胞来源。洛索立宾与ODN组合刺激了高IL-12水平，并且在先研究证实IL-12诱导NK细胞中的IFN"Y分泌(21-23)。因此，在人NK细胞中评价IFN，产生(图6)。实际上，NK细胞中的IFN-"/产生可以在人PBMC与洛索立宾和ODN6056共孵育时观察到，不过，单独的刺激不会诱导如通过来自人PBMC上清液的IFN-y蛋白质ELISA的所证实的明显IFN-y产生。为了证实作为对洛索立宾和ODN6056应答的单核细胞的直接TLR介导的刺激，纯化来自人PBMC的单核细胞并且与洛索立宾在有或没有ODN6056或1982存在下孵育。分离的单核细胞仅产生IL-12p40(图7A)或TNF-a(未^^布的数据)作为对两种刺激物洛索立宾和ODN6056组合的应答。人PBMC与小免疫调节化合物类R-848或洛索立孵育诱导pDCs的IFN-a产生(图7B和(24，25))。因此，ODN6056由洛索立宾刺激的对IFN-a产生的抑制作用已经成为pDCs中TLR7介导的信号传导抑制的直接结果。为了研究这种可能性，分离人pDCs并且使用洛索立宾在有寡(dT)n均聚物或杂聚物ODN(图7B)存在下刺激。富集的人pDC在与但的洛索立宾孵育时产生大量IFN-a。相反，在与ODN6056或ODN1982共孵育时消除了IFN-a产生。此外，ODN6056的抑制作用表现为强于ODN1982的抑制作用，因为消除IFN-a产生所需的0DN浓度较低。图8表示使用TLR8-LUC-293细胞生成的数据。使用恒定浓度的R-848(50微摩尔)和增加量的指定ODN。将单独的R-848的焚光素酶读出结果设定为标准化的100%。结果如左侧组所示。图8右侧组表示增加的T含量在有增加量的R-848存在下的l微摩尔17mer聚C寡核苷酸中的作用。甚至使用两种胸苷均增强了活性并且使用6种或6种以上胸苷活性显著增加。讨论本发明的数据证实可以在有某些硫代砩酸ODN存在下调节hTLR8的能力。hTLR8最接近与hTLR7(26)相关，正如小免疫刺激化合物R-848活化hTLR7和hTLR8的能力所反映出的(16)。然而，hTLR7对R-848的刺激比hTLR8更为敏感，因为TLR7活化需要的R-848浓度较低。R848与硫代磷酸寡(dT)n共孵育使得TLR8对R848的刺激更敏感并且抑制TLR7活化，不过这种单独的T均聚物对这些TLR中任一种没有明显的作用。为了测定T均聚物是否可以影响其它刺激物的TLR活化，研究了其对两种TLR7配体，即洛索立宾和7-脱氮杂-鸟苷的作用，它们不刺激TLR8(18)。令人意外的是，就两种配体而言，寡(dT)"的存在导致从TLR7-完全转换成TLR8依赖性NF-KB活化，其中寡(dT)n抑制TLR7介导的信号传导。可能的情况是，人TLR8可以基因对洛索立宾的弱亲和结合，它可能无法在可利用的生物测定法中检测到。某些寡核苷酸的存在可以通过未知的机制增强洛索立宾对TLR8的亲和力，使得可以检测到稳定转染细胞中的洛索立宾介导的TLR8刺激。不能排除寡核苷酸对一般信号传导途经或摄取机制影响的可能性。然而，寡(dT)n对使用hTLR7(NF-KB信号传导抑制)，hTLR9(无作用)或hTLR8(信号传导的强烈增强)转染的HEK293细胞具有不同作用方式这一事实强烈反对了这一可能性。观察到的协同作用并不限于异常表达TLR8的细胞。人TLR7主要在pDCs和B细胞中表达。这些细胞不表达TLR8，而TLR8在骨髓细胞中表达(27-30)。实际上，测定具有内源性TLR8表达的人免疫细胞，诸如单核细胞中洛索立宾和ODN对细胞因子(IL-12和TNF-a)产生的协同作用。相反，大部分洛索立宾和R-848诱导的IFN-a通过人pDC中的TLR7活化产生(我们的数据和(4，24,25))。这些TLR7刺激物活化pDC中的IFN-a产生因与硫代磷酸0DN孵育而受到完全抑制，这与在TLR7-转染的细胞中观察到的抑制作用一致。在转染细胞或pDC中硫代磷酸ODN抑制TLR7介导的信号传导中不存在明显的序列依赖性，这与对TLR8观察到的序列-选择性刺激作用相反。ODN与洛索立宾的组合不仅导致从pDC-衍生的IFN-a转换成单核细胞-衍生的IL-12和TNF-a，而且导致IFN，从NK细胞中分泌。人NK细胞缺乏TLR7和TLR8表达(31),使得NK细胞-衍生的IFN，的刺激表现为可能由IL-12介导的间接作用(32)。在简单添加某些寡核苷酸时共同观察到了洛索立宾介导的免疫作用特性的完全改变。此外，这些数据指出了使用为最有效的ODN的富含硫代磷酸T的ODN的一定序列依赖性作用，所述的ODN可以与TLR7特异性配体联用以便活化TLR8。一些报道表明骨髄树突细胞和单核细胞表达mRNA水平上的TLR7和TLR8(27-29)。没有可利用的表示在这些细胞中实际TLR蛋白表达的数据。在这些实验中未检测到洛索立宾对单核细胞的直接刺激。相反，仅洛索立宾与寡核苷酸的组合诱导单核细胞-衍生的细胞因子产生。这些结果反对了TLR7在单核细胞中的功能性表达将指出TLR8作为由寡核苷酸和洛索立宾靶向的受体。此外，单独的洛索立宾不会诱导大量的IL-12,但报道了R-848诱导的人PBMC中产生IL-12(29)，这与R-848刺激TLR的能力一致(16)。使用刺激两种身体的化合物在可以表达TLR7和TLR8的细胞中活化TLR至明显差异极为困难。Ito等(33)报道了在使用R-848刺激时，mDC产生IL-12,但不产生IFN-a。相反，在使用R-848或其它TLR配体刺激时，pDC不产生IL-12,但不产生IFN-a(25)，表明了TLR8介导的IL-12在mDC中的诱导和TLR7介导的在pDCs中的IFN-a诱导。甚至R-848或洛索立宾与寡(dT)nODN共孵育也不会导致人pDC产生IL-12,这提示这种信号不足以活化pDC中的适当途经。引起关注的是推定模型，其中某些TLR可以具有(可能为变构的)寡核苷酸可以结合并且作为效应分子起作用的调节位点。就TLR7而言，硫代磷酸寡核苷酸表现出作为拮抗剂起作用。因此结合寡核苷酸的TLR7可以抑制TLR7配体与其结合囊结合或例如，通过加剧受体内的正确构象改变校正下游信号传导。另一方面，富含T的寡核苷酸与TLR8结合可以作为能够增加R-848或其它小分子配体类洛索立宾与活性TLR8结合嚢结合或增加下游信号传导的(变构)活化剂起作用。目前不能确定是存在涉及的两种结合域，还是在相同位点上出现小分子配体结合和效应0DN结合。已知来自几种不同家族的受体的变构增强子。例如，Knoflach等(34)报道了作为亲代谢性谷氨酸盐受体，即大量G蛋白偶联身体家族的变构促进剂起作用的两类小分子的鉴定。对受体结构的详细分析定位于跨膜结构域内的促进剂结合位点。其它研究表明小分子可以作为覃毒碱性乙酰胆碱受体的变构促进剂起作用(35)。某些2-氨基噻吩类作为腺苷受体Al变构促进剂通过稳定配体-受体-G-蛋白三元复合物和增加空受体与G-蛋白结合(38)起作用(36，37)。令人感兴趣的是，Gao等(39)发现一系列咪唑并喹啉衍生以便作为结合在人A3腺苷受体上的激动剂的变构促进剂起作用。近来Rutz等(40)使用SPR生物传感器分析证实用小分子直接阻断CpG0DN与纯化的TLR9蛋白结合。他们的发现表明这些分子与TLR9胞外域直接结合，从而作为TLR9介导的信号传导的拮抗剂起作用。因此，所述的寡核苷酸和小分子可以直接结合TLR7和8。使用分离的蛋白质和相应受体配体的结合研究可以进一步洞察到小分子TLR配体与寡核苷酸的组合对TLR7或TLR8的确切作用机制。这些发现对理解TLR的分子信号传导机制以及药物研究和药物研发具有重要意义。本发明已经证实TLR家族的两个成员TLR8和TLR7的信号传导活性可以由存在或不存在的某些寡核苷酸操纵。这些结果共同提示了使用洛索立宾(或其它小分子)与某些寡核苷酸的组合改变免疫应答的新方式。通过这些分子的组合能够通过使其信号传导再定向于不同TLR来改变TLR小分子配体的细胞因子特性。改变或加强的免疫应答对治疗各种疾病可能是有益的。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table>表l:不同ODN对R-848活性的协同作用的比较将表达hTLR8和NF-KB报道构建体的HEK293细胞与50jiM的R-848在没有或有5jiM所示ODN存在下孵育。将在没有ODN存在下R-848引起的NF-kB刺激设定为100%并且由此计算对R-848活性的作用。数值代表2-4次实验的平均值(土SD)。"N"表示随机顺序的A，C，G或T,""表示硫代磷酸酯主链，"-"表示磷酸二酯主链。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table>参考文献1.Schetter,C.andJ.Vollmer.2004.ToU-likerecq)toisinvolvedintheresponsetomicrobialpathogens:DevelopmentofagonistsfortoMkereceptor9.C"rm"C(pz'm'oMf"Drug2.KriegA-M.2003.CpGraotifi:theactiveingredientinbacterialextracts淑,A/ed.肌3.AkirajS.2003.MammalianToll-likereceptors.Cwr.Qpi'n,/附/wwMo/.4.H喊F.，P.Ahmad-Nej喊H.Henra^ELHochrei^RAmpaiberger,T.GellettH.DidrichGLipfoi^KTalced^S.Akira^tLWagner,andS.Bauer.2003.TheToll-likerccq)tor7(ILR7>specificstimulusloxoribineuncoversastrongreMond^pwithintheTLR7，8and9subfk^ily.5.DieboldjS.S.，T.KashajHHarani,S.AJdr^andReiseSousa2004.IhnateantiviralreqxosesbymeansofTLR7-mediatedrecognitionofsingb^strandedRNA-5We"ce鄉""-/5>/.6.LundjJ.M，L.Alexopoulou^Sato，M.Karow，N.C.Adams,N,W.Gal&人IwasakijaodlL人Flavell.2004.RecogDitionofsin^strandedKNAvirusesbyToll-likereceptor7.7.Matsumoto,]VL，ICFunam^M.Tanabe，HOshiuni^MShingai^Y.Seto,人Yamaraoto，andT.Seya2003.Subcellularlocalizationoftoll陽likereceptor3inhumandendriticcells.JJ)n附Mwoi8.Lafc^E,人Schoenaneyer,A.Vis5ntii^ICA>Fitzgeral4B,G.Morik^C.F.Knetter,E.Ii叫N.J.Nil^T.EspevflgandD.T.Golenboclc2鹏.TLR9signalsaftertranslocatingfitxntheERtoCpGDNAin1helysosome./"wm""oA9.Ahmad-Ngad^P.，ILHadoer，M.RutZjS.Baua;R1VLVabulas,andHWagner.2002.BacterialPpG-DNAaiidipopolysaccharidesactivateToll-likereceptorsatdistinctcellularconqjartments.10.Aldi^S.andKTakedjL2004.TolHikeieceptorsignaDin各胸Jev.J雨ww/.(柳J".11.Kob6jB.andAV.Kajava2001.Theleucin&ridhiqjeatasaproteinrecognitionmotif.12.BeltJ.K,G.E.Mull叫C.人Leifer，AMazzoiiD.RDavies，andD.MSegal2003.Loicin"ridhiq)eatsandpafliogenrecognitioninToll-likerecqjtors.!>ed!s加/mm"o/.13.UhlmannjE.andJ,Vollmer.2003.Recoitadvancesinfliedevdcpmentofinmiunostiraulatotyoliganucleotides.Owrr.q3z'".i>MgZtocov.Z>eve/.<U(W-2/7.14.HeiljF.,IlHeraraijIIHochrdnjF.Ampenberga，C.101801111^S.Akin^G.Upfo喊H.Wagner,andS,Bauer.2004.Species-specificrecognitionofsdn^strandedRNAviatoll-likerecqptor7and8.iSfcie"ce303:"26-"".15.UlevitohjRJ.2004.Tteeqjeuticstargetingfeeinnateimmunesystem.16.J昧M.,F.HeM.Vollmer，C.Schetter,A_M.Rrie&KLWagner,G.Iipfoidj3ndS.B加er,2002.:HumanTLR7orTLR8independentlyconferresponsivenessto1heantivirkcompomd848.躯/画""o/.丄'柳.17.Hemmi，II,T.Kaidio，O.TakeucliS.Sato，HSanjo,KHoshino,T.Horiudii,HLTomizawa^BCTalced^andS.Akiia2002.Smallanti-viralcompoundsactivateimmunecellsviatheTLR7MyD88"dependentsignalingpathway.胸./顧m'i。/.18.Lee，J.，T.KChuan&V.Redecke，L.She,P.M.Pith^D,ACarson^E.Ra^andH.B.Cottana2003.Molecularbasisfortheimmunoslimulatoryactivityofguaninenucleosideanalogs:activationofToll-likereceptor7.尸rac,A^/.^carf,Sd.C/S.AJ00,.6似tf-(56J/.19.GoodmanMG，久B.Reilz^RCh叫M.D.BobaidtJ.H.GoodmanandB.LPope.1995.Selectivemodulationofelementsoftheimmunesystembylowmoleciilarweightnucleosides.20.Bauer,S.,C.J.Kiredhnin&H.Hadcer，V.Redecke,S.Hausmara^S.Akira^ELWagner,andG,B.IJpfont2001.Humantlr9confersresponsivenesstobacterialDNA_viaspecies-specificQjGmotifrecognition.P,.oc,油f"c。dL败P27-P2C21.MagramJ.,S.E>Conoau幽toi^RRWarrier，D.IV!Carvaj"C.Y.Ferrante，C.Stewai^U.Sarmiento，D.入F必erty，andMICGately.1996.IL"12"deficientniicearedefectiveinIFNgammaproductionandtypelcytokinere^jonses.J"wnw"^.4:47J柳.22.Thierfelder,W,E.，J.M.vanDeuis叫ICYamamoto,ItA<Tripp,S.ItSarawar，ItT.Careoi^M，Y.Sangter,D.Vignali，P.C.Ddi^ty,G.CGrosvel4andlN.Me.1996.ReqviirenaentforStat4ininterleukiivl2-mediate^regx>nsesofnaturdkillerandtcells.mm/*e23.Trinchieri,G2003.toterieukin-12and&eregulationofinnateresistanceandadaptiveinraiunity,24.LorejKL,:MRBettsJ.M.Brenchley,J.Kurt^S.KhojastelwS.Perfetto,M.Roederei，RASedo;andR人Roup.2003.Toll-likeReceptorLig91iisModulateDewiriticCellstoAugmentCytomegalovirus"andHTV-l"SpecificTCellRfisprases.J./m附tmo/.■/72:4320-25.Qibsoi^S.J.，J.MIindl^T.RJRiter,RMGkasouLM.Ro鹏AEJUUer,J.LOesterid^KB.Gordet^X.QM.W.McKane，RJ,Noefl&RK繊er，RMKedl^P-Fitegeral(i-Bocarsly,MAToma^andJ.P.Vasiiakos^2002.flasroacytoiddendriticcellsproducecytoldnesandmatureintesponsetotheTLR7agonist^JmiquimodandiesiquimodCe〃加柳"o/.26.Du^5C，A^Po加喊Y.We^andB.Beufler.2000.TTireenovelmammaKantol國Ukereceptors:genestractoe，esqMessi叫andevoluli(Mi五MrQ^o/ri"eJVe/)v.".'362-37_/27.Jarrossay，D.，G.Napolitani，M,ColoimajF.Sallusto,andA-Lanzavecchia.2001.Slpedali^ationandocaiplQiientatityinmicrobialmoleculerecogniiionbytxum処myeloidandplasmacytoidd^idriticcells.jEw/".XTm鹏'!0/.3/，'33S5-3393.28.Kru&A^，ATowarowskiS.Bri喊S.Roflieo&sser,V.Ho放un&ILBals，T.Giese，H.EngdmaraijS.EndreSjA.M.Kiieg，and(3.HartmaraL2001.Toll-likereceptoreaqwes^onrevealsC^)GDNAasBuaiqueniictDhia]stimulusforplasmacytoiddendriticcdlsw^ichsynei^zeswiftiCD401igandtoinducehi^bamounteofIL-12.五wj;/卿""o/.3/,.鄉<5-柳7.29.Ito,T，RAraatew^T.Kaisho,HLHanmijJCTq'ima^K.Uehira^Y.OzaH，H.Toraizawa^S.Xkir^andS.FWcuhaiu2002.foterfeton-a]phaandinterieukin-2areinduceddiflfeenliallybyToll-likereceptor7ligandsinhumanblooddendriticcellsubsets./9J:/iW-30.IwasaH人andRMedzhitov.2004.ToMkerecq3tar咖trooftheadaptiveimmuneresponses,舰/m加"加/.工请-鄉31.HomungV>S.Roflieo&ssa",S.Britschj人Krug,B,Jahrsdorfer,T.Giese,S,Bndres,andG.Hartaana2002.Quantitativeexprcssianoftoll-likereceptorI-10mRNAincellularsubsetsofhumanpajpheralbloodmononudearcellsandsensitivity.toCpGoligodeoxynucleotides,32.TrinchierijG.2003,]hterieukin"12andfeei^ulationofinnateresistanceandadaptiveimmunity.33.Ito,T,，R.Amakawa^M.Inab4S.Dcehara^K.InabandS.Fukuhan2001.DifferentialregulationofhumanbboddoidriticcellsubsetsbyIFNs.J/薦mw/.34.Knoflac^F,V.Mute^S.JolidonJ.N.Kew，P.Maiherbe,E.Vieira,J.Wichm咖，andJ.A'.2001.PositiveaUostericmodulatorsofmetabotropicglutamate1rec印tor:dharacterizatioDjmedianismofacti叫andbindingsite.iVoc.TVflrf.Jca^Scz'.A9&'"4O2-/^/07.35.Waelbroeck,M.2003.Allostericdrugsactingatmuscarinicacetylcholinereceptors.36.Bnm^RRandJ.HFagus.1990.AllostericenhancementofadenosineAreceptorbindingandfonctionby2-amino3-beozoylthiophenes.MZ.尸Aamiaco/.35:W5MW.37.Bnms，R.F.,J.H.Fergus,L.L.Coughenour，G.G.Courtland,T.A.Pugsley，J.H.DoddjandF.J.Tiimey,1990.Sliuctur&^ctivityrelationdiipsforenhancementofadenorfneAlreceptorbindingby2-amino3-benzoylftiipphenes.A/o/.尸/za""flco/,35:950-38.Bhattachary^S.andJ.Lindea1995.Theallostericenhancer,PD81,723，stabilizeshumanAladenosinerecq)torcoalingtoGprotdns,历oc/"附-及cip/i;j^4ctoJTZdJ.."".39.Gac^乙G.,S.G.Kin^KL人Solfysi^N.MetaiaaA.P.Uzennan，andK.A.Jacobson.2002.SdectiveallostericedhancementofagonistbindingandfunctionathumanA3adaiodnereceptorsbyaseriesofimidazoquinDlinederivatives.M0/.PAa/7wflc0/.62.'W狄40.Rutz，M.，J.Metzger，T.Gellert，P.Lupp比G,B.Lipfor4H.Wagner,andS.Bauer.2004.Toll-lilffireceptor9bindssingje^strandedCpODNAinasequence-andpHdependentmanner.认为上面撰写的说明书足以使本领域技术人员实施本发明。本发明的范围并不限于所提供的实施例，因为这些实施例旨在作为对本发明一个方面的单独解释，而其它功能上等效的实施方案也属于本发明的范围。除了本文所示和所述的那些外，本领域技术人员显而易见还2卿.肌等效方案可以根据上面的描述对本发明进行各种变型并且属于所附的权利要求的范围。本发明的优点不一定由本发明的每一种实施方案所涵盖。将本申请中引述的所有参考文献，专利和专利申请完整地引入本文作为参考。权利要求1.刺激TLR8介导的免疫应答的方法，包括对有此需要的受试者给予有效刺激TLR8介导的免疫应答的用量的TLR7/8配体和连接寡核苷酸。2.使TLR7介导的免疫应答重定向为TLR8介导的免疫应答的方法，包括对经历TLR7介导的免疫应答的受试者给予有效使TLR7介导的免疫应答重定向为TLR8介导的免疫应答的用量的连接寡核苷酸。3.权利要求1或2所述的方法，其中TLR7/8配体为TLR7特异性配体。4.权利要求1或2所述的方法，其中TLR7特异性配体为C8-取代的鸟苷。5.权利要求4所述的方法，其中C8-取代的鸟苷为7-烯丙基-7，8-二氢-8-氧代-鸟苷(洛索立宾)，7-硫杂-8-氧代鸟苷(immunosine)，8-巯基鸟苷，8-溴鸟苷，8-曱基鸟苷，8-氧代-7,8-二氢鸟苷，C8-芳氨基-2'-脱氧鸟苷，C8-丙炔基-鸟苷，C8-和N7-取代的鸟嘌呤核糖核苷，7-曱基-8-氧代鸟苷，8-氨基鸟苷，8-羟基-2'-脱氧鸟苷，7-脱氮杂-8-取代的鸟苷和8-羟基鸟苷。6.权利要求4所述的方法，其中C8-取代的鸟苷为洛索立宾。7.权利要求3所述的方法，其中TLR7特异性配体为7-脱氮杂-鸟苷。8.权利要求3所述的方法，其中TLR7特异性配体为6-氨基-9-节基-2-(3-羟基-丙氧基)-9H-嘌呤-8-醇或6-氨基-9-苄基-2-丁氧基-9H-嘌呤-8-醇。9.权利要求1或2所述的方法，其中TLR7/8配体为TLR8特异性配体。10.权利要求1或2所述的方法，其中TLR7/8配体为TLR7配体和TLR8配体。11.权利要求10所述的方法，其中TLR7/8配体为咪唑并喹啉。12.权利要求ll所述的方法，其中咪唑并喹啉为咪唑并喹啉胺，咪唑并吡啶胺，6，7-稠合的环烷基咪唑并吡啶胺，1，2桥连的咪唑并喹啉胺，R-848(S-28463或瑞喹莫德)，4-氨基-2-乙氧基甲基-a，a-二曱基-lH-咪唑并[4，5-c]奮啉-1-乙醇，1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c]奮啉-4-胺(R-837或米全莫特)或S-27609。13.权利要求ll所述的方法，其中咪唑并喹啉为R848。14.权利要求1或2所述的方法，其中连接寡核苷酸包含未甲基化的CpG基序。15.权利要求1或2所述的方法，其中连接寡核苷酸不含未甲基化的CpG。16.权利要求1或2所述的方法，其中连接寡核苷酸包含5'N-TTTTT-N3、其中N为任何核苷酸。17.权利要求1或2所述的方法，其中连接寡核苷酸包含N-TTTTTT-N3、其中N为任何核苷酸。18.权利要求l或2所述的方法，其中连接寡核苷酸为dT均聚物。19.权利要求1或2所述的方法，其中连接寡核苷酸包含硫代磷酸酯主链修饰。20.权利要求1或2所述的方法，其中分别给予TLR7/8配体和连接寡核苷酸。21.权利要求1或2所述的方法，其中TLR7/8配体和连接寡核苷酸彼此结合。22.权利要求1或2所述的方法，其中连接寡核苷酸为DNA。23.权利要求1或2所述的方法，其中连接寡核苷酸为RNA。24.权利要求1或2所述的方法，进一步包括对受试者给予抗原。25.权利要求1或2所述的方法，其中受试者具有感染。26.权利要求1或2所述的方法，其中受试者具有癌症。27.权利要求1或2所述的方法，其中受试者具有过敏反应或哞喘。28.组合物，包含选自6-氨基-9-爷基-2-(3-羟基-丙氧基)-9H-噪呤-8-醇和6-氨基-9-千基-2-丁氧基-9H-嘌呤-8-醇的TLR7特异性配体和连接寡核苷酸。29.组合物，包含TLR8特异性配体和连接寡核苷酸。30.权利要求28或29所述的组合物，其中连接寡核苷酸包含未甲基化的CpG基序。31.权利要求28或29所述的组合物，其中连接寡核苷酸不含未甲基化的CpG。32.权利要求28或29所述的组合物，其中连接寡核苷酸包含5'N-TTTTT-N3'，其中N为任何核苷酸。33.权利要求28或29所述的组合物，其中连接寡核苷酸包含5'N-TTTTTT-N3'，其中N为任何核苷酸。34.权利要求28或29所述的组合物，其中连接寡核苷酸为dT均聚物。35.权利要求28或29所述的组合物，其中连接寡核苷酸包含至少一个硫代磷酸酯核苷酸间键。36.权利要求28或29所述的组合物，其中连接寡核苷酸为DNA。37.权利要求28或29所述的组合物，其中连接寡核苷酸为RNA。38.权利要求28或29所述的组合物，其中连接寡核苷酸和TLR7特异性配体或TLR8特异性配体彼此结合。39.权利要求28或29所述的组合物，进一步包含抗原。40.权利要求28或29所述的组合物，其中该组合物为药物制剂。41.鉴定TLR8配体的方法，包括使表达TLR8的细胞在有和没有连接寡核苷酸存在下接触测试配体，和测定在有和没有连接寡核苷酸存在下响应该测试配体的表达TLR8的细胞的刺激，其中根据在有连接寡核苷酸存在下刺激的增加鉴定TLR8配体。42.鉴定连接寡核苷酸的方法，包括使表达TLR8的细胞在有和没有测试连接寡核苷酸存在下接触TLR7配体，和测定在有和没有测试连接寡核苷酸存在下响应该TLR7配体的表达TLR8的细胞的刺激，其中根据在有连接寡核苷酸存在下对表达TLR8的细胞刺激的增加鉴定连接寡核苷酸。全文摘要本发明涉及某些寡核苷酸改变TLR配体，诸如TLR7，TLR8和TLR9配体的分布的能力。文档编号G01N33/68GK101340931SQ200680044386公开日2009年1月7日申请日期2006年9月27日优先权日2005年9月27日发明者A·M·克莱格,B·O·诺尔,E·尤尔曼,J·沃尔莫,M·朱尔克申请人:科利制药公司;科利制药集团公司