鉴定抗毛发调理剂的毛发结合肽的方法和由此得到的毛发有益试剂的利记博彩app

专利名称：：鉴定抗毛发调理剂的毛发结合肽的方法和由此得到的毛发有益试剂的利记博彩app
技术领域：
：本发明涉及个人护理产品领域。更具体地，本发明涉及鉴定抗毛发剂和着色剂中的用途。
背景技术：
：毛发调理剂和毛发着色剂是公知的，并且常用于毛发护理产品。目前的毛发调理剂和非氧化染发剂的主要问题是缺乏长期持续效果需要的耐久性。氧化染发剂提供长期持续的颜色，但它们所含有的氧化剂导致毛发受损。为了改进这些组合物的耐久性，开发了基于肽的毛发调理剂、毛发着色剂和其它有益试剂(Huang等人的共同未决和共同拥有的美国专利申请公开No.2005/0050656和美国专利申讳~公开No.2005/0226839)。基于肽的毛发调理剂或着色剂是通过将与毛发具有高亲和力的特定肽序列分别与调理剂或着色剂偶联而制备的。肽部分结合于毛发，从而强烈附着于调理剂或着色剂。用噬菌体展示筛选技术鉴定了与毛发具有高结合亲和力的肽(Huangetal.,supra;Estelletal.WO0179479;Murrayetal.,美国专利申请公开No.2002/0098524;Janssenetal.,美国专利申请7^开No.2003/0152976;和Janssenetal.，WO04048399)。0179479、2002/0098524、2003/0152976和04048399申i會描述了在沐浴露的稀溶液(即2。/q的水溶液)存在下〗吏肽文库与毛发样品结合，并且在噬菌体展示筛选过程中用沐浴露溶液洗涤噬菌体-肽-毛发复合物。但是，使用的沐浴露的浓度太低，以至于不能鉴定抗沐浴露的毛发结合肽。在毛发调理剂基质存在下毛发结合肽的结合亲和力降低，因此不能与调理剂基质中的毛发强结合，并且由于采用毛发调理剂而从毛发上洗掉。此外，在调理剂基质中毛发结合肽不能长时间稳定，这使得它们的结合亲和力在毛发调理剂产品中随时间降低。已经报道了鉴定抗洗发液的毛发结合肽的方法(Huang等人的共同未决和共同拥有的美国专利申请公开No.2005/0050656,和O'Brien等人的共同未决和共同拥有的美国专利申请No.11/251715)、结合秕糠状鳞斑霉的细胞表面蛋白的抗洗发液的抗体片段(Dolk等人的Appl.Environ.Microbiol.71:442-450(2005))和抗皮肤护理组合物的皮月夫结合肽(Wang等人的共同未决和共同拥有的美国专利申请N0.6O/657494)。但是，还没有描述过鉴定抗毛发调理剂的毛发结合肽的方法。因此，要解决的问题是提供能够结合毛发调理剂基质中的毛发并且在其中稳定的毛发结合肽。申请人通过发现鉴定抗毛发调理剂的毛发结合肽的方法而解决了上述问题。鉴定的抗毛发调理剂的毛发结合肽序列结合于毛发调理剂基质中的毛发，并且在调理剂基质中21天后没有损失结合活性。这些毛发结合肽可以用于制备基于肽的毛发有益试剂，如毛发调理剂和着色剂，在毛发调理剂基质存在下与毛发具有高结合亲和力，并且在毛发调理剂组合物中具有改进的稳定性。发明概述本发明提供了用于鉴定和分离新的抗毛发调理剂的毛发结合肽的方法，所述肽用作毛发护理组合物中的连接物和粘合剂。抗毛发调理剂的毛发结合肽可以掺入二嵌段或三嵌段结构，该结构任选包含化学或肽间隔基和有益试剂，如着色剂和/或调理剂。本发明的方法依赖于在各种调理剂存在下筛选组合产生的肽文库，得到毛发结合特性。括、、八"、口、、、、、a)提供DNA联合的肽(DNAassociatedpeptide)的组合文库；b)使(a)的文库与毛发样品接触，形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液；c)从反应溶液分离(b)的DNA联合的肽-毛发复合物；d)使(c)的分离的DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触，形成调理溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10%;e)从调理溶液分离(d)的DNA联合的肽-毛发复合物；f)扩增编码(e)的DNA联合的肽-毛发复合物中的肽部分的DNA;和g)对(f)的扩增的编码抗调理剂的毛发结合肽的DNA进^f亍测序，其中鉴定出抗调理剂的毛发结合肽。任选可以在步骤(e)之后用洗脱剂从毛发洗脱毛发结合肽，并且可以通过连续采用该方法而进一步精制本发明的方法鉴定的肽。的毛发结合肽:、'、'？、、、、':'、。a)提供DNA联合的肽的组合文库；b)使(a)的文库与毛发样品接触，形成包含DNA联合的月太-毛发复合物的反应溶液；c)从反应溶液分离(b)的DNA联合的肽-毛发复合物；d)使(c)的分离的DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调^里剂基质接触，形成调理溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度;农度的至少约10%;e)从调理溶液分离(d)的DNA联合的肽-毛发复合物；f)扩增编码(e)的DNA联合的肽-毛发复合物中的月大部分的DNA;和其中鉴定出抗调理剂的毛发结合肽。本发明的特定抗毛发调理剂6勺毛发结合肽示于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:12。在一个实施方案中，本发明提供了二嵌段的、基于肽的有益^式剂，其具有通式结构(HCPm)n-BA，其中a)HCP是抗毛发调理剂的毛发结合肽；b)BA是有益试剂；c)m的范围是1-约100;并且d)n的范围是1-约50,000。以相似的方式，本发明提供了三嵌段的、基于肽的有益试剂，其具有通式结构[(HCPx-S)m]n-BA,其中a)HCP是抗毛发调理剂的毛发结合肽；b)BA是有益试剂；c)S是间隔基；d)x的范围是l-约10;e)m的范围是1-约100;并且f)n的范围是1-约50,000。在一个优选实施方案中，本发明提供了毛发调理剂和着色剂，其中通过包括以下步骤的方法分离抗毛发调理剂的毛发结合肽a)提供DNA联合的肽的组合文库；b)使(a)的文库与毛发样品接触，形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液；c)从反应溶液分离(b)的DNA联合的肽-毛发复合物；d)使(c)的分离的DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触，形成调理溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10%;e)从调理溶液分离(d)的DNA联合的肽-毛发复合物；f)扩增编码(e)的DNA联合的肽-毛发复合物中的肽部分的DNA;和其中鉴定出抗调理剂的毛发结合肽。''''、此外，本发明提供了包含有效量的本发明的肽二嵌段和三嵌段有益试剂的毛发护理产品组合物。在另一实施方案中，本发明提供了形成毛发上的基于肽的调理剂的保护层的方法，包括将本发明的组合物施用于毛发，并且使得形成所述保护层。类似地，本发明提供了使毛发着色的方法，包括将本发明的组合物施用于毛发，持续足以导致毛发着色的一段时间。或者，本发明提供了使眉毛或睫毛着色的方法，包括将本发明的组合物施用于眉毛或睫毛。在另一实施方案中，本发明提供了使毛发、眉毛或睫毛着色的方法，包括以下步骤a)提供包含选自下组的毛发着色剂的毛发着色组合物i)(HCPm)n-C;和ii)[(HCPx-S)m]n-C其中1)HCP是抗毛发调理剂的毛发结合肽；2)C是着色剂；3)n的范围是l-约50,000;4)S是间隔基；5)m的范围是1-约100;并且6)x的范围是l-约10;并且其中抗毛发调理剂的毛发结合肽是通过包含以下步骤的方法选择的A)提供DNA联合的肽的组合文库；B)使(A)的文库与毛发样品接触，形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液；C)从反应溶液分离(B)的DNA联合的肽-毛发复合物；D)使(C)的分离的DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触，形成调理溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10%;E)从调理溶液分离(D)的DNA联合的肽-毛发复合物；F)扩增编码(E)的DNA联合的肽-毛发复合物中的肽部分的DNA;和G)对(F)的扩增的编码抗毛发调理剂的毛发结合肽的DNA进行测序，其中鉴定出抗调理剂的毛发结合肽；和b)将(a)的毛发着色组合物施用于毛发、眉毛或睫毛，持续足以使毛发着色剂结合于毛发、眉毛或睫毛的一段时间。类似地，本发明提供了在毛发上形成基于肽的调理剂的保护层的方法，包括以下步骤a)提供包含选自下组的毛发调理剂的毛发护理组合物i)(HCPm)n-HCA;和ii)[(HCPx-S)m]n-HCA其中1)HCP是抗毛发调理剂的毛发结合肽；2)HCA是毛发调理剂；3)n的范围是1-约50，000;4)S是间隔基；5)m的范围是1-约100;并且6)x的范围是l-约10;并且其中抗毛发调理剂的毛发结合肽是通过包含以下步骤的方法选4,的A)提供DNA联合的肽的组合文库；B)使(A)的文库与毛发样品接触，形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液；C)从反应溶液分离(B)的DNA联合的肽-毛发复合物；D)使(C)的分离的DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触，形成调理溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10%;E)从调理溶液分离(D)的DNA联合的肽-毛发复合物；F)扩增编码(E)的DNA联合的肽-毛发复合物中的肽部分的DNA;和G)对(F)的扩增的编码抗调理剂的毛发结合肽的DNA进行测序，其中鉴定出抗调理剂的毛发结合肽；和b)将(a)的毛发护理组合物施用于毛发，使得形成所述保护层。附图简述和序列描述通过以下的详细说明、附图和所附的序列描述，可以更充分地理解本发明，其中序列描迷也是本申请的一部分。图1显示毛发调理剂基质中的抗毛发调理剂的毛发结合肽HCP.l(SEQIDNO:l)的稳定性。图2显示毛发调理剂基质中的抗毛发调理剂的毛发结合肽HCR6(SEQIDNO:4)的稳定性。以下的序列符合37C.F.R.1.821—1.825("包含核苷酸序列和/或氨基酸序列公开的专利申请所必备的条件-序列条款")，并符合世界知识产权组织(WIPO)标准ST.25(1998),以及EPO和PCT(5.2条和49.5(a-bis)条，和使用说明208部分和附件C)的序列表要求。在核苷酸和氨基酸序列数据中所使用的符号和格式均符合37C.F.R.§1.822的规定。SEQIDNOs:l-5是抗毛发调理剂的毛发结合肽的氨基酸序列。SEQIDNO:6是胱天蛋白酶3切割位点的氨基酸序列。SEQIDNO:7是用于对噬菌体DNA进行测序的寡核苷酸引物的核普酸序列。SEQIDNO:8是用作实施例4中的对照的皮肤结合肽的氨基酸序列。SEQIDNO:9是抗毛发调理剂的毛发结合肽HCP.l(5-FAM)的氨基酸序列，其在C末端用荧光标记5-羧基荧光素-氨基己基amidite衍生化，如实施例4的描述。SEQIDNO:IO是抗毛发调理剂的毛发结合肽HCP.6(5-FAM)的氨基酸序列，其在C末端用荧光标记5-羧基荧光素-氨基己基amidite衍生化，如实施例4的描述。SEQIDNO:ll是皮肤结合对照肽Skinl(5-FAM)的氨基酸序列，其在C末端用荧光标记5-羧基荧光素-氨基己基amidite衍生化，如实施例4的描述。SEQIDNO:12是实施例8中描述的半胱氨酸连接的10HCP.l毛发结合肽的氨基酸序列。SEQIDNOs:13-15是肽间隔基的氨基酸序列。发明详述本发明提供了鉴定在毛发调理剂基质存在下以高亲和力特异性结合于人毛发的抗毛发调理剂肽序列的方法。鉴定的抗毛发调理剂的毛发结合肽序列结合毛发调理剂基质中的毛发，并且在调理剂基质中21天后没有损失结合活性。这些毛发结合肽可以用于制备基于肽的毛发有益试剂，如毛发调理剂和着色剂，在毛发调理剂基质存在下与毛发具有高结合亲和力，并且在毛发调理剂组合物中具有改进的稳定性。此处采用如下定义，其用于解释权利要求书和说明书。"HCP"表示抗毛发调理剂的毛发结合肽。"BA"表示毛发有益试剂。"HCA"表示毛发调理剂。"C"表示毛发着色剂。"S"表示间隔基。术语"肽"是指通过肽键或修饰的肽键彼此连接在一起的两个或多个氨基酸。如本文所使用的，术语"毛发"是指人毛发、眉毛和睫毛。术语"抗毛发调理剂的毛发结合肽"是指与毛发调理剂基质中的毛发强结合并且在其中稳定的肽。术语"毛发调理剂基质"是指一种介质，其包含未稀释或稀释形式的毛发调理剂产品，或包含毛发调理剂产品的至少一种成分的混合物以及毛发调理剂产品的至少两种成分。毛发调理剂产品的成分包括但不限于毛发调理剂、抗氧化剂、防腐剂、填料、表面活性剂、UVA和/或UVB防晒剂、香料、增稠剂、润湿剂和阴离子、非离子或两性聚合物；以及染料或色素。术语"完全强度浓度"是指成分存在于毛发调理剂产品中的浓度。术语"有益试剂，，是表示可以与抗毛发调理剂的毛发结合肽偶联，以施用于毛发而提供美容或皮肤学效果的化合物或物质。有益试剂典型地包括调理剂、着色剂、香料、防晒剂等，以及通常用于个人护理工业的其它物质。如本文所使用的，术语"偶联"和"偶联的"指任意的化学締合，包括共价的和非共价的相互作用。术语"肽-毛发复合物"表示一种结构，其包含通过肽上的结合位点与毛发纤维结合的肽。术语"DNA联合的肽-毛发复合物"是指毛发和肽之间的复合物，其中所述肽联合了鉴定性核酸成分。典型地，DNA联合的肽作为展示系统的结果产生，所述展示系统如噬菌体展示。在该系统中，肽展示在噬菌体的表面，而编码该肽的DNA包含在噬菌体的附着的糖蛋白外壳内。编码DNA在p盆菌体内的联合可以用于促进编码区的扩增，从而鉴定肽。术语"非靶"表示一种底物，对于该底物，具有结合亲和力的肽不是理想的。为了选择抗毛发调理剂的毛发结合肽，所述"非革巴"包括但不限于皮肤和塑料。在本文中将术语"纳米颗粒"定义为具有1至100nm的平均粒径的颗粒。优选地，颗粒的平均粒径是约1至40nm。如本文所使用的，"粒度"和"粒径"具有相同的含义。纳米颗粒包括但不限于，金属、半导体、聚合物或其它有机或无机颗粒。术语"氨基酸"指蛋白或多肽的基本化学结构单元。在本文中使用如下的缩写来代表特定的氨基酸氨基酸_三字母缩写_单字母缩写丙氨酸AlaA精氨酸ArgR天冬酰胺AsnN天冬氨酸AspD半胱氨酸CysC谷氨酰胺GinQ谷氨酸GluE甘氨酸GlyG组氨酸HisH异亮氨酸lieI亮氨酸LeuL赖氨酸LysK曱碌u氨酸MetM苯丙氨酸PheF脯氨酸ProP丝氨酸SerS苏氨酸ThrT色氨酸TrpW酪氨酸TyrY缬氨酸ValV"基因"指表达特定蛋白的核酸片段，包括编码序列之前的调控序列(5，非编码序列)和之后的序列(3'非编码序列)，"天然基因"指在天然状态下发现的带有自身调控序列的基因。"嵌合基因"指非天然基因的任意基因，其包含在天然状态下不会同时发现的调控序列和编码序列。因此，嵌合基因可能包含源自不同来源的调控序列和编码序列，或者包含源自相同来源、但排列方式不同于天然状态的调控序列和编码序列。"外源"基因指在宿主生物体中通常不存在、而是通过基因转移引入到宿主生物体的基因。外源基因可以包含插入非天然生物体中的天然基因，或嵌合基因。使用本领域中技术人员已知的方法，可以将化学合成的寡核苷酸结构单元装配成"合成的基因"。连接这些结构单元并退火，形成基因片段，然后再酶促地装配它们，构建完整的基因。当涉及DNA序列时，"化学合成的"表示在体外装配组分核苷酸。DNA的人工化学合成，可以使用充分确立的技术来完成，或自动化学合成可以使用许多市售仪器之一来进行。因此，可以根据反映宿主细胞密码子偏倚的核苷酸序列最优化，对基因进行裁剪，进行最佳的基因表达。如果密码子选择偏向宿主偏爱的那些密码子，本领域技术人员能够意识到成功的基因表达的可能性。基于对源自可得到序列信息的宿主细胞的基因的分析，可以确定出优选的密码子。"编码序列"指编码特定氨基酸序列的DNA序列。"适当的调控序列"指位于编码序列上游(5，非编码序列)、其中或下游(3，非编码序列)的核苷酸序列，其会影响相关编码序列的转录、RNA加工或稳定性、或翻译。调控序列可以包括启动子、翻译前导序列、内含子、聚腺苷酸化识别序列、RNA加工位点、效应物结合位点和茎环结构。"启动子"指能够控制编码序列或功能性RNA的表达的DNA序列。一^L来说，编码序列位于启动子序列的3，。启动子可以整体地源自天然基因，或包含源自不同天然启动子的不同元件，或者甚至包含合成的DNA片段。本领域技术人员应当理解，不同的启动子可以指导基因表达，后者发生在不同组织或细胞类型中，或在不同的发育阶段，或对不同环境或生理条件作出的反应。导致基因在大多数细胞类型中在大多数时间下表达的启动子，一般称为"组成型启动子"。进一步认识到，因为在大多数情况下不能完全确定调控序列的确切界限，因此不同长度的DNA片段可能具有相同的启动子活性。如本文所使用的，术语"表达，，指源自本发明的核酸片段的有义(mRNA)或反义RNA的转录和稳定累积。表达还可以指mRNA翻译为多肽。术语"转化"指将核酸片段转移到宿主生物体的基因组中，导致遗传上稳定的遗传特性。包含转化的核酸片段的宿主生物体也称作"转基因的"或"重组的"或"转化的"生物体。术语"宿主细胞"指已经或能被外源多核苷酸序列转化或转染的细胞。术语"质粒"、"载体"和"盒"指经常携带特定基因的染色体外元件，所述基因不是细胞中心代谢的一部分，并且通常是环状双链DNA分子形式。这样的元件可以是任意来源的单链或双链DNA或RNA的线状或环状自主复制序列、基因组整合序列、噬菌体或核苷酸序列，其中许多核苷酸序列已经结合或组合在独特的构建体中，该构建体能够将所选基因产物的启动子片段和DNA序列连同适当的3'非翻译序列引入细胞中。"转化盒"指一种特殊的载体，其包含外源基因，除外源基因外还具有促进特定宿主细胞的转化的元件。"表达盒"指一种特殊的载体，其包含外源基因，除外源基因外还具有增强该基因在外源宿主中的表达的元件。术语"噬菌体(phage或bacteriophage)"指能感染细菌的病毒。变化形式的噬菌体也能用于本发明目的。优选的噬菌体源自叫做M13的"野生"噬菌体。M13系统可以在细菌内生长，因此不会石皮坏它所感染的细胞，只是使它不断地制造新的噬菌体。它是单链DNA噬菌体。术语"噬菌体展示"指在噬菌体或噬菌粒颗粒表面上所进行的功能性外源肽或小蛋白的展示。可以使用基因工程化的噬菌体，将肽展示为它们的天然表面蛋白的片段。具有不同基因序列的噬菌体群可以产生肽文库。"PCR"或"聚合酶链式反应"是用于扩增特定DNA片段的技术(美国专利No.4,683，195和4,800,159)。本文所使用的标准重组DNA和分子克隆技术，是本领域众所周知的才支术，且i己载在Sambrook,J.，Fritsch,E.F.和Maniatis,T.，MolecularCloning:ALaboratoryManual,SecondEdition,ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY(1989)(下文称作"Maniatis");和Silhavy,T.J.，Bennan,M丄.和Enquist,L.W.,ExperimentswithGeneFusions,ColdSpringHarborLaboratoryColdPressSpringHarbor,NY(1984);和Ausubel,F.M.等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssoc,和Wiley-Interscience出版(1987)。本发明提供了鉴定在毛发调理剂基质存在下以高亲和力特异性结合于毛发的抗毛发调理剂的肽序列的方法。该方法是标准生物淘选技术的改进，其中毛发与组合产生的肽的文库接触。在本发明的内容中，得到的DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂接触一段时间。分离DNA联合的肽-毛发复合物，任选与洗脱剂接触，得到洗脱的DNA联合的肽和保持与毛发结合的DNA联合的肽。扩增和鉴定洗脱的DNA联合的肽和/或保留的结合的DNA联合的肽。可以用鉴定的抗毛发调理剂的毛发结合肽序列构建基于肽的毛发有益试剂，如毛发调理剂和着色剂。抗毛发调理剂的毛发结合肽的恭定本文定义的抗毛发调理剂的毛发结合肽(HCP)是特异性结合毛发调理剂基质中的毛发并且在其中稳定的肽序列。本发明的抗毛发调理剂的毛发结合肽的长度是约7个氨基酸-约45个氨基酸，更优选约7个氨基酸-约25个氨基酸，最优选约12-约20个氨基酸。本发明的肽是随机产生的，然后按照下文所述，在毛发调理剂基质存在下，基于它们对毛发的结合亲和力针对毛发样品进行选择。随机的肽文库的产生是众所周知的，且可以通过许多技术来实现，包括，细菌展示(Kemp，D丄;Proc.Natl.Acad.Sci.USA78(7):4520—4524(1981),和Helfman等，Pro"Natl,Acad.Sci.USA80(1):31-35,(1983))，酵母展示(Chien等，ProcNatlAcadSciUSA88(21):9578-82(1991))，组合固相肽合成(美国专利No.5,449,754，美国专利No.5,480,971,美国专利No.5,585，275,美国专利No.5,639,603)，和噬菌体展示技术(美国专利No.5,223,409，美国专利No.5,403，484，美国专利No.5,571,698,美国专利No.5,837,500)。产生这样的生物肽文库的技术是本领域7>知的。示例的方法记载在Dani,M.,J.ofReceptor&SignalTransductionRes.，21(4):447-468(2001),Sidhuetal.,MethodsinEnzymology328:333-363(2000),和PhageDisplayofPeptidesandProteins,ALaboratoryManual,BrianK.Kay,JillWinter,以、及JohnMcCafferty,eds.;AcademicPress,.NY,1996。jt匕夕卜，可以从商业来源如NewEnglandBiolabs(Beverly,MA)购买喧菌体展示文库。在一个实施方案中，特别有用的是以某种方式使编码肽的DNA与肽联合。该联合在筛选或生物淘选过程中促进结合肽的快速鉴定。编码DNA可以是PCR扩增的，或用于感染复制中的宿主，以增加用于快速鉴定的肽的表达。典型地通过噬菌体展示、细菌展示和酵母展示的方法生产DNA联合的肽。随机产生肽的一个优选的方法是利用噬菌体展示。噬菌体展示是一种体外选择技术，其中将肽或蛋白遗传地融合到噬菌体外壳蛋白上，从而在噬菌体病毒体的外部形成融合肽展示，而编码融合体的DNA停留在病毒体内。展示肽和其编码DNA之间的这种物理连接，允许通过称作"生物淘选，，的简单体外选择过程，筛选大量肽变体，每个变体均与相应的DNA序列连接。生物淘选中最简单的形式是，将噬菌体-展示的变体库与目标耙一起温育，洗去未结合的噬菌体，并通过破坏噬菌体与靶之间的结合相互作用，洗脱特异性地结合的噬菌体。然后，体内扩增洗脱的噬菌体，重复该过程，得到逐步富集的有利于最紧密结合序列的噬菌体库。经过3轮或更多轮的选择/扩增，通过DNA测序对单个克隆进行表4正。可以通过在毛发调理剂基质存在下，基于对毛发的结合亲和力，针对毛发样品选择噬菌体肽，从而用噬菌体展示法鉴定本发明的抗毛发调理剂的毛发结合肽。毛发和噬菌体肽可以以多种途径与毛发调理剂基质接触，形成调理溶液，如下文的详细描述。例如，可以将噬菌体肽文库溶解于毛发调理剂基质，然后与毛发样品接触。或者，可以随后将通过使毛发样品接触噬菌体展示文库而形成的噬菌体-肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触。此外，可以使用这些毛发调理剂接触方法的任意组合。在已经生产出或者从供应商购买DNA联合的肽的合适文库后，使该文库与适量的毛发样品相接触，形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液。人毛发样品是可以商购的，例如，购自InternationalHairImportersandProducts(Bellerose,NY)，其具有不同颜色，如棕色、黑色、红色和金色，有各种类型，如黑人、白人和亚洲人的类型。此外，例如可以用过氧化氢处理毛发样品，以获得漂白的毛发。将DNA联合的肽的文库溶解于合适的溶液，用于接触毛发样品。在一个实施方案中，将肽的文库溶解于含有表面活性剂的緩冲盐水溶液中。合适的溶液是含有0.5%Tween20的Tris緩冲的盐水(TBS)。在另一实施方案中，将肽的文库溶解于毛发调理剂基质中(参见下文)，然后与毛发样品接触。可以通过任何方法搅拌含有肽文库的溶液，以便增加肽到毛发表面的质量转移速度，从而缩短达到最大结合所需的时间。达到最大结合所需的时间依赖于一些因素而改变，例如毛发样品的大小、肽文库的浓度和搅拌速度。本领域技术人员可以采用常规实验容易地确定需要的时间。典型地，接触时间是1分钟到1小时。任选地，可以使肽文库与非耙，如皮肤或塑料接触，所述接触是在^^妄触毛发样品之前或同时，以除去结合于非靶的不需要的DNA联合的肽。接触毛发样品后，许多随机产生的肽就结合于毛发，形成DNA联合的肽-毛发复合物。许多肽保持未复合状态，部分样品也未结合。可以任选用任何合适的緩冲液洗涤，从而除去未复合的肽，所述緩冲液如Tris-HC1、Tris緩冲的盐水、Tris-硼酸盐、Tris-乙酸、三乙胺、磷酸緩冲液和甘氨酸-HC1，其中优选Tris緩冲的盐水溶液。洗涤溶液也可以含有表面活性剂，如SDS(十二烷基石克酸钠)、DOC(脱氧胆酸钠)、NonidetP-40、TritonX-100、Tween20,其中优选浓度为0.5%的Tween20。洗涤步骤可以重复一次或多次。除去未复合的材料后，使DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触一段时间，典型地，接触约1分钟至约30分钟，以形成调理溶液。本文用到的毛发调理剂基质是指一种介质，其包含未稀释或稀释形式的毛发调理剂产品，或包含毛发调理剂产品的至少一种成分的混合物以及毛发调理剂产品的至少两种成分。合适的毛发调理剂产品组合物是本领域公知的。毛发调理剂产品组合物的成分由Philippe等人描述于美国专利No.6,280,747,由Omura等人描述于美国专利No.6,139,851，并且由Cannell等人描述于美国专利No.6,013,250，在此引入作为参考。例如，毛发调理剂组合物可以是水溶液、水-醇溶液和油包水(W/O)或水包油(OAV)乳液。此外。毛发调理剂组合物可以包含一种或多种常规的化妆品或皮肤病学添加剂或佐剂，包括但不限于毛发调理剂(参见下文实施例)、抗氧化剂、防腐剂、填料、表面活性剂、UVA和/或UVB防晒剂、香料、增稠剂、润湿剂和阴离子、非离子或两性聚合物，以及染料或色素。这些佐剂是化妆品领域/>知的，并且描述于许多^Hf文南史，例如参见Harry'sBookofCosmeticology,第8版，MartinRieger,ed.，ChemicalPublishing,NewYork(2000)。jt匕夕卜，可以J吏用可商购的毛发调理剂产品，如DoveExtraVolumeConditioner(Unilever)、PanteneProV(ProctorandGamble)、HerbalEssence(Clairol)，Finesse(HeleneCurtis)和Tresemme(Alberto'Culver)。毛发调理剂可以在地区超市和药店购买。优选地，本方法中采用这样的毛发调理剂基质，其中最终使用抗毛发调理剂的毛发结合肽。毛发调理剂组合物可是不稀释使用，也可以稀释以促进其应用，特别是在非常粘稠的组合物的情况下。毛发调理剂基质可以用水或合适的緩冲液稀释，如可以使用上文描述的那些。毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10%，优选至少约20%，更优选至少约50%,更优选至少约75%。最优选地，以未稀释形式使用毛发调理剂基质。任选地，可以使DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触一次或多次。从调理溶液分离DNA联合的肽-毛发复合物，任选用上文描述的緩冲液洗涤一次或多次。也可以将毛发调理剂基质用作洗液。然后使DNA联合的肽-毛发复合物与洗脱剂接触(优选在转移到新容器之后)，以使DNA联合的肽从毛发上解离；但是，一些DNA联合的肽在该处理之后可能仍然保持与毛发结合。洗脱剂可以是任何已知的洗脱剂，包括但不限于酸(pH1.5-3.0);石咸(pH10-12.5);含有高盐浓度如MgCl2(3-5M)和LiC1(5-10M)的溶液；水；乙二醇(25-50%);二哺烷(5-20%);硫氰酸盐(1-5M);胍(2-5M);和脲(2-8M),其中优选用酸处理。如果使用的洗脱緩冲液是酸或碱，那么，加入中和緩冲液，以便在洗脱步骤后将pH调节至中性范围。可以使用任何合适的緩冲液，其中采用酸性洗脱液时优选使用1MTris-HCIpH9.2。然后，用本领域已知的方法扩增编码洗脱的肽或保持结合的肽的DNA，或编码洗脱的肽和保持结合的肽这两者的DNA。例如，可以通过用编码需要的肽的DNA感染细菌宿主，如大肠杆菌ER2738，来扩增编码洗脱的肽和保持结合的肽的DNA,如Huang等人的描述(共同未决和共同拥有的美国专利申请一^开No.2005/0050656，在此引入作为参考)。在合适的生长培养基(例如LB(Luria-Bertani)培养基)中培养感染的宿主细胞，然后将培养物涂布到琼脂上，琼脂包含合适的生长培养基，例如含有IPTG(异丙基(3-D-硫代吡喃半乳糖苷)和S-GalTM(3,4-环己烯基七叶亭-|3-D-吡喃半乳糖苷)的LB培养基。生长后，挑选噬斑进行DNA分离和测序，以鉴定编码抗毛发调理剂的毛发结合肽序列的序列。或者，可以用核酸扩增方法，如聚合酶链式反应(PCR)扩增编码洗脱的肽和保持结合的肽的DNA。在该方法中，用合适的引物，在编码洗脱的肽和/或保持结合的肽的DNA上进行PCR,如Janssen等人在美国专利申请公开No.2003/0152976中的描述，在此引入作为参考。在一个实施方案中，通过感染细菌宿主细胞扩增编码洗脱的肽和保持结合的肽的DNA,使扩增的DNA联合的肽与新鲜的毛发样品接触，将上述完整过程重复一次或多次，得到富含抗毛发调理剂的毛发结合DNA联合的肽的群体。在需要数目的生物淘选周期后，用本领域公知的标准DNA序列技术确定扩增的DNA序列，以鉴定抗毛发调理剂的毛发结合肽序列。用上述方法鉴定抗毛发调理剂的毛发结合肽。具体地，分离了SEQIDNOs:l-5所示的结合肽，其对毛发调理剂基质中的正常棕色毛发具有高亲和力，并且在其中稳定。抗毛发调理剂的毛发结合肽的生产可以使用本领域/>知的标准的肽合成方法来制备本发明的抗毛发调理剂的毛发结合肽(参见例如Stewart等，SolidPhasePeptideSynthesis,PierceChemicalCo.，Rockford,IL,1984;Bodanszky，PrinidplesofPeptideSynthesis,Springer-Verlag,NewYork,1984;和Pennington等，PeptideSynthesisProtocols,HumanaPress,Totowa,NJ,1994)。另外，许多公司能够提供提供常规肽合成服务。或者，可以使用重组DNA和分子克隆技术来制备本发明的肽。可以在异源宿主细胞(尤其是微生物宿主细胞)中生产编码毛发结合肽的基因。用于表达本发明结合肽的优选异源宿主细胞是微生物宿主，其广泛地存在于真菌或细菌家族中，并能够在宽温度、pH值和溶剂耐受性范围内生长。因为转录、翻译和蛋白质生物合成装置均同样地与细胞原料供给无关，因此功能性基因的表达与用于生成细胞生物量的碳原料供给无关。宿主菌林的实例包括但不限于，真菌或酵母物种，如曲霉属(Aspergillus),木霉菌属(Trichoderma)、糖酵母属(Saccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia)、假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula),或细菌物种，如沙门氏菌属(Salmonella),芽孢杆菌属(Bacillus)、不动杆菌属(Acinetobacter)、红球菌属(Rhodococcus)、链霉菌属(Streptomyces)、埃希氏菌属(Escherichia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、曱基单胞菌属(Methylomonas)、曱基纟田菌属(Methylobacter)、产石威菌属(Alcaligenes)、集胞蓝细菌属(Synechocystis)、鱼腥蓝细菌属(Anabaena)、石克杆菌属(Thiobacillus)、曱烷杆菌属(Methanobacterium)、和克雷伯氏菌属(Klebsiella)。可以使用多种表达系统来生产本发明的肽。这样的载体包括但不限于，染色体型载体、附加型载体和病毒衍生型载体，如源自细菌质粒、噬菌体、转座子、插入元件、酵母附加体和病毒(如杆状病毒、逆转录病毒)的载体，以及上述载体组合后得到的载体，如源自质粒和噬菌体遗传元件，如粘粒和噬菌粒的载体。表达系统构建体可以包含调控区，其调节和引起表达。通常，在这点上来说，任何适合在宿主细胞中维持、繁殖或表达多核苷酸或多肽的系统或载体都可以用于表达。微生物表达系统和表达载体包含调控序列，该调控序列能够指导外源蛋白相对于宿主细胞的生长进行高水平的表达。调控序列对于本领域技术人员来说是公知的，实例包括但不限于，在对化学或物理刺激的反应中造成基因表达开启或关闭的调控序列，包括存在于载体中的调控元件，如增强子序列。可以使用它们中的任一种来构建嵌合基因，用于生产本发明的任意结合肽。然后，将这些嵌合基因通过转化引入到合适的微生物中，提供肽的高水平表达。用于转化适当宿主细胞的载体或盒是本领域公知的。典型地，载体或盒包含指导相关基因的转录和翻译的序列、一个或多个选择标记、和允许自主复制或染色体整合的序列。适合的载体包含携带转录起始控制区的基因的5'区域，和控制转录终止的DNA片段的3'区域。尽管本领域技术人员均清楚，这样的控制区没有必要源自选为生产宿主的特定物种的天然基因，但是最优选地，两个控制区都源自与转化的宿主细胞同源的基因。选择标记基因会为转化的宿主细胞的选择提供表型性状，如大肠杆菌中的四环素或氨苄青霉素抗性。能够用于驱动嵌合基因在目标宿主细胞中的表达的起始控制区或启动子有多种，并为本领域技术人员所熟知。几乎任意能够驱动基因的启动子都适合用于生产本发明的结合肽，包括，但不限于CYC1、HIS3、GAL1、GALIO、ADH1、PGK、PH05、GAPDH、ADC1TRP1、URA3、LEU2、ENO、TPI(用于在糖酵母属中的表达)；AOXl(用于在毕赤氏酵母属中的表达)；和lac、ara、tet、trp、IPL、IPR、T7、tac和trc(用于在大肠杆菌中的表达)；以及用于在芽孢杆菌属中表达的amy、apr、npr启动子和各种噬菌体启动子。终止控制区也可以来自优选宿主的各种天然基因。任选地，没有必要必须包含终止位点，但是最优选地包含终止位点。可以使用包含上述合适的DNA序列以及合适的启动子或控制序列的载体，来转化合适的宿主，以使宿主表达本发明的肽。也可以使用源自本发明DNA构建体的RNA,使用无细胞翻译系统来生产这样的肽。任选地，可能需要以转化的宿主的分泌产物的形式来生产本发明的基因产物。将所需的蛋白分泌到培养基中，有利于简化纯化过程并降低成本。本领域熟知，分泌信号序列常被用于促进可表达的蛋白穿过细胞膜的主动运输。通过掺入编码在生产宿主中起作用的分泌信号的DNA序列，可以建立能分泌的转化的宿主。选择合适的信号序列的方法在本领域中是已知的(参见例如EP546049和WO9324631)。分泌信号DNA或促进子(facilitator)可以位于表达-控制DNA和本发明基因或基因片段之间，并且与后者处于相同的读码框中。基于肽的毛发有益试剂通过将抗毛发调理剂的毛发结合肽(HCP)与有益试剂(BA)如调理剂、着色剂、香料、防晒剂等偶联，形成本发明的基于肽的毛发有益试剂。基于肽的有益试剂的抗毛发调理剂的毛发结合肽部分与毛发调理剂基质中的毛发强结合，由此使有益试剂保持附着于毛发，得到长期持续的效果。抗毛发调理剂的毛发结合肽与有益试剂之间的偶联相互作用可以是共价键或非共价相互作用，并且可以是通过任选的间隔基，如下文的描述。也可能需要将多个抗毛发调理剂的毛发结合肽偶联于有益试剂，以便增强基于肽的有益试剂和毛发之间的相互作用，如Huang等人(共同未决和共同拥有的美国专利申请^^开No.2005/0050656)的描述。这可以通过将多个拷贝的单个抗毛发调理剂的毛发结合肽与有益试剂偶联，或通过直接或经间隔基将两个或多个抗毛发调理剂的毛发结合肽序列连接在一起，然后将得到的多拷贝毛发结合肽序列与有益试剂偶联而实现。此外，可以将多个拷贝的多拷贝抗毛发调理剂的毛发结合肽序列与有益试剂偶联。在所有这些基于肽的毛发有益试剂中，可以使用多个拷贝的相同抗毛发调理剂的毛发结合肽或不同抗毛发调理剂的毛发结合肽的组合。在本发明的一个实施方案中，基于肽的有益试剂是二嵌段组合物，其由抗毛发调理剂的毛发结合肽(HCP)和有益试剂(BA)组成，具有通式结构(HCPm)n-BA,其中m是l-约IOO,优选1-约10。当有益试剂是分子种类时，n的范围是1-约100,优选1-约10。当有益试剂是颗粒，如色素时，n的范围是1-约50,000，优选l-约10,000。在另一实施方案中，基于肽的有益试剂含有分隔抗毛发调理剂的毛发结合肽与有益试剂的间隔基(S)。可以将多个拷贝的抗毛发调理剂的毛发结合肽与单个间隔分子偶联。或者，可以由多个间隔基分隔多个拷贝的抗毛发调理剂的毛发结合肽。在该实施方案中，基于肽的有益试剂是三嵌段组合物，其由抗毛发调理剂的毛发结合肽、间隔基和有益试剂组成，具有通式结构[(HCPx-S)m]n-BA，其中x的范围是l-约10,优选x是l，并且m是l-约100,优选l-约10。当有益试剂是分子种类，如染料或非颗粒调理剂时，n的范围是l-约100，优选1-约10。当有益试剂是颗粒，如色素时，n的范围是1-约50,000，优选1-约10,000。应该理解，本文使用的HCP是通用命名，不意味着它表示单个抗毛发调理剂的毛发结合肽序列。当上文使用的m、n或x大于l时，提供以下状况是在本发明的范围内即一系列不同序列的毛发结合肽可以形成组合物的一部分。此外，S是通用命名，不意味着它表示单个间隔基。当上文用于三嵌段组合物的m或n大于1时，提供以下状况是在本发明的范围内即一系列不同序列的间隔基可以形成组合物的一部分。应该理解，这些结构不一定代表肽、有益试剂和任选间隔基之间的共价键。如下文所述，肽、有益试剂和任选间隔基之间的偶联相互作用可以是共价的或非共价的。下文针对毛发调理剂和毛发着色剂描述了本发明的抗毛发调理剂的基于肽的有益试剂的制备。应该理解，这些方法可以用于其它有益试剂，并且这些其它的抗毛发调理剂的基于肽的有益试剂属于本发明的范围内。泉于肽的毛发调理剂肽(HCP)与毛发调理剂(HCA)偶联而形成的。调理剂的抗毛发调理剂的毛发结合肽部分与毛发调理剂基质中的毛发强结合，由此使调理剂附着于毛发，得到长期持续的调理效果。抗毛发调理剂的毛发结合肽是通过上文描述的方法选择的，并且包括但不限于SEQIDNOs:l-5和SEQIDNO:12示出的毛发结合肽序列。在本文中定义的毛发调理剂指能够改善毛发外观、质地和光泽度，以及增加毛发体或柔度的试剂。毛发调理剂，包括但不限于，发型辅助剂，毛发拉直辅助剂，毛发强化辅助剂，和膨胀(voluminizing)试剂，例如纳米颗粒。在本发明的基于肽的毛发调理剂中，可以使用任何已知的毛发调理剂。毛发调理剂在本领域是公知的，参见例如本申请引作参考的文献Green等(WO0107009),并且可以通过各种途径购买到。合适的毛发调理剂的例子包括，但不限于阳离子聚合物，如阳离子化的瓜耳胶、二烯丙基季铵盐/丙烯酰胺共聚物、季铵化的聚乙烯吡咯烷酮及其衍生物、和各种聚季铵化合物；阳离子表面活性剂，如硬脂基二曱基千基氯化铵(steralkoniumchloride)、centrimoniumchloride、和Sapaminhydrochloride;脂肪族醇，如二十二醇；脂肪族胺，如硬脂胺；蜡；酉旨；非离子聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、和聚乙二醇；硅酮；硅氧烷，如十曱基环戊硅氧烷；聚合物乳剂，如氨基封端的二曱基硅酮(amodimethicone);和纳米颗粒，如二氧化硅纳米颗粒和聚合物纳米颗粒。本发明优选的毛发调理剂包含胺或羟基官能团，以促进与毛发结合肽的偶联，如在下面所述。优选的调理剂的实例是辛胺(CASNo.lll-86-4)、硬月旨胺(CASNo.124-30-1)、二十二醇(CASNo.661-19-8,CognisCorp.,Cincinnati,OH)、乙烯基封端的娃氧烷、乙烯基封端的硅酮(CASNo.68083-19-2)、乙烯基封端的曱基乙烯基硅氧烷、乙烯基封端的曱基乙烯基硅酮(CASNo.68951-99-5)、羟基封端的硅氧烷、羟基封端的硅酮(CASNo.80801-30-5)、氨基修饰的硅酮衍生物、[(氨乙基)氨基]丙基羟基二甲基硅氧烷、[(氨乙基)氨基]丙基羟基二曱基硅酮、a-十三烷基-co-羟基-聚(氧基-1,2-乙烷二基)(CASNo.24938-91-8)。通过使特异性的抗毛发调理剂的毛发结合肽直接地或通过任选的间隔基偶联到毛发调理剂上，可以制备本发明基于肽的毛发调理剂。偶联相互作用可以是共价键或非共价相互作用，例如氬键，静电相互作用，疏水相互作用，或范德华相互作用。在非共价相互作用的情况下，可以通过混合肽和调理剂以及任选的间隔基(如果使用)，并允许足以发生相互作用的时间，制备基于肽的毛发调理剂。使用本领域已知的方法，例如，凝胶渗透色谱，可以从得到的基于肽的毛发调理剂加合物分离未结合的物质。间隔基^价地结合到毛发调理剂上，D制备本发明的基于肽的毛i调理剂，如Huang等人的描述(共同未决和共同拥有的美国专利申请/>开No.2005/0050656)。可以使用任意已知的肽或蛋白缀合化学，制备本发明的基于肽的毛发调理剂。缀合化学在本领域是已知的(参见例如Hermanson，BioconjugateTechniques,AcademicPress，NewYork(1996))。合适的偶联剂包括但不限于，碳二亚胺偶联剂、酸氯化物、异氰酸酯、环氧化物、马来酰亚胺和其它功能性偶联剂，其中功能性偶联剂与肽的末端胺和/或羧酸基团以及肽上的巯基反应。另外，可能需要保护对肽上的反应性胺或羧酸基团，以产生基于肽的调理剂的预期结构。本领域公知氨基酸的保护基团、如叔丁氧羰基(t-Boc)的应用(参见例如上述Stewart等的文献；上述Bodanszky的文献；和上述Pennington等的文献)。在某些情况下，可能需要在毛发调理剂上引入反应基团，如羧酸、醇、胺、异氰酸酯或醛基，以偶联毛发结合肽。可以使用本领域公知的常规化学方法，如氧化、还原等，完成这些修饰。也可能希望使抗毛发调理剂的毛发结合肽通过间隔基与毛发调理剂相偶联。间隔基将肽和调理剂分隔开，以确保调理剂不干扰肽对毛发的结合。间隔基可以是任意类型的分子，如烷基链、苯基化合物、乙二醇、酰胺、酯等。优选的间隔基是亲水性的，链长从l至约IOO个原子，更优选地，链长从2至约30个原子。优选的间隔基的实例包括但不限于，乙醇胺、乙二醇、链长为6个碳原子的聚乙烯、具有3-6个重复单元的聚乙二醇、苯氧乙醇、丙醇酰胺、丁二醇、丁二醇酰胺、丙基苯基链、和乙基烷基链、丙基烷基链、己基烷基链、甾醇基(steryl)烷基链、十六烷基烷基链和棕榈酰基烷基链。可以使用任意上述的偶联化学，使间隔基共价结合到肽和毛发调理剂上。为了促进间隔基的掺入，可以使用双功能交联剂，其包含间隔基和处于两末端的反应基团，以偶联肽和调理剂。合适的双功能交联剂在本领域中是公知的，包括但不限于二胺，如1,6-二氨基己烷；二醛，如戊二醛；双N-羟基琥珀酰亚胺酯，如乙二醇-双(琥珀酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)、双琥珀酰亚胺基戊二酸酯、双琥珀酰亚胺基辛二酸酯、和乙二醇-双(琥珀酰亚胺基琥珀酸酯)；二异氰酸酯，如1,6-己二异氰酸酯；双环氧乙烷，如1,4亚丁基二环氧甘油醚；二羧酸，如琥珀酰双水杨酸酯等。也可以使用异双功能交联剂，其在每个末端含有一个不同的反应基团。异双功能交联剂的实例包括但不限于，具有如下结构的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>其中R!是H或是取代基，如-S03Na、-N02、或-Br;R2是间隔基，如-CH2CH2(乙基)、-(CH2)3(丙基)或-(CH2)3QH5(丙基苯基)。这样的异双功能交联剂的实例是3-马来酰亚胺基丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯。这些试剂的N-羟基琥珀酰亚胺酯基团与调理剂上的胺或醇基反应，而马来酰亚胺基团与肽上的巯基反应。通过在结合肽序列的至少一个末端(即，C-末端或N-末端)添加至少一个半胱氨酸基团，可以将巯基掺入肽中。可以在结合肽序列和末端半胱氨酸之间掺入几种间隔氨基酸残基，如甘氨酸，以将反应性巯基与结合序列分隔开。此外，可以将至少一个赖氨酸残基加至结合肽的至少一个末端，即C-末端或N-末端，以提供用于偶联的胺基团。另外，间隔基可以是包含任意氨基酸及其混合物的肽。优选的肽间隔基包含脯氨酸、赖氨酸、甘氨酸、丙氨酸和丝氨酸及其混合物。另夕卜，肽间隔基可以包含特异性酶切割位点，如蛋白酶半胱天冬酶3位点(SEQIDNO:6所示)，其用于酶促地从毛发上去除调理剂。肽间隔基的长度可以是从1至约50个氨基酸，优选从1至约20个氨基酸。肽间隔基的实例包括但不限于SEQIDNOs:13-15。可以通过本领域已知的任何方法，将这些肽间隔基连接到结合肽序列上。例如，可以使用前面所述的标准的肽合成技术，制备完整的结合肽-肽间隔基二嵌段物。另外，还可以<吏用碳二亚胺偶联剂(参见例如Hermanson,BioconjugateTechniques,AcademicPress,NewYork(1996))、二价氯化物、二异氰酸酯和能与肽上的末端胺和/或羧酸基团反应的其它双功能偶联剂，连接结合肽序列和肽间隔基。或者，可以使用前面所描述的重组DNA和分子克隆技术，制备完整的结合肽-肽间隔基二嵌段物。间隔基也可以是肽间隔基和有机间隔基分子的组合，其可以通过上述方法制备。还可能需要将多个抗毛发调理剂的毛发结合肽与毛发调理剂偶联，以增强基于肽的毛发调理剂和毛发之间的相互作用。可以使用多个拷贝的相同毛发结合肽，或不同毛发结合肽的组合。例如，可以使用抗毛发调理剂和抗洗发液的组合的毛发结合肽。抗洗发液的毛发结合肽由Huang等人(共同未决和共同拥有的美国专利申请公开No.2005/0050656)和O'Brien等人(共同未决和共同拥有的美国专利申请No.11/251715)描述。多拷贝的抗毛发调理剂的毛发结合肽可以包含多个如上文所述的间隔基。在大调理颗粒(如颗粒乳液或纳米颗粒)的情况下，可以在调理剂上偶联大量的毛发结合肽，即至多约5,000个。可以将小量毛发结合肽偶联到较小的调理剂分子上，即至多约100个。此外，多个毛发结合肽序列可以连接在一起，并且附着于调理剂。因此，在本发明的一个实施方案中，基于肽的毛发调理剂是二嵌段组合物，其由抗毛发调理剂的毛发结合肽(HCP)和毛发调理剂(HCA)组成，通式结构为(HCPm)n-HCA，其中m的范围为1-约100，优选1-约10。当毛发调理剂是分子种类，即非颗粒调理剂时，n的范围是l-约IOO，优选1-约10。当毛发调理剂是颗粒时，n的范围是1-约50,000，优选1-约10,000。在另一实施方案中，基于肽的毛发调理剂含有上文所述的将抗毛发调理剂的毛发结合肽与毛发调理剂分开的间隔基(s)。可以将多个拷贝的毛发结合肽与单个间隔基偶联。此外，可以通过间隔基将多个拷贝的肽连接在一起，并且通过间隔基与毛发调理剂偶联。在该实施方案中，基于肽的毛发调理剂是三嵌段组合物，其由抗毛发调理剂的毛发结合肽、间隔基和毛发调理剂组成，具有通式结构[(HCPx-S)m]n-HCA,其中x的范围是1-约10,x优选是1,m的范围是1-约100,优选1-约10。当毛发调理剂是分子种类，即非颗粒调理剂时，n的范围是l-约100,优选l-约10。当毛发调理剂是颗粒时，n的范围是l-约50,000,优选1—约10,000。应该理解，本文使用的HCP是通用命名，不意味着它表示单个抗毛发调理剂的毛发结合肽序列。当上文使用的m、n或x大于l时，提供以下状况是在本发明的范围内即一系列不同序列的毛发结合肽可以形成组合物的一部分。此外，S是通用命名，不意味着它表示单个间隔基。当上文用于三嵌段组合物的m或n大于1时，提供以下状况是在本发明的范围内即一系列不同序列的间隔基可以形成组合物的一部分。应该理解，这些结构不一定代表肽、有益试剂和任选间隔基之间的共价键。如下文所述，肽、有益试剂和任选间隔基之间的偶联相互作用可以是共价的或非共价的。可以将本发明的基于肽的毛发调理剂用于毛发护理的产品中。还应当认识到，抗毛发调理剂的毛发结合肽本身也能作为调理剂来处理毛发。在本文中将毛发护理产品组合物定义为用于处理毛发的组合物，包括但不限于调理剂、洗剂、气雾剂、凝胶、摩丝和毛发着色剂。在一种实施方案中，毛发护理产品组合物是毛发调理产品。另一种实施方案中，毛发护理产品组合物是毛发着色产品。本发明的毛发护理产品组合物包含化妆上可接受的介质中的有效量的基于肽的毛发调理剂或不同基于肽的毛发调理剂的混合物。在本文量定义为相对于组合物的,:重量，:換重量;十约0^01%至约10%:优选约0.01%至约5%的比例。毛发护理产品组合物的化妆上可接受的介质的成分是公知的，其例子记载在，P區ppe等，美国专利号6,280,747和Omura等，美国专利号6,139,851和Cannell等，美国专利号6,013,250。基于肽的毛发着色剂通过将抗毛发调理剂的毛发结合肽(HCP)与着色剂(C)相偶联，形成本发明的基于肽的毛发着色剂。基于肽的毛发着色剂的抗毛发调理剂的毛发结合肽部分可以与毛发强结合，并且不被毛发调理剂的施用除去，从而能够使着色剂在毛发上保持，产生长期持续的毛发着色效果。抗毛发调理剂的毛发结合肽是通过上文描述的方法选择的，并且包括但不限于SEQIDNOs:1-5和SEQIDNO:12示出的毛发结合肽序列。在本文中定义的着色剂是，能够用于改变毛发的颜色的任何染料和色素等。在本发明的基于肽的毛发着色剂中，可以使用任何合适的着色剂。毛发着色剂在本领域是公知的(参见上述Green等的文献，CFTAInternationalColorHandbook,2nded.，MicellePress,England(1992)和CosmeticHandbook,USFoodandDrugAdministration,FDA/IASBooklet(1992)),并且可以通过各种途径购买到(例如Bayer,Pittsburgh,PA;Ciba-Geigy,Tarrytown，NY;ICI,Bridgewater,NJ;Sandoz，Vienna,奥地利；BASF,MountOlive，NJ;和Hoechst,Frankfurt,德国)。合适的毛发着色剂包括，但不限于染料，如4-羟丙基氨基-3-硝基苯酚、4-氨基-3-硝基苯酚、2-氨基-6-氯代_4-硝基苯酚、2-硝基-对苯二胺、N,N-羟乙基-2-硝基-苯二胺、4-硝基-口引p来、指曱花、HCBluel、HCBlue2、HCYellow4、HCRed3、HCRed5、DisperseViolet4、DisperseBlack9、HCBlue7、HCBlue12、HCYellow2、HCYellow6、HCYellow8、HCYellow12、HCBrown2、D&CYellow1、D&CYellow3、D&CBlue1、DisperseBlue3、Disperseviolet1、伊红衍生物如D&CRedNo.21和卤化荧光素衍生物如D&CRedNo.27、与D&CRedNo.21和D&COrangeNo.10组合的D&CRedOrangeNo.5;和色素，如D&CRedNo.36和D&COrangeNo.17、D&CRedNo.7、11、31和34的4丐色淀、D&CRedNo.12的钡色淀、D&CRedNo.13的锶色淀、FD&CYellowNo.5、FD&CYellowNo.6、D&CRedNo.27、D&CRedNo.21和FD&CBlueNo.1的铝色淀、氧化铁、锰紫(manganeseviolet)、氧化铬、二氧化钛、氧化锌、氧化钡、群青蓝、柠檬酸铋和炭黑颗粒。也可以将碳纳米管(carbonnanotubes)用作染发的黑色素，如等人在共同未决和共同拥有的U.S.专利申请公开Nos.2005/0229334和2005/0229335中的描述，在此引入这两篇文献作为参考。本发明优选的染料和色素包括D&CYellow1和3、HCYellow6和8、D&CBlue1、HCBluel、HCBrown2、HCRed5、2—^肖基只t苯二胺、N,N-轻乙基-2-硝基-苯二胺、二氧化钛、4-硝基-p引咮、氧化铁、炭黑和碳纳米管。金属和半导体纳米颗粒也可以用作毛发着色剂，因为它们具有强发光作用(Vic等，美国专利申请公开号2004/0010864)。金属纳米颗粒包括，但不限于金、银、柏、钯、铱、铑、锇、铁、铜、钴的颗粒和由上述金属组成的合金。在本文中将"合金"定义为两种或多种金属的均一混合物。"半导体纳米颗粒"包括，但不限于硒化镉、^琉化镉、石克化银、硫化镉、氧化锌、疏化锌、硒化锌、碌u化铅、砷化镓、^圭、氧化锡、氧化铁和磷化铟的颗粒。使用合适的有机包衣或单层，可以使纳米颗粒稳定并具备水溶性。如本文所使用的，单层-保护的纳米颗粒是一类稳定化的纳米颗粒。制备稳定化的、水溶的金属和半导体纳米颗粒的方法是本领域众所周知的，且记载在在此引作参考的Huang等，共同未决的美国专利申请公开No.2004/0115345。纳米颗粒的颜色取决于颗粒尺寸。因此，通过控制纳米颗粒的尺寸，可以获得不同的颜色。例如，ZnS-包衣的CdSe纳米颗粒在粒度为2到6nm内时，其颜色覆盖整个可见光光谱。更具体地，CdSe纳米颗粒核心尺寸分别为2.3、4.2、4.8和5.5nm时，其发射光的波长分别集中为485、565、590和625nm。使用上述Huang等人(美国专利申请公开No.2004/0115345)的尺寸分级方法，可以从较宽尺寸分布的纳米颗粒中，获得不同尺寸的水溶的纳米颗粒。该方法包含在存在电解质的情况下，有调节地向纳米颗粒溶液中加入易溶于水的有机溶剂。易溶于水的有机溶剂所加入的量越大，所得到的纳米颗粒沉淀的尺寸就越小。金属的和半导体纳米颗粒也可以用作膨胀试剂，如上所述。另外，可以将附着、吸附或吸收了染料的有机和无机纳米颗粒用作毛发着色剂。例如，毛发着色剂可以是有色的聚合物纳米颗粒。示例性的聚合物纳米颗粒包括但不限于，包含聚苯乙烯、聚曱基丙烯酸甲酯、聚乙烯基曱苯、苯乙烯/丁二烯共聚物和胶乳的微球。为了用于本发明，微球具有约10纳米至约2微米的直径。通过将任意的合适的染料(例如上述的那些)偶联到微球上，可以使微球着色。可以将染料偶联到微球的表面上，或吸附到多孔微球的孔结构内。可以从BangLaboratories(Fishers,IN)等公司得到合适的微球，包括未染色和染色微球，其被官能化，以实现共价结合。偶联到着色剂上，可以制备本发明的基于肽的毛发着色剂:、可以使用1述任意的偶联方法。可能需要在着色剂上引入反应基团，如羧酸、醇、胺、醛或异氰酸酯基，以偶联毛发结合肽。可以使用本领域^^知的常规化学，如氧化、还原和光气化，实现上述修饰。例如，可以-使用硝酸、过氧化物如过氧化氢、或无机起始物如过硫酸铵，氧化炭黑颗粒的表面，产生官能团。优选地，使用Carrasco-Marin等描述的方法(J.Chem,Soc.,FaradayTrans.93:2211-2215(1997))用过硫酸铵氧化炭黑表面。使用无机起始物，如2，2'-偶氮二(2-曱基丙酰胺)-二盐酸化物，可以在炭黑表面引入氨基官能团。无机色素和纳米颗粒也可以通过类似的方法进行衍生化，以引入羧酸或氨基功能团。还可能需要将多个抗毛发调理剂的毛发结合肽与着色剂偶联，以增强基于肽的毛发着色剂和毛发之间的相互作用。可以使用多个拷贝的相同毛发结合肽，或不同毛发结合肽的组合。例如，可以使用如上文所述的抗毛发调理剂和抗洗发液的组合的毛发结合肽。在大色素颗粒的情况下，可以在色素上偶联大量的毛发结合肽，即至多约5,000个。可以将小量毛发结合肽偶联到较小的染料分子上，即至多约100个。此外，如上文所述，多个毛发结合肽序列可以连接在一起，并且附着于着色剂。因此，在本发明的一个实施方案中，基于肽的毛发着色剂是二嵌段组合物，其由抗毛发调理剂的毛发结合肽(HCP)和着色剂(C)组成，通式结构为(HCPm)n-C,其中m的范围为1-约100，优选1-约10。当着色剂是分子种类，如染料时，n的范围是l-约IOO，优选1-约10。当着色剂是颗粒，如色素或纳米颗粒时，n的范围是1-约50，000,优选1-约10,000。在另一实施方案中，基于肽的毛发着色剂含有上文所述的将抗毛发调理剂的毛发结合肽与毛发着色剂分开的间隔基(s)。可以将多个拷贝的抗毛发调理剂的毛发结合肽与单个间隔基偶联。此外，可以通过间隔基将多个拷贝的肽连接在一起，并且通过间隔基与着色剂偶联。在该实施方案中，基于肽的毛发着色剂是三嵌段组合物，其由抗毛发调理剂的毛发结合肽、间隔基和着色剂组成，具有通式结构[(HCPx-s:u]n-c，其中x的范围是l-约10，x优选是l,m的范围是l-约IOO,优选l-约10。当着色剂是分子种类如染料时，n的范围是1-约100,优选1-约10。当着色剂是颗粒，如色素或纳米颗粒时，n的范围是1-约50,000，优选1—约10,000。应该理解，本文使用的HCP是通用命名，不意味着它表示单个抗毛发调理剂的毛发结合肽序列。当上文使用的m、n或x大于l时，提供以下状况是在本发明的范围内即一系列不同序列的毛发结合肽可以形成组合物的一部分。此外，S是通用命名，不意p未着它表示单个间隔基。当上文用于三嵌段组合物的m或n大于1时，提供以下状况是在本发明的范围内即一系列不同序列的间隔基可以形成组合物的一部分。应该理解，这些结构不一定代表肽、有益试剂和任选间隔基之间的共价键。如下文所述，肽、有益试剂和任选间隔基之间的偶联相互作用可以是共价的或非共价的。可以将本发明的基于肽的毛发着色剂用于染发的毛发着色产品中。本文定义的毛发着色产品组合物定义为用于对毛发进行着色、染色或漂白的组合物，其中包含化妆上可接受的介质中的有效量的基于肽的毛发着色剂或不同基于肽的毛发着色剂的混合物。在本文中将用于毛发着色产品组合物中的基于肽的毛发着色剂的有效量定义为相对于组合物的总重量，按重量计约0.001%至约20%的比例。用于毛发着色产品组合物的化妆上可接受的介质的成分记载在Dias等，美国专利号6,398,821和Deutz等，美国专利号6,129,770，上述文献在此引作参考。例如，毛发着色产品组合物可以包含螯合剂、稳定剂、增稠剂、緩冲液、载体、表面活性剂、溶剂、抗氧化剂、聚合物和调理剂。调理剂可以包括本发明的基于肽的毛发调理剂和抗毛发调理剂的毛发结合肽，其按重量计占毛发着色组合物总重量的约0.01%至约10%,优选约0.01%至约5%。本发明的基于肽的毛发着色剂还可以作为着色剂用于化妆组合物中，其中化妆组合物是施用到睫毛或眉毛上的，包括但不限于，睫毛膏和眉笔。它们可以是包含化妆上可接受介质的无水化妆产品，该介质所包含的脂肪物质按重量计通常占组合物总重量的约10%至约90%,其中脂相包含至少一种液体、固体或半固体脂肪物质，如上所述。脂肪物质包括但不限于，油、蜡、树胶和所谓的糊状脂肪物质。或者，如上所述，这些组合物可以是稳定化的分散系形式，如油包水或水包油乳剂。在这些组合物中，基于肽的毛发着色剂的比例通常是按重量计占组合物总重量的约0.001%至约20%。处理毛发的方法在另一个实施方案中，提供了用本发明的基于肽的调理剂和着色剂处理毛发的方法。更具体地，本发明还包含如下在毛发上形成基于肽的调理剂的保护膜的方法将上述包含有效量的基于肽的毛发调理剂的组合物施用到毛发上，使之形成保护膜。可以通过各种方法，包括但不限于，喷雾、刷涂和用手涂抹，将本发明的组合物施用到毛发上。使基于肽的调理剂组合物与毛发接触足以形成保护膜的时间，优选至少约0.1到60分钟。本发明还提供了如下使毛发着色的方法通过上述的方法，将包含有效量基于肽的毛发着色剂的毛发着色组合物施用到毛发上。使毛发着色组合物与毛发接触足以使毛发着色的时间，优选约5到约50分钟，然后将毛发着色组合物从毛发上洗掉。本发明还提供了如下对眉毛和睫毛进行着色的方法通过上述的方法，将包含有效量基于肽的毛发着色剂的化妆组合物施用到眉毛和睫毛上。在下面的实施例中对本发明作进一步的详细说明。应当理解，这些实施例是本发明优选的实施方案，仅用作实例。根据上述描述和这些实施例，本领域技术人员能够确定本发明的基本特征，在不脱离本发明精神和范围内，能够对本发明作出各种改变和修改，以满足各种应用和需要。使用的缩写的含义如下"min"表示分钟，"sec"表示秒，"h，，表示小时，>L"表示微升，"mL"表示毫升，"L"表示升，"nm"表示纳米，"mm"表示毫米，"cm"表示厘米，"jam"表示樣么米，"mM，，表示毫摩尔浓度，"M，，表示摩尔浓度，"mmol"表示毫摩尔，"pmole"表示微摩尔，"g，，表示克，"pg，，表示微克，"mg"表示亳克，"pfu，，表示噬斑形成单位，"BSA，，表示牛血清白蛋白，"ELISA，，表示酶联免疫吸附测定法，"A"表示吸光度，"A45Q"表示在4S0nm波长测得的吸光度，"TBS"表示Tris-緩冲盐水，"TBST-X"表示包含Tween20的Tris緩冲盐水，其中"X"是Tween20的重量百分比，"SEM，，表示平均值的标准误，"MALDI"表示基质辅助的激光解吸电离，"NMR"表示核磁共振分光检定法。一般方法实施例中所使用的标准重组DNA技术和分子克隆技术是本领域中7〉知的，JU己载在，Sambrook,J.,Fritsh,E.F,和Maniatis,T.，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY1989;T丄Silhavy，M丄.Bennan，和L.V/.Enquist，实施例Experimentsw池GeneFusions,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,N.Y.，1984;和Ausubel,F.M.等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssoc.和Wiley-Interscience，N.Y.，1987。适用于细菌培养物的维持和生长的材料和方法也是本领域中公知的。适用于下面实施例的技术参见ManualofMethodsforGeneralBacteriology,PhillippGerhardt,R.G.E.Murray,RalphN.Costilow,EugeneW.Nester,WillisA.Wood,NoelR,Kriey和G.BriggsPhillips,eds.,AmericanSocietyforMicrobiology,Washington,DC.，1994,或者ThomasD.Brock,Biotechnology:ATextbookofIndustrialMicrobiology,SecondEdition,Si腿erAssociates,Inc.,Sunderland,MA，1989。除非另有说明，所有的试剂和用于生长和维持细菌细胞的材料均购自AldrichChemicals(Milwaukee,Wl)、BDDiagnosticSystems(Sparks，MD)、LifeTechnologies(Rockville，MD)、或SigmaChemicalCompany(St.Louis,MO)。噬菌体展示肽文库以下实施例使用3种噬菌体展示肽文库。Ph.D.-12TM噬菌体展示肽文库购自NewEnglandBioLabs(Beverly,MA)。该试剂盒是基于随机肽12聚体的组合文库，所述随机肽融合到噬菌体M13的一个较小的外壳蛋白(pIII)上。所展示的肽在pIII的N-末端表达，因此在切除信号肽后，外壳蛋白的首位残基即是所展示的肽的第一位残基。Ph.D.-12文库分别由大约2.7x109个序列组成。用Kay等人4结述的方法(CombinatorialChemistry&HighThroughputScreening,Vol.8:545-551(2005))制备两个噬菌体展示肽文库，其中一个含有15聚体随机肽序列，另一个含有20聚体随机肽序列。该方法是Sidhu等人报道的方法(MethodsinEnzymology328:333-363(2000))的改进，其中用大肠杆菌CJ236抹(dut—ung_)制备含有尿苷的单链噬菌粒DNA(U-ssDNA)。这种DNA用作采用寡核苷酸合成第二链的模板，不仅作为第二链的引物，也用于插入编码随机氨基酸的序列。在完成第二链合成后，双链DNA即转化到野生型菌抹中。由宿主细胞降解任何U-ssDNA,由此仅仅留下重组链来产生噬菌体颗粒。这种方法可以用于制备M13外被蛋白的肽融合体或突变体。Kay等人的方法在基因m的起始处采用琥珀终止密码子。将含有随机化的DNA序列片段的寡核苷酸与单链噬菌体基因组退火，使得随机化的区域与终止密码子联合。将ssDNA酶促转化为共价封闭的、环状dsDNA,随后电穿孔到大肠杆菌的非阻抑菌林中。新合成的DNA链(负链)作为制备宿主细胞中的正链的模板，该正链用于转录/翻译病毒基因，并且包装到病毒颗粒中。得到的15聚体和20聚体文库的滴度分别是4.1x10^pfu/mL和4.2x1012pfu/mL。每个实验中采用含有大约4x101Qpfu来自感兴趣的文库的噬菌体的样品。首先将噬菌体文库的样品进行预处理，以除去皮肤和塑料结合克隆。为了除去皮肤结合克隆，在独特的以猪皮为底的96孔装置上将噬菌体文库的样品在室温下与猪皮的样品一起温育1小时，所述装置是通过以下方法制备的在MinifoldIDot-BlotSystem(Schleicher&Schuell,Inc.，Keene,NH)的上层96孔区的下面加上一层Pamfilm,然后在该Parafiln^层的上面加入一层无毛的猪皮，然后将该装置绷紧。猪皮购自地区超市，并且在-80。C下储存。使用前，将猪皮放置在去离子水中解冻，然后用纸巾将其吸千。用90%的异丙醇擦拭猪皮表面，然后用去离子水冲洗。暴露于猪皮后，将噬菌体样品转移到聚苯乙烯、6孔细胞培养簇(CorningInc.,Acton,MA;目录号3526),在室温下温育l小时，以除去塑料结合克隆。实施例1-3抗毛发调理剂的毛发结合肽的鉴别这些实施例的目的是证明从三个随机噬菌体展示肽文库鉴别抗毛发调理剂的毛发结合肽的方法。采用的毛发才羊品是乂人InternationalHairImportersandProducts(Bellerose,NY)获得的中等棕色人头发的6英寸(bcm)长的片段。将头发在室温下置于90%的异丙醇中30分钟，然后用去离子水洗涤5次，每次10分钟。室温下将头发晾干过夜。将头发切成lcm长，将10-20段头发放置在微量离心管中。将按照上文预处理以除去皮肤和塑料结合克隆的噬菌体样品加入含有毛发样品的试管中，将混合物在室温下温育1小时。除去噬菌体溶液，将毛发样品在未稀释的毛发调理剂(DoveExtraVolumeConditioner;Unilever,购自地区超市)中室温下温育5分钟。然后用TBST-0.5%緩冲液将毛发洗涤6次。洗涤后，将毛发转移到含有由溶于0.2Mglycine-HC1,pH2.2的1mg/mLBSA组成的洗脱緩冲液中，将毛发温育10分钟。然后，在试管中加入由1MTris-HC1，pH9.2组成的中和緩冲液。洗脱噬菌体，通过加入新的宿主细胞(大肠杆菌ER2338)扩增洗脱或仍然与皮肤结合的噬菌体。使扩增和分离的噬菌体与新鲜的毛发样品接触，对于每个文库，将生物淘选程序再重复2次。第3轮生物淘选后，选择随机单噬菌体克隆，按照制造商的说明书(NewEnglandBiolabs)制备单噬斑裂解物，用QIAprepSpinM13试剂盒(Qiagen;Valencia,CA)纯化单链噬菌体基因组DNA,用SEQIDNO:7示出的-96gill测序引物(5，-CCCTCATAGTTAGCGTAACG—3，)在DuPont测序装置中进行测序。展示的肽紧接基因III的信号肽之后。三轮生物淘选后从三个噬菌体文库鉴定的抗毛发调理剂的毛发结合噬菌体肽的氨基酸序列示于表1。表1抗毛发调理剂的毛发结合噬菌体肽的氨基酸序列<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>频率代表在95个随机测序的克隆中出现的相同序列的数目。实施例4抗毛发调理剂的毛发结合肽的特异性本实施例的目的是采用ELISA程序证明实施例1-3中鉴定的抗毛发调理剂的毛发结合肽的特异性。将毛发结合肽HCP.l(SEQIDNO:l)和HCP.6(SEQIDNO:4)与对照肽，即一种无关的皮肤结合肽Skin1(Huangetal.,美国专利申请公开No.2005/0050656)—起用于本实施例，所述对照肽如SEQIDNO:8所示。用添加的赖氨酸残基合成所有的肽，所述赖氨酸残基通过SynPep(Dublin,CA)在C末端用荧光标记5-羧基荧光素-氨基己基amidite(5-FAM)衍生化。衍生化的毛发结合肽HCP.l(5-FAM)和HCP.6(5-FAM)的序列分别示于SEQIDNOs:9和10。衍生化的皮肤结合肽对照Skinl(5-FAM)的序列示于SEQIDNO:l1。对于该测定，在MinifoldIDot-BlotSystem(Schleicher&Schuell,Inc.,Keene,NH)的上层96孔板的下面加上一层Parafilm,在该Parafiln^层的顶部加上毛发或一层无毛的猪皮，然后将该装置绷紧，从而形成了独特的以毛发或猪皮为底的96孔装置。首先，通过将样品在室温温育1小时，用SuperBlock封闭緩冲液(Tris-緩冲的；PierceBiotechnology,Rockford，IL)封闭96孔装置中的毛发或皮肤样品。然后，用洗涤緩冲液(TBST-0.5%)将毛发或皮肤样品洗涤6次。将l.OmL结合緩冲液(含1mg/mLBSA的TBST-0.5%)中浓度为20的荧光素标记的肽加入每个孔，37。C下温育30分钟。用TBST-0.5%将毛发或皮肤样品洗涤6次，然后，每孔加入1.0mL抗荧光素/小鼠IgG(MolecularProbes,Inc.,Eugene,OR)溶液(在封闭緩冲液中1:1000稀释)。将样品在室温下温育1小时，然后用洗涤緩冲液洗涤6次。然后，每孔加入1.0mL抗小鼠IgG-HRP缀合物(PierceBiotechnology)溶液(在封闭緩冲液中1:1000稀释)，将样品在室温下温育1小时。用洗涤緩冲液洗涤样品6次，每孔加入300|iLTMB底物(PierceBiotechnology)。将样品在室温下温育10分钟，然后从每孔取出100样品，加入新的微量滴定板的孔中。然后，每孔加入100laL终止溶液(2M石克酸溶液)，在450nm的波长测量每个样品的吸光度。结果在表2中表示为重复的独立实验的平均值土标准误(SEM),每个实验由至少三次重复组成。从表中的数据可以看出，抗毛发调理剂的毛发结合肽HCP.l和HCP.6结合于毛发，但不结合于皮肤，证明了它们对毛发的结合特异性。如所预期的，用作阳性皮肤结合对照的Skin1肽具有高皮肤结合特异性，但具有低毛发结合活性。表2抗毛发调理剂的毛发结合肽的特异性的ELISA测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>实施例5抗毛发调理剂的毛发结合肽与毛发调理剂基质中的毛发的结合基质中的毛发结合。采用了实施例4中描述的相同ELISA法，不同的是将毛发样品集中成束，而不是在96孔装置中制成孔。为了制备毛发样品束，将100片lcm长的毛发集中在一起，用窄胶带(3M，St.Paul,MN)在一端粘住。按照实施例1-3的描述制备毛发，铺板到平底板(QiagenScience,Germantown,MD;目录号)中。分另'J用高剪切混合器(Silverson,ModelL4R7A;SilversonMachines,EastLongmeadow,MA)单独地将实施例4描述的HCP.l(5-FAM)和HCP.6(5-FAM)毛发结合肽与未稀释的毛发调理剂(DoveExtraVolumeConditioner;Unilever)混合6分钟，得到最终20jaM的肽浓度。按照实施例4的描述封闭毛发样品，然后37。C下在肽-调理剂混合物中温育30分钟。然后按照实施例4的描述洗涤和处理毛发样品。在加入抗小鼠IgG-HRP缀合物之后，进行最后的洗涤步骤，然后将毛发束转移到新试管中，加入TMB底物。将毛发束在室温下温育10分钟，然后从每个试管取出100iiL样品，加入微量滴定板的孔中。然后，将100pL终止溶液(2M好u酸溶液)加入每个孔，在450nm的波长测量每个样品的吸光度。用相同的程序确定HCP.l(5-FAM)和HCP.6(5-FAM)毛发结合肽与緩冲液中的毛发的结合。此外，用相同的程序进行对照，但是在毛发调理剂和緩冲液中都不存在任何毛发结合肽。结果在表3中表示为重复的独立实验的平均值士标准误(SEM)，每个实验由至少三次重复组成。结果证明，与緩冲液相比，毛发调理剂基，有显著差异，表3抗毛发调理剂的毛发结合肽与毛发调理剂基质中的毛发的结合的ELISA测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>液的。对于这些实验，在毛发接触毛发结合肽(HCP.l或HCP.6)后，用含有30%洗发液(PantenePro—V,SheerVolume,Proctor&Gamble,Cincinnati,OH)的溶液洗涤毛发，用上文描述的ELISA法确定结合活性，并且与用緩冲液洗涤获得的结果进行比较。洗发液洗涤导致结合活性几乎完全丧失，表明抗毛发调理剂的毛发结合肽不是抗洗发液的。实施例6抗毛发调理剂的毛发结合肽在毛发调理剂基质中的稳定性本实施例的目的是证明抗毛发调理剂的毛发结合肽在毛发调理剂基质中的稳定性。按照实施例5中的描述，制备毛发结合肽HCP.l和HCP.6在毛发调理剂中的各自的混合物。为了比较，使用了毛发结合肽在緩冲液中的溶液。所有溶液都保存在室温下，采用实施例5描述的ELISA程序确定肽的结合活性，其中在不同的时间釆集样品。也用缓冲液和不含毛发结合肽的毛发调理剂作为对照。用肽HCP.l和HCP.6获得的结果分別示于图l和2。图中的结果表明，在毛发调理剂基质中21天后，两种抗毛发调理剂的毛发结合肽的毛发结合活性没有显著降低。实施例7(预示性)制备基于肽的毛发调理剂本预示性实施例的目的是描述如何制备基于肽的毛发调理剂，其中使用异双功能交联剂3-马来酰亚胺基丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯将结合了半胱氨酸的HCP.l肽(如SEQIDNO:12所示)与辛胺偶联。通过加入11.6mg辛胺(购自Aldrich)到0.3mL的DMF中进行稀释。将稀释后的溶液加入到置于5mL圆底烧瓶中的搅拌着的下列溶液中，该溶液含有溶解在0.2mL的DMF中的25mg的3-马来酰亚胺基丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(Aldrish)和5mg的二异丙基乙胺(Aldrish)。反应混合物立即变浑浊，然后在几分钟之后变澄清。将溶液继续搅拌4小时。然后将溶液在高度真空下干燥。使用柱层析纯化产物，即辛胺偶联的马来酰亚胺基丙酸酯，所使用的柱子是Silicagel60(EMDChemicals,以前叫{故Science,Gibbstown，NJ)，洗脱液是DMF/醚。将约12mg的上述产物置于5mL的圆底烧瓶中，加入85mg结合了半胱氨酸的HCP.l肽(SynPep,Dublin,CA，示于SEQIDNO:12)和0.5mL0.1MpH7.2的磷酸盐緩冲液。结合了半胱氨酸的HCP.l肽具有结合于毛发结合HCP.l肽(SEQIDNO:1)的C末端的半胱氨酸。室温下将混合物搅拌6小时。通过用水/乙醚萃取，纯化终产物。用液相色语-质谱法(LC-MS)分析产物。实施例8(预示性)制备基于肽的毛发调理剂本预示性实施例的目的是描述如何制备基于肽的毛发调理剂，其中将毛发调理剂-毛发结合肽HCP.l偶联于十八烷基链。将异氰酸十八烷酯(70mg，Aldrich,CASNo.l12-96-9)溶解于5mLN,N，-二甲基曱酰胺(DMF)中，加入在C末端添加了半胱氨酸残基的未受保护的HCP.l肽(购自SynPep，示于SEQIDN0:12)的溶液中，该肽(150mg)溶解于10mLDMF中。加入三乙胺(30mg)，用于催化反应。室温下将溶液搅拌120小时。蒸发溶剂，得到米色晶体粉末产物。通过液相色谱和ALDI质谱法分析产物。实施例9(预示性)制备基于肽的毛发着色剂本实施例的目的是，通过使抗毛发调理剂的毛发结合肽HCP.l(SEQIDNO:l)共价结合到DisperseOrange3染料上，制备基于肽的毛发着色剂。首先用异氰酸酯官能化染料，然后与HCP.l肽反应。DisperseOrange3的官能化在干燥箱中,将14.25gDisperseOrange3(Aldrich)悬浮于在加料漏斗中的400mL无水THF中。将200mL无水曱苯装入含有磁力搅棒的2-升、四颈反应烧瓶(CorningInc.,Coming,NY;批号1533—12)。给烧瓶配备冷的指形冷凝管(CorningInc.,批号1209-04)和具有加料漏斗的第二个冷的指形冷凝管，并置于通风柜中的油浴上。在室温，将光气(25.4mL)浓缩在反应烧瓶中。添加完光气后，使油浴的温度升高到80。C，经2小时，以100mL的增量，将DisperseOrange3悬浮液逐滴加入反应烧瓶，同时监视反应温度和洗涤器排出的气体。在加料过程中，将温度维持在64。C或低于64°C。完成加料后，将反应物在64r加热l小时，然后搅拌过夜，冷却至室温。将反应溶剂真空蒸馏至千燥，同时将内容物维持在4(TC或低于40°C,并将真空另外维持1小时。将反应烧瓶转移至干燥箱；收集产物，过夜干燥。通过质子NMR,证实目标产物。将异氰酸酯官能化的染料与HCP.l毛发结合肽相偶联将如上所述制备的异氰酸酯官能化的DisperseOrange3[(2-(4-异氰酸基苯基)-1-(4-硝基苯基)二氮烯)(16mg)溶于5mLDMF中，并加入含有75mg未保护的HCP.l肽(SEQIDNO:l)的溶液中，所述HCP.l肽购自SynPep,且溶解在10mLDMF中。加入三乙胺(30mg)以催化反应。在室温搅拌溶液24小时。蒸发溶剂，产生暗红棕色粉末产物。通过MALDI质谱法分析产物，以证实加合物形成。实施例10(预示性)用基于肽的毛发着色剂对毛发调理剂基质中的毛发进行染色本预示性实施例的目的是描述如何测试对天然白发样品进行染色，其中使用毛发调理剂基质中的基于肽的毛发着色剂。通过混合按照实施例9的描述制备的基于肽的毛发着色剂与毛发调理剂，制备毛发着色组合物。用高剪切混合器将基于肽的毛发着色剂(100mg)与10mLDoveExtraVolume调理剂混合在一起。将一束天然白发(约100—1000才艮头发)(购自InternationalHairImportersandProductsInc)搅拌下浸入基于肽的毛发着色剂-调理剂混合物中10分钟。然后通过与10mL50%PanteneProV洗发液混合5分钟，清洗毛发，然后用蒸馏水冲洗，除去洗发液。在室温下干燥毛发，用蒸馏水冲洗至少5次。毛发的颜色将是橙色。权利要求1.鉴定抗毛发调理剂的毛发结合肽的方法，包括a)提供DNA联合的肽的组合文库；b)使(a)的文库与毛发样品接触，其中毛发与DNA联合的肽复合，形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液；c)从反应溶液分离(b)的DNA联合的肽-毛发复合物；d)使(c)的分离的DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触，形成调理溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10％；e)从调理溶液分离(d)的DNA联合的肽-毛发复合物；f)扩增编码(e)的DNA联合的肽-毛发复合物中的肽部分的DNA；和g)对(f)的扩增的编码抗调理剂的毛发结合肽的DNA进行测序，其中鉴定出抗调理剂的毛发结合肽。2.权利要求l的方法，其中在步骤(e)之后i)使DNA联合的肽-毛发复合物中的肽与洗脱剂接触，从而从毛发洗脱一部分DNA联合的肽，而一部分DNA联合的肽保持复合；并且ii)使(ii)的洗脱或复合的DNA联合的肽进行步骤(f)和(g)。3.权利要求1或2的方法，其中编码肽的DNA是通过选自下组的过程扩增的a)通过聚合酶链反应扩增包含肽编码区的DNA;和b)用包含编码肽的DNA的噬菌体感染宿主细胞，并且使所述宿主细胞在合适的生长培养基中生长。4.权利要求1或2的方法，其中由步骤(f)的扩增的DNA编码的肽与新鲜的毛发样品接触，并且重复步骤(b)-(f)—次或多次。5.权利要求l的方法，其中重复步骤(d)—次或多次。6.权利要求l的方法，其中在毛发调理剂基质中提供DNA联合的肽的组合文库，并且与毛发样品接触，以形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10%。7.权利要求l的方法，其中在毛发调理剂基质中提供DNA联合的肽的组合文库，并且与毛发样品接触，以形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10%，并且其中任选省略步骤(d)和(e)。8.权利要求1的方法，其中通过选自噬菌体展示、细菌展示和酵母展示的方法制备DNA联合的肽的组合文库。9.权利要求l的方法，其中在接触毛发样品之前或同时，使DNA联合的肽的组合文库任选与非靶接触，以除去结合于非靶的肽。10.权利要求l的方法，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约20%。11.权利要求l的方法，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约50%。12.权利要求l的方法，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约75%。13.权利要求l的方法，其中毛发调理剂基质是未稀释的。14.权利要求2的方法，其中洗脱剂选自酸、碱、盐溶液、水、乙二醇、二嚙烷、疏氰酸盐、胍和脲。15.a)提供DNA联合的肽的组合文库；b)使(a)的文库与毛发样品接触，其中毛发与DNA联合的肽复合，形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液；c)从反应溶液分离(b)的DNA联合的肽-毛发复合物；d)使(c)的分离的DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触，形成调理溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10%;e)从调理溶液分离(d)的DNA联合的肽-毛发复合物；f)扩增编码(e)的DNA联合的肽-毛发复合物中的肽部分的DNA;和其中鉴定出抗调理剂的毛发结合肽。''''16.抗毛发调理剂的毛发结合肽，选自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNQ:5和SEQIDNO:12。17.二嵌段的、基于肽的毛发有益试剂，其具有通式结构(HCPnOn-BA,其中a)HCP是抗毛发调理剂的毛发结合肽；b)BA是有益试剂；c)m的范围是l-约100;并且d)n的范围是1-约50,000。18.三嵌段的、基于肽的毛发有益试剂，其具有通式结构[(HCPx-S)m]n-BA,其中a)HCP是抗毛发调理剂的毛发结合肽；b)BA是有益试剂；c)S是间隔基；d)x的范围是l-约10;e)m的范围是1-约100;并且f)n的范围是1-约50,000。19.权利要求17的二嵌段的、基于肽的有益试剂，其中所述有益试剂是毛发调理剂。20.权利要求18的三嵌段的、基于肽的有益试剂，其中所述有益试剂是毛发调理剂。21.权利要求17的二嵌段的、基于肽的有益试剂，其中所述有益试剂是着色剂。22.权利要求18的三嵌段的、基于肽的有益试剂，其中所述有益试剂是着色剂。23.权利要求17-22的任一项的基于肽的有益试剂，其中所述抗a)提供DNA联合的肽的组合文库；b)使(a)的文库与毛发样品接触，其中毛发与DNA联合的肽复合，形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液；c)从反应溶液分离(b)的DNA联合的肽-毛发复合物；d)使(c)的分离的DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触，形成调理溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10%;e)从调理溶液分离(d)的DNA联合的肽-毛发复合物；f)扩增编码(e)的DNA联合的肽-毛发复合物中的肽部分的DNA;和g)对(f)的扩增的编码抗毛发调理剂的毛发结合肽的DNA进行测序，其中鉴定出抗调理剂的毛发结合肽。24.权利要求17-22的任一项的基于肽的有益试剂，其中抗毛发调理剂的毛发结合肽的长度是约7个氨基酸-约25个氨基酸。25.权利要求17-22的任一项的基于肽的有益试剂，其中抗毛发调理剂的毛发结合肽的长度是约12个氨基酸-约20个氨基酸。26.权利要求17-22的任一项的基于肽的有益试剂，其中抗毛发调理剂的毛发结合肽进一步包含至少一个位于肽的至少一个末端的半胱氨酸残基，所述末端选自a)N末端；和b)C末端。27.权利要求17-22的任一项的基于肽的有益试剂，其中抗毛发调理剂的毛发结合肽进一步包含至少一个位于肽的至少一个末端的赖氨酸残基，所述末端选自a)N末端；和b)C末端。28.权利要求17-22的任一项的基于肽的有益试剂，其中所述抗毛发调理剂的毛发结合肽具有选自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:12的氨基酸序列。29.权利要求19或20的基于肽的有益试剂，其中所述毛发调理剂选自辛胺、硬脂胺、二十二醇、乙烯基封端的硅氧烷、乙烯基封端的硅酮、乙烯基封端的曱基乙烯基硅氧烷、乙烯基封端的曱基乙烯基硅酮、羟基封端的硅氧烷、羟基封端的硅酮、氨基修饰的硅酮衍生物、[(氨乙基)氨基]丙基羟基二甲基硅氧烷、[(氨乙基)氨基]丙基羟基二曱基硅酮、a-十三烷基-co-羟基-聚(氧基-1,2-乙烷二基)、氨基封端的二曱基硅酮和纳米颗粒。30.权利要求21或22的基于肽的有益试剂，其中所述着色剂选自D&CYellow1、D&CYellow3、HCYellow6、HCYellow8、D&CBlue1、HCBluel、HCBrown2、HCRed5、2-硝基对苯二胺、N,N-羟乙基-2-硝基-苯二胺、4-硝基-吲咮、氧化铁、二氧化钛、炭黑、碳纳米管、金属纳米颗粒、半导体纳米颗粒和有色微球。31.权利要求30的基于肽的有益试剂，其中所述有色微球包含选自下组的材料聚苯乙烯、聚曱基丙烯酸曱酯、聚乙烯基曱苯、苯乙烯/丁二烯共聚物和胶乳，并且微球具有约10纳米至约2微米的直径。32.权利要求18、20或22的基于肽的有益试剂，其中所述间隔基选自乙醇胺、乙二醇、链长为6个碳原子的聚乙烯、具有3-6个重复单元的聚乙二醇、苯氧乙醇、丙醇酰胺、丁二醇、丁二醇酰胺、丙基苯基、乙基烷基链、丙基烷基链、己基烷基链、留醇基烷基链、十六烷基烷基链和椋榈酰基烷基链。33.权利要求18、20或22的基于肽的有益试剂，其中所述间隔基是包含氨基酸的肽，所述氨基酸选自脯氨酸、赖氨酸、甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸及其混合物。34.权利要求18、20或22的基于肽的有益试剂，其中所述间隔基是包含氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列选自SEQIDNO:6、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14和SEQIDNO:15。35.毛发护理产品组合物，包含有效量的权利要求17或18的基于肽的有益试剂。36.毛发着色产品组合物，包含有效量的权利要求21或22的基于肽的有益试剂。37.化妆产品组合物，包含有效量的权利要求21或22的基于肽的有益试齐'J。38.毛发着色产品组合物，包含有效量的权利要求19或20的基于肽的有益试剂。39.毛发调理产品组合物，包含有效量的权利要求19或20的基于肽的有益试剂。40.在毛发上形成基于肽的调理剂的保护层的方法，包括将权利要求39的组合物施用于毛发，使得形成所述保护层。41.使毛发着色的方法，包括将权利要求38的组合物施用于毛发，持续足够导致毛发着色的时间。42.使眉毛或睫毛着色的方法，包括将权利要求37的组合物施用于眉毛或睫毛。43.使毛发、眉毛或睫毛着色的方法，包括以下步骤a)提供包含选自下组的毛发着色剂的毛发着色组合物i)(HCPm)n-C;和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中1)HCP是抗毛发调理剂的毛发结合肽；2)C是着色剂；3)n的范围是l-约50,000;4)S是间隔基；5)m的范围是l-约100;并且6)x的范围是l-约10;并且其中抗毛发调理剂的毛发结合肽是通过包含以下步骤的方法选择的A)提供DNA联合的肽的组合文库；B)使(A)的文库与毛发样品接触，其中毛发与DNA联合的肽复合，形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液；C)从反应溶液分离(B)的DNA联合的肽-毛发复合物；D)使(C)的分离的DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触，形成调理溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10%;E)从调理溶液分离(D)的DNA联合的肽-毛发复合物；F)扩增编码(E)的DNA联合的肽-毛发复合物中的肽部分的DNA;和G)对(F)的扩增的编码抗毛发调理剂的毛发结合肽的DNA进行测序，其中鉴定出抗调理剂的毛发结合肽；和b)将(a)的毛发着色组合物施用于毛发、眉毛或睫毛，持续足以使毛发着色剂结合于毛发、眉毛或睫毛的一段时间。44.在毛发上形成基于肽的调理剂的保护层的方法，包括以下步骤a)提供包含选自下组的毛发调理剂的毛发护理组合物i)(HCPm)n-HCA;和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中1)HCP是抗毛发调理剂的毛发结合肽；2)HCA是毛发调理剂；3)n的范围是l-约50,000;4)S是间隔基；5)m的范围是l-约100;并且6)x的范围是l-约10;并且其中抗毛发调理剂的毛发结合肽是通过包含以下步骤的方法选择的A)提供DNA联合的肽的组合文库；B)使(A)的文库与毛发样品接触，其中毛发与DNA联合的肽复合，形成包含DNA联合的肽-毛发复合物的反应溶液；C)从反应溶液分离(B)的DNA联合的肽-毛发复合物；D)使(C)的分离的DNA联合的肽-毛发复合物与毛发调理剂基质接触，形成调理溶液，其中毛发调理剂基质的浓度是完全强度浓度的至少约10%;E)从调理溶液分离(D)的DNA联合的肽-毛发复合物；F)扩增编码(E)的DNA联合的肽-毛发复合物中的肽部分的DNA;和G)对(F)的扩增的编码抗调理剂的毛发结合肽的DNA进行测序，其中鉴定出抗调理剂的毛发结合肽；和b)将(a)的毛发护理组合物施用于毛发，使得形成所述保护层。全文摘要描述了一种鉴定抗毛发调理剂的毛发结合肽的方法。这种抗毛发调理剂的毛发结合肽与毛发调理剂基质中的毛发强结合并且在其中稳定。描述了基于抗毛发调理剂的毛发结合肽的基于肽的有益试剂，如毛发调理剂和着色剂。基于肽的毛发调理剂和毛发着色剂由直接或通过任选的间隔基与毛发调理剂或着色剂偶联的抗毛发调理剂的毛发结合肽组成。还描述了包含这些基于肽的毛发调理剂和着色剂的毛发护理和毛发着色产品组合物。文档编号G01N33/53GK101563608SQ200680014955公开日2009年10月21日申请日期2006年2月28日优先权日2005年3月1日发明者H·王,J·P·奥布赖恩,Y·吴申请人:纳幕尔杜邦公司