专利名称：一种用hplc法分析雷尼酸锶原料及其制剂的方法
—种用HPLC法分析雷尼醴锶厣料及其制荆的方法
魷领域
本发明公开了一种HPLC方法，尤其是一种雷尼酸锶原料及其制剂的分析方法。
背紫技术
雷尼酸锶是预防骨质疏松，防止脚裸或其它关节骨折的药物，其结构式为
<image>image see original document page 3</image>化学名为3-噻吩乙酸，5-双(羧甲基)氨基]-2羧基4银基酸锶盐。在合成 该化合物的过程当中，有几歩重要的中间体可能会由于去除不完全而影响药物的 纯度和质量，这几个中间体即通常药物质量控制中所说的有关物质。对于雷尼酸 锶的合成主要控制的有关物质有三个，分别是中间体l (3-氧代戊二酸二乙酯), 中间体2 (5-氨基4氰基-3 (2-甲氧基-2-氣代乙基)-2-噻吩甲酸乙難)和中间体 3 (5-[双(2-甲氧基-2-氧代乙基)贫萄斗氰基-3- (2-甲氧基-2-氧代&基)-2-噻 吩甲酸乙酯)，它们的结构式分别为
中间体l <image>image see original document page 3</image>中间体2 <image>image see original document page 3</image>中间体3<image>image see original document page 3</image>
对于合成雷尼酸锶中引入的有关物质,不论是在原料药还是制剂中都是需要 进行质量控制的。因此，实现雷尼酸锶及其有关物质的分离在雷尼酸锶的合成和 制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。
经反复试验发现，用以季铵盆为键合相的强阴离子交换柱(SAX (250 ,x46 mm)),采用ZJf— (0.04咖1/L磷酸二级钠，磷酸调pH3.0) =20 :８０
为流动相，可以将雷尼酸锶及其有关物质进行有效分离，从而可以准确控制雷尼 酸锶原料药及制剂的质量。本发明的方法能简便、快速、准确地分析雷尼酸锶的 纯度和含量并能有效的控制其有关物质。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分析分离雷尼酸锶及其有关物质的寓效液相色 谱方法，从而保证雷尼酸银的纯度，实现其原料药及制剂的质量控制。
本发明所述的用髙效液相色谱法分析雷尼酸锶的纯度以及分离其有关物质
的方法，是采用以季铵盐为键合相的强阴离子交换柱(SAX(250nmix4.6min)), 采用乙腈—(0.04咖1/L磷酸二氢钠，磷酸调pH3.0) -20 : 80为流动相。
上述所说的离子交换色谱柱选自以季铵盐为键合相的强阴离子交换柱(SAX (250mmx4.6mm))。
本发明的流动相中有机相选自下列化合物乙腈、甲醇、&醇。
本发明的方法，有机相一缓冲液的体积比为30 - 70 10 :卯。
上述所说的流动相中缓冲液的pH=2.5 4。
本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现
(1) 取雷尼酸锶样品及各中间体适量，用流动相溶解样品，配制成含雷尼酸 锶及中间体约0.2mg/hil的混合样品溶液。
(2) 设置流动相流速为1.0mL/min,检测波长为237nm,柱温为室温。
(3) 取(1)的样品溶液20 iiL注入液相色谱仪，完成雷尼酸锶及其有关物质 的分离与分析。
其中
高效液相色谱仪岛津LCMOAT呼，SPD-M10Aip 色谱柱SAX (250mmx4.6min)
流动相&腈一 (0.04moi/L磷酸二氣钠，磷酸调pH3.0) =20 :抑 流速l.OmDMn 检测波长237 nm 柱温室温
进样体积20 HL
本发明采用强鹏离于交换色谱柱SAX (250mmx46mm)，能够有效的分离 雷尼酸镯及其有关物质，准确溯定雷尼黢锶的纯度；本发明解决了雷尼酸锶及其 有关物虜的分离阏题，从而确保了雷尼酸锶原料药及其制剂的貭量可控(结果见
附图
l)。 附圉说明
图l最优选条件的HPLC图，图l中l号峰为中间体l、中间体2和中间 体3, 2号峰雷尼酸键，可以看凼在该条件下雷尼酸锶主峰可以和三个中间体完 全分离开来，且雷尼酸锶主峰在8min左右。
图2苯磺酸柱分离雷尼酸锶有关物质的HPLC图，图2中1号峰为雷尼酸 锶，2号峰为中间体1， 3号峰为中间体2， 4号峰为中间体3，可以看出在该条 件下雷尼酸锶主峰可以和三个中间体完全分离开来，且雷尼酸锶主峰在2 miii左右。
面3流动相比例2 腈一缓冲液=30 : 70的HPLC图，图3中1号峰为中间 体l、中间体2和中间体3， 2号峰为雷尼酸锶，可以看出在该条件下雷尼酸锶 主峰可以和三个中间体完全分离开来，且雷尼酸锶主峰在13mto左右。
图4流动相比例乙腈一缓冲液-10 :卯的HPLC图，图4中1号峰为中间 体l, 2号峰为中间体2和中间体3， 3号峰为雷尼酸锶，可以看出在该条件下雷 尼酸锶主峰可以和三个中间体完全分离开来，且雷尼酸锶主峰在16min左右。
图5离子浓度为0.05mol/L的HPLC图，图5中1号峰为中间体1、中间 体2和中间体3， 2号峰为雷尼酸锶，可以看出在该条件下雷尼酸锶主峰可以和 三个中间体达到基线分离，且雷尼酸锶主峰在6mk左右。
图6 pH-4的HPLC图，图6中i号峰为中间体i、中间体2和中间体3， 2号峰为雷尼酸锶，可以看出在该条件下雷尼截锶可以和三个中间体完全分离开 来，且雷尼酸锶主峰在27min左右。
具体实施方式
-实施例l
仪器与条件
高效液相色谱仪日本岛津LC40A，， SPD-10A，； 色谱fe以苯磺酸为键合相的强阳离子交换柱SCX (250mm>4.6mm); 流动相乙腈—(0.04mol/L磷酸二统钠，磷酸调pH至3.0)-20-80 流速1.0mL/min;
检测波长237鹏； 柱温室温；
进样体积20 L。
实验步骤
分别称取3个中间体与雷尼酸锶各5mg，置于25mL容量瓶中，加流动相 溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及雷尼酸 锶各5迈g,分别置于4个2SmL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀， 作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行髙效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图2，图中l号峰为雷尼酸锶，2号峰为中间体1， 3号峰为 中间体2, 4号峰为中间体3,可以看出在该条件下雷尼酸锶主峰可以和三个中 间体完全分离开来，且雷尼酸锶主峰在2 左右。
实施例2
仪器与条件
高效液相色谱仪曰本岛津LCM0Avp, SPD-10A呼
色谱柱SAX (250mmx4.6mm)强阴离子交换柱
流动相乙腈一(0.04咖亂磷酸二氣钠缓冲液，磷酸调pH至3) =30:
70:
流速1.0mL/min: 检测波长237 nm; 柱温室温s
进样体积20 PL。
实验步骤
分别称取3个中间体与雷尼酸锶各5mg,置于25mL容量瓶中，加流动相 溶解并稀释置刻度，摇勾，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及雷尼酸 锶各5mg，分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀, 作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行离效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图3，图中l号峰为中间体l、中间体2和中间体3， 2号峰 为雷尼酸锶，可以看出在该条件下雷尼酸锶主峰可以和三个中间体完全分离开 来，且雷尼酸锶主峰在l3mk左右。
实鄉3
仪器与条件
离效液相色谱仪日本岛津- LCMOA，， SPD40A，； 色谱柱SAX (250mmx46mm)强阴离子交换柱；
流动相&腈一 (0.04 mol/L磷酸二無钠缓冲液，磷酸调pH至3》-10
卯；
流速LOmL/min: 检测波长237, 柱温室温； 进样体积20 liL。 实验步骤
分别称取3个中间体与雷尼酸锶各5 mg，置于25 mL容量瓶中，加流动相 溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及雷尼酸 锶各5mg,分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀, 作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附國4,圉中1号峰为中间体1, 2号峰为中间体2和中间体3, 3号峰为雷尼酸锶,，可以看出在该条件下雷尼酸锶主峰可以和三个中间体完全 分离开来，且雷尼酸锶主峰在l6min左右。
实施倒4
仪器与条件
高效液相色谱仪日本岛津LC-IOAt i, SPD-WA呼；
色谱柱SAX (250咖一.6咖)强阴离子交换柱；
流动相乙腈一 (0.05迈ol/L磷酸二氨钠缓沖液，磷酸调pH至3) =20 :
流速1.0mL/迈in: 检测波长237 nm:
进样体私20 li L。
实验歩骤
分别称取3个中间体与雷尼酸锶各5mg,置于25inL容量瓶中，加流动相
溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及雷尼酸
锶各5mg,分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀, 作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行离效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图5，图中l号峰为中间体l、中间体2和中间体3， 2号峰 为雷尼酸锶，可以看出在该条件下雷尼酸锶主峰可以和三个中间体达到基线分 离，且雷尼酸锶主峰在6min左右。
实施例S
仪器与条件
高效液相色谱仪日本岛津LC-10A甲，SPD-iOAvp: 色谱柱- SAX (250mi^4.6nim)阴离子交换柱
流动相乙腈一 (0.04咖1/L磷酸二煞钠缓冲液，磷酸调pH至4) -20 :
甜；
流速1.0mliniin; 检测波长237 nm: 柱温室温； 进样体积20 ML。 实验步驟
分别称取3个中间体与雷尼酸锶各5 mg,置于25 mL容量瓶中，加流动相 溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及雷尼酸 锶各5mg,分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀, 作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图6，图中l号峰为中间体l、中间体2和中间体3， 2号峰 为雷尼酸锶，可以看出在该条件下雷尼酸锶可以和三个中间体完全分离开来，且 雷尼酸锶主峰在27min左右。
权利要求
1. 一种高效液相色谱法分析分离雷尼酸锶及其合成中引入的有关物质的方法，其特征在于采用离子交换柱，有机相-不同pH的缓冲液为流动相。
2. 根据权利要求1所述的分析分离方法，其特征在于选择以季胺盐为键合相的强阴离子交换柱(SAX (250nunx4.6mm))和以苯磺酸为键合相的强阳离子 交换柱(SCX (250mmx4.6mm))进行分析分离。
3. 根据权利要求2所述的分析分离方法，其特征在于选用以季铵盐为键合相的 强阴离子交换柱(SAX (250mmx4.6mm))。
4. 根据权利要求1所述的分析分离方法，其特征在于所述有机相选自乙腈、甲 醇或乙醇，优选乙腈。
5. 根据权利要求1所述的分析分离方法，有机相一缓冲液的体积比为5545 5 : 95,优选30 : 70 i0 :卯，最优选20 : 80。
6. 根据权利要求1所述的分析分离方法，其特征在于所述的流动相中包含的缓 冲液选自磷酸二氢钠缓冲液。
7. 根据权利要求6所述的分析分离方法，其特征在于所述的磷酸二氨钠缓冲液 的浓度为0.03迈o亂 0.1 mol/L,优选0.03 mol/L~0.05 mol/L，最优选0.04 mol/L。
8. 根据权利要求1所述的分析分离方法，流动相中缓冲液的pH选则范围为2.5 6,优选pH2.5 4,最雌pH3。
9. 根据权利要求1所述的分析分离方法，其特征在于包括以下几个歩骤(1) 取雷尼酸锶样品及各中间体适量，用流动相溶解样品，配制成每1 mL 含雷尼酸锶及各中间体0.05 1 mg的样品溶液；(2) 设置流动相流速为0.4 l,2mymii1,检测波长为230 245鹏，最佳检 测波长为237nm;(3)取(l)的样品溶液2-50nL注入液相色谱仪，完成雷尼酸锶及其它杂质的 分析与分离。
10. 根据权利要求9所述的分析分离方法，流动相的流速优选为1,0 mL/min。
全文摘要
本发明公开了一种用HPLC法分析雷尼酸锶原料及其制剂的方法。采用此方法可以很好的将雷尼酸锶及其合成过程中引入的有关物质进行有效分离，从而控制雷尼酸锶的质量，准确测定雷尼酸锶原料药及其制剂的含量，指示雷尼酸锶及其制剂的稳定性。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。
文档编号G01N30/00GK101206208SQ200610165388
公开日2008年6月25日 申请日期2006年12月19日 优先权日2006年12月19日
发明者杨 胡 申请人:北京德众万全药物技术开发有限公司