前列地尔乳剂的测定方法

专利名称：：前列地尔乳剂的测定方法
技术领域：
：本发明涉及药物分析
技术领域：
，具体地说是一种前列地尔乳剂的测定方法，用于测定前列地尔乳剂中的有效成分前列地尔及杂质前列腺素Aj的含量。技术背景前列地尔，又称前列腺素E！(PGEO,英文名Alprostadi(ProstaglandinED，其化学名称为11a，15(S)-双羟基-9-羰基-13-反前列烯酸。分子式C2QH3405，其结构式为前列地尔具有广泛的药理活性能舒张血管，改善末梢循环；抑制血小板聚集，防止血栓素A2形成；保护血小板，抑制动脉粥样硬化斑块的形成、能扩张外周和冠脉血管及免疫复合物的作用；保护缺血性心肌，縮小梗塞面积；保护消化道黏膜细胞；抑制胃肠道分泌及刺激肠和子宫平滑肌；舒张海绵体平滑肌，加速阴茎动脉血流等。可以治疗①急性心肌梗塞、血栓性疾病，如血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化症、雷诺氏综合征、视网膜闭塞症等；冠心病、克山病引起的心绞痛、心力衰竭。②阴茎海绵体注射本品适用于治疗神经性、血管性、心因性或混合性勃起功能障碍。阴茎海绵体注射本品适用于辅助其他方法诊断勃起功能障碍等。前列地尔乳剂是将PGEr溶解于大豆油中，在磷脂类乳化剂作用下，在高压均质机中乳化而成，市售的产品有前列地尔注射液(商品名凯时，北京泰德制药有限公司生产)。如加入冻干支持剂，冷冻干燥，则可制成前列地尔冻干乳剂，使用时只需按需要量加水，水合振荡后复原为前列地尔乳剂，参见中国专利CN1195990A、CN1562041A。控制前列地尔(PGEi)及其有关物质前列腺素Ai(PGA》的含量是前列地尔乳剂质量标准的重要组成部分。在现有的分析技术和仪器设备条件下，能够准确检测上述物质已不是大问题，如高书文等采用紫外分光光度法测定注射用前列腺素^的含量(中国药品标准，2005,1(6):11-12)，中国药典2005版采用高效液相色谱法测定注射用前列地尔中PGE,的含量和PG^的限度。但对于前列地尔乳剂而言，其有效成分PGE,的含量较低，仅为5ug/ml或5Pg/支，且由于在制备过程中加入了较多的植物油及乳化剂，特别是前列地尔冻干乳剂，还加入了冻干支持剂，因此破乳困难，对测定干扰较大，在进行含量测定时必须对样品进行前处理。由此可见，进行前列地尔乳剂PGE,和PGA,含量测定的关键就在于解决破乳的问题。在国家食品药品监督管理局公布的前列地尔注射液的国家药品标准WSr(X-041)2002Z中，破乳的方法是采用四氢呋喃和磷酸溶液，再通过固相萃取来富集乳剂中的PGE1Q由于PGE,在酸性条件下不稳定，且固相萃取过程复杂、繁琐，数据重现性差，测量误差较大，在5(TC减压蒸干溶剂也易破坏PGE,，使其转化成PGA,，造成样品的真实含量偏低而PG^含量偏大。在该标准中，PGA,的含量规定为不得过3.0"g/ml。国家药品审评中心专家认为，按每支标示量5.0pg/ml理解，限度为60.0%，但通常杂质的限度不是这样计算的。一般按标准记载，供试样品量为2.5pg/ml，PGA,对照品为2.(Hig/ml，按目前标准限度3.0ng/ml计算，PGAi相当于120M，样品全转化为PGA,都合格，因此该方法和限度无法控制产品质量(国家药品审评中心2005年IO月21日发布的电子刊物，网址http:〃www.cde.org.cn/page/framelimit.cbsResName=dzkw)。此夕卜，固相萃取成本高，检验周期长，不利于生产过程控制(中间体检测)。中国专利CN1823786A采用冷冻干燥法破乳，过程复杂，时间太长，需20—50小时，能耗较大，成本较高，用于样品的含量测定很困难，可操作性不强，也不能对生产过程进行控制。且一般检测单位没有冷冻干燥设备，不能采用此法测定，实用性不强。因此，目前急需研究开发一种操作简便、破乳完全、能有效控制产品质量的前列地尔乳剂的测定方法。
发明内容本发明的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种操作简便易行、破乳完全、能有效控制产品质量的前列地尔乳剂的测定方法。本发明通过以下技术方案予以实施前列地尔乳剂先用含醇的有机混合溶剂进行破乳，再用高效液相色谱测定样品中PGE,和PGA,的含量。本发明所述含醇有机混合溶剂(破乳剂)，为两种有机溶剂的混合物。第一种为醇类，可以为单一的醇，也可以是一种以上醇的混合物，优选乙醇、异丙醇。第二种为烷烃、卤代烷烃或四氢呋喃。垸烃选自正己烷、庚烷、辛烷，卤代垸烃选自二氯甲垸、三氯甲垸。第一种和第二种有机溶剂的体积比为1:0.1一l:1。更优选的是异丙醇和正己烷按h0.30.5的体积比的混合物。如样品为前列地尔冻干乳剂，则先加水溶解使复乳，再用有机混合溶剂破乳。由于前列地尔乳剂中有效成分PGEi的含量较低，采用柱后衍生可大大提高检测灵敏度，便于准确测定PGEi和PGA,的含量。在本发明的高效液相色谱测定中，采用十八烷基键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液(pH4.9)—乙腈(60:40)为流动相；柱后反应液为氢氧化钾溶液，柱后反应管为聚四氟乙烯管反应管温度60°C;检测波长为278nm。按外标法以峰面积计算样品中PGE,和PGA,的含量。具体技术方案如下供试品溶液的制备前列地尔乳剂精密量取前列地尔乳剂，置量瓶中，加含醇有机混合溶剂，振荡、超声处理后，加有机混合溶剂中相应的醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。前列地尔冻干乳剂取前列地尔冻千乳剂，精密称定，置量瓶中，加水溶解使复乳，加含醇有机混合溶剂，振荡、超声处理后，加有机混合溶剂中相应的醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。对照品溶液的制备前列地尔对照品溶液的制备取前列地尔对照品，精密称定，置量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，制成每lml含前列地尔O.lmg的溶液，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液lml，置100ml量瓶中，加破乳所用醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。前列腺素A对照品溶液的制备取前列腺素At对照品(以五氧化二磷为干燥剂，室温减压干燥1小时)精密称定，置棕色量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，制成每lml含前列腺素A,0.05mg的溶液，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液lml，置100ml量瓶中，加破乳所用醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录VD)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合胶为填充剂，以0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH4.9)—乙腈(60:40)为流动相；柱后反应液为1.Omol/L氢氧化钾溶液，柱后反应管为聚四氟乙烯管；反应管温度60。C;检测波长为278nm。前列地尔峰与前列腺素Al峰的分离度应符合要求。前列腺素Al含量测定精密量取前列腺素Al对照品溶液和供试品溶液各20ul注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算。前列地尔含量测定取供试品溶液和对照品溶液各20"1注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。本发明采用常用的有机溶剂的混合液体进行破乳，然后再用高效液相色谱进行检测，方法简单，操作简便易行，破乳完全。经方法学验证，本测定方法回收率高，重现性好。在测定过程中，PGE,不易转化为PGAp试验结果表明，采用本方法测定的样品，PGA,的含量很低，低于10%，说明本方法克服了现有技术的缺陷，能真实反映样品中PGE,和PGA,的含量，有效控制产品的质量。与现有技术相比，本方法更经济、快捷、准确，易于操作，既可用于用于前列地尔乳剂的质量检测，也可对生产过程中的中间体进行检测，便于生产过程的控制。图l:前列地尔对照品HPLC图谱图2:前列腺素^对照品HPLC图谱图3:色谱条件及系统适用性试验HPLC图谱图4:实施例120060301批按本发明的方法测定的HPLC图谱图5:实施例120060301批按WSr(X-041)2002Z测定的HPLC图谱具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步描述，但不以任何形式限制本发明。实施例1前列地尔冻干乳剂PGE1和PGA1含量测定1、仪器、药品及试剂AgilentHP1100液相色谱仪，Pickering公司PCX5200柱后衍生器。前列地尔冻干乳剂参照中国专利CN1195990A制备；前列地尔对照品，台湾永光化学工业股份有限公司提供，含量为99.5%;前列腺素Al对照品为USP对照品。乙腈、异丙醇、正己烷为B&J的色谱纯；磷酸二氢钾、氢氧化钾、无水乙醇为分析醇，重庆东方红试剂厂生产。2、色谱条件及系统适用性试验色谱柱为AgilentXBD-C18(250X4.0mm,5um)色谱柱，以0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.9)(取磷酸二氢钾2.72g，加水使溶解，制成1000ml，摇匀，即得)一乙腈(60:40)为流动相；柱后反应液为1.Omol/L氢氧化钾溶液，柱后反应管为聚四氟乙烯管(V=2.0ml):反应管温度60。C;检测波长为278nm。前列地尔与前列腺素Al分离度为5.6，理论板数以前列地尔峰计算为5200。3、溶液的制备(1)供试品溶液的制备取本品适量(约相当于前列地尔10yg)，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解使复乳，加lml破乳剂(异丙醇正己烷=1:0.5)，振荡2分钟，超声处理2分钟，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。(2)前列地尔对照品溶液的制备取前列地尔对照品约5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液lml，置100ml量瓶中，加异丙醇稀释刻度，摇匀，作为对照品溶液(前列地尔浓度约为1.0ug/ml)。(3)前列腺素Al对照品溶液的制备取前列腺素Al对照品(以五氧化二磷为干燥剂，室温减压干燥l小时)约2.5mg，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液lml，置100ml量瓶中，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(前列腺素Al浓度为0.5ug/ml)。4、测定(1)前列腺素Al含量测定精密量取前列腺素Al对照品溶液和供试品溶液各20u1注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算。(2)前列地尔含量测定取供试品溶液和对照品溶液各20U1注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。5、结果表1前列地尔注射液中PGE1和PGA1含量测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>以上结果可以看出，同一产品，采用本发明的方法测定，PGA,的含量很低，而按WSr(X-041)2002Z测定则PGA,的含量较高，相应的PGE!的含量下降。说明本发明的测定方法能不会导致PGEi转化为PGA"真实地反应了样品中PGEi和PGAi的含量。实施例2前列地尔注射液PG^和PG、含量测定供试品溶液的制备精密量取本品适量(约相当于前列地尔10Pg)，置10ml量瓶中，加lml破乳剂(异丙醇正己烷=1:0.3)，振荡2分钟，超声处理2分钟，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。其余同实施例1。测定结果PGE!的含量为110.2%，PGA!的含量为5.8%。实施例3前列地尔冻干乳剂PG^和PGAi含量测定破乳剂为乙醇正己垸=1:0.1，其余同实施例l。测定结果PGEi的含量为105.6%，PGAi的含量为2.iy。。实施例4前列地尔冻干乳剂PGEi和PGM含量测定破乳剂为异丙醇三氯甲垸=1:1，其余同实施例l。测定结果PGEi的含量为104.3%，PGA,的含量为2.0%。实施例5前列地尔注射液PGEi和PG^含量测定破乳剂为异丙醇正庚烷=1:0.3，其余同实施例2。测定结果PGE!的含量为109.8%，PGAi的含量为5.9%。实施例6前列地尔注射液PGE1和PGA1含量测定破乳剂为甲醇异丙醇混合溶液(甲醇异丙醇=0.2:1):正己垸=1:0.8，其余同实施例2。测定结果PGE,的含量为110.5%,PGA!的含量为5.2%。实施例7前列地尔注射液PGE1和PGA1含量测定破乳剂为乙醇四氢呋喃=1:0.5，其余同实施例2。测定结果PGE1的含量为108.5%，PGA1的含量为6.0%。权利要求1.一种前列地尔乳剂的测定方法，其特征在于先用含醇的有机混合溶剂破乳，再用高效液相色谱法测定前列地尔和前列腺素A1的含量。2.按照权利要求1的测定方法，其中所述的含醇有机混合溶剂为两种有机溶剂的混合物，第一种为醇类或醇类的混合物，第二种为烷烃、卤代烷烃或四氢呋喃，第一种和第二种有机溶剂的体积比为1:0.11。3.按照权利要求2的测定方法，其中所述的醇类选自乙醇、异丙醇。4.按照权利要求2的测定方法，其中所述的烷烃选自正己烷、庚烷和辛烷。5.按照权利要求2的测定方法，其中所述的卤代烷烃选自二氯甲烷和三氯甲垸。6.按照权利要求1或2的测定方法，其中所述含醇有机混合溶剂为异丙醇和正己烷按l:0.30.5的体积比的混合物。7.按照权利要求1的测定方法，其特征在于破乳的方法为精密量取前列地尔乳剂，置量瓶中，加含醇有机混合溶剂，振荡、超声处理后，加有机混合溶剂中相应的醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。8.按照权利要求1的测定方法，其特征在于破乳的方法为取前列地尔冻干乳剂，精密称定，置量瓶中，加水溶解使复乳，加含醇有机混合溶剂，振荡、超声处理后，加有机混合溶剂中相应的醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。9.按照权利要求1的测定方法，其特征在于所述的高效液相色谱法采用十八垸基键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液(pH4.9)—乙腈(60:40)为流动相；柱后反应液为氢氧化钾溶液，柱后反应管为聚四氟乙烯管反应管温度60°C;检测波长为278nm;按外标法以峰面积计算样品中前列地尔和前列腺素A,的含量。全文摘要本发明公开了一种前列地尔乳剂的测定方法，用于测定前列地尔乳剂中的有效成分前列地尔及杂质前列腺素A₁的含量。本发明先用含醇的有机混合溶剂进行破乳，再用高效液相色谱法测定前列地尔和前列腺素A₁的含量。该方法操作简便易行、破乳完全、能有效控制产品质量，与现有技术相比，本方法更经济、快捷、准确，易于操作，既可用于前列地尔乳剂的质量检测，也可用于生产过程中的中间体检测。文档编号G01N30/00GK101158665SQ20061009530公开日2008年4月9日申请日期2006年12月18日优先权日2006年12月18日发明者谭俊杰申请人:重庆药友制药有限责任公司