专利名称：有机肥腐熟度的花粉培养检测方法
技术领域：
本发明涉及一种有机肥腐熟度的生物检测方法，特别是涉及一种有机肥腐熟度的花粉培养检测方法。
背景技术：
有机肥料是一种主要来源于天然植物和/或动物，施于土壤以提供植物营养为其主要功能的物质。这种肥料需由堆肥材料经过发酵处理而达到一定的腐熟度后才能应用于植物，否则其内部的有害物质会对植物的生长产生负面影响，因而腐熟度的检测程序在堆肥化过程中是不可缺少的重要环节。目前的有机肥腐熟度检测方法主要分为物理、化学、仪器及生物方法，其中物理、化学和仪器检测方法一般只能对有机肥料的某一指标进行定性或定量分析，并且堆肥材料的适用种类受到限制，而且费力、费时、成本高。而生物检测方法相对来讲则具有综合检测结果较为可靠且适用堆肥材料范围广等优点。目前国外的有机肥生产厂家使用较多的有机肥腐熟度生物检测方法是种子发芽试验法。虽然这种试验法对于畜禽废弃物、城市垃圾、污泥以及残枝落叶等堆制的有机肥腐熟度检测都适用，而且其是利用植物本身来对有机肥生产过程中的各种植物生长阻害物质进行综合检测，因而检测结果较为可靠。但是，这种有机肥腐熟度的种子发芽检测方法存在下列问题一是受种子饱满程度及个体大小的影响，不同种子的发芽快慢及根的伸长存在一定的差别；二是其对盐分含量高的有机肥腐熟度的判定比较困难，而且个别盐分含量高的有机肥料对于腐熟度的检测结果会有影响；三是检测所需的时间较长，通常需要3～7天，即3天测发芽率，7天测根长指数。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种适用范围广、操作方法简单快捷、结果准确且成本低的有机肥腐熟度的花粉培养检测方法。
为了达到上述目的，本发明提供的有机肥腐熟度的花粉培养检测方法是按照下列步骤顺序进行(1)分别采集刚刚开的茄子和山茶花的花粉，使其通过100目筛进行筛选，然后用硫酸纸包裹后与干燥剂一起放入塑料瓶中，于-15℃下保存备用；(2)将有机肥样品和蒸馏水以1∶2的重量比混合均匀，并在60℃的水浴中振荡30分钟，然后用离心机分离30分钟，取上清液作为有机肥浸提液；(3)分别将琼脂、蔗糖、硼、蒸馏水和有机肥浸提液按照0.8g∶10g∶16mg/l∶82.9g∶6.3g及0.8g∶10g∶10mg/l∶82.9g∶6.3g的比例进行混合，然后用0.1N的HCl或NaOH分别将上述两混合物的pH值调至6.0和7.0，并在低于60℃的温度下加热使其熔化，吸取20ml熔化后的培养基液并注入直径12cm的培养皿中，冷却后而分别制成添加有有机肥浸提液的茄子花粉培养基及山茶花花粉培养基；(4)使茄子花粉或山茶花花粉均匀、稀薄地分布在硫酸纸上，将盖玻片的断面沿撒有上述花粉的硫酸纸表面轻轻移动，以使盖玻片的断面少量、均匀地沾上花粉，然后将沾有茄子或山茶花花粉的盖玻片断面分别在上述已冷却的茄子花粉培养基及山茶花花粉培养基表面上轻轻沾一下而在相应的培养基表面上植上一条花粉线；(5)将上述植有花粉线的培养基置于25℃的温度下培养20小时，以使花粉管从培养基的表面沿与植入的花粉线呈直角的方向向两边生长；(6)以相同条件下不添加有机肥浸提液的培养基上的空白花粉管长度作为基准，如果上述花粉管长度小于空白花粉管长度，表明该有机肥尚未完全腐熟，而若上述花粉管长度大于或等于空白花粉管长度，则表明该有机肥已经腐熟。
所述的离心机的转速为6000转/分。
本发明提供的有机肥腐熟度的花粉培养检测方法是通过对茄子或山茶花花粉的培养而使其发芽、生长成花粉管，然后以花粉管的伸长长度与空白花粉管的伸长长度进行对比来判断有机肥的腐熟度，其不仅适用于所有生产有机肥的材料，而且只需20～24小时便可获得检测结果，因而操作方法简单快捷，因此特别适合废弃物的工厂化处理。另外，花粉的个体差变动系数小，并且不受饱满程度、个体大小差别的影响。特别是花粉管的生理特性与根毛十分相似，与种子发芽试验法相比其对作物的发芽、生长有害物质更为敏感，因而测试结果准确可靠，从而能够确保有机肥的安全使用。
具体实施例方式
下面结合具体实施例详细说明本发明提供的有机肥腐熟度的花粉培养检测方法。
实施例1首先将300g由鸡粪、牛粪和锯末组成，并在通气式堆腐发酵槽中第1次发酵7天，然后堆放6个月以进行第2次发酵的有机肥样品和600g蒸馏水混合均匀，并在60℃的水浴中振荡30分钟，然后用离心机在6000转/分的转速下分离30分钟，从中取出6.3g上清液作为该有机肥浸提液，然后加入0.8g琼脂、10g蔗糖、16mg/l硼和82.9g蒸馏水并混合均匀。然后根据混合物的pH值而用0.1N的HCl或NaOH将其调整到6.0，并在低于60℃的温度下加热使其熔化，吸取20ml熔化后的培养基液并注入直径12cm的培养皿中，冷却后而制成添加有有机肥浸提液的茄子花粉培养基。将采集的刚刚开的、通过100目筛进行筛选并在-15℃下保存的茄子花粉均匀、稀薄地分布在硫酸纸上，将盖玻片的断面沿撒有上述茄子花粉的硫酸纸表面轻轻移动，以使盖玻片的断面少量、均匀地沾上花粉，然后将沾有茄子花粉的盖玻片断面在上述已冷却的茄子花粉培养基表面上轻轻沾一下而在该表面上植上一条花粉线；将上述植有花粉线的培养基置于25℃的温度下培养20小时，由于花粉管生长具有趋向性，所以花粉管会从培养基的表面沿与植入的花粉线呈直角的方向向两边生长，培养后花粉管的长度为3.76mm；同时在相同条件下不添加有机肥浸提液的培养基上重复上述试验过程，并以生长出的花粉管作为空白花粉管，此时该空白花粉管的长度为3.08mm。由于添加有机肥浸提液的培养基上的花粉管长度大于空白花粉管长度，表明该有机肥已经腐熟，因而可以安全施用。
实施例2将实施例1中的有机肥样品变成由鸡粪和粉碎的树皮组成，处理方式及发酵时间相同的原料，并且使用的培养基及培养过程相同，培养后花粉管的长度为4.20mm，而空白花粉管的长度为3.08mm，表明该有机肥已经腐熟，因而可以安全施用。
实施例3将实施例1中的有机肥样品变成经过6个月堆腐的造纸污泥，并且使用的培养基及培养过程相同，培养后花粉管的长度为3.32mm，而空白花粉管的长度为2.89mm，表明该有机肥已经腐熟，因而可以安全施用。
实施例4将实施例1中的有机肥样品变成经过3个月堆腐发酵的稻草，并且使用的培养基及培养过程相同，培养后花粉管的长度为3.43mm，而空白花粉管的长度为3.12mm，表明该有机肥已经腐熟，因而可以安全施用。
实施例5将实施例1中的有机肥样品变成从养猪场的储粪池中采取的鲜猪粪，并且使用的培养基及培养过程相同，培养后花粉管的长度为2.43mm，而空白花粉管的长度为3.08mm。由于添加该有机肥浸提液的培养基上的花粉管长度小于空白花粉管长度，表明该有机肥尚未完全腐熟，若施用会对作物的出苗和生长产生阻害。
实施例6将实施例1中的有机肥样品分别变成经6天堆腐发酵的猪粪、鸡粪和牛粪，并且使用的培养基及培养过程相同，培养后花粉管的长度分别为1.17、1.45和2.40mm，而空白花粉管的长度则分别为2.67、2.42和2.73mm。由于上述添加有机肥浸提液的培养基上的花粉管长度均分别小于相对应的空白花粉管长度，表明这些有机肥尚未完全腐熟，若施用会对作物的出苗和生长产生阻害。
实施例7首先将300g由鸡粪、牛粪和锯末组成，并在通气式堆腐发酵槽中第1次发酵7天，然后堆放6个月以进行第2次发酵的有机肥样品和600g蒸馏水混合均匀，并在60℃的水浴中振荡30分钟，然后用离心机在6000转/分的转速下分离30分钟，从中取出6.3g上清液作为该有机肥浸提液，然后加入0.8g琼脂、10g蔗糖、10mg/l硼和82.9g蒸馏水并混合均匀。然后根据混合物的pH值而用0.1N的HCl或NaOH将其调整到7.0，并在低于60℃的温度下加热使其熔化，吸取20ml熔化后的培养基液并注入直径12cm的培养皿中，冷却后而制成添加有有机肥浸提液的山茶花花粉培养基。将采集的刚刚开的、通过100目筛进行筛选并在-15℃下保存的山茶花花粉均匀、稀薄地分布在硫酸纸上，将盖玻片的断面沿撒有上述山茶花花粉的硫酸纸表面轻轻移动，以使盖玻片的断面少量、均匀地沾上花粉，然后将沾有山茶花花粉的盖玻片断面在上述已冷却的山茶花花粉培养基表面上轻轻沾一下而在该表面上植上一条花粉线；将上述植有花粉线的培养基置于25℃的温度下培养20小时，由于花粉管生长具有趋向性，所以花粉管会从培养基的表面沿与植入的花粉线呈直角的方向向两边生长，培养后花粉管的长度为2.60mm；同时在相同条件下不添加有机肥浸提液的培养基上重复上述试验过程，并以生长出的花粉管作为空白花粉管，此时该空白花粉管的长度为2.56mm。由于添加该有机肥浸提液的培养基上的花粉管长度大于空白花粉管长度，表明该有机肥已经腐熟，因而可以安全施用。
实施例8将实施例7中的有机肥样品变成由鸡粪和粉碎的树皮组成，处理方式及发酵时间相同的原料，并且使用的培养基及培养过程相同，培养后花粉管的长度为2.62mm，而空白花粉管的长度为2.56mm，表明该有机肥已经腐熟，因而可以安全施用。
实施例9将实施例7中的有机肥样品变成经过6个月堆腐的造纸污泥，并且使用的培养基及培养过程相同，培养后花粉管的长度为2.82mm，而空白花粉管的长度为2.63mm，表明该有机肥已经腐熟，因而可以安全施用。
实施例10将实施例7中的有机肥样品变成经过3个月堆腐发酵的稻草，并且使用的培养基及培养过程相同，培养后花粉管的长度为2.91mm，而空白花粉管的长度为2.68mm，表明该有机肥已经腐熟，因而可以安全施用。
实施例11将实施例7中的有机肥样品变成从养猪场的储粪池中采取的鲜猪粪，并且使用的培养基及培养过程相同，培养后花粉管的长度为1.42mm，而空白花粉管的长度为2.44mm。由于添加该有机肥浸提液的培养基上的花粉管长度小于空白花粉管长度，表明该有机肥尚未完全腐熟，若施用会对作物的出苗和生长产生阻害。
实施例12将实施例7中的有机肥样品分别变成经6天堆腐发酵的猪粪、鸡粪和牛粪，并且使用的培养基及培养过程相同，培养后花粉管的长度分别为2.23、2.00和2.06mm，而空白花粉管的长度则分别为2.70、2.52和2.55mm。由于上述添加有机肥浸提液的培养基上的花粉管长度均分别小于相对应的空白花粉管长度，表明这些有机肥尚未完全腐熟，若施用会对作物的出苗和生长产生阻害。
权利要求
1.一种有机肥腐熟度的花粉培养检测方法，其特征在于所述的有机肥腐熟度的花粉培养检测方法是按照下列步骤顺序进行(1)分别采集刚刚开的茄子及山茶花的花粉，使其通过100目筛进行筛选，然后用硫酸纸包裹后与干燥剂一起放入塑料瓶中，于-15℃下保存备用；(2)将有机肥样品和蒸馏水以1∶2的重量比混合均匀，并在60℃的水浴中振荡30分钟，然后用离心机分离30分钟，取上清液作为有机肥浸提液；(3)分别将琼脂、蔗糖、硼、蒸馏水和有机肥浸提液按照0.8g∶10g∶16mg/l∶82.9g∶6.3g及0.8g∶10g∶10mg/l∶82.9g∶6.3g的比例进行混合，然后用0.1N的HCl或NaOH分别将上述两混合物的pH值调至6.0和7.0，并在低于60℃的温度下加热使其熔化，吸取20ml熔化后的培养基液并注入直径12cm的培养皿中，冷却后而分别制成添加有有机肥浸提液的茄子花粉培养基及山茶花花粉培养基；(4)使茄子花粉或山茶花花粉均匀、稀薄地分布在硫酸纸上，将盖玻片的断面沿撒有上述花粉的硫酸纸表面轻轻移动，以使盖玻片的断面少量、均匀地沾上花粉，然后将沾有茄子或山茶花花粉的盖玻片断面分别在上述已冷却的茄子花粉培养基及山茶花花粉培养基表面上轻轻沾一下而在相应的培养基表面上植上一条花粉线；(5)将上述植有花粉线的培养基置于25℃的温度下培养20小时，以使花粉管从培养基的表面沿与植入的花粉线呈直角的方向向两边生长；(6)以相同条件下不添加有机肥浸提液的培养基上的空白花粉管长度作为基准，如果上述花粉管长度小于空白花粉管长度，表明该有机肥尚未完全腐熟，而若上述花粉管长度大于或等于空白花粉管长度，则表明该有机肥已经腐熟。
2.根据权利要求1所述的有机肥腐熟度的花粉培养检测方法，其特征在于所述的离心机的转速为6000转/分。
全文摘要
一种有机肥腐熟度的花粉培养检测方法。其包括花粉的采集、有机肥浸提液和培养基的制备、花粉的种植、培养及比较。本发明的有机肥腐熟度的花粉培养检测方法是通过对茄子或山茶花花粉的培养而使其发芽、生长成花粉管，然后以花粉管与空白花粉管的伸长长度进行对比来判断有机肥腐熟度，不仅适用于所有生产有机肥的材料，而且只需20～24小时便可获得检测结果，因而操作方法简单快捷，特别适合废弃物的工厂化处理。另外，花粉的个体差变动系数小，并且不受饱满程度、个体大小差别的影响。特别是花粉管的生理特性与根毛十分相似，与种子发芽试验法相比其对作物的发芽、生长有害物质更为敏感，因而测试结果准确可靠，从而能确保有机肥的安全使用。
文档编号G01N1/28GK1831534SQ20061001335
公开日2006年9月13日 申请日期2006年3月23日 优先权日2006年3月23日
发明者任顺荣, 邵玉翠 申请人:天津市农业资源与环境研究所