专利名称：一种对生物活性物质进行蛋白芯片检测的方法
技术领域：
本发明涉及生物医学研究及临床应用领域，具体涉及一种对生物活性物质进行蛋白芯片检测的方法。
背景技术：
研究发现，当人体感染疾病时，血清或体液中含有与疾病有关的病原微生物相关指标、细胞因子，如特异性IgG/IgM抗体、抗原及细胞因子。通过酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法可以测定其含量，有助于对疾病的早期诊断、鉴别、发现。目前用于临床实验室检查方法有病原微生物的分离鉴定、免疫学诊断、基因学诊断，操作复杂，检测周期长，DNA扩增的高效性导致假阳性高，免疫学方法包括补体结合法(CF)、间接免疫荧光法(IFA)、免疫粘附法(IAHA)、酶联免疫法(ELISA)等，但这些方法都不太理想，存在的主要的问题是1、操作麻烦一般只能检测一种指标，因此需要重复操作，增加工作量；2、检测周期长要检测多种病原微生物及细胞因子，就需要进行大量重复工作；3、成本高需要花费大量的人力、物力、财力；4、检测结果不准确由于实验条件不统一，批间差大，因此检测结果不够准确，限制了临床应用。
发明内容
本发明的目的是要提供一种对生物活性物质进行蛋白芯片检测的方法，以克服现有技术存在的操作麻烦、检测周期长、成本高和检测结果不准确的问题。
为了实现上述目的，本发明采取的技术方案是一种对生物活性物质进行蛋白芯片检测的方法，依次包括下述步骤①用生物活性物质包被制成蛋白芯片；②用洗涤液将蛋白芯片润湿；③加入待测样品将使蛋白芯片中的活性物质进行特异性结合，再将蛋白芯片用洗涤液进行洗涤；④用免疫金试剂对蛋白芯片进行二次结合反应，再用洗涤液洗涤；⑤用蛋白芯片阅读仪对蛋白芯片进行分析、检测通过检测蛋白芯片的发光强度与对照值，得出相应的待测抗原或抗体的含量。
上述方案中，①用抗原包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗涤液，使蛋白芯片表面润湿，将蛋白芯片与待测样品混合进行抗原和抗体的特异性结合，再将蛋白芯片用洗涤液进行洗涤；在第④步中二次结合反应是指加入经胶体金标记过的相应的抗体，如抗人IgG/IgM抗体进行反应。该方案适用于检测血清或体液中各种特异性抗体。
上述方案中，①用抗体包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗涤液，使蛋白芯片表面润湿，将蛋白芯片与待测样品混合进行抗原和抗体的特异性结合，再将蛋白芯片用洗涤液进行洗涤；在第④步中二次结合反应是指加入经胶体金标记过的相应的抗体。该方案适用于检测血清或体液中各种抗原。
上述方案中，①用细胞因子单克隆抗体抗体包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗涤液，使蛋白芯片表面润湿，将蛋白芯片与待测样品混合进行抗原和抗体的特异性结合，再将蛋白芯片用洗涤液进行洗涤；在第④步中二次结合反应是指加入经胶体金标记过的相应的配对单克隆抗体。该方案适用于检测细胞因子。
上述方案中，第⑤步用蛋白芯片阅读仪检测，蛋白芯片的各种参数通过磁卡输入方式输入。这样大大提高芯片阅读速度、提高了蛋白芯片的准确性。避免手工输入造成的时间浪费和差错。
与现有技术相比，本发明的优点是1、该检测方法简便快速由于利用蛋白芯片上的数十种、数百种抗原或特异性抗体对被测样品进行检测，其操作步骤仅需两步即可完成，在5-10分钟内即可给出检测结果；
2、敏感性高可以检测出待测样品中极其微量的抗原或抗体的含量；3、特异性强因为是特异性的抗原和抗体反应，因而具有很高的特异性；4、检测结果准确，可靠性好各项试验流程易于标准化，一次完成检测，试验误差小，重复性好，可有效保证检测结果的准确可靠；5、成本低、减轻患者负担试剂消耗少，设备的重复使用减少，有效降低检测成本；因此可广泛应用于临床检测及进行研究。
6、适用范围广使用本方法可用于人血清或体液中各种疾病相关的特异性抗原或抗体含量的检测，如各种病原微生物抗原或抗体、各种细胞因子、各种细胞的可溶性表面标记、各种可溶性受体分子等。
具体实施例方式发明人给出了以下的实施例，但本发明不限于这些实施例。
实施例1、使用蛋白芯片进行优生优育病毒十项的检测①准备孔径为0.45μm的硝酸纤维素膜，同时准备弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹I型和单纯疱疹II型病毒抗原，然后进行点样包被，用抗人IgG/IgM标记胶体金，即形成可检测优生优育病毒十项的蛋白芯片。
②将上述蛋白芯片去掉包装，逐滴加洗涤液6滴润湿；③加入200μl待测血清进行抗原抗体反应，再逐滴加入洗涤液8滴；④逐滴加入胶体金标记的抗人IgG/IgM8滴，再逐滴加入洗涤液6滴；⑤用蛋白芯片阅读仪对蛋白芯片进行分析、检测。
实施例2、使用蛋白芯片进行心肌梗塞标志物的检测①准备孔径为0.45μm的硝酸纤维素膜，同时准备8种不同特异性的单克隆抗体，然后点样包被，再用这些配对单克隆抗体分别标记胶体金，即形成可检测心肌梗塞标志物蛋白芯片。
②将这些蛋白芯片去掉包装，逐滴加洗涤液6滴润湿；③加入200μl待测血清进行抗原抗体反应，再逐滴加入洗涤液8滴，④逐滴加入单克隆抗体分别标记的胶体金8滴，再逐滴加入洗涤液6滴，⑤蛋白芯片阅读仪对蛋白芯片进行分析、检测。
实施例3、使用蛋白芯片进行生殖道感染标志物的检测①准备孔径为0.45μm的硝酸纤维素膜，同时准备4种不同特异性的羊抗或兔抗多克隆抗体，然后点样包被，再用这些抗体分别标记胶体金，即形成可检测心肌梗塞标志物蛋白芯片。
②将这些蛋白芯片去掉包装，逐滴加洗涤液6滴润湿；③加入经处理过的标本进行抗原抗体反应，再逐滴加入洗涤液8滴，④逐滴加入抗体分别标记的胶体金8滴，再逐滴加入洗涤液6滴，⑤用蛋白芯片阅读仪检测，蛋白芯片的各种参数通过磁卡输入方式，这样大大提高芯片阅读速度、提高了蛋白芯片的准确性。
权利要求
1.一种对生物活性物质进行蛋白芯片检测的方法，其特征在于依次包括下述步骤，①用生物活性物质包被制成蛋白芯片；②用洗涤液将蛋白芯片润湿；③加入待测样品将使蛋白芯片中的活性物质进行特异性结合，再将蛋白芯片用洗涤液进行洗涤；④用免疫金试剂对蛋白芯片进行二次结合反应，再用洗涤液洗涤；⑤用蛋白芯片阅读仪对蛋白芯片进行分析、检测通过检测蛋白芯片的发光强度与对照值，得出相应的待测抗原或抗体的含量。
2.如权利要求1所述的一种对生物活性物质进行蛋白芯片检测的方法，其特征在于所述步骤①用抗原包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗涤液，使蛋白芯片表面润湿，将蛋白芯片与待测样品混合进行抗原和抗体的特异性结合，再将蛋白芯片用洗涤液进行洗涤；在第④步中二次结合反应是指加入经胶体金标记过的相应的抗体，如抗人IgG/IgM抗体进行反应。
3.如权利要求1所述的一种对生物活性物质进行蛋白芯片检测的方法，其特征在于所述步骤①用抗体包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗涤液，使蛋白芯片表面润湿，将蛋白芯片与待测样品混合进行抗原和抗体的特异性结合，再将蛋白芯片用洗涤液进行洗涤；在第④步中二次结合反应是指加入经胶体金标记过的相应的抗体。
4.如权利要求1所述的一种对生物活性物质进行蛋白芯片检测的方法，其特征在于所述步骤①用细胞因子单克隆抗体抗体包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗涤液，使蛋白芯片表面润湿，将蛋白芯片与待测样品混合进行抗原和抗体的特异性结合，再将蛋白芯片用洗涤液进行洗涤；在第④步中二次结合反应是指加入经胶体金标记过的相应的配对单克隆抗体。
5.如权利要求2或3或4所述的一种对生物活性物质进行蛋白芯片检测的方法，其特征在于所述第⑤步用蛋白芯片阅读仪检测，蛋白芯片的各种参数通过磁卡输入方式输入。
全文摘要
本发明涉及生物医学研究及临床应用领域，具体涉及一种对生物活性物质进行蛋白芯片检测的方法。本发明的目的是要克服现有技术存在的操作麻烦、检测周期长、成本高和检测结果不准确的问题。为了实现上述目的，本发明采取的技术方案是一种对生物活性物质进行蛋白芯片检测的方法，依次包括下述步骤①用生物活性物质包被制成蛋白芯片；②用洗涤液将蛋白芯片润湿；③加入待测样品将使蛋白芯片中的活性物质进行特异性结合，再将蛋白芯片用洗涤液进行洗涤；④用免疫金试剂对蛋白芯片进行二次结合反应，再用洗涤液洗涤；⑤用蛋白芯片阅读仪对蛋白芯片进行分析、检测通过检测蛋白芯片的发光强度与对照值，得出相应的待测抗原或抗体的含量。
文档编号G01N21/64GK1996018SQ20051002278
公开日2007年7月11日 申请日期2005年12月31日 优先权日2005年12月31日
发明者马秦荣, 陶东, 任跃军, 李治国 申请人:西安联尔科技有限公司