专利名称：一种静脉注射用的粉针及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗上呼吸道感染、肺炎，抗上呼吸道病毒的粉针。具体地说是以中草药为原料制备的粉针，同时涉及该药物的制备方法。
背景技术：
在我国，咽炎、气管炎等上呼吸道感染、肺炎、呼吸道病毒感染是一类常见病多发病。不但本身常迁延不愈，而且可以引起多种并发症，危害人类健康。随着工业社会的发展，空气被不同程度地污染，使得鼻炎、咽炎等上呼吸道感染和肺炎类疾病的发病率增高。现代医学认为本病虽主要致病菌为链球菌，但细菌与病毒混合感染者并不少见，由此引发的急性淋巴炎、风湿热、肾炎等症给患者带来了巨大痛苦。因此将该病消灭在初期是十分必要的。
目前治疗本病的首选药物为抗生素，但青霉素类药物有严重的过敏反应，使对青霉素有过敏反应的患者无法使用，且该药对细菌和病毒混合感染者疗效差、耐药性强；中药方面应用较广泛的是双黄连输液、粉针剂和各种银黄制剂有口服液、含化片、冲剂等剂型。双黄连输液、粉针剂疗效较确切但是其有效成分也不太明确，目前已有多起过敏反应(《中国中药杂志》1994年754页、《现代应用药学》1994年第十一卷第一期25页)、剧烈呕吐(《武警医学》1995年第六卷第二期110页)、血尿(《现代应用药学》1995年12月第12卷第六期42页)等不良反应的报道。大量研究表明其不良反应主要由连翘苷引起。中国专利1398626和1424084公开了静脉注射用银黄粉针剂及其制备方法和注射用银黄粉针剂及其制备方法。它们和其它银黄输液一样采用常规提取精制方法金银花提取以绿原酸为指标，而忽略了异绿原酸等有效成分的作用，且绿原酸含量太低，大量杂质和无效成分对用药的安全性、稳定性造成很大威胁；黄芩的提取过程以黄芩苷为指标，有的虽然纯度较高但忽略了汉黄芩苷等有效成分的作用，反而影响了药品的疗效。常规制剂以提取物入药，分别以绿原酸、黄芩苷为指标，有效成分含量低，提取物中成分不明确，给药品的安全性、稳定性留下隐患。
因此，提供一种疗效可靠，毒副作用低的药物迫切需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗上呼吸道感染粉针，它从各有效组分入手，较全面研究了制剂中各组分及含量范围和比例，有效成分含量高，杂质和无效成分含量小，用药安全、稳定，疗效可靠。除用于治疗上呼吸道感染外，对肺炎、抗上呼吸道病毒感染也有较好疗效。本发明的另一个目的是提供该药物的制备方法。
为实现以上目的，本发明采取以下技术方案本发明所提供的粉针主要有效成分由以下成分组成绿原酸10-250mg/g、黄芩苷16-400mg/g，不含连翘苷、栀子苷。
如上所述主要活性成分及浓度优选为绿原酸50-175mg/g、黄芩苷100-300mg/g。
其主要活性成分及浓度优化为绿原酸100-140mg/g、黄芩苷170-230mg/g。
如上所述粉针还包含以下重量百分比的活性成分异绿原酸3-80mg/g、汉黄芩苷2-40mg/g，其浓度优化为异绿原酸8-50mg/g、汉黄芩苷4-20mg/g。
为保证冻干工艺的顺利进行，增加已干产品的复水效应，药液中我们在添加了添加剂如氯化钠、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、PVP等，优选为氯化钠。添加剂的浓度在4％-25％之间，优选为10％-15％，葡糖糖的浓度优选为5％-10％。
本发明药物粉针有效成分测定方法为绿原酸的测定方法为色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为10∶90的乙腈-0.4％磷酸溶液为流动相检测波长为327nm对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备 取本品，研细，取约0.1g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇100ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量。用50％的甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取滤液适量加入棕色量瓶即得供试样品溶液；测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；黄芩甙的测定方法色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基键合硅胶为填充材料以比例47∶53∶0.2的甲醇-水-磷酸为流动相检测波长280nm对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的黄芩苷适量，置50ml量瓶中，加甲醇溶解，摇匀，制成每1ml含60μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本品，研细，取约0.1g精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇50ml振摇，溶解，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)，滤过，即得；测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl；本发明药物粉针的制备方法是(1)绿原酸、异绿原酸的制备工艺取金银花，4-20倍量40％-95％乙醇，回流提取1-5次，每次0.5-3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至浸膏状，放入真空干燥箱中干燥，干燥的金银花提取物，溶于相当于其重量1-20倍量体积的水中，水溶液用等量氯仿萃取1-5次，氯仿层弃去(回收氯仿)，水相再用0.5-3倍量异戊醇萃取1-5次，合并异戊醇层，减压浓缩，真空干燥，取适量溶于40-90％乙醇溶液适量，拌入200克硅胶，水浴挥干(60℃)，作为柱层析分离样品，称取200-300目硅胶2000克，以氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)为溶剂，湿法装柱，干法上样，用氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)洗脱，等体积收集，每份500ml，梯度洗脱，每500ml加甲醇10ml，TLC追踪检查，合并相同部分，再经小柱反复层析及结合重结晶技术，得到化合物绿原酸，化合物异绿原酸。
(2)黄芩苷、汉黄芩苷的制备工艺黄芩粗粉，加2-10倍量水，回流提取1-5次，每次0.5-3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加入0.5-4mol/LHCl溶液适量调PH＝0.5～4.0，保温0.5-3小时，放置8-24小时，滤过，沉淀加4-20倍量水，调PH＝5.0～10.0，再加入0.5-2倍乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用HCl溶液调PH＝1.0～5.5，保温0.5-3小时，放置8-24小时，滤过，沉淀用乙醇洗至PH＝5.0～10.0，真空干燥，取上述干燥物，拌以硅胶(200-300目)，硅胶湿法装柱进行层析分离，氯仿-甲醇(90∶1～1∶1)为洗脱剂，薄层检查洗脱液，等量收集，每份500ml，合并相同部分后分为2大部分一(10∶1～90∶1)，B(10∶1～1∶1)，从一部分在氯仿-甲醇(10∶1)段的洗脱液中析出针状结晶，进一步重结晶得到化合物2；B部分经过硅胶柱层析(200-300目)，葡聚糖凝胶(LH-20)柱层析分离得到化合物1；化合物1，黄芩苷；化合物2，汉黄芩苷，即得。
(3)该制剂的制备工艺为将投料量的绿原酸、黄芩苷等溶于适量的注射用水中，使浓度为绿原酸0.1％-25mg/ml、黄芩苷1-40mg/ml，加等渗调节剂，控制药液的PH值。用注射用水补至适量，调节药液的PH值，使成品的PH值在4.0～9.0的范围内，质检，灌装、冷冻干燥，包装，即得。
本绿原酸、异绿原酸的制备工艺中所使用的药材为任意含绿原酸、异绿原酸的药材如金银花、杜仲等，优选为金银花。
本发明还区别与以往制剂体现在以下方面①提高药物有效成分的纯度，有增加制剂稳定性、减少毒性、减少服用量、便于制备现代化制剂等重要作用。在以往的制剂和工艺中金银花多以绿原酸为指标，而忽略了异绿原酸等其它成分，绿原酸的纯度也较低多在20％以下，本发明金银花以总有机酸和绿原酸为指标，提高药物疗效的同时提高了总有机酸的纯度。传统工艺黄芩苷的纯度达90％以上，却忽略了汉黄芩苷等有效成分的作用，本发明以黄芩总黄酮和黄芩苷为指标，提高了药物疗效。
②药材提取物中各组分的组成与比例对制剂的稳定性、疗效等有密切联系，我们通过研究分出金银花提取物中绿原酸、异绿原酸等组分，并对各组分的含量比例作界定；从黄芩总黄酮中分出了黄芩苷、汉黄芩苷、等组分并通过指纹图谱界定了各组分的含量。同时对药物粉针中绿原酸、异绿原酸、黄芩苷、汉黄芩苷等组分做了含量界定，提高了药品质量标准，保证了制剂的安全性、稳定性和有效性。
③注射液适宜的PH值能减少药液对肌体的不良反应、增加粉针的稳定性、加速药物的吸收，所以注射液必须有适当的PH值。黄芩苷等黄酮类成分易溶于碱液，酸性条件下易结晶析出；绿原酸等有机酸类在甲醇、乙醇、70％乙醇、丙酮中易溶，在乙酸乙酯、水中溶解。我们通过大量试验证明本发明pH值范围在4.0～9.0之间当pH值小于5.0时黄芩苷等黄酮类成分有结晶析出；绿原酸为咖啡酸奎尼酸酯，因而既能被酸也能被碱催化水解，当pH值大于8.0时绿原酸等有机酸类成分很不稳定，易发生颜色变化。
④由绿原酸、黄芩苷制成的很多制剂作为一种治疗咽炎、气管炎等上呼吸道感染的常用药物为广大医务工作者和患者接受。我单位经过仔细研究和长期试验发现本发明还有治疗肺炎、抗呼吸道病毒作用，疗效确切，值得推广应用。绿原酸和异绿原酸对多种致病菌和病毒有较强的抑制和杀灭作用。绿原酸对急性咽喉炎症及皮肤病有明显疗效，临床上用于治疗急性细菌性感染疾病及放、化疗所致的白细胞减少症，绿原酸还有降压利胆作用。研究表明上述有机酸组合物对多种致病菌，如痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、肺炎球菌等有一定抑制作用。黄芩苷体外对乙肝病毒(HBV)的三种抗原均有显著的抑制作用；黄芩苷对正常体温大鼠无致低温作用，而对发热大鼠有显著的解热作用，并呈一定量效关系；黄芩苷、汉黄芩苷等组合物对过氧化脂质的生成具有明显的抑制作用，对流感病毒PRs有一定抑制作用，对豚鼠被动皮肤过敏反应及离体小肠、气管对抗原所致的过敏性收缩反应均有抑制作用，能抑制肥大细胞释放组织胺，还能抑制环加氧酶和脂加氧酶的活性，阻断前列腺素及白三烯的合成，从而发挥抗炎、抗过敏作用。
另外，本发明虽然比双黄连粉针少了连翘苷，但疗效并没有下降，反而大多都有了提高。
本发明，疗效好、毒副作用少。为表明本发明药物的治疗作用和毒副作用，我们做了大量的实验研究，下面实验例用于进一步说明本发明。
本发明粉针对2，4-二硝基苯酚致大鼠发热的解热作用一、试验目的本发明粉针为北京福瑞康正医药技术研究所研制的7类中药新药，本试验旨在观察本发明粉针对化学刺激物-2，4-二硝基苯酚所致大鼠发热模型的解热作用，以评价该药的解热疗效。
二、试验材料1.受试药物本发明粉针，由北京福瑞康正医药技术研究所提供。临床拟用剂量1-2次/日，0.4-0.8g/次，临床最大用量为X生药/Mg)。
2.试剂氯化钠注射剂，500ml/瓶，由北京双鹤药业股份有限公司生产，批号030415322；2，4-二硝基苯酚，规格25g，由中国军事医学科学院提供，批号860419。
3.动物及饲料Wistar大鼠，102只，雄性，购进后进行3天预饲养，用于试验时体重150～200g(体重差异小于30g)，购自军事医学科学院动物中心，动物合格证号SCXK-(军)2002-001。饲养条件群养5只/笼，标准颗粒鼠饲料喂养，自由饮水，室温18～22℃，湿度50％～70％。实验设施合格证医动字第01-2049号。
4.器材DT-1TB数字式电子体温计，购自上海华辰医用仪表有限公司。
三、试验方法(一)试验前的准备1.供试用大鼠处于同一温度的环境预饲养3天，实验室的温度在17～25℃，在试验全部过程中，室温变化不得大于3℃，避免噪音干扰。
2.试验期间，每次抓取大鼠的动作要轻柔，体温计插入大鼠肛门的深度和时间相同，每只大鼠固定体温计，固定检测人员；3.体温预测试验前3日用电子体温计测正常体温，每日2次，连续3日；4.当日使用的大鼠，正常体温应在36.6～38.3℃的范围内。每隔30分钟测量体温一次，测量三次的平均值作为大鼠的正常体温。
5.2，4-二硝基苯酚溶液的配制精密称取2，4-二硝基苯酚300mg，置于80ml左右生理盐水中，滴加5mol/LNaOH溶液，不断搅拌，待药液澄明变为亮黄色，再加入氯化钠注射剂至100ml备用。
(二)试验方法1.试验药物本发明高剂量组本发明中剂量组本发明低剂量组双黄连对照组600mg/10ml/kg；模型组10ml生理盐水/kg；正常对照组10ml生理盐水/kg。
2.方法102只大鼠称重后随机分为本发明粉针低剂量组、中剂量组和高剂量组、模型组、双黄连对照组和正常对照组6组。各组按上述给药量静脉给药0.5小时后，每鼠于背部皮下注射化学致热物——2，4-二硝基苯酚33mg/11ml/kg，正常动物对照组以相同体积的生理盐水来代替2，4-二硝基苯酚。致热后每30分钟测量体温1次，连续测定3h。
四、试验结果在本试验条件下，皮下注射化学致热物-2，4-二硝基苯酚，大鼠的体温开始升高，在1h时出现发热高峰，3h仍未恢复至基础体温；本发明粉针各个比例及双黄连非常明显的降低2，4-二硝基苯酚致发热大鼠的体温(p＜0.001)(结果详见表1)表1 本发明粉针对2，4-二硝基苯酚所致大鼠发热的影响正常 给予2，4-二硝基苯酚后体温升高值/℃组别 体重/kg体温/℃ 30min 60min90min 120min150min 180min正常组 37.49±0.4037.49±0.400.13±0.290.03±0.290.00±0.300.07±0.360.01±0.39-0.03±0.33模型组 37.42±0.292.53±0.323.17±0.482.73±0.392.18±0.431.88±0.67 1.55±0.58高剂量组37.56±0.331.91±0.541.79±0.431.50±0.581.34±0.601.04±0.55 0.73±0.42中剂量组37.60±0.281.35±0.591.51±0.671.12±0.780.74±0.680.54±0.52 0.43±0.52低剂量组37.55±0.351.54±0.701.95±0.651.72±0.641.35±0.621.02±0.55 0.90±0.43双黄连 37.59±0.321.22±0.551.93±0.781.64±0.561.30±0.530.82±0.62 0.55±0.38五、试验结论在本试验条件下，本发明粉针原料各比例均可非常明显的降低2，4-二硝基苯酚所致发热大鼠的体温；中剂量组的效果最好，优于双黄连及其他比例组。
本发明粉针对细菌内毒素致兔发热的解热作用一、试验目的本发明粉针由北京福瑞康正医药技术研究所提供，本试验旨在观察本发明粉针对细菌内毒素所致兔发热的解热作用，以评价该药的解热疗效。
二、试验材料1.受试药物本发明粉针，由北京福瑞康正医药技术研究所提供。临床拟用剂量1-2次/日，0.4-0.8g/次，临床最大用量为Xg生药/Mml。
2.试剂氯化钠注射剂，500ml/瓶，由北京双鹤药业股份有限公司生产，批号030415322；细菌内毒素由中国药品生物制品研究所提供，效价每支含9000EU，批号981。
3.动物及饲料大耳白兔54只，雄性，由北京科宇动物养殖中心提供，合格证号SCXK京2002-005，购进后进行1周预饲养，用于试验时体重1.6～2.2kg。饲养条件金属兔笼单笼饲养，自由饮水，给予标准颗粒兔饲料，室温18～22℃，湿度50％～70％。实验设施合格证医动字第01-2049号。
4.器材DT-1TB数字式电子体温计，购自上海华辰医用仪表有限公司。
三、试验方法(一)试验前的准备1.供试用家兔处于同一温度的环境预饲养1周，实验室的温度在17～25℃，在试验全部过程中，室温变化不得大于3℃，避免噪音干扰；2.试验期间，每次抓取兔的动作要轻柔，体温计插入各兔肛门的深度和时间相同，每只兔子固定体温计，固定检测人员；3.体温预测试验前2日用电子体温计测正常体温，每日2次，连续2日；4.当日使用的兔，正常体温应在38.0～39.6℃的范围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃。每隔30分钟测量体温一次，测量两次，两次体温之差不得超过0.2℃，以此二次体温的平均值作为该兔的正常体温。
(二)试验方法1.试验药物本发明高剂量组本发明中剂量组本发明低剂量组
双黄连对照组600mg/5ml/kg；模型组5ml生理盐水/kg；正常对照组5ml生理盐水/kg。
2.方法54只大耳白兔试验前每隔0.5h测量一次体温，测量2次，2次体温的平均值作为该兔的正常体温。体温合格的大耳白兔随机分为本发明粉针高剂量组、中剂量组和低剂量组、双黄连组、模型组和正常对照组6组，每组9只，各组耳缘静脉分别给予温浴至38℃的相对应的药液，给药40min时耳缘静脉注射内毒素1200EU/ml/kg，给予内毒素后1h、2h、3h、4h与5h各测量一次肛温。
四、试验结果在本试验条件下，静脉注射内毒素后，兔体温开始升高，在1h与3h时分别出现发热峰的双峰热。5h时仍未恢复至基础体温。给予内毒素1h时，双黄连、本发明粉针低剂量与高剂量对体温的升高有明显的降低作用，且降温效果优于中剂量组，中剂量组的体温升高值有降低的趋势。
给予内毒素2h时，与模型组比较，双黄连、本发明粉针三个给药组对体温的升高有降低作用；本发明粉针高剂量组动物体温比双黄连组有降低的趋势，二者的降温效果优于本发明粉针低剂量与中剂量。
给予内毒素3h，与模型组比较，双黄连、本发明粉针三个给药组对体温的升高有降低作用；本发明粉针高剂量的降温效果优于双黄连、该药低剂量与中剂量。
给予内毒素4h，与模型组比较，双黄连、本发明粉针三个给药组对体温的升高有降低作用；本发明高剂量的降温效果优于本发明粉针低剂量与中剂量，该组体温升高值比双黄连组有降低的趋势。
给予内毒素5h，与模型组比较，双黄连、本发明粉针三个给药组对体温的升高有降低作用本发明粉针中剂量组的效果优于低剂量组。(结果详见表2)表2本发明粉针对内毒素所致兔发热的影响正常 给予内毒素后体温升高值/℃组别 体重/kg体温/℃1h 2h 3h 4h 5h模型组 1.80±0.1539.0±0.37 1.44±0.35 1.64±0.24 1.87±0.15 1.44±0.27 1.12±0.53双黄连 1.77±0.1338.8±0.25 1.09±0.26 0.77±0.10 1.31±0.18 0.84±0.12 0.53±0.23高剂量组1.74±0.1138.8±0.23 1.46±0.19 1.46±0.11 1.76±0.53 1.23±0.52 0.68±0.40中剂量组1.77±0.1138.9±0.32 1.32±0.19 1.15±0.15 1.53±0.20 0.96±0.35 0.29±0.31低剂量组1.77±0.1339.0±0.28 1.33±0.14 1.17±0.28 1.67±0.35 1.59±0.17 0.71±0.24
正常组 1.88±0.2638.8±0.31 -0.04±0.08 -0.03±0.11 -0.02±0.14 -0.08±0.13 -0.08±0.14五、试验结论在本试验条件下，本发明粉针各个组对细菌内毒素所致兔发热均有解热作用中剂量组治疗效果好。
本发明粉针对二甲苯致鼠耳肿胀的抑制作用一、试验目的本发明粉针为北京福瑞康正医药技术研究所研制新药，本试验旨在观察本发明粉针对二甲苯所致小鼠耳肿胀的抑制作用，以评价该药的抗炎疗效。
二、试验材料1.动物及饲养条件KM小鼠，100只，雄性，健康二级，购进后进行3天预饲养，用于试验时体重18～22g，购自军事医学科学院动物中心，动物合格证号SCXK-(军)2002-001。饲养条件群养5只/笼，标准颗粒鼠饲料喂养，自由饮水，室温18～22℃，湿度50％～70％。实验设施合格证医动字第01-2049号。
2.仪器JA5003电子天平HANGPING3.药品及试剂本发明粉针，由北京福瑞康正医药技术研究所提供，临床拟用剂量1-2次/日，0.4-0.8g/次；氯化钠注射剂，500ml/瓶，由北京双鹤药业股份有限公司提供，批号030415322；双黄连粉针剂，600mg/安瓿，由哈药集团中药二厂生产，批号0306225；二甲苯。
三、试验方法1.试验药物本发明高剂量组本发明中剂量组本发明低剂量组双黄连对照组900mg/20ml/kg；模型组20ml生理盐水/kg；2.试验方法雄性KM小鼠100只，按体重随机分为本发明粉针低剂量组、中剂量组与高剂量组、模型组和双黄连对照组5组，每组20只。按上述给药剂量上、下午各静脉给药一次，次日早上给药一次，共给药3次。末次给药30min时于右耳滴50ul二甲苯，左耳不做任何处理，15min后脱臼处死，沿耳廓剪下双耳后用7mm直径打孔器分别在同一部位打下左右两圆耳片后，电子天平称耳片湿重，每鼠用右耳片的重量减去左耳片的重量即为肿胀度，并计算肿胀抑制率。
抑制率＝(模型组肿胀度-用药组肿胀度)/模型组肿胀度×100％四、试验结果本研究发现与模型组比较，双黄连与本发明粉针各组可明显抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀；结果见表3。
表3 本发明粉针对鼠耳肿胀的抑制作用(n＝20)体重/g 肿胀度/g肿胀抑制率％模型组 16.3±6.92 0双黄连组 7.7±6.5552.8本发明低剂量组 8.9±4.2845.4本发明中剂量组 10.7±3.15 34.4本发明高剂量组 12.75.28 22.1五、试验结论在本试验条件下，本发明粉针对二甲苯引起的鼠耳肿胀有抑制作用，且抑制程度与剂量呈反比。
本发明粉针抗呼吸系统病毒作用一、试验目的本发明粉针为北京福瑞康正医药技术研究所研制新药，本试验旨在观察本发明粉针对各病毒株的抑制作用，以评价该药的抗病毒疗效。
二、试验材料1.动物及饲养条件动物昆明种小鼠，雌雄各半，18～20g，4周龄购自军事医学科学院动物中心，动物合格证号SCXK-(军)2002-001。饲养条件群养5只/笼，标准颗粒鼠饲料喂养，自由饮水，室温18～22℃，湿度50％～70％。实验设施合格证医动字第01-2049号。
2.试剂病毒呼吸道合胞病毒(RSV)Long株，源自美国ATCC菌种库，批号990521；腺病毒Ad3V，中国预防医学科学院病毒学研究所保存。甲1型流感病毒(A1V)，鼠肺病毒液由中国预防医学科学院病毒学研究所保存。双黄连粉针剂，600mg/安瓿，由哈药集团中药二厂生产，批号0306225培养基IMDM(美国GIBC产品)；噻唑蓝(MTT)购自华美公司。Eagle′s维持液，由中国预防医学科学院病毒学研究所提供。
3.受试药物本发明粉针，由北京福瑞康正医药技术研究所。
4.仪器仪器酶标测定仪、LBK紫外可见分光光度计均由美国产，LC-9A输液泵，低温离心机，Olympus相差显微镜均为日本岛津公司产品。
三、试验方法1.细胞的筛选与制备所用3种病毒分别接种于VERO、HEP2细胞以测定敏感性，细胞按常规方法传代。同时制成2×10-5/mL细胞悬液，每孔0.1mL，24h后形成单层细胞备用。
2.初筛与分组实验形成单层细胞孔弃去培养液，加入对细胞无毒性浓度的药物作用24h，吸出药液加入病毒液，按一般病毒吸附的时间，均采用37℃吸附1h吸出，加入含药的维持液，置37℃、5％CO2恒温箱培养48～96h，待病毒对照孔病变达+++～++++，细胞对照正常时测结果。将初筛有意义的病毒分4组进行实验，探讨药物的具体作用环节。高剂量感染前24h给药，吸出药液，用Hank′s液洗3遍，加入病毒液。中剂量组感染后给药，先加液置37℃吸附1h洗去病毒加含药维持液。低剂量组药液与病毒同时加入细胞层。IV组药液与病毒混合置37℃、2h后加入细胞层。以上均设正常对照及病毒对照。
3.感染动物模型的建立及给药方案病毒性肺炎模型建立[1]。实验动物随机分为病毒感染模型组、正常对照组、抗病毒不同浓度给药组，阳性对照药比较组，每组10只，均在相同条件下饲养，均为静脉给药，剂量如下本发明粉针及阳性对照药双黄连粉针剂均为320，160，80，40mg/kg。
四、结果利用光镜检查细胞病变(CPE)，结果表明本发明粉针可以不同程度地抑制上述病毒对组织细胞的CPE，见表4。
表4本发明粉针对病毒引起细胞病变抑制作用病毒细胞对照 病毒对照 试验RSV- ++++ -AD3V - ++++ -A1V - ++++ -分组结果在镜下观察CPE基础上，用MTT染色细胞，测定吸光度，以便进一步客观地反映加药与不加药之差别。高剂量实验目的是观察药物能否进入细胞或吸附于细胞表面，以阻止病毒的吸附与穿入。结果表明，本发明粉针此法对RSV，Ad3V，A1V3种病毒有意义(P＜0.05)。中剂量组实验目的是观察药物能否对已进入细胞内的病毒起作用，抑制其生物合成及成熟释放。结果表明，本发明粉针此法对3种病毒有意义(P＜0.05)。III、IV组为药物与病毒在不同条件下作用，观察药物对病毒直接灭活作用，结果表明，本发明粉针对3种病毒均有作用。说明本发明粉针无论是药物与病毒同时加入细胞层或是药物与病毒先作用2h然后加入细胞层，均具有抗病毒效应。对细胞的保护率最高可达96％，见表5。
表5本发明粉针药物对病毒直接灭活作用NO. RSV AD3V A1V PI91.6 84.3 94.1 ＜0.05II 90.1 84.7 94.6 ＜0.05III 88.9 79.2 80.5 ＜0.05IV 66.4 80.2 73.4 ＜0.05组织病理学检查本发明粉针对FM1感染所致的病毒性炎有明显的保护作用，治疗组鼠肺组织结构基正常，病毒对照组鼠肺部有大量病变，药物对组织细胞保护率用下式计算。保护率(％)＝加药孔A值-病毒对照孔A值/细胞对照孔A值×100％。见表6。
表6本发明粉针对FM1感染所致的病毒性肺炎的保护作用NO 比例Index 保护率(％)(x±s)病毒对照组 -1.785±0.312 -正常对照组 -0.910±0.103 -1.401±0.171 30.73API 1.232±0.069 41.421.199±0.062 48.68五、试验结论在本试验条件下，本发明粉针的抗病毒作用不仅在细胞水平上得以证实，即能显著的抑制、延缓细胞病变出现，也表现在整体水平上，即可有效抑制流感病毒等呼吸道病毒性肺炎的发生与发展，有着较好的疗效。关于本发明粉针抗病毒的作用机制，从分组实验结果可以看出，作用是多途径的，不仅有直接灭活病毒的作用，而且对吸附于细胞表面和进入细胞内的病毒也有抑制作用。
本发明粉针热原检查一、试验目的本发明粉针由北京福瑞康正医药技术研究所提供，将一定剂量的药液静脉注入大耳白兔体内，在规定时间内，观察兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
二、试验材料(一).受试药物本发明粉针，由北京福瑞康正医药技术研究所提供。临床拟用剂量1-2次/日，0.4-0.8g/次，临床最大用量为Xg生药/Mml/60kg体重。
(二)仪器与试剂氯化钠注射剂，500ml/瓶，由北京双鹤药业股份有限公司生产，批号030415322；DT-1TB电子体温计，上海华辰医用仪表有限公司生产。
(三)动物及饲料大耳白兔，雄性，由北京科宇动物养殖中心提供，合格证号SCXK京2002-005，购进后进行一周预饲养，用于试验时体重2.3～2.4kg。饲养条件用金属兔笼单笼饲养，自由饮水，给予颗粒兔饲料，湿度50％～70％，温度18～22℃。实验设施合格证医动字第01-2049号。
三、试验方法(一)试验前的准备1.热原检查前供试用兔处于同一温度的环境预饲养，实验室的温度在17～25℃，在试验全部过程中，室温变化不得大于3℃，避免噪音干扰；2.兔在试验前禁食不禁水，操作要轻柔；3.体温计插入各兔肛门的深度和时间相同；4.每隔30分钟测量体温一次，测量二次，二次体温之差不得超过0.2℃，以此二次体温的平均值作为该兔的正常体温；5.当日使用的兔，正常体温应在38.0～39.6℃的范围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃。
(二)动物的挑选挑选的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温一次，测量四次，四次体温之差不得超过0.4℃。
(三)检查法取适用的大耳白兔3只，测定其正常体温后15分钟以内，以无菌操作法自耳缘静脉缓缓注入温热至38℃的本发明粉针，然后每隔30min按前法测量其体温一次，共测六次，以六次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温升高的度数(℃)，如果给药后体温低于正常体温，则体温升高度数以“0”计。
四、结果判断(一)判断复试
1.如3只兔中有1只体温升高0.6℃或0.6℃以上；2.3只兔体温升高均低于0.6℃，但升高的总数达1.4℃或1.4℃以上出现上述情况之一应另取5只兔复试，检查方法同上。
(二)热原检查合格1.初试的3只兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只兔体温升高总数低于1.4℃；2.复试的5只兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的兔数仅有1只，并且初试、复试合并8只兔的体温升高总数为3.5℃或3.5℃以下。
符合上述情况之一均认为供试品的热原检查符合规定。
(三)热原检查不合格1.在初试的3只兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的兔数超过1只；2.在复试的5只兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的兔数超过1只；3.在初试和复试合并8只大耳白兔的体温升高总数超过3.5℃。
出现上述情况之一均认为供试品的热原检查不符合规定。
五、试验结果静脉给予所试本发明粉针，2只家兔体温不升高，1只体温升高0.1℃低于0.6℃，3只体温升高总数(0.1℃)低于1.4℃，结果见表7。
表7本发明粉针热原检查结果体重 给药量 正常体温给药后最高体温升高号数(kg)(mg生药/kg) (℃) 体温(℃) (℃)1 2.4 X 38.5 38.6 0.13 2.3 X 38.9 38.8 05 2.4 X 38.9 38.8 0六、试验结论在本试验条件下，本发明粉针所含热原的限度符合规定。
本发明粉针异常毒性检查一、试验目的将一定剂量的本发明药液静脉注入小鼠体内，在规定时间内，观察小鼠的死亡情况，以判定供试品的异常毒性是否符合规定。
二、试验材料(一)受试药物本发明粉针，由北京福瑞康正医药技术研究所提供。临床拟用剂量1-2次/日，0.2-0.4g/次，临床最大用量为Xg生药/Mml/60kg体重。
(二)动物及饲料5只KM小鼠，雄性，健康二级，购进后进行3天预饲养，用于试验时体重17～20g，购自军事医学科学院动物中心，动物合格证号SCXK-(军)2002-001。饲养条件5只/笼群养，标准饲料喂养，自由饮水，室温18～25℃，湿度50％～70％，光照明暗各12小时，实验设施合格证医动字第01-2049号。全价营养颗粒鼠饲料，由军事医学科学院动物中心研制。
三、试验方法小鼠5只，称重后由静脉注射给药0.5ml/只，正常饲养，48小时内不得死亡，称重。
四、结果判断(一)判断复试5只小鼠中有死亡情况时，应另取体重18～19g的小鼠10只复试，检查方法同上。
(二)异常毒性检查合格1.初试的5只小鼠在48小时内无死亡；2.复试的10只小鼠在48小时内无死亡。
符合上述情况之一均认为供试品的异常毒性检查符合规定。
(三)异常毒性检查不合格初试的5只小鼠在48小时内有死亡；复试的10只小鼠在48小时内有死亡。
符合上述情况认为供试品的异常毒性检查不符合规定。
五、试验结果全部小鼠在给药后48小时内无死亡。
六、试验结论在本试验条件下，本发明粉针异常毒性符合规定。
本发明粉针小鼠急性毒性试验一.试验目的本发明粉针的毒性较低，测不出来半数致死量(LD50)，观察单次静脉和灌胃给予小鼠本发明粉针所产生的急性毒性反应和死亡情况，得出iv和ig给药的最大耐受量，对其安全性进行评价，为临床提供参考。
二.材料(一)受试物1.受试药物本发明粉针，由北京福瑞康正医药技术研究所提供。临床拟用剂量1-2次/日，0.4-0.8g/次，临床最大用量为Dg生药，即Fg生药/60kg体重。
2.试剂蒸馏水，购自中国人民解放军总医院。
(二)动物60只KM小鼠，雌雄各半，健康二级，购进后进行3天预饲养，用于试验时体重18～22g，购自军事医学科学院动物中心，动物合格证号SCXK-(军)2002-001。饲养条件5只/笼群养，标准饲料喂养，自由饮水，室温18～25℃，湿度50％～70％，光照明暗各12小时，实验设施合格证医动字第01-2049号。全价营养颗粒鼠饲料，由军事医学科学院动物中心研制。
三.试验方法(一)给药量的确定所用本发明粉针的浓度Ag生药/ml，根据小鼠单次静脉(iv)给药最大容量为aml/bg，确定小鼠iv的剂量为vg生药/kg；小鼠单次灌胃(ig)给药最大容量为dml/10g，确定小鼠ig的剂量为fg生药/kg。
(二)给药方法1.给药途径iv与临床静脉给药的途径是一致的。
2.给药容量小鼠iv vml/10g；ig dml/10g。
3.供试药药物由本所制剂室提供。
(三)试验依据根据中华人民共和国卫生部药政局《中药新药研究指南》和《新药(西药)临床前研究指导原则汇编》中的“急性毒性试验”的方法要求及本科室制定的“药理试验标准操作规程”(SOP)进行。
(四)方法KM小鼠60只，按照体重随机分为本发明iv组、本发明ig组与对照组三组，每组20只，雌雄各半，给药前禁食不禁水12小时，本发明iv组小鼠按照0.25ml/10g的给药容量静脉给药；本发明ig组小鼠按照0.4ml/10g的给药容量灌胃给药。给药后即刻观察动物的反应，包括动物的形态、行为活动、精神状态、食欲、大小便及其颜色、皮毛、鼻、眼、口有无异常分泌物以及动物死亡情况，死亡的动物及时尸检，若有肉眼可见的病变则进行病理组织学检查。给药第1天每1小时观察一次，以后每天观察一次，连续观察7天，记录动物毒性反应及死亡情况。称量小鼠在试验前、试验后第三天及第七天的体重。从体重和动物的反应情况综合评价试验结果，得到本发明粉针对小鼠单次静脉与灌胃给药的最大耐受量。若出现死亡，则进行急性半数致死量(LD50)的测定。
四.试验结果(一)iv的MTDKM小鼠单次静脉给予所试本发明粉针17.075g生药/kg，相当于人临床最大日用量的187.5倍，给药后即刻动物的翻正反射消失，心跳加快，3min内翻正反射恢复，心跳恢复正常，动物无异常表现，整个试验期间未出现任何异常，体重随试验时间的延长而增加，与同期对照组无差异(p＞0.05)，试验期间未见动物死亡。观察期结束时处死小鼠，尸检无肉眼可见的变化。
(二)ig的MTDKM小鼠单次灌胃给予所试本发明粉针27.320g生药/kg，相当于人临床最大日用量的300倍，给药后即刻及整个试验期间未出现任何异常，体重随试验时间的延长而增加，与同期对照组无差异(p＞0.05)，试验期间未见动物死亡。观察期结束时处死小鼠，尸检无肉眼可见的变化。
五.试验结论在本试验条件下，本发明粉针给小鼠单次静脉给药的最大耐受量＞Ag生药/kg，相当于人临床最大日用量的187.5倍；单次灌胃的最大耐受量＞Sg生药/kg，相当于人临床最大日用量的300倍，本试验提示该药的临床用量是一个相当安全的剂量。
本发明粉针血管刺激性试验一、试验目的本试验旨在观察本品每日连续耳缘静脉给药，对兔耳缘静脉有无血管刺激作用，为临床用药安全提供参考。
二、试验材料1.受试药物本发明粉针，由北京福瑞康正医药技术研究所提供。临床拟用剂量1-2次/日，0.4-0.8g/次。
2.试剂氯化钠注射剂，500ml/瓶，由北京双鹤药业股份有限公司生产，批号030415322。
3.动物及饲料大耳白兔，雄性，由北京科宇动物养殖中心提供，合格证号SCXK京2002-005，购进后进行1周预饲养，用于试验时体重2.2～2.6kg。饲养条件金属兔笼单笼饲养，自由饮水，给予标准颗粒兔饲料，室温18～22℃，湿度50％～70％。实验设施合格证医动字第01-2049号。
三、试验方法
1.取健康、耳缘无伤大耳白兔6只，随机分为本发明粉针组和氯化钠注射剂对照组两组，每组3只。给药组以无菌操作法耳缘静脉注射给药91.07mg生药/0.67ml/kg，对照组给予同体积氯化钠注射剂，控制给药速度3ml/min，分别于每日9:00am各组兔左侧耳缘静脉注射给药一次，连续给药3d。
2.取健康、耳缘无伤大耳白兔6只，随机分为本发明粉针组和氯化钠注射剂对照组两组，每组3只。给药组以无菌操作法耳缘静脉注射给药mg/0.67ml/kg，对照组给予同体积氯化钠注射剂，控制给药速度3ml/min，分别于每日9:00am各组兔左侧耳缘静脉注射给药一次，连续给药7d。
四、观察指标1.每日给药后，肉眼观察给药局部的静脉血管及周围组织的红肿情况。
2.末次给药后24h将动物敲击头部处死，分别于注射部位近心端1.5cm至3cm处剪取耳缘静脉，用10％福尔马林溶液固定，常规病理切片HE染色，观察有无组织变性或坏死、血栓形成及内皮损伤等刺激反应。
五、试验结果本发明粉针耳缘静脉注射给药91.07mg生药/0.67ml/kg，连续3d和7d，对兔耳局部血管具有扩张、出血作用，及炎细胞浸润，未见血管壁变性、坏死损伤和血栓形成，给药7天比给药3天血管变化略重。总体上本药物血管刺激病变属于可逆性、轻度血管病变。
六、试验结论该试验条件下，本发明粉针不产生血管壁的变性、坏死及血栓形成。
本发明粉针体外溶血试验一、试验目的本试验旨在观察本发明粉针对兔红细胞有无溶血和致凝集作用。
二、试验材料1.受试药物同前2.试剂氯化钠注射剂，500ml/瓶，由北京双鹤药业股份有限公司生产，批号0304153223.仪器800B型台式离心机，上海安亭科学仪器厂生产；SY21-Ni电热恒温水浴锅，北京市长风仪器仪表公司生产。
三、试验方法
1.2％红细胞混悬液的制备兔心脏取血20ml，放入盛有玻璃珠的三角瓶中轻轻振摇10分钟除去纤维蛋白，使成脱纤血液，加10倍量的生理盐水摇匀，离心3min(转速2000rpm/min)，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水洗涤至上清液无色透明为止。将所得红细胞用生理盐水配成2％的混悬液备用。
2.试验方法取试管7只，按表8依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水，混匀后于37℃温浴半小时，然后按表8加入不同量的药液(第6管不加受试品，作为空白对照组；第7管不加受试品，用蒸馏水代替生理盐水，作为阳性对照组)，将各管轻轻摇匀后置37℃水浴保温4h。开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，如表9所示观察溶血与凝集现象。
表8本发明粉针体外溶血试验加样表管号 1 2 3 4 5 6 72％红细胞悬液(ml) 2.5 2.52.52.52.52.52.5生理盐水(ml)2.0 2.12.22.32.42.5-蒸馏水(ml) - - - - - - 2.5受试品(ml) 0.5 0.40.30.20.1- -表9红细胞溶血、凝集判断标准全溶血溶液澄明红色，管底无细胞残留；部分溶血 溶液澄明红色或棕色，管底有少量红细胞残留；无溶血红细胞全部下沉，上层液体无色澄明；凝集 红细胞聚集成块，振摇后不能分散；四、结果判断1.以0.3ml粉针(第3管)，在2小时内不产生溶血作用者认为可供注射用。
2.如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将聚集物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴生理盐水，显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，供试品可供临床应用。若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚，供试品不宜供临床使用。
五、试验结果1-6管4h内没有出现溶血现象；1-4管在不同的时间点出现凝聚现象，振摇后红细胞均匀分散，属于假凝聚；7管完全溶血。(结果见表10)表10本发明粉针体外溶血试验结果时间 1 2 3 4 5 6 7
15min- - - - - - +30min- - - - - - +45min- - - - - - +1h * * - - - - +2h ** ** ** ******- +3h ***************- +4h ***************- +备注“-”表示无溶血；“+”表示完全溶血；“±”表示部分溶血；“*”表示假凝聚六、试验结论该试验条件下，所试本发明粉针对兔红细胞无溶血作用，有不同程度的假凝聚现象发生。
本发明粉针全身过敏试验一、试验目的本发明粉针为北京福瑞康正医药技术研究所研制的中药新药，本试验旨在考察本发明粉针有无全身致敏作用，为临床安全用药提供参考。
二、试验材料1.受试药物同前2.试剂氯化钠注射剂，500ml/瓶，由北京双鹤药业股份有限公司生产，批号030415322；新鲜卵白蛋白，以生理盐水配制成10％浓度供试验用。
3.动物白色豚鼠，雌雄各半，由北京科宇动物养殖中心提供，合格证号SCXK京2002-005，购进后进行一周预饲养，用于试验时体重270～350g。饲养条件群养9只/笼，颗粒豚鼠饲料喂养，自由摄水，室温20～22℃，湿度50％～70％。实验设施合格证医动字第01-2049号。
四、试验方法1.分组健康豚鼠18只，按体重随机分为本发明粉针组、卵白蛋白阳性对照组及氯化钠注射剂阴性对照组三组，每组6只，雌雄各半。
2.受试动物致敏各组动物按无菌操作隔日分别腹腔注射给予本发明粉针、10％卵白蛋白和氯化钠注射剂0.5ml/只，共致敏三次。
3.攻击将各组动物分为2批，每批3只，一批于首次致敏后14d分别静脉注射相应药液1ml/只攻击；另一批于首次致敏后21d静脉注射相应药液1ml/只攻击。
五、观察指标于攻击给药后15min内，观察动物有无咳嗽、抓鼻、竖毛、呼吸困难、痉挛、休克及死亡等情况，并按表11所列标准评分，评分≥2时，判定为过敏试验阳性。(结果见表11)表11 全身过敏性反应评分标准评分 体征0 无明显反应1 轻微抓鼻、颤抖或竖毛2 出现咳嗽，多次抓鼻、颤抖或竖毛3 多次或连续咳嗽，伴有呼吸困难或痉挛、抽搐4 痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡六、试验结果阳性组6只豚鼠15min内出现痉挛、抽搐、大小便失禁、最后死亡，评分4分，为过敏反应阳性；阴性组和本发明粉针组6只豚鼠无明显反应，评分0分，为过敏反应阴性。(结果见表12)表12本发明粉针全身过敏试验结果粉针组 阳性组 阴性组动物号 性别评分动物号 性别评分动物号 性别 评分4 ♀ 0 7 ♀ 41 ♀ 05 ♀ 0 8 ♀ 42 ♀ 06 ♀ 0 9 ♀ 43 ♀ 04 ♂ 0 7 ♂ 41 ♂ 05 ♂ 0 8 ♂ 42 ♂ 06 ♂ 0 9 ♂ 43 ♂ 0七、试验结论该试验条件下，本发明粉针全身过敏反应阴性，无全身致敏作用。这些实施例仅为本发明的优选方式，并不限制本发明要求保护的范围。
具体实施例方式
实施例1绿原酸 0.1g黄芩苷 40g氯化钠 55g称氯化钠，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的氯化钠，搅拌溶解，加注射用水至约550ml。使用1mol/L盐酸及1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值，使药液的pH值在6.0～6.8的范围内。加入0.2％药液量的活性炭，升温至70℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至5.0。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例2绿原酸 25g黄芩苷 1.6g氯化钠 67g取氯化钠，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的氯化钠，搅拌溶解，加注射用水至约500ml。使用1mol/L盐酸及1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值，使药液的pH值在6.0～6.8的范围内。加入1％药液量的活性炭，升温至80℃，搅拌40分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至8.0。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例3绿原酸 25g黄芩苷 40g氯化钠 35g取氢氧化钠，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的氯化钠，搅拌溶解，加注射用水至900ml。使用1mol/L盐酸及1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值，使药液的pH值在6.0～6.8的范围内。加入1％药液量的活性炭，升温至75℃，搅拌20分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至7.0。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例4绿原酸 5.0g黄芩苷 30g氯化钠 63g取氢氧化钠，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的氯化钠，搅拌溶解，加注射用水至250ml。使用1mol/L盐酸及1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值，使药液的pH值在6.0～6.8的范围内。加入1％药液量的活性炭，升温至75℃，搅拌20分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至7.0。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例5绿原酸 17.5g黄芩苷 6g葡萄糖 78g取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的葡萄糖，搅拌溶解，加注射用水至约780ml。加入1％药液量的活性炭，升温至60℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至5.5。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例6绿原酸10.0g黄芩苷23.0g葡萄糖67g取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的葡萄糖，搅拌溶解，加注射用水至约1340ml。加入1％药液量的活性炭，升温至80℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至6.5。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例7绿原酸 14g黄芩苷 17g葡萄糖 69g取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的葡萄糖，搅拌溶解，加注射用水至约280ml。加入1％药液量的活性炭，升温至85℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至7.5。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例8
绿原酸 5.0g黄芩苷 30.0g异绿原酸 8.0g汉黄芩苷 4.0g葡萄糖 50.5g取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的葡萄糖，搅拌溶解，加注射用水至约1265ml。加入1％药液量的活性炭，升温至80℃，搅拌40分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至8.5。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例9绿原酸 17.5g黄芩苷 6g异绿原酸8g汉黄芩苷4g山梨醇 60.5g称取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，搅拌溶解，加注射用水至约605ml。加入1％药液量的活性炭，升温至80℃，搅拌50分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至9.0。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例10绿原酸 17.5g黄芩苷 30g异绿原酸0.3g汉黄芩苷4.0g山梨醇 58.2g称取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，搅拌溶解，加注射用水至约340ml。加入1％药液量的活性炭，升温至80℃，搅拌50分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至6.4。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例11绿原酸17.5g黄芩苷30.0g异绿原酸 8.0g汉黄芩苷 0.2g山梨醇44.3g称取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，搅拌溶解，加注射用水至约1100ml。加入1％药液量的活性炭，升温至80℃，搅拌40分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至7.8。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例12绿原酸 10g黄芩苷 23g异绿原酸 8g汉黄芩苷 4g山梨醇 45g称取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，搅拌溶解，加注射用水至约180ml。加入1％药液量的活性炭，升温至50℃，搅拌60分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至6.8。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例13绿原酸 14g黄芩苷 17g异绿原酸8g
汉黄芩苷4g甘露醇 43g称取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的甘露醇，搅拌溶解，加注射用水至约430ml。加入1％药液量的活性炭，升温至70℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至7.2。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例14绿原酸14g黄芩苷23g异绿原酸 0.3g汉黄芩苷 2g甘露醇61g称取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的甘露醇，搅拌溶解，加注射用水至约410ml。加入1％药液量的活性炭，升温至70℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至7.8。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例15绿原酸 14g黄芩苷 23g异绿原酸 5g汉黄芩苷 0.2g甘露醇 58g称取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的甘露醇，搅拌溶解，加注射用水至约1450ml。加入1％药液量的活性炭，升温至70℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的PH值至7.8。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例16绿原酸5.0g黄芩苷30g异绿原酸 5g汉黄芩苷 2g甘露醇55g称取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的甘露醇，搅拌溶解，加注射用水至约1300ml。加入1％药液量的活性炭，升温至80℃，搅拌50分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至6.6。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例17绿原酸 17.5g黄芩苷 10g异绿原酸 5g汉黄芩苷 2g甘露醇 65g取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的甘露醇，搅拌溶解，加注射用水至约1300ml。加入1％药液量的活性炭，升温至80℃，搅拌45分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至6.8。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例18绿原酸 17.5g黄芩苷 30g异绿原酸0.8g汉黄芩苷2g氯化钠 使成品至100g取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的氯化钠，搅拌溶解，加注射用水至约3000ml。加入1％药液量的活性炭，升温至70℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至6.4。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例19绿原酸 17.5g黄芩苷 30g异绿原酸 5g汉黄芩苷 0.4g山梨醇 使成品至100g取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，搅拌溶解，加注射用水至约3000ml。加入1％药液量的活性炭，升温至70℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至6.5。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例20绿原酸10g黄芩苷23g异绿原酸 5g汉黄芩苷 2g葡萄糖使成品至100g取氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，搅拌溶解，加注射用水至约3000ml。加入1％药液量的活性炭，升温至70℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至6.2。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例21绿原酸 14g黄芩苷 17g异绿原酸5g汉黄芩苷2g氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。加注射用水约至4000ml，加添加剂适量。加入1％药液量的活性炭，升温至70℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至6.6。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例22绿原酸 14g黄芩苷 23g异绿原酸0.8g汉黄芩苷2g氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。加注射用水约至2000ml，加入1％药液量的活性炭，升温至70℃，搅拌30分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至6.6。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
实施例23绿原酸 14g黄芩苷 23g异绿原酸5g汉黄芩苷0.4g氢氧化钠适量，加入适量注射用水搅拌使溶解。将投料量绿原酸、黄芩苷、异绿原酸、汉黄芩苷投入注射用水中，搅拌下加入适量50％氢氧化钠溶液使绿原酸与黄芩苷溶解，控制药液的pH值使低于7.5。加注射用水约至2000ml。加入1％药液量的活性炭，升温至65℃，搅拌45分钟。使用沙滤棒与真空泵将药液过滤。使用1mol/L氢氧化钠调节药液的pH值至6.2。使用过滤机将药液过滤，依半成品质量标准测定半成品的含量、pH值，灌装，冷冻干燥，得冻干粉约100g，包装、贮存。
权利要求
1.一种静脉注射用粉针，其特征在于它是由下述原料制成的金银花1-10重量份，黄芩1-10重量份。
2.一种静脉注射用粉针，其特征在于它主要有效成分由以下成分组成绿原酸10-250mg/g、黄芩苷16-400mg/g，不含连翘苷、栀子苷。
3.如权利要求2所述的粉针，其特征在于所述活性成分及含量为绿原酸50-175mg/g、黄芩苷60-300mg/g。
4.如权利要求3所述的粉针，其特征在于所述活性成分及含量为绿原酸100-140mg/g、黄芩苷170-230mg/g。
5.如权利要求3或4所述的粉针，其特征在于还包含以下重量百分比的活性成分异绿原酸3-80mg/g、汉黄芩苷2-40mg/g。
6.如权利要求3或4所述的粉针，其特征在于还包含以下重量百分比的活性成分异绿原酸8-50mg/g、汉黄芩苷4-20mg/g。
7.如权利要求1-6所述的粉针，其特征在于药物制剂中加了添加剂氯化钠、葡萄糖、山梨醇或甘露醇。
8如权利要求7所述的粉针，其特征在于添加剂的浓度在4％-25％之间。
9.如权利要求8所述的粉针，其特征在于所述添加剂浓度葡糖糖的浓度优选为5％-10％，其它优选为10％-15％。
10.如权利要求1-8所述的粉针，其特征在于所药物制剂PH值在4.0～9.0之间。
11.如权利要求1-10所述的粉针在制备治疗肺炎药物中的应用。
12.如权利要求1-10所述的粉针在制备治疗上呼吸道感染药物中的应用。
13.如权利要求1-12所述的粉针，其特征在于其中绿原酸的测定方法为色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为10∶90的乙腈-0.4％磷酸溶液为流动相检测波长为327nm对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备取本品，研细，取约0.1g精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％的甲醇100ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用50％的甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取滤液适量加入棕色量瓶即得供试样品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
14.如权利要求1-12所述的粉针，其特征在于黄芩苷的测定方法色谱条件与系统适应性试验用十八烷基键合硅胶为填充材料以比例47∶53∶0.2的甲醇-水-磷酸为流动相检测波长280nm对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的黄芩苷适量，置50ml量瓶中，加甲醇溶解，摇匀，制成每1ml含60μg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品，研细，取约0.1g精密称定，置50ml量瓶中，加50％甲醇50ml振摇，溶解，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl；
15.根据权利要求1-14所述药物制剂，其特征在于它的制备工艺为(1)绿原酸、异绿原酸的制备工艺取金银花，4-20倍量40％-95％乙醇，回流提取1-5次，每次0.5-3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至浸膏状，放入真空干燥箱中干燥，干燥的金银花提取物，溶于相当于其重量1-20倍量体积的水中，水溶液用等量氯仿萃取1-5次，氯仿层弃去(回收氯仿)，水相再用0.5-3倍量异戊醇萃取1-5次，合并异戊醇层，减压浓缩，真空干燥，取适量溶于40-90％乙醇溶液适量，拌入200克硅胶，水浴挥干(60℃)，作为柱层析分离样品，称取200-300目硅胶2000克，以氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)为溶剂，湿法装柱，干法上样，用氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)洗脱，等体积收集，每份500ml，梯度洗脱，每500ml加甲醇10ml，TLC追踪检查，合并相同部分，再经小柱反复层析及结合重结晶技术，得到化合物氯原酸，化合物异氯原酸；(2)黄芩苷、汉黄芩苷的制备工艺黄芩粗粉，加2-10倍量水，回流提取1-5次，每次0.5--3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加入0.5-4mol/LHCl溶液适量调PH＝0.5～4.0，保温0.5-3小时，放置8-24小时，滤过，沉淀加4-20倍量水，调PH＝5.0～10.0，再加入0.5-2倍乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用HCl溶液调PH＝1.0～5.5，保温0.5-3小时，放置8-24小时，滤过，沉淀用乙醇洗至PH＝5.0～10.0，真空干燥，取上述干燥物，拌以硅胶(200-300目)，硅胶湿法装柱进行层析分离，氯仿-甲醇(90∶1～1∶1)为洗脱剂，薄层检查洗脱液，等量收集，每份500ml，合并相同部分后分为2大部分一(10∶1～90∶1)，B(10∶1～1∶1)，从一部分在氯仿-甲醇(10∶1)段的洗脱液中析出针状结晶，进一步重结晶得到化合物2；B部分经过硅胶柱层析(200-300目)，葡聚糖凝胶(LH-20)柱层析分离得到化合物1；化合物1，黄芩苷；化合物2，汉黄芩苷，即得；(3)该制剂的制备工艺为将投料量的绿原酸、黄芩苷等溶于适量的注射用水中，使浓度为绿原酸0.1％-25mg/ml、黄芩苷1-40mg/ml，加等渗调节剂，控制药液的PH值。用注射用水补至适量，调节药液的PH值，使成品的PH值在4.0～9.0的范围内，质检，灌装、冷冻干燥，包装，即得。
全文摘要
本发明公开了一种静脉注射用粉针及其制备方法。该药物主要是绿原酸、黄芩苷为原料为原料制备而成。本药物对上呼吸道感染、肺炎和呼吸道病毒感染具有显著的疗效。
文档编号G01N33/15GK1616051SQ20041008002
公开日2005年5月18日 申请日期2004年9月24日 优先权日2004年9月24日
发明者赵志全 申请人:鲁南制药股份有限公司