多隔室脂质纳米颗粒的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明应当在用于给予活性成分的纳米技术的开发的上下文中看出。
[0002] 本发明涉及多隔室脂质纳米颗粒（multicompartmentlipidnanoparticles)(在 下文中称为"微孔体（cellisome) ")，其制备方法以及其作为用于特别地通过注射、口、鼻或 皮肤给予感兴趣的分子的载体的用途。
[0003] 在以下说明书中，方括号（[])中的参考文献是指在本文末尾呈现的参考文献列 表。
【背景技术】
[0004] 在过去的30年中，已经开发了两种主要种类的纳米尺寸系统，用作感兴趣的分子 的载体：聚合物系统和脂质系统。
[0005] 已经显示这些中的第一种在它们的工业应用方面是相对令人失望的，可能由于毒 性的原因。此外，市场上可获得的制剂主要是基于脂质，其已经产生两大载体家族：脂质体 和脂质颗粒（纳米乳液（NE)、纳米结构的脂质载体（NLC)、固体脂质纳米颗粒（SLN))。脂质 体和较小程度上的纳米乳液，已经产生了许多化妆品应用和几个市场上的药品，同时更近 来开发的纳米结构的固体脂质颗粒存在于许多化妆品产品中和药学部门的临床试验中。
[0006] 脂质体定义为，由在它们之间限定水或含水缓冲液的隔室的一个或多个同心脂质 双层组成的人造结构。脂质体是由单一类型的，或几种类型的天然或合成的磷脂（组织其 使得极性头部在一起以生成双层）制备的。最惯用的制备脂质体的方法是所谓的脂质膜水 合。脂质体被越来越多地开发为水溶性、脂溶性和两亲性活性成分的载体。因而将活性成分 包封在水相或脂质双层中使得其可以保护所述成分不受酶降解或被免疫系统消除，并且减 少它们在肠胃外给药时可能的毒性副作用（例如，溶血、血栓性静脉炎、血液凝固）（Meure etal.,AapsPharmscitech, 9:798-809,2008;StormandCrommelin,Pharmaceutical Science&TechnologyToday, 1:19-31，1998) [1，2]。然而，基于十二种商用组合物（例如， MyocetK、Doxil'/Caelyx"、AmBisomeK、.VisudyneK 等），脂质体具有几个主要的 缺点：它们缺少对靶细胞的特异性，磷脂的氧化和物理不稳定性需要将它们冻干，它们工业 生产较为易损（theyaredelicatetoproduceindustrially)，并且可以包封的感兴趣的 分子的量存在特定限制。实际上，两亲性或亲脂性分子能够通过插入它们的膜与脂质体结 合，但是有后者的不稳定的风险。
[0007] 乳液是一种液体（分散相）的液滴在另一种（分散剂或连续相）中的精细分散 体，这两种液体是相对不互溶的；它们最通常是水/油类型。术语"纳米乳液"（NE)是当获 得的粒径非常小，即平均尺寸为约一百纳米时使用的。它们通常是通过将在水相中的油相 机械打碎来生产，并且可选地通过面活性剂的存在来稳定。相比常规的乳液，小尺寸的球粒 (globule)赋予它们有利的药用性质，具体地，在存储期间的物理稳定性和可能的给药路径 (具体地，需要使用小液滴的静脉给药）的方面。然而，这些系统仅可以结合可溶于这些乳 液的油类组分（豆油、橄榄油）的非常亲脂性的活性成分。因而限制了它们的潜在应用。
[0008] 开发了固体脂质纳米颗粒（SLN)和纳米结构脂质载体（NLC)以增加包封 的活性成分的物理化学稳定性和脂质载体整体的给药后稳定性，借助于它们的粘 附、保持（occlusion)和皮肤含水（skinhydration)的性能，通常最终用于化妆 品，以及用于给予和保护感兴趣的活性成分的药物（Bunjes,CurrentOpinionin Colloid&InterfaceScience,16(5):405-411, 2011；Hardeetal. ,ExpertOpinionon DrugDelivery,8(11):1407-1424, 2011；Harmsetal.,JournalofDrugDelivery ScienceandTechnology, 21 (1):89-99, 2011；JoshiandMuller,EuropeanJournal ofPharmaceuticsandBiopharmaceutics, 71:161-172, 2009；Mulleretal. ,Current DrugDiscoverytechnologies, 8(3):207-227, 2011；Pardeikeetal. ,International JournalofPharmaceutics, 366:170-184,2009；SoutoandDoktorovova,Methodsin Enzymology，464:105-129, 2009) [3-9]。如同上述的纳米乳液，使用的原材料的非常高 的亲脂性限制了潜在的可给予的活性成分的选择。此外，还显示固态的脂质的多态性 (polymorphism)对这些系统（排出（expulsion)活性分子、凝胶）的物理稳定性具有大的 影响，特别是SLN的情况。
[0009] 由昂热大学（UniversityofAngers)开发的脂质纳米胶囊是通过相转化方法 获得的，并且由磷脂单层围绕。虽然与SLN和NLC类的纳米分散体非常相似，这些颗粒已 经描述为通过磷脂的结晶层和非离子聚氧乙烯表面活性剂稳定的纳米胶囊（国际申请W0 01/64328;Huynhetal·，JournalofPharmaceutics, 379:201-209, 2009) [10, 11]。有利 地是由于其是相对"温和的"，相转化法需要使用相对特定的原材料以及在准备过程中非常 精细控制温度。这些方面可以限制这种方式的大规模开发。
[0010] 几年之前，开发了由双隔室的油/水结构（称为"手袋（handbag)"）组成的亚 微米尺度阳离子乳液（图1)。为了将它们用作活性成分的载体，它们的形成需要十八胺 (stearylamine)的存在，其支持甘油三酯大量插入限定含水隔室的脂质双层（Texeiraet al·，PharmaceuticalResearch, 17:1329-1332,2000) [12]。令人遗憾地，这些双隔室物的 比例在制备过程中形成的众多其他物体（胶束、脂质体、纳米乳液）中占少数（小于20% )。 此外，考虑到这类产品对负电荷的生物膜的毒性，应谨慎考虑使用如十八胺的阳离子表面 活性剂。
[0011] 更边缘地（moremarginal)，开发并设计了具有10-250nm直径颗粒的纳米 乳液（称为乳液体（emulsome)或超微体（ultrasome))，其包含由如在脂质体中通过 至少一种磷脂双层围绕和稳定的液体或固体形式的脂质组成的脂质芯部，用于脂溶性 或水溶性分子的肠胃外、口、直肠、鼻内或局部给药（美国专利5, 576, 016;Guptaet al.,JournalofDrugTargeting, 15:437-444,2007;GuptaandVyas,Journalof DrugTargeting, 15:206-217, 2007；Kretschmaretal.,Mycoses, 44:281-286, 2001 ； Paliwaletal. ,InternationalJournalofPharmaceutics, 380:181-188, 2009；ffuet al·,JournalofImmunology, 185(6) :3401-3407, 2010) [13-18]。用于制备这些乳液体 的方法在工业规模上应用困难，因为其通常需要使用有机溶剂以及磷脂膜的沉积和再水 合。实际上，这些颗粒主要是通过与用于脂质体的那些非常相似的磷脂膜水合技术获得， 除了水相含有预形成的脂质纳米颗粒外。最终的颗粒是由磷脂双层中的油滴的"统计限定 (statisticalconfinement)"产生的。因此，该过程事前地（priori)生成的各种物体的群 体（乳液体、脂质体、纳米乳液或固体纳米颗粒）而没有结合脂质和磷脂部分。这可以事前 在特定的纯化操作（例如离心）过程中或存储过程中造成系统稳定性问题。
[0012] 因而对于消除这些现有技术的缺陷、缺点和障碍的脂质载体，具体地，对于可以控 制用于大量给予具有广泛极性的感兴趣的分子的脂质载体的长时间稳定性，和可选的，设 想在相同纳米物体中共包封亲水性和亲脂性活性成分的简单制造方法存在真实需要。
【发明内容】
[0013] 基于他们自己对脂质纳米系统的稳定性和毒性的经验，发明人已经开发了代表上 述那些，即脂质体和脂质颗粒（图2A-B)之间的混合系统的新型多隔室脂质纳米颗粒（或 微孔体（cellisome))，其中脂质基体和含水隔室结合在相同纳米尺度的物体中。尽管可应 用工业规模的简单制备方法（高压均化），本发明的微孔体的原理新颖性来自它们的多隔 室形态（图3)。此外，使用的原材料相对便宜，已经由各种药典承认，并在制药工业中采用。
[0014] 形态学上，本发明的这些多隔室纳米颗粒与乳液体是完全不同的。在后者中，因 为脂质隔室结合在一个或多个磷脂双层内，它们本身限定了同心的含水隔室，该物体是各 向同性的（由中心开始在所有方向上性能相同）。在本发明的多隔室脂质纳米颗粒（微孔 体）的情况下，因为脂质隔室仅部分由含水隔室覆盖，组织是各向异性的（从中心开始根据 方向，性能不同）。
[0015] 在本发明的微孔体中，脂质芯部可以由脂质混合物组成，所述脂质混合物在室温 下（25°c)为液体或半固体，并且结合甘油酯和聚乙二醇酯。后一方面在将具有广泛极性的 活性成分（AP) (AP在甘油酯中亲脂，AP在聚乙二醇中更亲水）包封在所述纳米颗粒内的方 面是非常重要的。
[0016] 此外，不像对于许多药物载体观察到的，本发明的微孔体的悬浮液的稳定性延长 至几十个月，而不需要，例如脂质体的情况下的冻干步骤。本发明的微孔体是由含有磷脂 (例如，Ph〇Sph〇lip〇nK 90G)的表面活性剂的混合物以及包括一些具有大于11的Griffin HLB的"疏水-亲水-疏水"类型的非离子表面活性剂的混合物稳定的。这些三序