专利名称：加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法及其装置的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及一种加速溶剂萃取-高速逆流色谱(ASE-HSCCC)联用方法，以及实施该 方法的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用装置，适用于食品、医药、生物等领域目标组 分的提取分离、纯化制备或分析。
背景技术：
传统离线的天然产物提取分离与纯化制备过程烦琐耗时，易导致目标组分的损失， 提取率及回收率低。加速溶剂萃取(ASE)是通过提高温度和增强压力来增加物质溶解 度和溶质扩散速率，从而提高萃取效率的一种萃取技术，它具有省时、耗溶剂少、提取 率高和易于自动化等优点，适合天然物质中有效成分的提取分离。
高速逆流色谱(HSCCC)是一种连续高效的液-液分配色谱分离制备技术，它依据物 质在两相互不混溶液体中的分配系数不同而实现分离，不需要固体载体，避免了因不可 逆吸附而引起的被分离物质损失、失活、变性等问题，不仅能使样品全部回收，回收的 样品更能反映其本来特性；而且由于被分离物质与液体固定相之间能够充分接触，使得 样品的制备量大大提高。依据有效分离柱体积的不同，高效逆流色谱主要包括分析型和 制备型两种。其中，分析型具有目标组分分离速度快、分离纯度高的特点；制备型则具 有纯化能力强、制备量大、适用范围广等优点。
尽管目前加速溶剂萃取和高速逆流色谱分别被广泛应用于天然产物、食品、医药等 领域，但是，加速溶剂萃取存在的缺陷是样品的利用率低，而高速逆流色谱单独应用也 存在一定的缺陷，且两者仍处于独立研究状态。
发明内容
本发明的目的在于，克服现有的离线的天然产物提取分离与纯化制备存在的缺陷， 而提供一种新型的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法，所要解决的技术问题是使其 可有效减少操作步骤，縮短提取时间，降低样品损失，提高产品收率，从而更加适于实 用。
本发明的另一目的是提供一种快速高效的集提取分离、纯化制备或分析于一体的加
4案来实现的。依据本发明提出的 一种加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法，其包括以下步骤采用加速溶剂萃取法提 取物料得到提取液；采用制备型高速逆流色谱纯化制备提取液得到目标组分，或采用分 析型高速逆流色谱分析天然产物提取液中的目标组分。
本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。
根据本发明实施例的联用方法，其还包括步骤1)加速溶剂萃取法提取物料得到 的提取液采用储液瓶收集；2)通过蠕动泵将储液瓶中的提取液泵入定量环；3)采用柱 塞泵将储液瓶中的固定相泵入高速逆流色谱仪，启动高速逆流色谱仪，同时用柱塞泵将 储液瓶中的流动相泵入高速逆流色谱仪，进行溶剂体系平衡；4)当高速逆流色谱溶剂 体系平衡建立后，将定量环中的样品溶液泵入高速逆流色谱进行分离纯化制备或分析； 上述步骤通过切换阀集成加速溶剂萃取与高速逆流色谱于一体，实现天然产物有效成分 的在线提取分离与纯化制备或分析。
根据本发明实施例的联用方法，其中高速逆流色谱的溶剂体系采用体积比为 1:2:1:2的正己烷乙酸乙酯甲醇:水，以上相为固定相，下相为流动相。
根据本发明实施例的联用方法，其中加速溶剂萃取过程中的提取条件为采用高速 逆流色谱的流动相为提取液，在90 12(TC和85-120 bar的压力下提取10 20min，循环 提取两次或以上，获得提取液。
根据本发明实施例的联用方法，其中所述的切换阀为六通阀；当高速逆流色谱溶剂 体系平衡建立后，旋转六通阀，使得六通阀的a号位与f号位相通、b号位与c号位相 通以及d号位与e号位相通。
本发明的目的及解决其技术问题还采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的一 种加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用装置，包括加速溶剂萃取装置，用于提取物料以 获得提取液；高速逆流色谱仪，用于纯化制备或分析提取液中的目标组分；溶剂泵，用 于将加速溶剂萃取装置的提取液泵入高速逆流色谱仪；切换阀，用于连接加速溶剂萃取 装置和高速逆流色谱仪，以实现进样状态与分离状态间的切换。
本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。
根据本发明实施例的联用装置，其中所述的加速溶剂萃取装置所用萃取罐体积为 1-100 mL。
根据本发明实施例的联用装置，其中所述的高速逆流色谱仪为制备型高速逆流色谱 仪或分析型高速逆流色谱仪。
根据本发明实施例的联用装置，其中所述的切换阔为六通阀。20 根据本发明实施例的联用装置，其中所述的加速溶剂萃取装置和高速逆流色谱仪之 间的连接管为聚四氟乙烯管或聚丙烯管，所述的连接管的直径为0.8-3.0mm。
借由上述技术方案，本发明加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法及装置至少具有 以下优点
结合加速溶剂萃取溶剂用量少、快速高效的提取优势和高速逆流色谱制备量大、纯 度高的纯化制备优势，发展一种加速溶剂萃取-高速逆流色谱的联用方法，可有效降低 天然产物等物料中目标组分提取分离、纯化制备或分析全过程中样品的损失，縮短提取 时间、简化操作步骤、提高产品收率。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而 可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够 更明显易懂，现特举较佳实施例，并配合附图，详细说明如下。
图1是本发明ASE-HSCCC联用装置进样过程示意图； 图2是本发明ASE-HSCCC联用装置分离过程示意图； 图3是肿节风提取液的高效液相色谱图4是本发明ASE-制备型HSCCC分离肿节风的高速逆流色谱图5是本发明ASE-制备型HSCCC分离得到的异秦皮啶的高效液相色谱图6是本发明ASE-分析型HSCCC分离肿节风的高速逆流色谱图7是本发明ASE-分析型HSCCC分离得到的异秦皮啶的高效液相色谱图。
1-加速溶剂萃取装置 2:储液瓶
3:蠕动泵 4:定量环
5-.六通阀 6:三通阀
7-储液瓶 8:储液瓶
9:柱塞泵 10:高速逆流色谱仪
11:废液瓶 I :异秦皮啶。
a、 b、 c、 d、 e、 f:切换位
具体实施例方式
为更进一步阐述本发明以达成预定发明目的所采取的技术手段及功效，以下结合附 图及较佳实施例，对依据本发明提出的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法及其装置其具体实施方式
、结构、特征及其功效，详细说明如后。
请参考图1和图2所示，对本发明加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法及其装置
进一步详述。本发明的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法提取分离与纯化制备过程
包括加速溶剂萃取装置l，用于提取物料；高速逆流色谱溶剂体系平衡过程，用于建 立高速逆流色谱流体动力平衡体系；高速逆流色谱仪IO，用于物料的分离纯化。加速溶 剂萃取的提取条件(如提取温度、压力、提取时间和循环次数等)和高速逆流色谱的条 件(如进样量、不同溶剂体系)可根据不同目标物确定，在此不作限定。本发明的加速 溶剂萃取-高速逆流色谱联用装置通过聚四氟乙烯或聚丙烯连接管(图中未示)，连接
管的直径可以为0.8-3.0 mm、切换阀(在本实施例中为六通阀5)、溶剂泵(在本实施 例中为蠕动泵3和柱塞泵9)等实现整机的全自动或半自动运行。
请参照图1所示，过程中，六通阔5的a号位与b号位相通、c号位与d号位相通、 e号位与f号位相通。首先通过加速溶剂萃取装置1提取物料，该加速溶剂萃取装置1 所用萃取罐体积可以为1-100 inL;提取结束后采用储液瓶2收集；釆用柱塞泵9将储液 瓶8中的固定相泵入高速逆流色谱仪10;启动高速逆流色谱仪IO,同时用柱塞泵9将 储液瓶7中的流动相泵入高速逆流色谱仪，进行溶剂体系平衡。
将储液瓶2中的提取液通过蠕动泵3泵入定量环4;当高速逆流色谱溶剂体系平衡 建立后，请参照图2所示，旋转六通阀5，使得六通阀5的a号位与f号位相通、b号 位与c号位相通以及d号位与e号位相通；将定量环4中的样品溶液泵入高速逆流色谱 10，对样品溶液进行纯化制备或分析。
实施例1
(采用ASE-制备型HSCCC联用分离纯化肿节风中的异秦皮啶)
其具体操作是称取2.0 g 20-40 mesh的肿节风样品于22 mL ASE萃取罐中，采 用HSCCC流动相为提取液，在IO(TC和100 bar的压力下提取10 min，循环提取两次， 收集提取液(肿节风提取液的高效液相色谱图请参见图3所示)，将提取液直接泵入制 备型HSCCC进行纯化制备，进样过程中的废液收集到废液瓶ll中。制备型HSCCC的条 件进样体积10mL，溶剂体系为正己烷乙酸乙酯甲醇:水=1:2:1:2 (体积比)，柱体 积为240mL，转速800rpm,以上相正己垸/乙酸乙酯为固定相，下相甲醇/水为流动相， 流速2. 0 mL/min;固定相保留率约54%，紫外检测波长344 nm。图4是ASE-制备型HSCCC 分离肿节风得到的逆流色谱图；图5是ASE-制备型HSCCC分离得到的异秦皮啶的高效液 相色谱图，异秦皮啶的液相色谱检测纯度大于99%。实施例2
(采用ASE-分析型HSCCC联用分离纯化肿节风中的异秦皮啶)
其具体操作是称取2. 0 g 20-40 mesh的肿节风样品于22 mL萃取罐中，采用HSCCC 流动相为提取液，在IO(TC和100 bar的压力下提取10 min，循环提取两次，收集提取 液(肿节风提取液的高效液相色谱图请参见图3所示)，将提取液直接泵入分析型HSCCC 进行纯化分离，进样过程中的废液收集到废液瓶11中。分析型高速逆流色谱条件进 样体积2mL,溶剂体系为正己烷乙酸乙酯甲醇:水-l:2:l:2 (体积比)，柱体积为43 mL，转速1600 rpm，以上相正己烷/乙酸乙酯为固定相，下相甲醇/水为流动相，流速 2.0 mL/min;固定相保留率约51%，紫外检测波长344 nm。图6是ASE-分析型HSCCC 分离肿节风得到的逆流色谱图；图7是ASE-分析型HSCCC分离得到的异秦皮啶的高效液 相色谱图；异秦皮啶的液相色谱检测纯度大于99%。
很明显，采用本发明的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法及装置，可以直接从 肿节风中得到纯度大于99%的有效成分异秦皮啶，在线实现肿节风中异秦皮啶的快速提 取分离和纯化制备。该联用装置结合了加速溶剂萃取装置可以快速高效提取分离及高速 逆流色谱的高效纯化制备的优势，有效降低了天然产物等样品中目标组分提取、分离、 纯化和制备或分析全过程中的样品损失，縮短提取时间，减少中间环节，提高分离效率。
另外，在上述实例中，采用肿节风中异秦皮啶作为对象来说明的，但本发明不仅适 用于天然产物中有效成分的提取分离、纯化制备或分析，也可以应用于食品、医药、生 物等其它复杂对象中目标组分的快速在线提取分离、纯化制备或分析。
根据以上的说明可知，本发明加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用仪具有适应面广、 快速高效、回收率高等优点，能广泛应用于食品、医药和生物等复杂对象中目标组分的 提取分离、纯化、制备和分析。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽 然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术 人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出更动或修饰 为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实 质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范 围内。
8
权利要求
1、一种加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法，其特征在于其包括以下步骤采用加速溶剂萃取法提取物料得到提取液；采用制备型高速逆流色谱纯化制备提取液得到目标组分，或采用分析型高速逆流色谱分析天然产物提取液中的目标组分。
2、 根据权利要求1所述的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法，其特征在于其还包括步骤1 )加速溶剂萃取法提取物料得到的提取液采用储液瓶收集；2) 通过蠕动泵将储液瓶中的提取液泵入定量环；3) 采用柱塞泵将储液瓶中的固定相泵入高速逆流色谱仪，启动高速逆流色谱仪，同时用柱塞泵将储液瓶中的流动相泵入高速逆流色谱仪，进行溶剂体系平衡；4) 当高速逆流色谱溶剂体系平衡建立后，将定量环中的样品溶液泵入高速逆流色谱进行分离纯化制备或分析；上述步骤通过切换阀集成加速溶剂萃取与高速逆流色谱于一体，实现天然产物有效成分的在线提取分离与纯化制备或分析。
3、 根据权利要求2所述的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法，其特征在于，高速逆流色谱的溶剂体系采用体积比为1:2:1:2的正己烷乙酸乙酯甲醇:水，以上相为固定相，下相为流动相。
4、 根据权利要求2所述的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法，其特征在于，加速溶剂萃取的提取条件为采用高速逆流色谱的流动相为提取液，在卯 12(TC和85 120bar的压力下提取10 20min，循环提取两次或以上，获得提取液。
5、 根据权利要求1所述的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法，其特征在于所述切换阀为六通阀；当高速逆流色谱溶剂体系平衡建立后，旋转六通阀，使得六通阔的a号位与f号位相通、b号位与c号位相通以及d号位与e号位相通。
6、 一种加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用装置，其特征在于其包括加速溶剂萃取装置，用于提取物料以获得提取液；高速逆流色谱仪，用于纯化制备或分析提取液中的目标组分；溶剂泵，用于将加速溶剂萃取装置的提取液泵入高速逆流色谱仪；切换阀，用于连接加速溶剂萃取装置和高速逆流色谱仪，以实现进样状态与分离状态间的切换。
7、 根据权利要求6所述的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用装置，其特征在于所述的加速溶剂萃取装置所用萃取罐体积为1-100 mL。
8、 根据权利要求6所述的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用装置，其特征在于所述的高速逆流色谱仪为制备型高速逆流色谱仪或分析型高速逆流色谱仪。
9、 根据权利要求6所述的加速溶剂提取-高速逆流色谱联用装置，其特征在于所述的切换阀为六通阀。
10、 根据权利要求6所述的加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用装置，其特征在于-所述的加速溶剂萃取装置和高速逆流色谱仪之间的连接管为聚四氟乙烯管或聚丙烯管，所述的连接管的直径为0.8-3.0 mm。
全文摘要
本发明公开了一种加速溶剂萃取-高速逆流色谱联用方法及其装置。采用加速溶剂萃取装置提取物料得到提取液，采用储液瓶收集；将提取液通过蠕动泵泵入定量环；将储液瓶中的固定相采用柱塞泵泵入高速逆流色谱仪，启动高速逆流色谱仪，同时用柱塞泵将储液瓶中的流动相泵入高速逆流色谱仪，进行溶剂体系平衡；将定量环中的样品溶液泵入高速逆流色谱仪，采用制备型高速逆流色谱纯化制备得到目标组分，或采用分析型高速逆流色谱分析天然产物提取液中的目标组分；上述步骤通过切换阀集成加速溶剂萃取与高速逆流色谱于一体，实现天然产物有效成分的在线提取分离与纯化制备，具有快速高效、自动化程度高的特点，在食品、医药、生物等领域有广泛的应用前景。
文档编号B01D11/00GK101637665SQ20091003654
公开日2010年2月3日 申请日期2009年1月9日 优先权日2009年1月9日
发明者李攻科, 肖小华, 邓建朝 申请人:中山大学