专利名称：一种蛋白质晶体生长方法
技术领域：
本发明涉及一种蛋白质晶体生长方法，特别是涉及一种简易的蛋白质晶体生长方法。
背景技术：
蛋白质是生命活动的物质基础，研究蛋白质的空间结构对于了解蛋白质的结构与功能具有重要意义。到目前为止，X-射线单晶体衍射方法仍是了解蛋白质空间结构的主要方法。而要进行这样的工作，首先要从纯化蛋白质溶液中培养出蛋白质晶体。蛋白质晶体生长已从批量的，常量的方法向微量、超微量的方法发展。目前使用最多的是微量的汽相扩散法，包括坐滴法，悬滴法等，在蛋白质溶液和沉淀剂之间形成一个密闭的空间，构成一个汽相扩散的环境，逐步地降低蛋白质溶解度从而结晶出蛋白质。该方法使用的材料均是透明的，以便于使用显微技术观察蛋白质晶体生长情况。传统上，该方法使用真空脂，硅油，或是用透明胶带密封，造成密封不持久或不易开启等困难。同时使用该方法难以对密封的容器进行加减试剂或挑选晶体等操作。
发明内容
本发明的目的是提供一种简易的蛋白质晶体生长方法，该方法将传统使用的真空脂、硅油或是透明胶带密封改为使用气相色谱固定液——甲基硅油或甲基苯基硅油作为密封剂。
装沉淀剂的容器(塑料或玻璃)具有平坦的表面，顶部是硅化的盖玻片，盖玻片和容器之间用气相色谱固定液——甲基硅油或甲基苯基硅油密封，形成一个密闭的空间以造成一个汽相扩散的环境，由于这种气相色谱固定液的密封性能良好，又利于开启便于对蛋白质液滴或沉淀剂溶液增减试剂，也有利于挑选晶体和晶体接种技术等操作。本发明的晶体生长方法，与现有技术相比，具有以下优点1.密封性能良好，比使用一般硅油或用透明胶带密封性能更好，可达2-3年甚至7-8年，仍密封良好；2.易于开启，为了便于观察晶体生长情况，一般使用很薄的盖玻片作为容器的盖子，而使用真空脂密封，开启时很容易造成盖玻片破裂。
3.适合于各种挥发性的有机试剂作沉淀剂的蛋白质晶体生长。
具体实施例方式
实施例1使用24孔U型医用血凝滴定板(塑料)作为装沉淀剂的容器，每孔加0.8ml沉淀剂，孔上方涂一层甲基硅油，硅化盖玻片上加8μl的巴豆毒素II溶液和2μl的沉淀剂，翻转过来盖在塑料板的孔上，过两天观察到蛋白质溶液仍然透明，于是开启玻片，在蛋白质溶液中再加2μl的沉淀剂后重新盖好密封，3天后观察到蛋白质液滴中长出晶体。
从91年1月5日开始培养晶体，一直到99年7月1日，开启玻片，挑出晶体，经X-射线衍射获得一套1.7衍射数据。
实施例2挑选表面平坦的称量瓶作为装沉淀剂的容器，容器内加0.8ml沉淀剂，瓶口上表面涂一层甲基苯基硅油，硅化的盖玻片上添加蛋白质溶液和沉淀剂，翻转过来盖在称量瓶上形成一个汽相扩散空间，此法可以用于挥发性有机试剂作沉淀剂的蛋白质晶体生长。
实施例3将例1的24孔U型医用血凝滴定板锯成每孔一块，放在表面平坦的称量瓶内，称量瓶内加入沉淀剂，单孔U型板内添加蛋白质溶液和沉淀剂，称量瓶口涂上一层甲基硅油或甲基苯基硅油，盖玻片密封，形成一个坐滴式汽相扩散环境，可以用于加大蛋白质溶液量以利于培养蛋白质大晶体。
权利要求
1.一种蛋白质晶体生长方法，包括制备沉淀剂和蛋白质液滴，并使二者处于一个密封的容器内，其特征在于该方法使用气相色谱固定液——甲基硅油作为密封剂。
2.一种蛋白质晶体生长方法，包括制备沉淀剂和蛋白质液滴，并使二者处于一个密封的容器内，其特征在于该方法使用气相色谱固定液——甲基苯基硅油作为密封剂。
全文摘要
本发明涉及一种蛋白质晶体生长方法，包括制备沉淀剂和蛋白质液滴，该方法使用汽相色谱固定液——甲基硅油或甲基苯基硅油作为汽相扩散方法(包括悬滴法和座滴法)的密封剂。该技术使汽相扩散环境密封良好，又易于开启，便于增减试剂和挑选晶体等操作。
文档编号B01D9/02GK1727528SQ20041005489
公开日2006年2月1日 申请日期2004年7月29日 优先权日2004年7月29日
发明者陈明晃 申请人:中国科学院福建物质结构研究所