酶法产生的过酸对染料的氧化脱色-方法、组合物和套盒的利记博彩app

专利名称：酶法产生的过酸对染料的氧化脱色-方法、组合物和套盒的利记博彩app
技术领域：
所述组合物和方法涉及使用酶法产生的过酸对水性介质中的染料分子的脱色。
背景技术：
纺织品材料的染色不是一个有效的过程，因为许多用来染色纺织品的染料保留在染色介质中。由于部分耗竭的染色介质的确切成分不同，再次使用耗竭的染色介质可能产生不一致的结果。因此，该残余的染色介质通常被丢弃，导致大量的染料污染的废水进入环境。经染色的工业废水能引起生态系统的严重破坏，例如由于其减少了光通透性，对水生生命的光合作用的影响。用于去除纺织品废水染料的常规处理技术包括物理方法(凝固/絮凝)，膜分离 (超滤、反渗透)以及通过活性炭吸附去除。这些方法花费昂贵，还会导致污染物的相转移。由于某些染料的复杂结构使其抗生物降解，现有的微生物方法还不是处理废水的有效方法。染料的化学分解通常以两种不同的方式进行。染料可以使用稀盐酸或甲酸溶液在称为“增白”的方法中部分除去。或者，染料可使用还原剂、氧化剂和释放助剂在称为“脱色 (stripping)，，的方法中分解。通常使用基于过氧化氢(H2O2)的氧化，因为它与氯或常规的漂白剂(即，次氯酸盐)相比，能产生更清洁的副产物。已知H2O2对蒽醌或偶氮染料无效，这些染料被广泛使用并造成了严重的环境影响。此外，使用H2O2的脱色反应很慢。较快的氧化性脱色方法利用了高级氧化技术(AOP)，其通常使用臭氧(O3)、用紫外光活化的臭氧(UV)/O3、用UV活化的过氧化氢UV (UV/H202)，或产生较强氧化剂如过酸的“活化剂”。由于化学活化剂或紫外线辐射能的花费，这些方法难以大规模使用。脱色通常使用碱性的连二亚硫酸钠、氯酸钠、次氯酸钠或二氧化硫脲。这些化学物是环境不友好的，从健康和安全的方面需要谨慎处理。仍然存在对环境温和的更有效的染料脱色方法的需求。鍵提供了对水性介质中染料脱色的方法和组合物。一方面，提供了使染料脱色的方法，包括使染料接触包含下列成分的组合物过水解酶(perhydrolase)、过水解酶的底物以及过氧化氢源；其中在过氧化氢存在下，通过过水解酶对底物的催化作用产生过酸；并且其中所述染料与该组合物在一定条件下接触一段时间，所述条件和时间适合于产生足以使至少部分染料脱色的量的过酸。在一个相关方面，提供了使染料脱色的方法，包括使染料接触酶法产生的过酸，其中所述染料被过酸脱色至超过没有酶法产生的过酸的等价组合物脱色的程度。在另一个相关方面，提供了使染料脱色的方法，包括使染料接触包含过水解酶、过水解酶的底物以及过氧化氢源的组合物，其中在过氧化氢存在下，通过过水解酶对底物的催化作用产生过酸；其中所述染料与该组合物在一定条件下接触一段时间，所述条件和时间适合于产生足以使染料脱色，包括改变染料的色调、色度、色泽或亮度的过酸。在某些实施方案中，所述染料存在于废水中。在某些实施方案中，所述废水来自纺织品加工过程。在某些实施方案中，所述纺织品加工过程是纺织品染色过程。在某些实施方案中，所述废水来自纸浆或纸加工过程。在某些实施方案中，所述纸浆或纸加工过程是脱黑过程。在不同的实施方案中，水性介质中至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约 70%、至少约80%、至少约90%、或甚至至少约95%的染料被脱色。在特定的实施方案中， 至少40%的染料被脱色。在特定的实施方案中，至少50%的染料被脱色。在特定的实施方案中，至少60%的染料被脱色。在特定的实施方案中，至少70%的染料被脱色。在特定的实施方案中，至少80%的染料被脱色。在某些实施方案中，与缺乏过水解酶的等价方法中被脱色的染料的量相比，废水中至少两倍的染料被脱色。在某些实施方案中，与缺乏过水解酶的等价方法中被脱色的染料的量相比，废水中至少三倍的染料被脱色。在某些实施方案中，过水解酶催化酯底物的过水解，过水解水解比例等于或大于 1。在某些实施方案中，过水解酶包含如SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列或其变体或同源物。在某些实施方案中，过水解酶包含与SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列具有至少70%氨基酸序列同源性的氨基酸序列。在某些实施方案中，过水解酶是具有SEQ ID N0:1所示的氨基酸序列的过水解酶的S54V变体。在某些实施方案中，过水解酶包含与SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列具有至少70%氨基酸序列同源性的氨基酸序列。在某些实施方案中，过水解酶包含与SEQ ID NO :1或3所示的氨基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%氨基酸序列同源性的氨基酸序列。在某些实施方案中，酯底物选自丙二醇二乙酸酯(PGDA)、乙二醇二乙酸酯 (EGDA)、三乙酸甘油酯(tracetin)、乙酸乙酯和三丁酸甘油酯。在特定的实施方案中，所述底物是PGDA。在特定的实施方案中，所述底物是EGDA。在某些实施方案中，过氧化氢以过氧化氢源的形式提供，所述过氧化氢源选自过氧化氢、过碳酸盐和过硼酸盐。在某些实施方案中，所述染料是纺织品染料。在某些实施方案中，底物中羧酸酯部分和酶分子的摩尔比值为约4 χ105/1至约4 χ 106/1。在某些实施方案中，底物中羧酸酯部分和水性介质中酶分子的摩尔比值为至少约2 χ 105/1。在某些实施方案中，底物中羧酸酯部分和酶分子的摩尔比值为至少约4 χ 105/1。在某些实施方案中，底物中羧酸酯部分和染料分子的摩尔比值为至少约 1,000/1.在某些实施方案中，酯底物中羧酸酯部分和染料分子的摩尔比值为约1，000/1至约10，000/1。在某些实施方案中，过水解酶的浓度小于等于5 X 10_%。另一方面，提供了用于氧化染料脱色方法的组合物，该组合物包含过水解酶、过水解酶的底物以及过氧化氢源，底物/酶/过氧化物的摩尔比值适合于使水性介质中的染料氧化性脱色。在某些实施方案中，底物中羧酸酯部分和水性介质中酶分子的摩尔比值为至少约2 χ 105/1。在某些实施方案中，底物中羧酸酯部分和水性介质中酶分子的摩尔比值为至少约4 χ 105/lo在某些实施方案中，底物中羧酸酯部分和酶分子的摩尔比值为约4 χ 105/1至约4 χ 106/1。在某些实施方案中，底物中羧酸酯部分和染料分子的摩尔比值为至少约1,000/1.在某些实施方案中，底物中羧酸酯部分和染料分子的摩尔比值为约1，000/1 至约10，000/1。在某些实施方案中，过水解酶的浓度小于等于5 χ 10_%。另一方面，提供了用于氧化染料脱色方法的套盒(kit of parts)，所述套盒包括任何前述的组合物。根据说明书，本发明的方法和组合物的这些和其他方面以及实施方案将是很明显的。附图简述

图1是显示室温下反应黑5任选地在EGDA或EGDA和过水解酶存在下的氧化性脱色的图。图2是显示室温下反应黑5使用不同比例的EGDA、酶和过氧化氢的氧化性脱色的图，。图3是显示室温下反应黑5脱色百分比的图。图4是显示不同的EGDA/酶/ 比例下，室温下反应黑5脱色百分比的图。图5A和5B是显示酶和H2A比例的变化对室温下反应黑5脱色速率的影响的图。图6是显示将温度升高至40°C对反应黑5氧化性脱色速率的影响的图。图7A和7B分别是显示将温度升高至40°C和45°C对不同比例的EGDA和酶的反应黑5脱色的影响的图。图8A和8B分别是显示在不同EGDA/酶/ 比例下，在40°C和45°C时反应黑5 脱色百分比的图。图9是显示EGDA/酶/ 比例对室温下反应紫5R的氧化性脱色影响的图。图10是显示室温下反应紫5R脱色百分比的图。图IlA和IlB分别是显示在两种波长，325nm和560nm监测下，不同的EGDA/酶/ H2O2比例对40°C下反应紫5R脱色的影响的图。图12A和12B是显示在325nm监测下，25°C (亮色带)和40°C (暗带)下反应紫 5R脱色百分比的图。图13是显示在560nm监测下，不同的EGDA/酶/ 比例在40°C下2小时对反应紫5R脱色的影响的图。发明详述定义在详细描述本发明的组合物和方法之前，为清楚的目的而定义下列术语。未定义的术语具有相关领域中使用的通常含义。本文所用的“过水解酶”是能够催化过水解反应，产生足够高的量的用于所述氧化染料脱色方法的过酸的酶。通常，过水解酶具有高的过水解与水解比值。在某些实施方案中，过水解酶包括、由或基本上由SEQ ID NO 1所示的耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)过水解酶的氨基酸序列或其变体或同源物组成。在某些实施方案中，过水解酶包含酰基转移酶和/或芳基酯酶活性。
本文所用的术语“过水解”是指从酯和过氧化氢底物产生过酸的反应。在某些实施方案中，过水解反应由过水解酶催化，例如酰基转移酶或芳基酯酶。在某些实施方案中，过酸通过式R1C ( = 0) OR2的酯底物在过氧化氢(H2O2)存在下通过过水解产生，其中R1和&是相同或不同的有机基团。在某些实施方案中，-0 是-0H。在某些实施方案中，-0 被-NH2 替换。在某些实施方案中，过酸由羧酸或酰胺底物的过水解产生。本文所用的“有效量的过水解酶”是指产生本文所述脱色效应所需要的过水解酶的量。该有效量可由本领域技术人员参考本说明书确定，并基于下列若干因素，例如所使用的具体酶变体，使用的PH值，使用的温度等，以及所需要的结果(例如漂白的程度)。本文所用的术语“过酸”是指衍生自羧酸酯的分子，其由羧酸酯与过氧化氢反应生成高反应性的具有通式RC( = 0)00H的产物。所述过酸产物能够将其一个氧原子转移至另一个分子，例如染料。该转移氧原子的能力使得过酸，例如过乙酸能够作为漂白剂。当涉及含有过水解酶的氧化染料脱色系统时，本文所用的“酯底物”是指含有酯键的过水解酶底物。包含脂肪族和/或芳族羧酸和醇的酯类可用作过水解酶的底物。在某些实施方案中，酯源是乙酸酯。在某些实施方案中，酯源选自以下一种或多种丙二醇二乙酸酯、乙二醇二乙酸酯、三乙酸甘油酯、乙酸乙酯和三丁酸甘油酯。在某些实施方案中，酯源选自一种或多种下列酸的酯甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、正十二烷酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和油酸。本文所用的术语“过氧化氢源”是指能产生过氧化氢的分子，例如原位产生。过氧化氢源包括过氧化氢本身，以及能自发或酶促产生作为反应产物的过氧化氢的分子。所述分子包括例如过硼酸盐和过碳酸盐。本文所用的术语“过水解和水解的比值”是指是在限定的条件下和限定的时间内， 由过水解酶从酯底物酶促产生的过酸与酶促产生的酸的量(例如以摩尔计)的比值。在一些实施方案中，使用WO 05/056782提供的试验方法来确定该酶产生的过酸和酸的量。本文所用的术语“酰基”是指通式RCO-的有机基团，其通过从有机酸除去-OH基团获得。通常，酰基名称具有后缀“_oyl，”例如甲酰氯CH3CO-Cl是从甲酸CH3CO-OH形成的酰氯)。本文所用的术语“酰化”是指分子的一个取代基被酰基替换的化学转化，或酰基进入分子的过程。本文所用的术语“转移酶”是指催化官能团从一个底物向另一底物转移的酶。例如，酰基转移酶可将酯底物上的酰基转移至过氧化氢底物形成过酸。本文所用的术语“产生过氧化氢的氧化酶”是指催化氧化/还原反应的酶，其使用分子氧(O2)作为电子受体。在该反应中，氧被还原成水(H2O)或过氧化氢(H2O2)。本文所用的合适的氧化酶是能在其底物上产生过氧化氢(相对于水)的氧化酶。本文所用的合适的产生过氧化氢的氧化酶及其底物的实例是葡萄糖氧化酶和葡萄糖。其他能用于产生过氧化氢的氧化酶包括乙醇氧化酶、乙二醇氧化酶、甘油氧化酶、氨基酸氧化酶等等。在某些实施方案中，产生过氧化氢的氧化酶是碳水化合物氧化酶。本文所用的术语“纺织品”是指纤维、纱、织物、衣服和非针织品。该术语包括天然、 合成(例如生产的)纺织品和各种天然和合成的混合物。因此，术语“纺织品”是指未加工和加工的纤维、纱、针织品或编织纤维、非针织品和衣服。在某些实施方案中，纺织品含有纤会佳·ο本文所用的术语“织物”是指加工的纤维和/或纱的集合，其具有与其厚度有关的实质表面积，以及获得该集合的有用的机械强度的足够粘聚力。本文所用的术语“非棉纤维素的”纤维、纱或织物表示主要由基于纤维素的非棉的成分组成的纤维、纱或织物。所述成分的实例包括亚麻布、苎麻、黄麻、亚麻、人造丝、溶纺纤维素纤维(lyocell)、醋酸纤维素、竹子和其他类似的来自非棉的纤维素的成分。本文所用的术语“纯化的”和“分离的”是指从至少一种天然相关的成分中取得的样品和/或材料(例如蛋白质、核酸、细胞等)中污染物的去除。例如该术语可以指基本上或实质上不含通常在其天然状态(例如完整的生物系统)下相伴的成分的材料。本文所用的术语“多核苷酸”是指任何长度以及任何三维结构和单或多链(例如单链、双链、三螺旋等)的聚合形式的核苷酸，其含有脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和/或脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的类似物或修饰形式，包括修饰的核苷酸或碱基或其类似物。 因为遗传密码是简并的，可使用一种以上密码子编码特定的氨基酸。可使用任何类型的修饰的核苷酸或核苷酸类似物，只要该多核苷酸保留了使用条件下所需的功能即可，包括增加了核酸酶抗性的修饰(例如脱氧、2' -Ο-Me、硫代磷酸酯等)。也可掺入标记用于检测或捕获，例如放射性或非放射性标记或锚，例如生物素。术语多核苷酸还包括肽核酸(PNA)。 多核苷酸可以是天然的或非天然的。术语“多核苷酸”和“核酸”和“寡核苷酸”在本文中可交换使用。多核苷酸可含有RNA、DNA或两者，和/或其修饰形式和/或类似物。核苷酸序列可以被非核苷酸成分中断。一个或多个磷酸二酯键可以被可选的连接基团替换。这些可选的连接基团包括但不限于其中磷酸酯被P (O)S ( “硫代酯”)、P(S)S( “二硫代酯”)、(0) NR2 ( “酰胺化物”)1(0)1 、？(0)( ’、0)或012( “甲缩醛”)替换的实施方案，其中R或R’各自独立是H或取代或未取代的烷基(1-20C)，其任选含有醚键(-0-)、芳基、链烯基、环烷基、 环烯基或芳烷基(araldyl)。并非多核苷酸中所有键都必须是相同的。多核苷酸可以是线性或环状，或包含线性和环状部分的组合。本文所用的“多肽”是指任何由氨基酸组成、本领域技术人员公认为蛋白质的成分。本文使用常规的单字母或三字母氨基酸残基编码。术语“多肽”和“蛋白质”在本文中可交换使用，是指任何长度的氨基酸聚合物。所述聚合物可以是直链或支链的，其可以包含修饰的氨基酸，并且可被非氨基酸中断。该术语还包括被天然或人工修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他处理或修饰，例如与标记组分缀合等等。该定义还包括，例如含有一种或多种氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸) 以及本领域已知的其他修饰的多肽。本文所用的功能和/或结构类似的蛋白质被认为是“相关蛋白质”。在某些实施方案中，这些蛋白质来源于不同的属和/或种，包括有机体的不同类别的差异(例如细菌蛋白质和真菌蛋白质)。在其他实施方案中，相关蛋白质来自同一种属。实际上，本文所述的过程、方法和/或组合物不意味着限定至任何特定来源的相关蛋白质。此外，术语“相关蛋白质”包括三级结构同源物和一级结构同源物。在其他实施方案中，该术语包括免疫交叉反应性的蛋白质。本文所用的术语“衍生物”是指通过向C-和N-末端中的任一端或两端加入一个或多个氨基酸，在氨基酸序列中一个或许多不同位点处替换一个或多个氨基酸，和/或在蛋白质任一端或两端、或者在氨基酸序列的一个或多个位点处删除一个或多个氨基酸，和/ 或在氨基酸序列的一个或多个位点处插入一个或多个氨基酸，从而由一种蛋白质衍生出的蛋白质。蛋白质衍生物的制备优选地通过修饰编码天然蛋白质的DNA序列、将该DNA序列转化入合适的宿主以及表达该修饰的DNA序列以形成衍生蛋白质来完成。相关(和衍生)蛋白质包括“变体蛋白质(variant proteins) ”。在一些实施方案中，变体蛋白质不同于母体蛋白质(例如野生型蛋白质)并且彼此不同，不同之处在于少数的氢基酸残基。不同的氨基酸残基的数目可以是一个或多个，优选地是1、2、3、4、5、10、15、 20、30、40、50或更多的氨基酸残基。在一些方面，相关蛋白质和特定的变体蛋白质具有至少 35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、 94^^95%,96^^97^^98%或甚至99%或更高的氨基酸序列同一性，此外，相关蛋白质或变体蛋白质可以指，在重要区域的数目上不同于另一相关蛋白质或母体蛋白质的蛋白质。 例如，在一些实施方案中，变体蛋白质具有1、2、3、4、5或10个不同于母体蛋白质的相应的重要区域。重要区域包括结构特征、保守性区域、表位、结构域、基序等。适于产生本文所述酶的变体的方法是本领域已知的，包括但不限于位点饱和诱变、扫描诱变、插入诱变、随机诱变、定点诱变和定向进化以及各种其它重组方法。 本文所用的术语“类似序列，，是指在蛋白质中，提供了与目标蛋白质(即，通常是原始的目标蛋白质)相似的功能、三级结构和/或保守残基的序列。例如，在含有α螺旋或β片层结构的表位区域中，类似序列中的置换氨基酸优选地维持相同的特定结构。该术语也指核苷酸序列以及氨基酸序列。在一些实施方案中，开发出类似序列，以使置换氨基酸导致产生显示出相似的或改进的功能的变体酶。在一些实施方案中，目标蛋白质中的氨基酸的三级结构和/或保守残基被定位在感兴趣的片段或部分或其附近。因此，在感兴趣的片段或部分含有例如α螺旋或β片层结构的情况下，置换氨基酸优选保持该特定结构。本文所用的术语“同源蛋白质”是指与参照蛋白质有相似活性和/或结构的蛋白质。同源不意味着一定在进化上相关。因此，该术语意图包括从不同有机体得到的相同、相似或相应的酶(即，在结构和功能方面)。在一些实施方案中，需要鉴定出和参照蛋白质有相似的四级、三级和/或一级结构的同源物，在一些实施方案中，同源蛋白质诱导和参照蛋白质类似的免疫应答。在一些实施方案中，同源蛋白质被加工产生具有所需活性的酶。可以用本领域中已知的任何合适方法来确定序列间的同源性程度(参见，例如 Smith 禾口 Waterman(1981)Adv. Appl. Math. 2 :482 ;Needleman 禾口 Wunsch (1970) J. Mol. Biol. ,48 443 ；Pearson 和 Lipman (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :2444 ；程序例如 GAP, BESTFIT, FASTA 和 TFASTA，在威斯康星遗传学软件包中(Genetics Computer Group, Madison，WI)；和 Devereux 等人(1984)Nucleic Acids Res. 12 :387-395)。例如，PILEUP是确定序列同源性水平的有用程序。PILEUP使用渐进式配对比较， 从一组相关序列创建出多序列比对。它也能绘出树图，显示出用来创建该比对的聚类关系。 PILEUP应用Feng与Doolittle的渐进比对方法的简化方法(Feng和Doolittle (1987) J. Mol. Evol. 35 =351-360)。该方法和 Higgins 与 Sharp 描述的方法相似(Higgins 和 Sharp (1989) CABI0S5 :151-153)。有用的 PILEUP 参数包含默认的缺口权重(gap weight) 值3. 00、默认的缺口长度权重值0. 10和加权的末端缺口(weighted end gaps)。合适算法的另一例子是 BLAST 算法，由 Altschul 等人描述(Altschul 等人(1990) J. Mol. Biol. 215 403-410 ；和Karlin等人(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA90 :5873-5787)。一个特别有用的 BLAST 程序是 WU-BLAST-2 程序(参见 Altschul 等人(1996) Meth. Enzymol. 266 :460-480)。 参数“W”、“T”、和“X”确定比对的敏感性和速度。BLAST程序使用的默认值是字符长度 (W) 11，BL0SUM62 记分矩阵(参见 Henikoff 和 Henikoff (1989)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 :10915)比对(B) 50，期望值(E) 10，Μ，5，N，_4，和两条链比较。当涉及至少两条核酸或多肽时，本文所用的术语“基本上类似”和“基本上相同”通常表示与参比序列(即野生型)相比，具有至少约40%同一性、更优选至少约50%同一性、 更优选至少约60%同一性、优选至少约75%同一性、更优选至少约80%同一性、更优选至少约90 %、至少约91%、至少约92 %、至少约93 %、至少约94 %、至少约95 %、至少约96 %、 至少约97%、至少约98%或甚至至少约99%序列同一性的多核苷酸或多肽。序列同一性可用已知的程序如BLAST、ALIGN和CLUSTAL使用标准参数确定(参见例如Altschul，等人(1990) J. Mol. Biol. 215 :403-410 ；Henikoff 等人(1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 10915 ；Karin 等人(1993) Proc. Natl. Acad. Sci USA 90 :5873 ；以及 Higgins 等人(1988) Gene 73:237-244)。用于进行BLAST分析的软件可在国家生物技术信息中心获得。同样可使用 FASTA(Pearson 等人(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :2444-2448)搜索数据库。 两条多肽基本上相同的一个特征是第一条多肽与第二条多肽具有免疫交叉反应性。通常， 通过保守性氨基酸替换区分的多肽是免疫交叉反应的。这样，当一条多肽和第二条的区别仅仅在于保守性替换时，它们是基本上相同的。两条核酸序列基本上相同的另一个特征是两条分子在严格条件下(例如在中到高的严格条件的范围内)互相杂交。本文所用的“野生型”和“天然”蛋白质是天然发现的那些蛋白质。术语“野生型序列”和“野生型基因”在本文中可交换使用，指在宿主细胞中固有的序列或天然存在的序列。 在一些实施方案中，野生型序列是指感兴趣的序列，它是蛋白质工程项目的起始点。编码天然存在的蛋白质的基因可以根据本领域技术人员已知的常规方法得到。方法通常包括，合成具有推定的编码目标蛋白质的区域的序列的标记探针，从表达该蛋白质的生物体制备出基因组文库，和通过与探针杂交来筛选文库中感兴趣的基因。然后阳性杂交克隆被绘图并测序。本文所用的术语“染色”是指对例如纺织品施加颜色，尤其是通过浸渍在着色溶液中。本文所用的术语“染料”是指对所应用的底物具有亲和性的有色物质(S卩，生色团)，本文中描述了多种类型的染料。本文所用的术语“脱色”是指从例如水性介质中通过破坏、修饰或去除染料从而消除或淡化颜色。在某些实施方案中，脱色定义为从水性介质中去除的颜色百分比。除去的颜色的量可通过比较用过水解酶处理后的颜色水平(即残余颜色水平)和起始的水性介质中的水平(即原始颜色水平)确定，使用已知的分光光度法或目检方法。本文所用的术语“原始颜色水平”是指在接触本文所述的过水解酶之前，包含至少一种染料成分的水性介质的颜色水平。原始颜色水平可使用已知的分光光度法或目检方法测定。 本文所用的术语“残余颜色水平”是指在接触本文所述的过水解酶之后，包含至少一种染料成分的水性介质的颜色水平。原始颜色水平可使用已知的分光光度法或目检方法测定。本文所用的“水性介质”是主要包含水作为溶剂的溶液和/或混悬液。水性介质通常包括至少一种需要脱色的染料，以及任意数目的溶解或混悬成分，包括但不限于表面活性剂、盐类、缓冲剂、稳定剂、络合剂、螯合剂、增量组分(builders)、金属离子、其他酶和底物等。示例性的水性介质是纺织品染色溶液。所述水性介质中也可存在诸如纸浆、纺织品物体、纺织品纤维和其他固体材料等物质或与之接触。本文所用的“包装”是指能够以便于操作和运输的形式提供过水解酶、过水解酶的底物和/或过氧化氢源的容器。示例性的包装包括盒、管、罐、桶、包，甚至罐车。本文所用的术语“接触”表示在水溶液存在下、通常是在水溶液中孵育。本文所用的单数冠词“一种”和“该”包括复数形式，除非上下文有明确的相反指示。所有本文引用的参考文献都整体引入本文作为参考。除非另外说明，否则以下缩写/首字母缩略词具有下列含义cDNA互补 DNA
DNA脱氧核糖核酸
EC酶学委员会
kDa千道尔顿
MW分子量
SDS-PAGE 十二烷基疏酸枘聚丙稀醜腰凝胶电泳
w/v重量/体积
w/w重量/重量
v/v体积/体积
wt%重量百分数
°C摄氏度
H20水
H202过氧化氢
dHjO或DI 去离子水
dIHjO去离子 7jC，Milli-Q 过滤
g或gm克
yig微克
mg毫克
kg千克
jiL和微升
mL和ml毫六
mm毫米
Jim微米
M摩尔/升
mM毫摩尔/升
^lM##尔/升U单位ppm百万分之sec 和〃秒min 和’分hr小时ETOH乙醇eq.当量N正常CI颜色指数CAS化学文摘社过水解酶本发明用于氧化染料脱色的组合物和方法的一个特征是存在一种或多种过水解酶。在某些实施方案中，所述过水解酶是天然存在的酶。在某些实施方案中，过水解酶包括、由或主要由与天然存在的过水解酶的氨基酸序列具有至少约70^^75^^80%,85%、 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或甚至 99. 5% 同一性的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，所述过水解酶来自微生物来源，例如细菌或真菌。在某些实施方案中，过水解酶是天然存在的耻垢分枝杆菌过水解酶或其变体。该酶、其酶性质、结构和众多变体和同源物描述于国际专利申请公开号WO 05/056782A和WO 08/063400A,以及美国专利申请公开号US2008145353和US2007167344中，它们引入本文作为参考。在某些实施方案中，过水解酶包括、由或主要由SEQ ID NO :1所示氨基酸序列或其变体或同源物组成。在某些实施方案中，过水解酶包括、由或主要由与SEQ ID N0:1所示氨基酸序列具有至少约 70%,75%,80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%、或甚至99. 5%同一性的氨基酸序列组成。耻垢分枝杆菌过水解酶的氨基酸序列如下(SEQ ID NO 1) =MAKRILCFGDSLTffGffVPV EDGAPTERFAPDVRWTGVLAQQLGADFEVIEEGLSARTTNIDDPTDPRLNGASYLPSCLATHLPLDLVIIMLGTNDT KAYFRRTPLDIALGMSVLVTQVLTSAGGVGTTYPAPKVLVVSPPPLAPMPHPWFQLIFEGGEQKTTELARVYSALAS FMKVPFFDAGSVISTDGVDGIHFTEANNRDLGVALAEQVRSLL相应的编码耻垢分枝杆菌过水解酶的多核苷酸序列如下所示(SEQ ID NO 2)5 ‘ -ATGGCCAAGCGAATTCTGTGTTTCGGTGATTCCCTGACCCTGGGGCTGGGTCCCCGTCGAAGAC GGGGCACCCACCGAGCGGTTCGCCCCCGACGTGCGCTGGACCGGTGTGCTGGCCCAGCAGCTCGGAGCGGACTTCGA GGTGATCGAGGAGGGACTGAGCGCGCGCACCACCAACATCGACGACCCCACCGATCCGCGGCTCAACGGCGCGAGCT ACCTGCCGTCGTGCCTCGCGACGCACCTGCCGCTCGACCTGGTGATCATCATGCTGGGCACCAACGACACCAAGGCC TACTTCCGGCGCACCCCGCTCGACATCGCGCTGGGCATGTCGGTGCTCGTCACGCAGGTGCTCACCAGCGCGGGCGGCGTCGGCACCACGTACCCGGCACCCAAGGTGCTGGTGGTCTCGCCGCCACCGCTGGCGCCCATGCCGCACCCCTGGT TCCAGTTGATCTTCGAGGGCGGCGAGCAGAAGACCACTGAGCTCGCCCGCGTGTACAGCGCGCTCGCGTCGTTCATG AAGGTGCCGTTCTTCGACGCGGGTTCGGTGATCAGCACCGACGGCGTCGACGGAATCCACTTCACCGAGGCCAACAA TCGCGATCTCGGGGTGGCCCTCGCGGAACAGGTGCGGAGCCTGCTGTAA-3'在某些实施方案中，所述过水解酶包括在等价于如SEQ ID NO=I所示耻垢分枝杆菌过水解酶氨基酸序列的一个或多个氨基酸位点上的一个或多个替换。在某些实施方案中，所述过水解酶包括任何一种选自下列氨基酸替换或其组合M1，K3，R4，15，L6，C7，D10, Sll, L12, T13, W14, W16, G15, V17, P18, V19, D21, G22, A23, P24, T25, E26, R27, F28, A29, P30, D31, V32, R33, W34, T35, G36, L38, Q40, Q41, D45, L42, G43, A44, F46, E47, V48, 149， E50, E51, G52, L53, S54, A55, R56, T57, T58, N59, 160，D61, D62, P63, T64, D65, P66, R67, L68, N69, G70, A71, S72, Y73, S76, C77, L78, A79, T80, L82, P83, L84, D85, L86, V87, N94, D95, T96, K97, Y99F100, R101, R102, P104, L105, D106, 1107，A108, L109, G110, Mill, S112, V113, L114, V115, T116, Q117, V118, L119, T120, S121, A122, G124, V125, G126, T127, T128, Y129, P146, P148, W149, F150, 1153，F154, 1194，以及 F196。在某些实施方案中，所述过水解酶包括在等价于如SEQ ID NO=I所示耻垢分枝杆菌过水解酶氨基酸序列的一个或多个氨基酸位点上的一个或多个下列替换L12C、Q或G ； T25S、G 或 P ；L53H、Q、G 或 S ；S54V、L A、P、T 或 R ；A55G 或 T ；R67T、Q、N、G、E、L 或 F ；K97R ； V125S、G、R、A 或 P ；F154Y ；F196G。在某些实施方案中，所述过水解酶包括在等价于如SEQ ID NO :1所示耻垢分枝杆菌过水解酶氨基酸序列的氨基酸位点上的氨基酸替换的组合L12I S54V ；L12M S54T ； L12T S54V ；L12Q T25S S54V ；L53H S54V ； S54P V125R ；S54V V125G ；S54V F196G ；S54V K97R V125G ；或 A55GR67T K97R V125G。在特定的实施方案中，所述过水解酶是耻垢分枝杆菌过水解酶的S54V变体，其如下所示(SEQ ID NO :3 ;S54V 替换在下划线处显示)MAKRILCFGDSLTWGWVPVEDGAPTERFAPDV RWTGVLAQQLGADFEVIEEGLVARTTNIDDPTDPRLNGASYLPSCLATHLPLDLVIIMLGTNDTKAYFRRTPLDIAL GMSVLVTQVLTSAGGVGTTYPAPKVLVVSPPPLAPMPHPWFQLIFEGGEQKTTELARVYSALASFMKVVPFFDAGSV ISTDGVDGIHFTEANNRDLGVALAEQVRSLL在某些实施方案中，所述过水解酶包括S54V取代，但同时与SEQ ID NO :1或3所示氨基酸序列具有至少约 70%,75%,80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或甚至99. 5%的同一性。在某些实施方案中，所述过水解酶具有至少1的过水解水解比值。在某些实施方案中，所述过水解酶具有超过1的过水解水解比值。在某些实施方案中，所述过水解酶以与要脱色的染料为一定的摩尔比提供。在某些实施方案中，该摩尔比为约1/10,000至约1/100，或甚至约1/5, 000至约1/100。在某些实施方案中，染料脱色过程中所述过水解酶在水性介质中的浓度为约IO-9M 至约1(Γ5Μ、约1(Γ8Μ至约1(Γ5Μ、约1(Γ8Μ至约1(Γ6Μ、约5 χ 1(Γ8Μ至约5 χ 10〃Μ、或甚至约 1(Γ7Μ至约5 χ 1(ΓΜ，例如约1.7 χ 1(Γ7至约3.4 χ IO-7M0在特定的实施方案中，约0. 2 μ M 至约0. 5 μ M的过水解酶被用于使包含约34 μ M染料的水性介质脱色。在某些实施方案中，所述过水解酶的量低于要改善脱色效果的预定量。认为过量的酶产生不需要的副反应，包括酶法产生的过酸的降解，并且染料脱色在某些条件下最有效。因此，在某些实施方案中，染料脱色过程中水性介质中过水解酶的浓度低于约10_6M、低于约5 χ 1(ΓΜ，或甚至低于约10_7M。在特定的实施方案中，染料脱色过程中水性介质中过水解酶的浓度低于约3. 4 χ ΙΟ—、，或甚至低于约1.7 χ 1(ΓΜ。这些值通常是指染料浓度为约34 μ M的时候，并且可根据水性介质中染料的实际浓度进行调节。尽管在脱色反应中使用的过水解酶的绝对量可以根据要脱色的染料的量增加或减少，但通常认为长的孵育时间(而非更高的酶浓度)对于较多量的染料脱色是优选的。酯底物本发明用于氧化染料脱色的组合物和方法的另一个特征是作为过水解酶底物的酯分子的存在，其用于在过氧化氢的存在下产生过酸。在某些实施方案中，所述酯底物是脂肪族和/或芳族羧酸或醇的酯。所述酯底物可以是单、双或多酯，或其混合物。例如，所述酯底物可以是羧酸和一元醇(单价，例如乙酸乙酯、乙酸丙酯)，两个羧酸和二醇(例如丙二醇二乙酸酯(PGDA)，乙二醇二乙酸酯(EGDA)， 或混合物，例如2-乙酰氧基1-丙酸酯，其中丙二醇在醇基2上具有乙酸酯，在醇基1上具有丙酯)，或三个羧酸和三醇(例如，甘油三乙酸酯或与甘油或其他多价醇连接的乙酸酯/丙酸酯的混合物)。在某些实施方案中，酯底物是硝基醇的酯(例如2-硝基-1-丙醇)。在某些实施方案中，酯底物是聚合的酯，例如部分酰化的(乙酰化、丙酰化等)聚羧基醇、乙酰化的淀粉等等。在某些实施方案中，酯底物是一种或多种下列酸的酯甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、正十二烷酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和油酸。在某些实施方案中，使用三乙酸甘油酯、三丁酸甘油酯和其他酯类作为过酸形成的酰基供体。在某些实施方案中，酯底物是丙二醇二乙酸酯、乙二醇二乙酸酯或乙酸乙酯。在一个特定的实施方案中，酯底物是丙二醇二乙酸酯。如前所述，合适的底物可以是单价(即包含单个羧酸酯部分)或多价(即包含一个以上羧酸酯部分)。用于氧化性脱色的底物的量可根据底物分子中羧酸酯部分的数目进行调节。在某些实施方案中，水性介质中羧酸酯部分的浓度为约20-500mM，例如约40mM至约400mM、约40mM至约200mM、或甚至约60mM至约200mM。羧酸酯部分的示例性的浓度包括约 60mM、约 80mM、约 100mM、约 120mM、约 140mM、约 160mM、约 180mM、以及约 200mM。所述的底物量适合用于染料浓度为约34 μ M的脱色反应，可根据脱色染料的多少进行调节。在某些实施方案中，当所述酯底物是二价(例如EGDA情况下)时，其在要脱色的水性介质中的量为约10-200mM，例如约20mM至约200mM，约20mM至约IOOmM,或甚至约30mM 至约lOOmM。酯底物示例性的量包括约30mM、约40mM、约50mM、约60mM、约70mM、约80mM、约 90mM以及约100mM。如前所述，这些底物的量适合于染料浓度为约34 μ M的脱色反应，可根据脱色染料的多少进行调节。本领域技术人员可基于每分子的羧酸酯部分的数目方便地计算相应的三价或其他多价酯底物的量。在某些实施方案中，所述酯底物以相对于要脱色的染料的摩尔量为过量的摩尔量提供。在某些实施方案中，所述酯底物的羧酸酯部分以约20至约20，000倍的染料摩尔量提供。羧酸酯部分和染料分子的示例性摩尔比值为约100/1至约10，000/1、约1，000/1至约10，000/1，或甚至2，000/1至约6，000/1。在某些情况下，酯底物与染料分子的摩尔比值至少为2，000/1或至少6，000/1。
在某些实施方案中，当酯底物是二价时(例如在EGDA的情况下)，所述酯底物以染料摩尔量的约10至约10，000倍提供。酯底物和染料分子的示例性的摩尔比值为约50/1 至约5，000/1，约500/1至约5，000/1，或甚至1，000/1至约3，000/1。在某些情况下，酯底物和染料分子的摩尔比值为至少1，000/1，或至少3，000/1。如前所述，本领域技术人员可基于每分子的羧酸酯部分的数目方便地计算相应的三价或其他多价酯底物的量。在某些实施方案中，所述酯底物以相对于过水解酶过量的摩尔量提供。在某些实施方案中，羧酸酯部分和过水解酶的摩尔比值为至少约2 χ 105/1、至少约4 χ 105/1、至少约1 χ 106/1、至少约2 χ 106/1、至少约4 χ 106/1，或甚至至少约1 χ 107/1或更高。在某些实施方案中，所述酯底物以相对于过水解酶约4 χ 105/1至约4 χ 106/1的过量的摩尔量提供。在某些实施方案中，当酯底物是二价时(例如在EGDA的情况下)，酯底物和过水解酶的摩尔比值为至少约1 χ 105/1、至少约2 χ 105/1、至少约切105/1、至少约1 χ 106/1、 至少约2 χ 106/1，或甚至至少约5 χ 106/1或更高。在某些实施方案中，所述酯底物以相对于过水解酶约2 χ 105/1至约2 χ106/1的过量的摩尔量提供。本领域技术人员可基于每分子的羧酸酯部分的数目方便地计算相应的三价或其他多价酯底物的量。过氧化氢源本发明用于氧化染料脱色的组合物和方法的另一个特征是过氧化氢源的存在。通常，过氧化氢可直接提供(即，分批提供)或通过化学、电化学和/或酶方法连续产生(原位产生)。在某些实施方案中，过氧化氢源是过氧化氢本身。在某些实施方案中，过氧化氢源是加入水后产生过氧化氢的化合物。所述化合物可以是固体化合物。这样的化合物包括过氧化氢和各种无机或有机化合物的加合物，其中最广泛使用的是碳酸钠过氧化氢合物，也称过碳酸钠。在某些实施方案中，过氧化氢源是无机过氧化氢合物盐。无机过氧化氢合物盐的实例有过硼酸盐、过碳酸盐、过磷酸盐、过硫酸盐和过硅酸盐。无机过氧化氢合物盐通常是碱金属盐。其他过氧化氢源包括过氧化氢与沸石的加合物或脲过氧化氢。过氧化氢源可以是无额外保护的晶态形式和/或基本上纯的形式。对于某些过氧化氢合物盐，优选的形式是包括涂层的颗粒组合物，其提供了颗粒制品中过氧化氢合物盐较好的储存稳定性。适当的涂层包括无机盐类，例如碱金属硅酸盐、碳酸盐或硼酸盐或其混合物，或有机材料例如蜡、油或脂肪肥皂。在某些实施方案中，过氧化氢源是酶法产生过氧化氢的系统。在一个实施方案中， 所述酶法产生过氧化氢的系统包括氧化酶及其底物。适当的氧化酶包括但不限于，葡萄糖氧化酶、山梨醇氧化酶、己糖氧化酶、胆碱氧化酶、醇氧化酶、甘油氧化酶、胆固醇氧化酶、吡喃糖氧化酶、羧基醇氧化酶、L-氨基酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、谷氨酸氧化酶、肌氨酸氧化酶、赖氨酸氧化酶、乳酸氧化酶、香草基氧化酶、葡糖酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿酸氧化酶、草酸氧化酶和黄嘌呤氧化酶。以下反应式提供了酶法生成过氧化氢的偶联系统的实例。葡萄糖氧化酶
葡萄糖+H2O----------------------------------今葡糖酸+H2O2
+
过水解酶
H2O2 +酯底物-------------------------+醇+过酸所述H2A的生成并不意图限定为任何的特定的酶，因为任何与适当的底物产生 H2O2的酶均可使用。例如，可以使用已知来自乳杆菌属(Lactobacillus)的乳酸氧化酶从乳酸和氧气产生H202。所述反应的一个优点是酶法产生的酸(例如上述例子中的葡糖酸)可使碱性水溶液的PH值下降至过酸漂白最有效的pH范围内(即小于或等于pKa)。所述pH 的下降同样可直接由过酸的生成导致。其他能产生过氧化氢的酶(例如醇氧化酶、乙二醇氧化酶、甘油氧化酶、氨基酸氧化酶等)也可与酯底物和过水解酶组合使用产生过酸。当过氧化氢是通过电化学产生时，其可以例如使用供应氧气和氢气的燃料电池产生。在某些实施方案中，酯底物在要脱色的水性介质中以约10_200mM的量提供，例如约20mM至约200mM，约20mM至约IOOmM,或甚至约30mM至约lOOmM。酯底物示例性的量包括约30mM、约40mM、约50mM、约60mM、约70mM、约80mM、约90mM和约lOOmM。这些过氧化氢的量适合于染料浓度为约34 μ M的脱色反应，可根据脱色染料的多少进行调节。在某些实施方案中，所述过氧化氢以相对于要脱色的染料的摩尔量为过量的摩尔量提供。在某些实施方案中，所述过氧化氢以约10至约10，000倍的染料摩尔量提供。 过氧化氢和染料分子的示例性摩尔比值为约500/1至约5，000/1、或甚至1，000/1至约 3，000/1。在某些情况下，过氧化氢与染料分子的摩尔比值至少为1，000/1或至少3，000/1。在某些实施方案中，所述过氧化氢以相对于过水解酶过量的摩尔量提供。在某些实施方案中，过氧化氢和过水解酶的摩尔比值为至少约1 χ105/1、至少约2 χ 105/1、至少约 5 χ 105/1、至少约1 χ 106/1、至少约2 χ 106/1，或甚至至少约5 χ 106/1或更高。在某些实施方案中，过氧化氢以相对于过水解酶约2 χ 105/1至约2 χ 106/1的过量的摩尔量提 {共。某些情况下，可能需要在最终被处理的水性介质中加入过氧化氢酶以除去残余的过氧化氢。染料任何可被氧化性脱色的染料均可用本发明的方法处理。能够被本发明所述的方法氧化性脱色的染料的实例包括但不限于偶氮、单偶氮、叠氮基、硝基、咕吨、喹啉、蒽醌、三芳基甲烷、对偶氮基苯胺、吖嗪巧t嗪、均二苯代乙烯、苯胺和酞菁染料或其混合物。在一个实施方案中，所述染料是偶氮染料(例如反应黑5 (2，7-萘二磺酸，4-氨基-5-羟基-3，6- 二 G4-G2-(磺基氧基)乙基)磺酰基)苯基)偶氮)_四钠盐)、反应紫5、甲基黄、刚果红)。 在某些实施方案中，所述染料是蒽醌染料(例如活性蓝(remazol blue))、靛蓝(靛卡红)、 三芳基甲烷/对偶氮基苯胺染料(例如结晶紫、孔雀绿)，或基于硫的染料。在不同的实施方案中，所述染料是反应性的、指示的、分散的或色素染料。在某些实施方案中，所述染料是墨水的组分。在某些实施方案中，所述染料是适合将纺织品染色的分子。一类可使用酶法产生的过酸氧化脱色的染料是反应性染料。反应性染料是包含能与染色对象的表面，例如纺织品表面发生化学相互作用的活化的或可活化的官能团的生色团。所述相互作用可以是共价键的形式。示例性的官能团包括单氯三嗪、单氟氯三嗪、二氯三嗪、二氟氯嘧啶、二氯喹喔啉、三氯嘧啶、乙烯基酰胺、乙烯基砜等。反应性染料可具有超过一个官能团(例如双官能团反应性染料)，从而导致更高程度的固定在织物上。表1列出了示例性的反应性染料，其中C. I.=根据染色师和配色师协会⑴K)和美国纺织化学师和配色师协会(USA)的颜色指数，CAS =化学文摘社表1.示例性的反应性染料
权利要求
1.使染料脱色的方法，包括使染料接触包含下列成分的组合物过水解酶，过水解酶的底物，以及过氧化氢源；其中在过氧化氢存在下，通过过水解酶对底物的催化作用产生过酸；并且其中所述染料与该组合物在一定条件下接触一段时间，所述条件和时间适合于产生足以使至少部分染料脱色的量的过酸。
2.权利要求1的方法，其中所述染料存在于废水中。
3.权利要求2的方法，其中所述废水来自纺织品加工过程。
4.权利要求3的方法，其中所述纺织品加工过程是纺织品染色过程。
5.权利要求1的方法，其中所述废水来自纸浆或纸加工过程。
6.权利要求5的方法，其中所述纸浆或纸加工过程是脱墨过程。
7.前述权利要求任一项的方法，其中废水中至少40%的染料被脱色。
8.前述权利要求任一项的方法，其中与没有过水解酶的等价方法所脱色的染料量相比，废水中至少两倍的染料被脱色。
9.前述权利要求任一项的方法，其中与没有过水解酶的等价方法所脱色的染料量相比，废水中至少三倍的染料被脱色。
10.前述权利要求任一项的方法，其中过水解酶催化酯底物的过水解，过水解水解比例等于或大于1。
11.前述权利要求任一项的方法，其中过水解酶包含如SEQID NO :1所示的氨基酸序列或其变体或同源物。
12.前述权利要求任一项的方法，其中过水解酶包含与SEQID NO :1所示的氨基酸序列具有至少70%氢基酸序列同源性的氨基酸序列。
13.前述权利要求任一项的方法，其中过水解酶是具有SEQID NO :1所示的氨基酸序列的过水解酶的S54V变体。
14.前述权利要求任一项的方法，其中过水解酶包含与SEQID NO :3所示的氨基酸序列具有至少70%氨基酸序列同源性的氨基酸序列。
15.前述权利要求任一项的方法，其中酯底物选自丙二醇二乙酸酯(PGDA)、乙二醇二乙酸酯(EGDA)、三乙酸甘油酯、乙酸乙酯和三丁酸甘油酯。
16.前述权利要求任一项的方法，其中过氧化氢以过氧化氢源的形式提供，所述过氧化氢源选自过氧化氢、过碳酸盐和过硼酸盐。
17.前述权利要求任一项的方法，其中所述染料是纺织品染料。
18.前述权利要求任一项的方法，其中所述底物中羧酸酯部分和酶分子的摩尔比值为约 4 χ IO5/1 至约 4 χ 106/1。
19.前述权利要求任一项的方法，其中底物中羧酸酯部分和酶分子的摩尔比值为至少约 4 χ 105/1。
20.前述权利要求任一项的方法，其中底物中羧酸酯部分和染料分子的摩尔比值为约 1，000/1 至约 10，000/1。
21.前述权利要求任一项的方法，其中过水解酶的浓度小于或等于5χΚΤΜ。
22.用于氧化染料脱色方法的组合物，该组合物包含过水解酶、过水解酶的底物以及过氧化氢源，底物/酶/过氧化物的摩尔比值适合于使水性介质中的染料氧化脱色。
23.权利要求22的组合物，其中底物中羧酸酯部分和酶分子的摩尔比值为至少约4χ 105/1。
24.权利要求22的组合物，其中底物中羧酸酯部分和酶分子的摩尔比值为约4χ 105/1 至约 4 χ 106/1。
25.权利要求22的组合物，其中底物中羧酸酯部分和染料分子的摩尔比值为约 1，000/1 至约 10，000/1。
26.权利要求22的组合物，其中过水解酶浓度小于或等于5χ 10—1。
27.用于氧化染料脱色方法的套盒，所述套盒在包装中包含权利要求2216任一项的组合物。
全文摘要
使染料脱色的组合物和方法，包括使染料接触包含下列成分的组合物过水解酶、过水解酶的底物以及过氧化氢源，其中在过氧化氢存在下，通过过水解酶对底物的催化作用产生过酸，并且其中所述染料与该组合物在一定条件下接触一段时间，所述条件和时间适合于产生足以使至少部分染料脱色的量的过酸。所述过水解酶可以包含如SEQ ID NO1所示的氨基酸序列，优选的过水解酶是该酶的S54V变体。酯底物可以选自丙二醇二乙酸酯(PGDA)、乙二醇二乙酸酯(EGDA)、三乙酸甘油酯、乙酸乙酯和三丁酸甘油酯，过氧化氢可以是过氧化氢源的形式，所述过氧化氢源选自过氧化氢、过碳酸盐和过硼酸盐。还要求保护套盒。
文档编号C02F1/72GK102341354SQ201080010187
公开日2012年2月1日 申请日期2010年3月2日 优先权日2009年3月3日
发明者C·C·巴耐特, R·F·萨拉 申请人:丹尼斯科美国公司