一种利用罗丹明类荧光探针检测亚锡离子的方法
【专利摘要】本发明提供了一种利用罗丹明类荧光探针检测亚锡离子的方法，其特征在于，包括：分别将罗丹明类荧光探针溶液加入到NaOH/NaH2PO4缓冲溶液中得到多个含有荧光探针的缓冲体系，分别加入不同体积的亚锡离子溶液，得到不同浓度的亚锡离子溶液，静置，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为587nm的荧光强度，以亚锡离子的浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，得到线性关系曲线；将罗丹明类荧光探针溶液加入到NaOH/NaH2PO4缓冲溶液中得到含有荧光探针的缓冲体系，加入待测的亚锡离子溶液，静置，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为587nm的荧光强度，计算亚锡离子的浓度。本发明方法操作简单、检测快速、灵敏度高且选择性好。
【专利说明】
一种利用罗丹明类荧光探针检测亚锡离子的方法
技术领域
[0001] 本发明属于荧光探针材料检测方法领域，特别涉及一种利用罗丹明类荧光探针检 测亚锡离子的方法。
【背景技术】
[0002] 亚锡离子应用于预防龋齿的历史由来已久，作为人体生理活动所必需的微量元 素，大量证据表明Sn2+除了能有效抑制癌细胞的生成，还可促进蛋白质和核酸的合成，促进 身体的生长发育，还参与组成多种酶以及黄素酶的生物反应，从而增强体内环境的稳定性。 亚锡的缺乏可能会导致生长不良和听力丧失，但亚锡过多积累造成对锌离子代谢干扰，会 影响呼吸道和消化系统。
[0003] 亚锡离子具有很强的还原性，SnCl2是人们熟悉的还原剂。它能把许多金属离子还 原成低氧化态，甚至还原到金属。亚锡离子还有很强的配位性，在(合成化学，2006)报道了 1-(2-吡啶偶氮)-2-萘(PAN)与亚锡离子能很好的络合形成新的混合胶束具有很好的荧光 性能，从而达到检测亚锡的目的，利用荧光光谱法检测线能达到2ng · mg"1。
[0004] 目前，人们用来检测Sn2+的方法有火焰原子吸收光谱法、电位膜传感法及紫外/可 见分光光度法，相比于这些方法，荧光分析法具有操作简单，灵敏度高，选择性好的优势。 (八1^1 75^，2014，139,5223)报道了设计合成了两种用于真核和原核细胞的5112+荧光探针，其 检测线分别达到5.7 X 10-7和4.6 X 10-7。
【申请人】申请的中国专利201510869087.0 "检测汞离 子的反应型罗丹明类荧光探针及其制备与应用"，在乙腈溶液中，使用荧光光谱法，在激发 波长为560nm，检测发射波长为580nm，检测汞离子的浓度在0.89-60μΜ的范围达到一个很好 地线性，采用荧光探针法检测汞离子溶液，可实现对汞离子的实时和快速的检测，在环境检 测方面有较好的应用前景。
[0005] 罗丹明及其衍生物作为开/关形式的荧光探针，具有较高的荧光量子产率，较大的 摩尔消光系数，在可见光区具有较长的发射和吸收波长。螺旋状罗丹明内酰胺化合物本身 具有一定的结构张力，在与重金属粒子结合后，内酰胺氮原子的质子化将导致氮原子电荷 密度减少，从而引发螺旋中心C-N键的开裂，同时，断键后原本富电子的螺旋环将进行电荷 重排，形成更稳定的刚性平面大η键结构，从而产生荧光变化和颜色变化。和不同金属离子 作用后，所形成的作用不同，罗丹明衍生物会发生荧光和颜色的变化也各不相同。因而罗丹 明及其衍生物在作为探针检测重金属离子方面具有很大的发展前景。荧光分子探针具有灵 敏度高，专一性强，无损伤快速准确等特点在检测生物体内金属方面显示出了独特的优势， 并广泛应用于金属离子参与的生物学研究（111 〇坪.〇1加.4(^&，2012,381，2-14)。罗丹明8又 称玫瑰红Β，罗丹明基荧光探针具有良好的荧光性能和较小的细胞毒性，广泛应用于生物体 内离子及小分子的检测，生物大分子的分析和检测以及复杂生物体系的研究。该类荧光探 针在识别前后荧光呈现从无到有的增强型响应，具有很高的灵敏度，通过对识别基团的精 心选择和设计该类探针表现出良好的选择性和抗干扰性（Chem. Rev . 2012.112.1910-1956)。令人遗憾是目前很少见到是识别亚锡离子的罗丹明基荧光探针的报道。综上所述， 开发出了一种可检测亚锡离子的罗丹明基荧光探针对于研究亚锡离子的生物活性和药理 作用具有重要的应用前景。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种利用罗丹明类荧光探针检测亚锡离子的方法。
[0007] 为了达到上述目的，本发明提供了一种罗丹明类荧光探针在检测亚锡离子含量中 的应用。
[0008] 优选地，所述的罗丹明类荧光探针的结构式为：
[0009]
[0010] 本发明还提供了一种利用罗丹明类荧光探针检测亚锡离子的方法，其特征在于， 包括：
[0011]步骤1:配制罗丹明类荧光探针溶液；
[0012] 步骤2:配制亚锡离子溶液；
[0013] 步骤3:配制pH=6 · 0~7 · 0的NaOH/NaH2P〇4缓冲溶液；
[0014] 步骤4:分别将步骤1得到的罗丹明类荧光探针溶液加入到步骤3得到的NaOH/ NaH2P04缓冲溶液中得到多个含有荧光探针的缓冲体系，分别加入不同体积的步骤2所得的 亚锡离子溶液，得到不同浓度的亚锡离子溶液，静置，在激发波长为560nm的条件下，检测发 射波长为587nm的荧光强度，以亚锡离子的浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，得到线 性关系曲线；
[0015] 步骤5:将步骤1得到的罗丹明类荧光探针溶液加入到步骤3得到的NaOH/NaH2P〇4缓 冲溶液中得到含有荧光探针的缓冲体系，加入待测的亚锡离子溶液，静置，在激发波长为 560nm的条件下，检测发射波长为587nm的荧光强度，根据步骤4中得到的线性关系曲线，计 算亚锡离子的浓度。
[0016]优选地，所述的步骤1中的罗丹明类荧光探针的结构式为：
[0017]
[0018] 1 尤选地，所还的步骤1中的芕丹明类灾元侏针浴淞的配制万法包拈：称取一定摩尔 量的罗丹明类荧光探针在乙腈溶剂中配置成l〇〇mL浓度为lxl(T 3M的荧光探针溶液，然后取 lmL上述的浓度为1χ10-3Μ的荧光探针溶液加入到10mL容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇 匀，得到1x10、的荧光探针溶液，取lmL上述的浓度为1x10、的荧光探针溶液加入到lOmL 容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到lxl〇_5M的罗丹明类荧光探针溶液。
[0019] 更优选地，所述的乙腈溶剂的纯度为95~98wt%。
[0020] 优选地，所述的步骤2中的亚锡离子溶液的配制方法包括:称取一定摩尔量的亚锡 化合物在乙腈溶剂中配置成1 〇〇mL浓度为1 xl 0-3Μ的亚锡离子溶液，然后取lmL上述的浓度为 lx 10-3Μ的亚锡离子溶液加入到10mL的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为 1χ10_ 4Μ的亚锡离子溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T4M的亚锡离子溶液加入到10mL的容 量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为lxl(T 5M的亚锡离子溶液。
[0021] 更优选地，所述的亚锡化合物的纯度为95~98wt%。
[0022]优选地，所述的步骤3中的Na0H/NaH2P04缓冲溶液的配制方法包括:称取氢氧化钠 配制0. lmol/L的氢氧化钠溶液，称取磷酸二氢钠0.68g，加入0. lmol/L的氢氧化钠溶液 29 · lmL，用水稀释至100mL，得到pH=6 · 0~7 · 0的NaOH/NaH2P〇4缓冲溶液。
[0023] 更优选地，所述的磷酸二氢钠的纯度为95~98wt%，所述的氢氧化钠的纯度为95 ~98wt%。
[0024] 优选地，所述的步骤4中的罗丹明类荧光探针溶液的用量为10yL，所述的步骤5中 的罗丹明类荧光探针溶液的用量为l〇yL。
[0025] 优选地，所述的罗丹明类荧光探针对亚锡离子溶液的检测限达Ι.ΟμΜ。
[0026] 本发明的荧光探针在乙腈溶液中与亚锡离子发生络合，颜色由无色变成粉红色， 使用荧光光谱法，在激发波长为560nm，检测其发射波长为587nm，此荧光探针的荧光强度随 着亚锡离子浓度的增加而增加的特性，进行的高灵敏度检测。在亚锡离子的浓度为1.2-6.2 μΜ的范围内，荧光探针的荧光强度变化值与亚锡离子的浓度成良好的线性关系，相关系数 为0.993,最低检测线为Ο.ΙμΜ，本发明方法操作简单、检测快速、灵敏度高且选择性好，该荧 光探针对亚锡离子有很好的选择性，在环境检测方面具有较好的使用效果。
[0027] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0028] (1)本发明荧光探针能选择性识别亚锡离子，并且不受其它常见离子的干扰、荧光 强度高、荧光强度高。
[0029] (2)该探针适用于pH值范围为7.0-11.0,这个范围可以满足绝大多数生物样品的 要求，该探针的灵敏度高检测线可达到〇. ΙμΜ。
[0030] (3)采用本发明所制备的荧光探针进行亚锡离子的检测，检测过程简单方便、灵敏 度高、检测线低，可实现对亚锡离子的快速灵敏检测。
【附图说明】
[0031] 图1为荧光探针加入亚锡离子前后的紫外变化图谱;在图1中，横坐标为紫外吸收 波长(nm)，纵坐标为吸光度。
[0032] 图2为荧光探针加入亚锡离子前后的荧光变化图谱;在图2中，横坐标为荧光发射 波长(nm)，纵坐标为荧光强度。（图2插图表示的是荧光探针没有加入亚锡离子的荧光变化 谱图，说明了加入亚锡离子之后发射波长变化，荧光强度也发生了变化。）
[0033]图3为浓度为10μΜ在乙腈溶液中对亚锡离子的荧光光谱响应图；在图3中，横坐标 为荧光发射波长(nm)，纵坐标为荧光强度。
[0034]图4为（浓度为ΙΟμΜ)在乙腈溶液中对不同的金属离子（Sn2+、Fe3+、C 〇2+、Ni2+、Sr2+、 Ba2+、Mn2+、Zn2+、pb2+、Ca 2+、Cd2+)选择干扰性检测的荧光响应图；在图4中，横坐标为不同的金 属离子，纵坐标为荧光强度。
[0035]图5为荧光探针溶液与亚锡离子络合比的Job-Plot曲线;横坐标为c[Cr3+]/c[Cr3+ +探针]，纵坐标为荧光F-F〇，其中F、F〇是在560nm的荧光发射强度。
[0036]图6为浓度为ΙΟμΜ在不同溶剂（甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、DMF)中对亚锡离子的荧光 响应谱图；横坐标为不同的溶剂，纵坐标为荧光强度。
[0037]图7为浓度为50μΜ的探针溶液使用磷酸二氢钠/氢氧化钠缓冲溶液配置了 一系列 不同pH的缓冲溶液，然后向探针溶液中加入一定量的亚锡离子，检测荧光强度横坐标为荧 光发射波长(nm)，纵坐标为焚光强度。
[0038]图8所示，ΙΟμΜ探针在乙腈溶液中加入0到15μΜ的Cr3+离子的荧光发射光谱图，当其 达至Ijl. 2μΜ-6.2μΜ之间有良好的线性，线性相关系数达到0.993，其最低检测限为0.12μΜ。横 坐标为Sn2+的浓度，纵坐标为探针的相对荧光强度F/F〇,然后所作出的线性关系曲线(λ Μ = 560nm)〇
【具体实施方式】
[0039] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。以下各实施例中所用的乙腈溶剂的纯度为99wt %，磷酸二氢钠的纯度为98wt %，所 述的氢氧化钠的纯度为98wt%，亚锡化合物的纯度为98wt%。
[0040] 以下实施例中的罗丹明类荧光探针的结构式为式（1)，其合成方法记载在中国专 利201510869087.0"检测汞离子的反应型罗丹明类荧光探针及其制备与应用"中的实施例1 中。
[0041 ] 实施例1
[0042] (1)将罗丹明类荧光探针溶于在乙腈溶剂中，配成ΙΟμΜ荧光探针溶液，将罗丹明类 荧光探针溶于乙腈溶剂中，配制成1〇μΜ亚锡离子溶液，将1 .OmL ΙΟμΜ荧光探针溶液加入到 1 .OmL ΙΟμΜ亚锡离子溶液中，测试加入亚锡离子溶液前后荧光探针溶液的紫外变化图谱， 结果如图1所不。
[0043] (2)将罗丹明类荧光探针溶于在乙腈溶剂中，配成ΙΟμΜ荧光探针溶液，将罗丹明类 荧光探针溶于乙腈溶剂中，配制成1〇μΜ亚锡离子溶液，将1 .OmL ΙΟμΜ荧光探针溶液加入到 1 .OmL ΙΟμΜ亚锡离子溶液中，测试加入亚锡离子溶液前后荧光探针溶液的荧光变化图谱， 结果如图2所不。
[0044] (3)基于Stern-Vo lmer理论，考察了罗丹明类荧光探针溶液对于Sn2+离子进行检测 时的线性范围和实际最低检测浓度。
[0045]将罗丹明类荧光探针溶于在乙腈溶剂中，配制成荧光探针溶液，分别将罗丹明类 荧光探针溶于乙腈溶剂中，配制成亚锡离子溶液，依次在0μΜ、1μΜ、2μΜ、3μΜ、4μΜ、5μΜ、6μΜ、7 μΜ、8μΜ、9μΜ 和 1 ΟμΜ 荧光探针溶液中按体积比 1:1 加入 1 ΟμΜ、9μΜ、8μΜ、7μΜ、6μΜ、5μΜ、4μΜ、3μ 1、2以1、以1和(^1亚锡离子溶液，通过进行荧光测试其谱图变化，激发波长为56〇11111，发射波 长为587nm，然后根据荧光强度的最大变化值作图并作出络合比的Job-Plot曲线;横坐标为 c[Sn2+]/c[Sn2++探针]，纵坐标为荧光F-F〇，其中F、F〇是在560nm的荧光发射强度。罗丹明类 荧光探针在560nm的激发光激发下，荧光强度很弱，随着亚锡离子的加入，荧光强度不断增 强，根据Stern-Volmer方程：
[0046] F/Fo=l+KsvCq
[0047] 其中Fo和F分别表示加入Sn2+前后所测得的RHPT的荧光强度，Ksv是增强常数，Cd 的Sn2+浓度。RHPT增强程度与Sn2+呈现良好的线性关系，如图5所示，通过计算其线性回归方 程，线性相关系数为0.993，线性范围为1.2以1-6.2以1，探针检测的最低限为0.1以1。如图8所 不。
[0048] (4)将罗丹明类荧光探针分别溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、DMF溶剂中，配成10μΜ荧 光探针溶液，将氯化亚锡溶于乙腈溶剂中，配制成1〇μΜ亚锡离子溶液，将1. OmL 10μΜ荧光探 针溶液加入到1. 〇mL 10μΜ亚锡离子溶液中，激发波长为560nm，发射波长为587nm，结果如图 6所示。
[0049] 实施例2
[0050] -种利用罗丹明类荧光探针检测亚锡离子的方法，具体步骤为：
[0051]步骤1 :配制罗丹明类荧光探针溶液：所述的罗丹明类荧光探针参照 201510869087.0"检测汞离子的反应型罗丹明类荧光探针及其制备与应用"的合成方法。所 述的的罗丹明类荧光探针溶液的配制方法为:称取一定摩尔量的罗丹明类荧光探针在乙腈 溶剂中配置成100mL浓度为lxl(T 3M的荧光探针溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T3M的荧 光探针溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到1χ10- 4Μ的荧光探 针溶液，取lmL上述的浓度为1χ10-4Μ的荧光探针溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙 腈溶剂定容、摇勾，得到lxl〇_ 5M的罗丹明类焚光探针溶液；
[0052] 步骤2:配制亚锡离子溶液：称取一定摩尔量的亚锡化合物（SnCl2)在乙腈溶剂中 配置成100mL浓度为lxl(T3M的亚锡离子溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T3M的亚锡离子 溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为1χ10-4Μ的亚锡 离子溶液，然后取lmL上述的浓度为1χ10- 4Μ的亚锡离子溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中， 然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为1X1 〇_5M的亚锡离子溶液；
[0053] 步骤3:配制pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4缓冲溶液:称取氢氧化钠配制0. lmol/L的氢氧 化钠溶液，称取磷酸二氢钠〇 . 68g，加入0 . lmol/L的氢氧化钠溶液29 . lmL，用水稀释至 100mL，得到 pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4 缓冲溶液。
[0054] 步骤4:分别将步骤1得到的罗丹明类荧光探针溶液10uL加入到步骤3得到的NaOH/ NaH2P〇4缓冲溶液10uL中得到多个含有荧光探针的缓冲体系，分别加入0uL、10uL、20uL、 30uL、40uL的步骤2所得的亚锡离子溶液，得到不同浓度的亚锡离子溶液，乙腈溶液定容至 2mL，静置lmin，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为587nm的焚光强度，以亚锡离 子的浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，得到线性关系曲线y = 21.58+4.50225x;
[0055] 步骤5:将步骤1得到的罗丹明类荧光探针溶液10uL加入到步骤3得到的NaOH/ NaH2P〇4缓冲溶液10uL中得到含有荧光探针的缓冲体系，加入待测的亚锡离子溶液10uL，静 置lmin，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为587nm的荧光强度，根据步骤4中得 到的线性关系曲线，计算亚锡离子的浓度为2xl(T 6M。
[0056] 实施例3
[0057] 步骤1 :配制罗丹明类荧光探针溶液：所述的罗丹明类荧光探针参照 201510869087.0"检测汞离子的反应型罗丹明类荧光探针及其制备与应用"的合成方法。所 述的的罗丹明类荧光探针溶液的配制方法为:称取一定摩尔量的罗丹明类荧光探针在乙腈 溶剂中配置成100mL浓度为lxl(T 3M的荧光探针溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T3M的荧 光探针溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到1χ10- 4Μ的荧光探 针溶液，取lmL上述的浓度为1χ10-4Μ的荧光探针溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙 腈溶剂定容、摇勾，得到lxl〇_ 5M的罗丹明类焚光探针溶液；
[0058] 步骤2:配制亚锡离子溶液：称取一定摩尔量的亚锡化合物（SnCl2)在乙腈溶剂中 配置成100mL浓度为lxl(T3M的亚锡离子溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T3M的亚锡离子 溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为1χ10-4Μ的亚锡 离子溶液，然后取lmL上述的浓度为1χ10- 4Μ的亚锡离子溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中， 然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为1X1 〇_5M的亚锡离子溶液；
[0059] 步骤3:配制pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4缓冲溶液:称取氢氧化钠配制0. lmol/L的氢氧 化钠溶液，称取磷酸二氢钠〇 . 68g，加入0 . lmol/L的氢氧化钠溶液29 . lmL，用水稀释至 100mL，得到 pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4 缓冲溶液。
[0060] 步骤4:分别将步骤1得到的罗丹明类荧光探针溶液10uL加入到步骤3得到的NaOH/ NaH2P〇4缓冲溶液10uL中得到9个含有荧光探针的缓冲体系，分别加入10，20，30，40，50，60， 70，80，90yL的步骤2所得的亚锡离子溶液，得到不同浓度的亚锡离子溶液，乙腈溶液定容， 静置lmin，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为587nm的荧光强度，以亚锡离子的 浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，得到线性关系曲线如图3所示。
[0061] 从荧光光谱可得知荧光探针的荧光强度随着亚锡离子浓度的增加而增加，到最后 趋于稳定，且荧光强度的增强值与亚锡离子浓度有良好的线性关系，R 2 = 〇.993。
[0062] 本发明利用荧光探针，进行亚锡离子的高灵敏检测，荧光探针的荧光强度变化值 与亚锡离子浓度有良好的线性关系，相关系数为R 2 = 〇.993,对亚锡离子的检测线可达到 Ο.ΙμΜ。本发明方法操作简单、灵敏度高、检测快速且选择型好，可对混合样品中的亚锡离子 进行在线原位快速灵敏检测。
[0063] 实施例4
[0064]各种金属离子对RHPT+Sn2+荧光探针的干扰实验：
[0065]步骤1 :配制罗丹明类荧光探针溶液：所述的罗丹明类荧光探针参照 201510869087.0"检测汞离子的反应型罗丹明类荧光探针及其制备与应用"的合成方法。所 述的的罗丹明类荧光探针溶液的配制方法为:称取一定摩尔量的罗丹明类荧光探针在乙腈 溶剂中配置成100mL浓度为lxl(T 3M的荧光探针溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T3M的荧 光探针溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到1χ10- 4Μ的荧光探 针溶液，取lmL上述的浓度为1χ10-4Μ的荧光探针溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙 腈溶剂定容、摇勾，得到lxl〇_ 5M的罗丹明类焚光探针溶液；
[0066]步骤2:分别配制多种金属离子溶液，配制方法为:称取一定摩尔量的金属化合物 (SnCl2)在乙腈溶剂中配置成100mL浓度为lxl(T3M的金属离子溶液，然后取lmL上述的浓度 为1X 10-3Μ的金属离子溶液加入到1 OmL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到 浓度为lxl(T4M的金属离子溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T4M的金属离子溶液加入到 1 OmL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为1X1 0-5Μ的金属离子溶液； 所述的金属离子为（5112+、？63+、(：〇 2+、附2+、3￥+、8&2+、111 2+、2112+、？132+、0&2+、0(1 2+)，对应的金属 化合物为（SnCl2、FeCl3、CoCl2、NiN03、SrCl2、BaCl2、MnCl2、ZnCl2、KCl、NaCl、Pd(N〇3)2、Ca (N〇3)2、CdCl2)〇
[0067] 步骤3:分别在lcm的石英比色皿中加入lmL的金属离子溶液和lmL的罗丹明类荧光 探针溶液;在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为587nm的荧光强度，把测试时荧光 强度的最大数值记录下来进行作图比较各种离子的干扰情况，只有Co 2+、Ni2+和Cd2+离子的 亚锡离子有轻微的干扰影响，其它的金属离子基本上对亚锡离子没有干扰影响。
[0068] 步骤4:如图4所对应的黑色柱子，取浓度为ΙΟμΜ的荧光探针溶液然后加入同等浓 度的亚锡离子和其他的金属离子，然后通过荧光光谱可以看出，Co 2+、Ni2+和Cd2+离子的亚锡 离子有轻微的干扰影响，其它的金属离子基本上对亚锡离子没有干扰影响。
[0069] 实施例5
[0070] 步骤1 :配制罗丹明类荧光探针溶液：所述的罗丹明类荧光探针参照 201510869087.0"检测汞离子的反应型罗丹明类荧光探针及其制备与应用"的合成方法。所 述的的罗丹明类荧光探针溶液的配制方法为:称取一定摩尔量的罗丹明类荧光探针在乙腈 溶剂中配置成浓度为ΙΟμΜ的荧光探针溶液；
[0071] 步骤2:配制ρΗ=7.0的NaOH/NaH2P〇4缓冲溶液:称取氢氧化钠配制0. lmol/L的氢氧 化钠溶液，称取磷酸二氢钠〇 . 68g，加入0 . lmol/L的氢氧化钠溶液29 . lmL，用水稀释至 100mL，得到 pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4 缓冲溶液。
[0072]步骤3:配制亚锡离子溶液:称取一定摩尔量的亚锡化合物（SnC12)在乙腈溶剂中 配置成100mL浓度为lxl(T3M的亚锡离子溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T3M的亚锡离子 溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为1χ10- 4Μ的亚锡 呙子溶液；
[0073]步骤4:分别在步骤1中得到的浓度为ΙΟμΜ的荧光探针溶液中加入步骤2得到的 NaOH/NaH2P〇4缓冲溶液，得到一系列不同（ρΗ=1·0、2·0、3·0、4·0、5·0、6·0、7·0、8·0、9·0、 10.0、11.0、12.0 )ρΗ的缓冲溶液;分别取0.5mL体积的缓冲溶液加入0.5mL体积的浓度为 1χ10_4Μ的亚锡离子溶液，在激发波长为560nm，发射波长为587nm的条件下，检测加入亚锡离 子溶液前后的荧光强度，得到不同pH条件下探针溶液荧光强度的变化。发现在pH=l.0-3.0 的时候荧光强度明显下降，pH=4.0-12.0荧光强度变化不明显，探针溶液比较稳定，因此该 荧光探针在乙腈溶剂中pH = 1.0-3.0以下受到酸性条件影响比较大，pH从10.0-12.0，荧光 强度有逐渐增强，可能是因为荧光强度有逐渐增强，可能是因为随着磷酸二氢根的增强，增 强了溶液中的电解质浓度，对螺类环的打开有利，见附图7。
【主权项】
1. 一种罗丹明类巧光探针在检测亚锡离子含量中的应用。2. -种利用罗丹明类巧光探针检测亚锡离子的方法，其特征在于，包括： 步骤1:配制罗丹明类巧光探针溶液； 步骤2:配制亚锡离子溶液； 步骤3:配制pH=6.0~7.0的化OH/Na出P化缓冲溶液； 步骤4:分别将步骤1得到的罗丹明类巧光探针溶液加入到步骤3得到的化OH/化出Kk缓 冲溶液中得到多个含有巧光探针的缓冲体系，分别加入不同体积的步骤2所得的亚锡离子 溶液，得到不同浓度的亚锡离子溶液，静置，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为 587nm的巧光强度，W亚锡离子的浓度为横坐标，巧光强度为纵坐标作图，得到线性关系曲 线； 步骤5:将步骤1得到的罗丹明类巧光探针溶液加入到步骤3得到的化OH/化出P〇4缓冲溶 液中得到含有巧光探针的缓冲体系，加入待测的亚锡离子溶液，静置，在激发波长为560nm 的条件下，检测发射波长为587nm的巧光强度，根据步骤4中得到的线性关系曲线，计算亚锡 离子的浓度。3. 如权利要求2所述的利用罗丹明类巧光探针检测亚锡离子的方法，其特征在于，所述 的步骤1中的罗丹明类巧光探针的结构式为：4. 如权利要求2所述的利用罗丹明类巧光探针检测亚锡离子的方法，其特征在于，所述 的步骤1中的罗丹明类巧光探针溶液的配制方法包括:称取一定摩尔量的罗丹明类巧光探 针在乙腊溶剂中配置成IOOmL浓度为Ixicr3M的巧光探针溶液，然后取ImL上述的浓度为 1 Xl(T3M的巧光探针溶液加入到IOmL容量瓶中，然后用乙腊溶剂定容、摇匀，得到1 Xl(T4M的 巧光探针溶液，取ImL上述的浓度为IxlCT4M的巧光探针溶液加入到IOmL容量瓶中，然后用乙 腊溶剂定容、摇匀，得到IxlCT5M的罗丹明类巧光探针溶液。5. 如权利要求2所述的利用罗丹明类巧光探针检测亚锡离子的方法，其特征在于，所述 的步骤2中的亚锡离子溶液的配制方法包括:称取一定摩尔量的亚锡化合物在乙腊溶剂中 配置成IOOmL浓度为IxlCT3M的亚锡离子溶液，然后取ImL上述的浓度为IxlCT3M的亚锡离子 溶液加入到IOmL的容量瓶中，然后用乙腊溶剂定容、摇匀，得到浓度为IxlCT4M的亚锡离子溶 液，然后取ImL上述的浓度为IxlO-4M的亚锡离子溶液加入到IOmL的容量瓶中，然后用乙腊溶 剂定容、摇匀，得到浓度为IxlCT5M的亚锡离子溶液。6. 如权利要求2所述的利用罗丹明类巧光探针检测亚锡离子的方法，其特征在于，所述 的步骤3中的化OH/Na出Kk缓冲溶液的配制方法包括:称取氨氧化钢配制0.1mol/L的氨氧化 钢溶液，称取憐酸二氨钢0.68g，加入0.1mol/L的氨氧化钢溶液29. ImL，用水稀释至IOOmL， 得到抑=6.0~7.0的NaOH/Na出K)4缓冲溶液。7. 如权利要求2所述的利用罗丹明类巧光探针检测亚锡离子的方法，其特征在于，所述 的步骤4中的罗丹明类巧光探针溶液的用量为10化，所述的步骤5中的罗丹明类巧光探针溶 液的用量为10化。8.如权利要求2所述的利用罗丹明类巧光探针检测亚锡离子的方法，其特征在于，所述 的罗丹明类巧光探针对亚锡离子溶液的检测限达l.OiiM。
【文档编号】C07D491/107GK105907387SQ201610255254
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月22日
【发明人】光善仪, 徐曼曼, 赵刚, 徐洪耀
【申请人】东华大学