专利名称：一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及菌种及其培养方法与应用，具体涉及一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用。
背景技术：
石油是关系国民经济命脉的战略性资源，经过经过一次、二次两次常规采油之后的总采收率一般只能占地下原油的30% 40%。三次采油(EOR)技术是一项能够利用物理、 化学和生物等技术提高原油采收率的重要油田开发技术。在过去数十年内，美国、加拿大和委内瑞拉等石油大国都把如何提高原油采收率作为研究工作的重点目标。随着社会经济持续快速增长，我国对油气需求量也不断增加。因此，运用三次采油技术来原油提高采收率， 是减缓我国多数油田产量递减速度、维持原油稳产的战略需要。枯草芽孢杆菌(Bacillus subfilis)即是通过筛选得到的一株驱油用菌株，可以在油层内生长繁殖，代谢产生脂肽类生物活性物质及蛋白酶类物质，起到剥离原油、油井解堵、提高采收率的功效。
发明内容
本发明的目的是提供一株能改善原油物性、提高采收率的枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用。本发明所采用的技术方案是
一株枯草芽孢杆菌菌株(Bacillus subf ilis) CAWB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289o一株枯草芽孢杆菌菌株(Bacillus subf ilis) CAWB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289 的培养方法，是按5%的接种比例将枯草芽孢杆菌(Macillus subf ilis )CAWB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289接种至液体培养基中，在35°C的温度条件下恒温通气培养；
液体培养基配方为每IOOml水中含，酵母提取物0. 5g，蔗糖2g，磷酸氢二钾0. 8g，磷酸二氢钾 0. 05g，pH6. 8。所述的培养时间为48小时； 所述的溶解氧条件为5-7mg/L。所述的一株枯草芽孢杆菌菌株(Bacillussubfilis) CAffB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289在低渗透性油田三次开发中提高采收率中的应用。一株枯草芽孢杆菌菌株(Bacillus subfilis) CAffB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289 在制备提高原油采收率生物制剂中的应用。本发明具有以下优点
本发明提供的枯草芽孢杆菌菌株CAWB 16-8-3，可以显著降低接触角，4 脱油效率可达45%左右；该菌可以有效驱替出岩心内部饱和原油，使岩心驱替效率增加15%左右。此外，该菌培养方法简单易操作，生长繁殖迅速，具有扩大化生产的可行性。基于上述特点，本发明的枯草芽孢杆菌菌株CAWB 16-8-3可用于油田的三次开发，提高洗油效率，降低含水，
3解除油井堵塞，增加产油量，提高原油采收率，并可借此开发出相应的生物制剂，用于环保污水治理，具有较高的科研、应用及市场价值。
图1为枯草芽孢杆菌CAWB 16-8-3的生长曲线。图2为枯草芽孢杆菌CAWB 16-8-3电镜照片。图3为枯草芽孢杆菌CAWB 16-8-3附着在岩芯表面的照片。图4为枯草芽孢杆菌CAWB 16-8-3枯深入岩芯孔的照片。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行详细的说明。本发明所涉及的枯草芽孢杆菌菌株(Bacillus subfilis)CAWB 16_8_3，已与2011 年8月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO. M2011289o以下实施例用于说明本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂。以下实施例中所涉及的培养基为 所用培养基
X 富集用液体培养基=NaNO3 1. 5g，(NH4) 2S04 1. 5g，K2HPO4 lg，MgSO4 · 7H20 0. 5g，KCl 0. 5g, FeSO4 · 7H20 0. Olg, CaCl2 0. 002g，蒸馏水 1000ml，原油 5g, pH6. 8。.t分离培养基为富集用液体培养基中添加1琼脂。f血平板培养基LB固体培养基中添加5%新鲜羊血。Z脱脂奶粉培养基牛肉膏0.5g，蛋白胨lg，NaC10.5g，琼脂2.0g，进口脱脂奶粉 3g，蒸馏水 100ml，pH7. 0 7. 2。实施例一枯草芽孢杆菌菌株(Bacillussubfilis) CAffB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289的分离筛选与纯化
1、石油降解菌株的富集与分离将5g油泥样品加入IOOml培养基I中，35°C、150r/
min摇床培养7d。待培养液混浊后，吸取5ml培养液重新转接入新鲜培养基I.中，与上述培养条件相同连续转接富集培养3次。采用稀释平板法进行分离，将培养液系列稀释后，取 100 μ 1稀释液涂布于培养基f中，培养48h;待平板长出菌落后选择不同颜色及形态的单菌落，分别回接于培养基①和②中，在两种培养基中均能生长的即为石油降解微生物。
2、表面活性剂产生菌的筛选由于表面活性剂具有降低表面张力的作用，可使红细胞破裂并释放血红素出现溶血圈，因此采用血平板法筛选。挑取活化好的石油降解菌株一环，点接于血平板上，35°C培养3d后若有溶血圈出现，证明该菌能产生表面活性剂。3、蛋白酶产生菌的筛选蛋白酶可以水解蛋白质，因此以脱脂奶粉为蛋白质源的
培养基作为筛选蛋白酶产生菌的培养基。挑去表面活性剂产生菌株一环，点接于培养基 上，35°C培养3d后若有溶解圈出现，证明该菌能产生蛋白酶。4、纯化挑取单菌落，转移到培养基1.中，35°C，120r/min振荡培养，至菌浓度达
到107-108CFU/ml，取100 μ 1涂布于LB固体培养基上，检测纯度，直至获得纯种菌株。实施例二枯草芽孢杆菌菌株(Bacillus subfilis) CAffB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289的培养方法
(一)培养基的配方优化
1、碳源优化考察了枯草芽孢杆菌菌株(Macillus subfilis ) CAffB
16-8-3 CCTCC NO. M2011289对葡萄糖、蔗糖、甘油、麦芽糖、酵母浸膏等几种碳源的利用情况，具体方法为采取单因素分析试验，固定氮源成分为酵母提取物5g/L，改变碳源成分为葡萄糖、蔗糖、甘油、麦芽糖、酵母浸膏等(均为20g/L)，接种枯草芽孢杆菌菌株OfeciBm subfilis) CAffB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289, 35°C，120r/min 振荡培养 48h，测定 0D_，确定细菌生长情况，试验结果显示，蔗糖为适宜的碳源。2、氮源优化考察了枯草芽孢杆菌菌株UaciBm subfilis) CAffB 16-8-3 CCTCC N0.M2011289对蛋白胨、胰蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物这几种氮源的利用情况， 具体方法为采取单因素分析试验，固定碳源成分为蔗糖(20g/L)，改变氮源成分为蛋白胨、胰蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物(含量均为5g/L)，接种枯草芽孢杆菌菌株OfeciBm subfilis) CAffB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289, 35°C，120r/min 振荡培养 48h,测定 OD600,确定细菌生长情况，试验结果显示，酵母提取物为适宜的氮源。发酵培养基组分的正交试验通过正交试验确定枯草芽孢杆菌OfeciBm subfHisXkm 16-8-3 CCTCC NO. M2011289发酵培养基各组分的最佳添加量，被考察因子与水平数如下
表1发酵培养基组分察因子与水平数列表
权利要求
1.一株枯草芽孢杆菌菌株(Bacillus subfilis) CAffB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289o
2.一株枯草芽孢杆菌菌株(Bacillus subfilis)CAffB 16-8-3 CCTCC N0.M201U89 的培养方法，是按5%的接种比例将枯草芽孢杆菌UaciBm subfilis) CAffB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289接种至液体培养基中，在35°C的温度条件下恒温通气培养；液体培养基配方为每IOOml水中含，酵母提取物0. 5g，蔗糖2g，磷酸氢二钾0. 8g，磷酸二氢钾 0. 05g，pH6. 8。
3.根据权利要求2所述的一株枯草芽孢杆菌菌株(Bacillussubfilis) CAffB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289的培养方法，其特征在于所述的培养时间为48小时；所述的溶解氧条件为5-7mg/L。
4.权利要求1所述的一株枯草芽孢杆菌菌株(Bacillussubfilis)CAWB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289在低渗透性油田三次开发中提高采收率中的应用。
5.权利要求1所述的一株枯草芽孢杆菌菌株(Bacillussubfilis)CAWB 16-8-3 CCTCC NO. M2011289在制备提高原油采收率生物制剂中的应用。
全文摘要
本发明涉及一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用。枯草芽孢杆菌是通过筛选得到的一株驱油用菌株，可以在油层内生长繁殖，代谢产生脂肽类生物活性物质及蛋白酶类物质，起到剥离原油、油井解堵、提高采收率的功效。本发明是按5%的接种比例将枯草芽孢杆菌(Bacillussubfilis)CAWB16-8-3CCTCCNO.M2011289接种至液体培养基中，在35℃的温度条件下恒温通气培养；液体培养基配方为每100ml水中含，酵母提取物0.5g，蔗糖2g，磷酸氢二钾0.8g，磷酸二氢钾0.05g，pH6.8。本发明提供的枯草芽孢杆菌菌株CAWB16-8-3，可以显著降低接触角，48h脱油效率可达45%左右；该菌可以有效驱替出岩心内部饱和原油，使岩心驱替效率增加15%左右。
文档编号C09K8/582GK102409017SQ20111041929
公开日2012年4月11日 申请日期2011年12月15日 优先权日2011年12月15日
发明者孙卫, 孙叶芳, 薛姝雯, 陈富林 申请人:西北大学, 西安瑞捷生物科技有限公司