一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2,3?丁二醇的方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2,3?丁二醇的方法，包括以下步骤：将固体培养基基质中添加氮源和营养盐溶液得到固体培养基，调节pH值和含水量后，高压蒸汽灭菌固体培养基后冷却至室温，然后接种多粘芽孢杆菌P. polymyxa ZJ?9种子液，于恒温恒湿条件下发酵3?4 d，发酵产物用蒸馏水浸提，浸提后即得2,3?丁二醇。本发明采用固态发酵法，发酵基质成本低廉、来源广泛，实现了对农业废弃资源的高效利用，同时，为生物法制备2,3?丁二醇提供了一个新的有效途径。本发明搭建的固态发酵装置，结构简单，装置配件易得，操作方便。为固态发酵2,3?丁二醇反应器的进一步放大提供了很好的参考价值。
【专利说明】
一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2,3-丁二醇的方法
技术领域
[0001]本发明属于生物化工领域，具体涉及一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_丁二醇的方法。
【背景技术】
[0002]菊芋是一种适应性极强的半野生植物，在全国各地均有分布，主要种植地区为沿海滩涂地区和西北地区，价格低廉，年产量高，由于其含有较高成分的果聚糖，常用作制备高果糖浆、低聚果糖、菊粉等产品。在工业化加工菊芋的过程中，会有较大部分的菊芋渣残留，其主要成分为纤维素，还有部分残糖以及少量的氨基酸和蛋白质等营养物质，其成分决定了其不适宜直接作为动物饲料。然而，通过固态发酵的方式，能降解部分纤维素等大分子化合物，增加蛋白质和其他小分子营养物质的含量，使其更适合于加工成饲料或者肥料，与此同时，可以获得更高价值的产物如2，3_ 丁二醇。由于对残渣利用比较完全，该过程中基本不会造成二次污染。实现了菊芋渣的综合高效利用，减少了对环境的污染。
[0003]2，3_丁二醇是一种典型的生物基化学品，可广泛应用于食品、燃料、航空航天以及化工等多个领域。2，3_丁二醇存在三种同分异构体，(S，S)-2，3-丁二醇、(R，R)-2，3-丁二醇和meso-2，3-丁二醇。由于其燃烧值(27.2kJ/g)与甲醇(22.lkj/g)、乙醇(29.0kJ/g)媲美，使2，3-丁二醇成为一种极具价值的液体燃料，另外，(R，R)_2，3-丁二醇有较低的凝固点(_60°C)，可作为一种优良的抗冻剂使用。
[0004]目前2，3_丁二醇的生物制备方法主要为液态发酵，用来发酵的微生物主要是细菌类，包括克雷伯氏菌属(Klebsiel Ia)、芽孢杆菌属(Baci Ilus)、肠杆菌属(Enterobacter)和沙雷氏菌属(Serratia)等，其中，芽孢杆菌属因其具有产生淀粉酶和木聚糖酶的能力，可以直接利用淀粉类物质为底物，而较受关注。本研究采用的芽孢杆菌P.polymyxa ZJ-9，能够合成菊粉酶，将菊粉降解成单个的果糖供菌体吸收利用，不需要对底物提前进行水解，可以避免因菊粉水解过程产生的一些抑制物(如糠醛、酚类物质等)对菌体生长的抑制作用。此外，由于多粘类芽孢杆菌不是致病菌且对植物病害(黄萎病、鹰嘴豆枯萎病、油菜腐烂病、黑松根腐病)具有一定的控制作用，使得菌种P.polymyxa ZJ-9固态发酵后的残渣更适于加工成饲料或植物肥料。
[0005]固态发酵是指在没有或几乎没有自由水存在的条件下，在一定湿度的水不溶性固态基质中，用一种或多种微生物发酵的生物反应过程。由于固态发酵所用原料多为农业废弃物如麸皮渣、秸杆渣、菊粉渣、苹果渣等，发酵原料来源广泛、成本低廉。培养基质的前处理过程较液态发酵而言更简便，只需加水使基质潮湿，或适当磨破基质增加其接触面积即可。在发酵结束后，培养基基质可进一步作为饲料添加剂或者有机肥料使用，基本没有二次污染。
[0006]固态发酵技术主要应用于生产酶类(α—淀粉酶、果糖转化酶、菊粉酶、脂酶、果胶酶等)、有机酸(乳酸、柠檬酸等)和生物燃料(如乙醇)中，农业废渣(麸皮渣、秸杆渣、菊粉渣、苹果渣等)往往含有残留的多糖、纤维素、维生素、矿物质等可利用的有机物，在微生物固态发酵进行生物转化的过程中，能将这些有机废渣转化成高附加值的代谢物，同时减少因堆弃固体废物造成的环境污染问题，具有很好的生态环境和社会经济效益。
[0007]目前文献暂无运用固态发酵的方式来生产2，3_丁二醇的方法报道。
【发明内容】
[0008]发明目的:为了克服现有技术中存在的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_ 丁二醇的方法。
[0009]本发明旨在研究一种利用多粘芽孢杆菌P.polymyxaZJ-9固态发酵生产2，3_丁二醇的方法，以实现从廉价底物菊芋残渣到高附加值代谢产物2，3_丁二醇的生物转化，提高菊芋渣的经济利用价值，降低2，3_ 丁二醇的生产成本并减少堆弃菊芋渣造成的环境污染。同时固态发酵过程中，含水量、通风与传质、温度、PH是固态发酵中的关键因素，如何成功控制不同的发酵参数是工程放大的难点。例如当通风不够时，微生物生长所需的氧气可能不足，且不能移走反应热和二氧化碳，使得固体基质间的传质、传热效率不高。因此，本发明在锥形瓶发酵的基础上，设计并搭建了一种模拟浅盘固态发酵的简易装置，通过考察在该装置下的发酵历程，为固态发酵生产2，3_ 丁二醇工艺的进一步放大提供了很好的参考作用。
[0010]技术方案:为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下:一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_ 丁二醇的方法，包括以下步骤:将固体培养基基质中添加氮源和营养盐溶液得到固体培养基，调节PH值和含水量后，高压蒸汽灭菌固体培养基后冷却至室温，然后接种多粘芽孢杆菌P.polymyxa ZJ-9种子液，于恒温恒湿条件下发酵3_4d，发酵产物用蒸馏水浸提，得到含有2，3-丁二醇。
[0011]其中，上述固体培养基基质由菊芋渣、麸皮渣、苹果渣中的一种或几种组成。
[0012]其中，上述菊芋渣的制备方法是:取粉碎过60目筛后的菊芋干粉原料，在固液比1:6的条件下充分混合，先在75°C水浴搅拌反应2h，降至室温后，用Ca(OH)2调节混合液的pH值至9.0，之后再用85°C水浴浸提lh，固液分离，得到含有丰富菊粉的菊粉粗提液和残留有部分菊粉的菊芋渣。
[0013]上述固体培养基基质麸皮渣和苹果渣购于南京市溧水渡江蛋白粉厂。
[0014]其中，上述固态发酵采用锥形瓶发酵或采用模拟浅盘固态发酵的装置进行发酵。
[0015]其中，上述氮源为蛋白胨、酵母粉、硫酸铵或氯化铵中的一种。
[0016]其中，上述营养盐溶液包括MgSO4.7H20、K2HP04、MnS04.H2O^NH4CUFeSO4.7H20和ZnSO4.7H20o
[0017]其中，上述多粘芽孢杆菌P.polymyxaZJ-9种子液的制备过程为:将保存于斜面培养基上的P.polymyxa ZJ-9接种于种子培养液中，30°C有氧条件下培养18_20h，菌体生长至对数生长中后期，得到供固态发酵的P.polymyxa ZJ-9种子液。种子培养液配方为:菊粉20g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏3g/L，NaC15g/L。发酵菌种为多粘芽孢杆菌P.polymyxa ZJ-9,它能够合成菊粉酶，直接利用未经水解的高聚物天然菊粉。此外，由于多粘类芽孢杆菌不是致病菌且对植物病害(黄萎病、鹰嘴豆枯萎病、油菜腐烂病、黑松根腐病)具有一定的控制作用，使得P.polymyxa ZJ-9发酵后的残渣更适于加工成饲料或植物肥料。
[0018]其中，上述pH值4-9，含水量为50 % -90 %。
[0019]其中，上述发酵温度为28°C?37°C。
[0020]其中，上述模拟浅盘固态发酵的装置从上至下主要包括布氏漏斗、橡胶圈、抽滤瓶，在抽滤瓶的一侧中上部设有滤嘴，滤嘴通过橡皮管与增氧栗相连通，在滤嘴与橡皮管之间设有空气过滤器，布氏漏斗为主要的发酵单元，其上端用纱布包裹密封，隔离空气中的微生物，保证发酵在无菌环境下进行;在布氏漏斗中间设置带孔的隔层，在带孔的隔层上平铺一块六层厚的湿纱布，在纱布上均匀放置配置好的固体培养基。增氧栗输送的除菌空气先经抽滤瓶，之后再透过布氏漏斗内的发酵培养基排出。
[0021]在此基础上对装置进行改进，在抽滤瓶中装有一部分的无菌水，便于增加通入空气的湿度，以避免在提高通气量的时候，对培养基质的含水量造成较大的影响。
[0022]作为本发明的进一步说明，把上述接种有种子液的简易固态发酵装置，置于一个30 °C的恒温恒湿箱中。
[0023]本发明利用多粘芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa ZJ-9固态发酵菊芋渣生产2，3-丁二醇的方法，具体包括以下步骤:
[0024]a、向固体培养基基质中添加氮源(有机氮源或无机氮源)和营养盐。
[0025]b、将固态培养基平铺于250mL锥形瓶底部，调节pH值(4-9)和含水量(50%-90%)后，121°C，20min高压蒸汽灭菌。
[0026]c、固体培养基冷却至室温后，按照质量比16%接种多粘芽孢杆菌P.polymyxa ZJ-9种子液，于恒温(28°C_37°C)恒湿条件下发酵3-4d，期间每隔12h用无菌玻璃棒搅拌固体基质一次，并取部分发酵基质作为样品供检测分析。
[0027]d、待测样品用蒸馏水浸提，8000rpm离心20min，检测上清液的体积V(L)和其中发酵产物浓度CKg/L)和剩余底物的浓度C2(g/L)，沉淀烘干称重M(Kg)，计算产物和剩余底物的质量浓度。
[0028]e、发酵结束后，剩余的残渣同样用蒸馏水浸提，浸提后的滤液通过分离纯化，用于提取2，3_ 丁二醇;浸提后剩余的固体残渣用于加工成饲料或者植物肥料。
[0029]本发明方法步骤a所述固体培养基基质为菊芋渣，添加的氮源(质量比1%)为蛋白胨、酵母粉、硫酸铵或氯化铵中的一种，每10mL营养盐溶液中含有MgSO4.7H20 0.05g，K2HPO4 0.309g，MnS04.H2O 0.0OOlg,NH4Cl 0.093g,FeS04.7H20 0.004g,ZnSO4.7H200.0OOlg0
[0030]本发明方法步骤b所述的pH值为4-7，含水量为50%-90%。
[0031 ]本发明方法步骤c所述的培养温度为28°C?37°C。
[0032]本发明方法步骤d所述上清液中发酵产物的检测方法为:高效液相色谱法，色谱柱:Aminex HPX-87H；流动相:0.005M的H2SO4；流速:0.6mL/min ；柱温:65°(:采用示差检测器检测。发酵底物浓度的检测方法为蒽酮比色法。
[0033]本发明中发酵底物质量浓度的计算方法为:Cl(g/Kg) = (CAVVM，即每千克烘干的固体培养基中含有底物的质量(g)。
[0034]本发明中发酵产物质量浓度的计算方法为:C2(g/Kg)= (C2*V)/M，即每千克烘干的固体培养基中含有产物的质量(g)。
[0035]有益效果:本发明利用能合成菊粉酶的多粘芽孢杆菌，使用提取完菊粉粗提液的菊芋残渣作为主要原料，通过多粘芽孢杆菌对菊芋残渣中菊粉的有效降解，实现了对菊芋残渣的充分利用，当在锥形瓶中发酵时，2，3-丁二醇产量可达到49.82g/Kgo
[0036]本发明在使用锥形瓶发酵的基础上，提供了一种新的固态发酵装置，其具有模拟浅盘固态发酵的价值，结构简单，元件易得，搭建方便，适合用于固态发酵研究的初步放大试验。使用该装置固态发酵时，2，3-丁二醇产量可达到67.90g/Kgo
【附图说明】
:
[0037]图1是本发明的工艺流程图；
[0038]图2是本发明多粘芽孢杆菌在锥形瓶中的发酵历程图；
[0039]图3是本发明多粘芽孢杆菌在模拟浅盘装置中的发酵历程图；
[0040]图4是本发明模拟浅盘固态发酵搭建的发酵装置示意图；本发明的装置模拟浅盘固态发酵装置为大号布氏漏斗，漏斗的圆柱体部分即为发酵单元，中间则是均匀分布着小孔的圆形区域用于盛放湿纱布和发酵基质，圆柱体部分的上端用纱布包裹密封，漏斗下端过橡皮塞与抽滤瓶相连，发酵基质是在一个相对独立和无菌的空间进行。所述抽滤瓶内装有一部分的无菌水，用以增加通入空气的湿度，便于在持续通入无菌空气的同时，维持固态发酵基质和空气的湿度。
【具体实施方式】
[0041]根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
[0042]实施例1:模拟浅盘固态发酵搭建的发酵装置
[0043]本发明的模拟浅盘固态发酵的装置从上至下主要包括直径为250mm的大号布氏漏斗1、橡胶圈2、抽滤瓶3，在抽滤瓶3的一侧中上部设有滤嘴4，滤嘴4通过橡皮管5与增氧栗6相连通，在滤嘴4与橡皮管5之间设有空气过滤器7，布氏漏斗I为主要的发酵单元，其上端用纱布8包裹密封;在布氏漏斗I中间设置带孔的隔层9，在带孔的隔层9上平铺一块六层厚的湿纱布10，在湿纱布10上均匀放置配置好的固体培养基11。
[0044]使用方法:首先将一块六层厚的湿纱布10平铺于布氏漏斗I内的带孔的隔层9上，之后再将配制好的固体培养基均匀铺于湿纱布10表面。布氏漏斗I的下端通过橡皮圈2与抽滤瓶3紧密相连，上端用纱布8包裹密封。抽滤瓶3底部装有部分纯净水，另外其一侧的滤嘴4与橡皮管5和空气过滤器7连接后，用锡箔纸包裹空气过滤器7的进气口。装有培养基的固态发酵装置置于高压灭菌锅中121°C，30min灭菌。待培养基冷却至室温后，接种微生物菌株后用纱布8密封布氏漏斗I上端。将空气过滤器7进气口的锡箔纸取下，用橡皮管5与增氧栗6出气口相连通。最后，于恒温恒湿的环境下静置培养。每隔一定的时间取样检测并对培养基进行搅拌，使菌种和培养基基质混合均匀。
[0045]实施例2:菊芋渣锥形瓶中的发酵历程
[0046]I)取粉碎过60目筛后的菊芋干粉原料，在固液质量比1:6的条件下先充分混合，75°C水浴搅拌反应2h后，降至室温后，用Ca(OH)2调节混合液的pH值到9.0，之后再用85°C水浴浸提lh，固液分离，得到含有丰富菊粉的菊粉粗提液和含有部分菊粉的菊芋渣。
[0047]2)往浸提过菊粉粗提液的菊芋渣中添加有机氮源酵母粉(质量比I %)和混合的营养盐溶液(每10mL营养盐溶液中含有MgSO4.7H20 0.05g,K2HPO4 0.309g,MnS04.H2O0.0OOlg,NH4Cl 0.093g，FeS04.7H20 0.004g,ZnSO4.7H20 0.0OOlg)，固液比为1:4，pH值为
7，充分搅拌，使营养物质和基质含水量分布均匀得到配制好的固态发酵培养基。
[0048]3)将上述配制好的固态发酵培养基，平铺于250mL锥形瓶瓶底，121°C高压蒸汽灭菌30min，冷却后，按质量比为16%的接种量均匀接种多粘芽孢杆菌种子液，然后，将整个发酵反应器置于恒温恒湿箱中，发酵温度设定为30°C。
[0049]其中，多粘芽孢杆菌种子液的制备过程为:将保存于斜面培养基上的多粘芽孢杆菌P.po Iymyxa ZJ-9 (购于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC N0.3044))接种于种子培养液中，在30°C有氧条件下培养18-20h，使菌体生长至对数生长中后期，得到供固态发酵的多粘芽孢杆菌P.polymyxa ZJ-9种子液。种子培养液配方为:菊粉20g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏3g/L，NaCl 5g/L0
[0050]4)接种完种子液的固体发酵培养基，每12h需要用无菌的玻璃棒对固态基质进行搅拌，使得菌种和固体培养基接触更充分，提高菌种对底物的利用效率，进一步提高产量。与此同时，也要进行取样检测底物中的残余糖含量和主副产物的含量;并取部分发酵基质作为样品供检测分析;待测样品用蒸馏水浸提，SOOOrpm离心20min，检测上清液的体积V(L)和其中发酵底物的浓度&(g/L)和剩余产物的浓度C2(g/L)，沉淀烘干称重M(Kg)，计算底物的质量浓度Cl (g/Kg) = (&*ν)/Μ和剩余产物的质量浓度C2(g/Kg) = (C2*V)/M。
[0051 ] 5)连续发酵培养84h，发酵产物经无菌水浸提，检测底物糖含量、产物2，3-丁二醇及副产物的含量。发酵产物的检测方法为:高效液相色谱法，色谱柱:Aminex HPX-87H;流动相:0.005i^^H2S04;流速:0.6mL/min;柱温:65 °C采用示差检测器检测。发酵底物浓度的检测方法为蒽酮比色法。本发明中发酵底物质量浓度的计算方法为:αα/^) = (&*ν)/Μ，即每千克烘干的固体培养基中含有底物的质量(g)。本发明中发酵产物质量浓度的计算方法为:C2(g/Kg) = (C2*V)/M，即每千克烘干的固体培养基中含有产物的质量(g)。
[0052]6)经检测，固态基质在锥形瓶中，发酵72h时，检测产物2，3_丁二醇的产量最高，到达49.82g/Kg，底物糖含量由136g/Kg降至35.94g/Kg，2，3-丁二醇的转化率为49.79 %。发酵结束后，通过蒸馏水充分浸提基质中的产物，提取后的残渣再用作饲料添加剂或者加工为有机肥料。
[0053]实施例3:菊芋渣模拟浅盘固态发酵
[0054]参考实施例2，不同的是所用的发酵设备为实施例1搭建的模拟浅盘固态发酵装置，具体实施方法为将实施例1配制好的固态发酵培养基基质，厚度均一的平铺于布氏漏斗中，随后用纱布密封布氏漏斗上端，用橡皮圈密封布氏漏斗下端与抽滤瓶的接口，121°C高压蒸汽灭菌30min，冷却后，按质量比为16%的接种量均勾接种多粘芽孢杆菌种子液，然后，将整个模拟浅盘固态发酵装置置于恒温恒湿箱中，在抽滤瓶的滤嘴处用橡皮管连接空气过滤器和增氧栗，给布氏漏斗中的发酵基质匀速通入无菌空气，恒速供氧，发酵温度设定为30Γ。
[0055]2，3_ 丁二醇的发酵:接种完种子液的固体发酵培养基，每12h需要用无菌的玻璃棒对固态基质进行搅拌，使得菌种和固体培养基接触更充分，提高菌种对底物的利用效率，进一步提高产量。与此同时，也要进行取样检测底物中的残余糖含量和主副产物的含量。
[0056]连续发酵培养84h，发酵产物经无菌水浸提，检测底物糖含量、产物2，3-丁二醇及副产物的含量。
[0057]发酵产物的检测方法为:高效液相色谱法，色谱柱:AminexHPX-87H;流动相:0.005i^^H2S04 ；流速:0.6mL/min;柱温:65 °C采用示差检测器检测。发酵底物浓度的检测方法为蒽酮比色法。本发明中发酵底物质量浓度的计算方法为:Cl (g/Kg) = (Ci*V)/M,即每千克烘干的固体培养基中含有底物的质量(g)。本发明中发酵产物质量浓度的计算方法为:C2(g/Kg) = (C2*V)/M，即每千克烘干的固体培养基中含有产物的质量(g)。
[0058]经检测，固态基质在模拟浅盘固态发酵装置中，发酵72h时，检测产物2，3-丁二醇的产量最高，到达67.90g/Kg，相较于用锥形瓶发酵时，产量提高了 36.3 %，底物糖含量由141.5g/Kg降至29.42g/Kg，2，3-丁二醇的转化率为60.58%。发酵结束后，通过蒸馏水充分浸提基质中的产物，提取后的残渣再用作饲料添加剂或者加工为有机肥料。
[0059]实施例4:菊芋渣模拟浅盘固态发酵
[0060]基本与实施例3—致，所不同的在于，往浸提过菊粉粗提液的菊芋渣中添加无机氮源氯化铵(质量比1%)和混合的营养盐溶液，经检测，固态基质在模拟浅盘固态发酵装置中，发酵60h时，检测产物2，3-丁二醇的产量最高，到达28g/Kg，相较于用锥形瓶发酵时，产量提高了 30%，底物糖含量由100g/Kg降至57g/Kg。发酵结束后，通过蒸馏水充分浸提基质中的产物，提取后的残渣再用作饲料添加剂或者加工为有机肥料。
【主权项】
1.一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_ 丁二醇的方法，其特征在于，包括以下步骤:将固体培养基基质中添加氮源和营养盐溶液得到固体培养基，调节pH值和含水量后，高压蒸汽灭菌固体培养基后冷却至室温，然后接种多粘芽孢杆菌八polymyxa ZJ-9种子液，于恒温恒湿条件下发酵3-4d，发酵产物用蒸馏水浸提，得到含有2，3_ 丁二醇的浸提液。2.根据权利要求1所述的一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_丁二醇的方法，其特征在于，所述固体培养基基质由菊芋渣、麸皮渣、苹果渣中的一种或几种组成。3.根据权利要求2所述的一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_丁二醇的方法，其特征在于，所述菊芋渣的制备方法是:取粉碎过60目筛后的菊芋干粉原料，在固液比1:6的条件下充分混合，先在75 °C水浴搅拌反应2 h，降至室温后，用Ca(OH)2调节混合液的pH值至9.0，之后再用85 °(:水浴浸提I h，固液分离，得到含有丰富菊粉的菊粉粗提液和残留有部分菊粉的菊芋渣。4.权利要求1所述的一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_丁二醇的方法，其特征在于，所述固态发酵采用锥形瓶发酵或采用模拟浅盘固态发酵的装置进行发酵。5.根据权利要求1所述的一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_丁二醇的方法，其特征在于，所述氮源为蛋白胨、酵母粉、硫酸铵或氯化铵中的一种。6.权利要求1所述的一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_丁二醇的方法，其特征在于，所述营养盐溶液包括MgSO4.7H20、K2HP04、MnS04.H2O^NH4CUFeSO4.7H20和ZnSO4.7H20o7.根据权利要求1所述的一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_丁二醇的方法，其特征在于，所述多粘芽孢杆菌P.polymyxa ZJ-9种子液的制备过程为:将保存于斜面培养基上的P.polymyxa ZJ-9接种于种子培养液中，30°C有氧条件下培养18-20 h，菌体生长至对数生长中后期，得到供固态发酵的八polymyxa ZJ-9种子液。8.根据权利要求1所述的一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_丁二醇的方法，其特征在于，所述pH值4-9，含水量为50%-90%。9.根据权利要求1所述的一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_丁二醇的方法，其特征在于，所述发酵温度为28 °C>37°C。10.根据权利要求4所述的一种利用多粘芽孢杆菌固态发酵生产2，3_丁二醇的方法，其特征在于，所述模拟浅盘固态发酵的装置从上至下主要包括布氏漏斗(1)、橡胶圈(2)、抽滤瓶(3)，在抽滤瓶(3)的一侧中上部设有滤嘴(4)，滤嘴(4)通过橡皮管(5)与增氧栗(6)相连通，在滤嘴(4)与橡皮管(5)之间设有空气过滤器(7)，布氏漏斗(I)为主要的发酵单元，其上端用纱布(8)包裹密封;在布氏漏斗(I)中间设置带孔的隔层(9)，在带孔的隔层(9)上平铺一块六层厚的湿纱布(10)，在湿纱布(10)上均匀放置配制好的固体培养基(11)。
【文档编号】C12M1/04GK106086088SQ201610576165
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年7月20日 公开号201610576165.2, CN 106086088 A, CN 106086088A, CN 201610576165, CN-A-106086088, CN106086088 A, CN106086088A, CN201610576165, CN201610576165.2
【发明人】张丽, 曹灿, 高健, 薛锋, 黄巍巍, 李艳
【申请人】盐城工学院