靶向生长抑素受体的Al¹⁸F?NOTA?PEG₆?TATE及其制备方法和应用

靶向生长抑素受体的Al¹⁸F?NOTA?PEG₆?TATE及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明公开了靶向生长抑素受体的Al18F?NOTA?PEG6?TATE及其制备方法和应用。该标记物的制备方法为：将生长抑素衍生物TATE与双功能螯合剂NOTA借助用PEG进行连接，生成放射性标记前体，然后采用“一锅法”进行正电子核素18F标记，即可获得18F标记的生长抑素衍生物Al18F?NOTA?PEG6?TATE。本发明方法可在乙酸盐缓冲液体系或乙腈反应体系中进行，且该方法具有操作简便、标记率、产物纯度高的优点。本发明制备的靶向生长抑素受体的正电子标记物可应用于PET/CT分子探针或肿瘤治疗药物的制备中，且为临床PET/CT分子探针的合成提供了新的思路。
【专利说明】
靶向生长抑素受体的A丨18f-nota-peg6-tate及其制备方法和 应用
技术领域
[0001 ]本发明属于放射性标记领域，具体涉及靶向生长抑素受体的ai18f-nota-peg6-TATE及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]近年来，放射性核素标记受体结合肽是肿瘤靶向诊断的研究热点之一，其中基于 生长抑素受体(somatostatin receptor，SSTR)的肿瘤显像备受关注。SSTR作为G蛋白偶联 受体家族的一员，共有5个亚型，即S S T R1~5，可在小细胞肺癌、神经内分泌肿瘤 (neuroendocrine tumor，NET)、脑膜瘤及胶质瘤等多种肿瘤细胞表面高表达。基于此，越来 越多的学者认为寻找对SSTR具有高亲和力的生长抑素源性配体或可为肿瘤诊断新靶点提 供借鉴。奥曲肽(octreotide，0C)，是天然的生长抑素经人工修饰后合成的环八肽[0-?116-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr (01)]，它对SSTR2有高度亲和力，对SSTR5有轻度亲和力。 若3位Phe被Tyr取代，碳末端的Thr(ol)被Thr取代则奥曲肽可衍生为TATE，其氨基酸顺序 为:D-Phe-Cy s-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr，此衍生物对SSTR2的亲和力进一步增高，从而 增加肿瘤细胞内在化的比率，最终使得肽分子在SSTR高表达组织(胰腺、肾上腺、垂体以及 SSTR高表达的肿瘤）中有明显高摄取。
[0003] 在欧美国家，mIn-DTPA-〇treotide(Octreoscan)是目前临床上诊断NETs的金标 准，但因回旋加速器产生mIn费用高，其广泛应用受限，而且与正电子核素相比，mIn能量 较低（171keV，245keV)，使得mIn-DTPA-〇treotide最终成像的空间分辨率较低。对于正电 子PET显像而言， 68Ga、64Cu、18F等已被用于标记奥曲肽衍生物。其中68Ga标记的奥曲肽衍生物 ( 68Ga_D0TATATE，68Ga-D0TAT0C及68Ga-D0TAN0C等)在神经内分泌肿瘤显像中具有巨大潜力， 近年来在临床上使用明显增加。然而因 68Ge/68Ga发生器日产量较低，每次仅可洗脱300-700MBq，再加上缺乏FDA批准的 68Ga标记药物及68Ge/68Ga发生器，68Ga PET显像目前并没有在 临床广泛应用。
[0004] 与放射性金属核素68Ga和64Cu相比，18F应用更为广泛，因其具有相对较长的半衰期 (ti/2 = 110min)、低能(0.64MeV)以及缺乏散射等优良的核素特征。另外，18F标记化合物可行 延迟显像，其起始比活度较高可允许大剂量制备，且 18F标记化合物空间分辨率较高，故用放 射性18F标记生长抑素类似物具有更明显的优势。
[0005] 目前已有多种放射性18F标记的奥曲肽类似物（如2-18F-FP-0C，Gluc-Lys ([ 18F] FP)-T0CA，Gluc-S-Dpr ([ 18F]FB0A) T0CA以及Ce 1-S-Dpr ([ 18F]FB0A)T0CA等）用于神经内分 泌肿瘤的显像。但这些化合物放射性制备过程繁琐、产率较低，其临床常规使用受限，而且 其制备过程很难实现自动化。比如：2003年Wester等人通过辅基法合成糖基化的Gluc-Lys ([1叩]即）_了〇(^，先合成中间产物1吁_册13，再通过，的酰基化作用，用，_册 13与#_(1_ deoxy-D-fructosyl)-LysQ-Tyr3-Lys5(Dde)-〇ctreotate 进行反应，合成糖基化的Gluc-Lys ([18F]FP)-T0CA，其中赖氨酸(Lys)可同时连接18F-NFP、糖基以及奥曲肽衍生物，总合成时 间约3h，放化产率介于20 % -30 %之间。

【发明内容】

[0006] 本发明的目的在于提供一种靶向生长抑素受体的PET显像分子探针及其制备方法 和应用。
[0007] 本发明所采取的技术方案是：
[0008] 一种靶向生长抑素受体的PET分子探针，为ai18f-nota-peg 6-tate，其结构式如下：
[0009；
[0010] PET分子探针A118F-N0TA-PEG6-TATE在生长抑素受体靶向的肿瘤显像中的应用。包 括神经内分泌瘤和非神经内分泌肿瘤(譬如胶质瘤等）。
[0011] PET分子探针A118F-N0TA-PEG6-TATE在非骨转移的生长抑素受体靶向的神经内分 泌肿瘤显像的应用，或在脑胶质瘤中的应用。
[0012] PET分子探针A118F-N0TA-PEG6-TATE在神经内分泌肿瘤分子影像诊断中的应用。
[0013] -种小分子探针的制备方法，包括下列步骤：在盛有18F离子的反应容器中加入 A1C13以及双功能螯合剂ΝΟΤΑ连接的小分子化合物，90-105°C反应15-25分钟，然后分离纯 化，制备得到A1 18F-N0TA标记的小分子探针。
[0014] 优选的，小分子化合物选自小分子多肽或维生素。
[0015]优选的，维生素为叶酸。
[0016] 优选的，小分子化合物为PEG6-TATE。
[0017]优选的，反应缓冲液为乙酸盐溶液或无水乙腈。
[0018]优选的，乙酸盐缓冲液的浓度为0· 1-0· 5mol/L，pH为3-6· 5。
[0019] 优选的，乙酸盐缓冲液的浓度为0.1-0.5mol/L，pH为3.8-4.2。
[0020] 优选的，在乙酸盐缓冲液中，每0.55-1.11689的^离子中加入611111〇1的41(：13以及 54 · 5-136nmol 的 N0TA-PEG6-TATE 〇
[0021] 优选的，在无水乙腈中，每0.55-1.11689的1乍离子中加入52-26〇11111〇1的41(：13以及 26 · 4-264 · 5nmo 1 N0TA-PEG6-TATE，以及26 · 4-264 · 5nmo 1 冰乙酸。
[0022]本发明的有益效果是：
[0023]本发明建立了一种制备靶向生长抑素受体的PET分子探针的方法，应用双功能螯 合剂ΝΟΤΑ与亲水基团PEG修饰的奥曲肽类似物TATE制备标记前体，通过"一锅法"进行18F标 记，也就是说不经中间纯化步骤，将两步反应在同一容器中进行，最后进行纯化，得到目标 产物A118F-NOTA-PEG6-TATE。该发明标记方法简便、省时，放化产率优于传统的辅基标记法。 [0024]本发明的N0TA-PEG6-TATE可通过A1 18F方法标记成功。本发明优选的反应缓冲液为 乙酸盐溶液或无水乙腈。在乙酸盐缓冲液反应体系中，控制每0.55-1. llGBq的18F氟离子中 加入6nmol的AlCh和54.5-136nmolN0TA-PEG 6-TATE。在这种条件下，所得目标产物放化产率 介于70%-100%之间，以便进行大剂量标记。此外，本发明首次采用无水乙腈为反应溶剂进 行A1 18F标记N0TA-PEG6-TATE，获得了成功。在无水乙腈反应体系下，控制每0.55 -1.1 lGBq 的 18F氟离子中加入52-260nmol的A1C13和26 · 4-264 · 5nmol N0TA-PEG6-TATE，以及26 · 4-264.5nmol冰乙酸，所得产物放化产率介于64%-74%之间。用C18柱纯化后放化纯均为95% 以上，整个标记及纯化过程可在1小时内完成。
[0025] 脂水分配系数实验测得Log P = -2.45 ±0.38，说明A118F-N0TA-PEG6-TATE水溶性 较强，此显像剂在PBS和小牛血清中可稳定存在2小时;细胞摄取及排泄实验证明U87MG细胞 可快速摄取及排泄A118F-N0TA-PEG 6-TATE;生物学分布实验及Micro PET显像提示该显像剂 在肿瘤摄取较高，并且主要通过肾脏排泄。
[0026]本发明选用人胶质母细胞瘤U87MG细胞进行细胞摄取及排泄实验，用荷U87MG瘤鼠 进行生物学分布及Micro PET实验，结果证明A118F-N0TA-PEG6-TATE在U87MG瘤组织及SSTR 高表达器官（肾上腺及胰腺）中摄取较高，说明U87MG细胞上确实含SSTR，能与A118F-N0TA-PEG 6-TATE进行特异性结合。
[0027]体内生物学分布实验及Micro PET显像结果提示双肾摄取较高，而肝肠摄取较低， 说明该显像剂主要通过泌尿系排泄，与脂水分配系数实验得出该显像剂亲水性较强结论基 本一致。另外该显像剂在脑中摄取较低，提示显像剂不通过血脑屏障，而临床上常用的 18f-FDG可通过血脑屏障在脑中摄取较高，故A118F-N0TA-PEG6-TATE对脑肿瘤的显像优于常用 的 18f-fdg〇
[0028] 此外，本发明验证显像剂A118F-N0TA-PEG6-TATE与生长抑素受体可进行特异性结 合，故该显像剂也可用于神经内分泌肿瘤显像，特别是非骨转移的生长抑素受体靶向的神 经内分泌肿瘤显像。
【附图说明】
[0029] 图 1 为A118F-N0TA-PEG6-TATE 的结构式；
[0030] 图2为标记后(a)及纯化后(b)的A118F-N0TA-PEG6-TATE的HPLC图谱；
[0031] 图3为A118F-N0TA-PEG6-TATE在PBS缓冲液及胎牛血清中的稳定性；
[0032]图 4 为U87MG摄取(a)和洗脱(b)Al18F-NOTA-PEG6-TATE 的曲线图；
[0033] 图5为注射A118F-N0TA-PEG6-TATE 1小时后其在荷U87MG瘤鼠中的生物学分布图； [0034] 图6为荷U87MG瘤鼠、注射A118F-N0TA-PEG6-TATE 1小时和2小时后的正常显像以及 共注射前体N0TA-PEG6-TATE 1小时后阻断显像；
[0035] 图7为U87MG(A)及KB(B)瘤组织切片SSTR表达情况的免疫组化图。
【具体实施方式】
[0036]下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0037] 使用材料
[0038] 所有化学试剂均从专业的化学公司购买，为分析等级，使用时没有进一步纯化。 NOTA-PEGe-TATE [ p-SCN-Bn-NOTA-PEGe- (D) -Phe^c (Cy s2-Tyr3- (D) -Trp4-Ly s5-Thr6-Cy s7)-Thr8]由本实验室设计，指定某生物公司合成，化学纯度大于92%，并经过反相高效液相层 析法（reverse-phase high-performance liquid chromatography，RP_HPLC)及质谱分析 证实。正电子核素18F用本中心的回旋加速器PET/CTtrac e(西门子，德国）生产获得，并通过 活化后SepPak'Light Accell plus QMA阴离子交换柱。反相萃取柱CisSep-Pak分离柱从 Waters公司购买(MiIford，MA,USA)，使用前依次用乙醇及水进行活化。所有放射性化合物 均是通过RP-HPLC(岛津，中国）进行分析的，C18柱规格为5μπι，250 X 4.6mm，分析时流速为 lml/min，流动相条件如下:A缓冲液为含0.1 %三氟乙酸的水，B缓冲液为含0.1 %三氟乙酸 的乙腈，分析梯度为 0-18min，30%B-60%B，18-20min，60%B-30%B。
[0039] 乙酸盐缓冲液配置如下：
[0040] 1)0.5mol/L(即0.5M)的乙酸盐缓冲液的配置：用20.5075g乙酸钠(分子量:82.03) 溶于水，再加入80.478mL冰乙酸(密度1.049g/mL)，定容为500mL，配成0.5mol/L的乙酸盐缓 冲液；
[0041 ] 2)0 · lmol/L(即0 · ImM)的乙酸盐缓冲液的配置:取60mL 0 · 5mol/L的乙酸盐缓冲液 用水定容至300mL，配成0. lmol/L的乙酸盐缓冲液。
[0042]以下实施例中的实验所得到的所有数据用均数±标准差表示，结果用非配对t检 验，p〈0.05时有统计学意义。
[0043]实施例1放射性标记
[0044] N0TA-PEG6-TATE通过A118F化学方法进行18F标记，基于两种完全不同的反应体系， 乙酸盐缓冲液(pH=4)及乙腈，均是在同一个反应容器中进行，反应过程中无中间产物的产 生。
[0045] 1.1基于乙酸盐缓冲液
[0046] 从本中心加速器取lml 18F水溶液，大约0.55-l.llGBq(15-30mCi)，将其通过活化 后的QMA柱，然后用0.2ml 0.9%的生理盐水洗脱18F离子至1.5ml EP管中，然后依次往EP管 中加入3yL 2mM的A1 Cl3(6nmo 1)乙酸盐缓冲液(0·1Μ，ρΗ=4)以及54.5nmo 1 N0TA-PEG6-TATE 前体溶液。密封后，将反应液在100°C反应20分钟，冷却，并用0.5ml PBS缓冲液稀释，然后通 过活化后的C18柱，先用5ml去离子水冲洗柱子以除去18F-和A118F 2+，再用500μ1 7:3的乙醇/ 水混合液洗脱目标化合物，共洗脱3次。最终产品的放化产率及放化纯均是通过分析型HPLC 测得，通过PBS稀释后用于体内外实验。
[0047] 1.2基于乙腈反应体系
[0048] 从本中心加速器取lml 18F水溶液，大约0.55-l.llGBq(15-30mCi)，将其通过活化 后的QMA柱，然后用0.5ml的0.5mM K2C03溶液洗脱至5ml的反应瓶中，在105°C加入0.5ml乙腈 共沸除水3次，然后依次加入10μ1 0.026mol/L(260nmol)的A1C13溶液及200μ1 N0TA-PEG6-ΤΑΤΕ前体溶液（用lml乙腈溶解0 · 5mg Ν0ΤΑ-ΤΑΤΕ，即52 · 9nmol)再加30ul冰乙酸（52nmol)， 反应液在105 °C反应20分钟，冷却，纯化方法同上。
[0049] 1.3放射性标记结果如下：
[0050] A118F-N0TA-PEG6-TATE的结构式见图1，整个放射性标记过程在100-105°C60min之 内完成，衰减校正后基于乙酸盐反应体系的标记率介于70%-100%之间，基于乙腈反应体 系的标记率介于64%-74%之间（见图2。图2是基于乙腈反应体系的HPLC图，其中2-a为反应 后的，而2-b为反应完经过纯化后的HPLC图）。采用Sep-Pak C18柱分离柱纯化、HPLC检测后， 无论基于哪种反应体系，放纯度均大于98%，比活度大于16.9GBq/umol。
[0051 ] 本发明证实N0TA-PEG6-TATE可通过A118F螯合化学方法标记成功，而且这种新型的 A118F螯合化学较传统的18F辅基标记法放化产率高。无论基于乙酸盐缓冲液还是有机溶剂 乙腈，A1 18F-N0TA-PEG6-TATE均可标记成功，只是后者放化产率较前者略低。另外，基于乙腈 体系的标记方法需要共沸除水，总过程耗时较乙酸盐体系长。可根据情况选择上述任一体 系进行A1 18F化学标记。最终标记产物可通过C18柱进行分离纯化无需用HPLC进行纯化。 [0052]实施例2脂水分配系数测定
[0053] 取 1〇μ1 (1.85MBq)的 A118F-N0TA-PEG6-TATE 反应液，加入含有 0.5ml 正辛醇和 0.5ml 磷酸缓冲液（PBS)的1.5ml的EP管中，密封后在室温下涡旋2min，1000r/min条件下离心 5min。用加样枪依次取出有机相和水相各50μ1置于γ计数管中，用γ计数器测定计数。由公 式LogP = lg(计数正辛醇/计数PBS)计算标记物的平均LogP值，重复三次。
[0054] 经实验测定A118F-N0TA-PEG6-TATE的Log P = -2.45±0.38，说明此分子探针是明 显亲水性的，故可推测此探针在体内是通过泌尿系排泄的。
[0055]实施例3体外稳定性实验
[0056] 取 20μ1 (约3.7MBq)的 18F-N0TA-PEG6-TATE 溶液，分别置于 0.5mL 的 PBS 缓冲液（pH = 7.24,0.02111〇1/1)或胎牛血清卬85)中，置于37°(：下孵育，0.5，1，1.5及211后分别用!^(：测定 其放射化学纯度，以观察其体外稳定性。但对于胎牛血清，先用等体积的乙腈稀释，密封后 在室温下祸旋2min，1000r/min条件下离心5min，取上清液用HPLC进行分析。
[0057] A118F-N0TA-PEG6-TATE在PBS缓冲液及胎牛血清中的体外稳定性实验结果如图3所 示，从图3中可看出，此分子探针在37°CPBS缓冲液中孵育2h放化纯仍大于95 %，同时在胎牛 血清中孵育2h放化纯大于80%，说明A118F-N0TA-PEG6-TATE在体外大部分是稳定存在的。 [0058]实施例4细胞培养及模型建立
[0059]人胶质母细胞瘤U87MG肿瘤细胞株在加有10%胎牛血清、10011]/11^青霉素和 100 IU/ml链霉素的MEM培养基中培养，隔天更换培养介质。细胞在含有5 %⑶2、温度37 °C的 潮湿空气中培养。当细胞铺满培养皿后用0. 〇5%EDTA和0.0 lmol/L磷酸缓冲液(pH7.4)分离 用于进一步细胞培养。在每只雄性裸鼠右肩部皮下接种5 X106个U87MG细胞，待肿瘤直径达 到0.8 -lcm时用于体内Micro PET实验(大约种植后4-5周），所有动物实验遵循国家标准及 动物福利原则。
[0060] 实施例5细胞摄取及洗脱实验
[0061] 在24孔板中加入每孔IX 105个U87MG肿瘤细胞，然后过夜以保证其贴壁，隔天去除 培养基，每孔加入含185KBq A118F-N0TA-PEG6-TATE的无血清培养液0.5ml，37°C孵育10，30， 60,90，180min后用0.5ml/孔冰冻的I?S洗涤3遍，然后用0.25%胰蛋白酶/0.02%EDTA消化 细胞，收集细胞悬液用γ -计数仪测量计数。细胞摄取数据经衰变校正后用细胞结合力，即 百分加入剂量表示，实验设3个平行样，重复两次。
[0062] 对于细胞洗脱实验，在24孔板中加入每孔IX 105个U87MG肿瘤细胞，在37 °C与 185KBq/孔A118F-N0TA-PEG6-TATE共孵育2h使其充分内在化。然后去除培养基，用冰冻PBS冲 洗3遍，再加入无血清培养液37°C孵育0，15,30,60,90，12011^11。之后再用冰冻?85液冲洗3 遍，最后用0.25 %胰蛋白酶/0.02%EDTA消化细胞，收集细胞悬液用γ -计数仪测量计数。细 胞排泄数据经衰变校正后用细胞滞留率即百分加入剂量表示，实验设3个平行样，重复两 次。结果见图4。
[0063]由图4结果可知:U87MG细胞能快速、高效的结合A118F-N0TA-PEG6-TATE，如图4a所 示，而且随着孵育时间的延长，显像剂对U87MG的细胞结合力进一步增强，在孵育3h时达到 高峰，细胞结合力最高值为1.77% ±0.07%。在细胞洗脱实验中，在最初的lOmin内，A118F-NOTA-PEG6-TATE在U87MG细胞内排泄最快，细胞滞留率从1.35%±0.10%降至0.41%土 0.01 %，之后此显像剂在U87MG细胞内排泄缓慢，2h末细胞滞留0.29% ±0.07%，见图4b。 [0064]实施例6体内生物学分布实验
[0065]体内生物学实验是通过在2%异氟烷麻醉下每只荷U87MG瘤鼠通过尾静脉注射 3.7MBq(100yCi)的Al18F-NOTA-PEG6-TATE，阻断实验是通过尾静脉共同注射上述示踪剂及 前体溶液N0TA-PEG 6-TATE(10mg/kg)。在注射显像剂后lh后处死动物，分离肿瘤和主要的脏 器并称重，然后用γ -计数仪测量放射性计数，肿瘤和正常脏器的放射性摄取用每克组织百 分注射剂量（％ID/g)来表不。
[0066]结果见图5。图5结果表明注射显像剂lh后U87MG肿瘤摄取值（图5中第三个柱子)为 2.43 ±0.40 % ID/g，高于其他正常脏器，例如血液（1.22 ±0.09 % ID/g)、肌肉（0.86 土 0.12%10/^)、脑（0.89±0.09%10/^)心脏（1.68±0.25%10/^)、肝脏（1.71±0.14%10/ 8) 及肺脏(2.05±0.15%10/^)，尤其是肌肉及脑。显像剂在双肾摄取较高，高达4.13±0.02% ID/g，而胃肠摄取较低，说明Al18F-NOTA-PEG6-TATE是通过泌尿系排泄，而非肝胆排泄。另外 在SSTR表达的胰腺及肾上腺内可见明显生理性摄取，摄取值分别为1.06 ±0.18% ID/g及 3.88 ± 0.88 % ID/g，提示A118F-NOTA-PEG6-TATE与生长抑素受体有高亲和力。骨中摄取明显 增高，高达67.18±0.78% ID/g，说明Al18F-NOTA-PEG6-TATE在体内易发生脱氟现像。
[0067] 阻断实验显示肿瘤、胰腺及肾上腺对A118F-N0TA-PEG6-TATE的特异性摄取在大量 非放射性前体的存在下可明显减低，进一步证明A118F-N0TA-PEG6-TATE与生长抑素受体有 高亲和力。另外该显像剂在脑中摄取较低，提示显像剂不通过血脑屏障，而临床上常用的 18f-fdg可通过血脑屏障在脑中摄取较高，故Al 18F-NOTA-PEG6-TATE对脑肿瘤的显像优于常 用的 18f-fdg。
[0068] 而骨的摄取在过量前体存在下未见明显下降，说明骨中高摄取是由于Al18F-NOTA-PEG6-TATE在体内发生了脱氟，而非骨中有SSTR高表达。目前脱氟还不可避免，但因为脱下 的氟是很微量的，而且人体中本身含氟，所以不存在安全性问题。本发明的ai 18f-nota-PEG6-TATE可用于生长抑素受体靶向的肿瘤显像;特别是非骨转移的靶向生长抑素受体的 神经内分泌肿瘤显像。
[0069] 实施例7Micro PET显像
[0070] Micro PET采集及图像分析是用西门子Inevon小动物PET/CT进行的。实验组荷胶 质瘤U87MG裸鼠在2%异氟烷麻醉下经尾静脉注射100μΙ约3.7MBq(100yCi)的A1 18F-N0TA-PEG6-TATE，在注射显像剂60min及120min后采集静态图像。阻断组是通过尾静脉共注射显 像剂3.7MBq(100yCi)及10mg/kg的前体溶液N0TA-PEG6-TATE，在注射显像剂60min后采集静 态图像。实验动物置于俯卧位进行固定，在显像过程中用带有连接管的鼻罩持续吸入异氟 烷使动物维持在麻醉状态下，实验动物的体温用水循环加热板使其保持稳定。图像经用CT 进行衰减校正后并采用2D有序子集期望最大化法重建。每次PET扫描后，用Inevon Research Workplace 4.1软件在衰减校正后的全身冠状位图像上勾画肿瘤及主要脏器的 感兴趣区，测量放射性摄取值，用％ ID/g表示，PET显像结束后将动物处死，遵循动物福利原 则。
[0071] 通过Micro PET/CT显像可观察A118F-N0TA-PEG6-TATE在荷U87MG瘤鼠中体内的药 代动力学特性及肿瘤靶向特征。从图6可见，U87MG瘤结节在Micro PET图像上显示清晰，在 注射显像剂1小时及2小时后瘤组织的摄取值分别为(3.8±0.3)及(4.4±0.4)%1〇4。在过 量非放射性前体的存在下，肿瘤摄取明显下降，近乎于背景，降至(〇.33±0.06)%ID/g，E 实了 A118F-N0TA-PEG6-TATE对SSTR阳性的U87MG瘤组织有明显的SSTR靶向性。另外类似于体 内分布实验，双肾摄取较高、肝脏及肌肉摄取较低。体内生物学分布实验及Micro PET显像 结果提示双肾摄取较高，而肝肠摄取较低，说明该显像剂主要通过泌尿系排泄，与脂水分配 系数实验得出该显像剂亲水性较强结论基本一致。
[0072] 体内分布实验结果一致，Micro PET/CT显像进一步证实A118F-N0TA-PEG6-TATE在 体内发生了脱氟现象。正常组中股骨摄取值较高，为（14.4±2.7)%1〇4，而阻断组中未见 明显下降为（14.4±1.8)%ID/g，说明骨中的高摄取不是由于骨中SSTR高表达，而是发生了 脱氟。
[0073]实施例8免疫组化实验
[0074]显像结束后，将荷U87MG瘤鼠断颈处死，将瘤结节解剖出来，用10 %福尔马林固定， 石蜡包埋并切片至4μπι，脱蜡水化、抗原修复，用DAB显色方法进行SSTR2抗体(H-50，SANTA) 的免疫染色。同时，用非神经内分泌肿瘤-人口腔上皮癌细胞株KB瘤结节进行阴性对照。 [0075] 免疫组化结果显示在U87MG肿瘤细胞膜表面可见SSTR2高表达，而KB肿瘤则成低表 达，见图7，这些结果与Micro PET显像结果相符，说明肿瘤摄取显像剂A118F-N0TA-PEG6-TATE不是因为非特异性摄取，而是肿瘤细胞表面高表达SSTR2所致。
[0076]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种祀向生长抑素受体的阳Τ分子探针，为A118F-N0TA-PEG6-TATE，其结构式如下：2. 阳T分子探针A118F-N0TA-PEG6-TATE在生长抑素受体祀向的肿瘤显像中的应用。3. 阳T分子探针A118F-N0TA-PEG6-TATE在神经内分泌肿瘤分子影像诊断中的应用。4. 一种小分子探针的制备方法，其特征在于，包括下列步骤:在盛有1中离子的反应容器 中加入AlClsW及双功能馨合剂ΝΟΤΑ连接的小分子化合物，90-105°C反应15-25分钟，然后 分离纯化，制备得到All中-ΝΟΤΑ标记的小分子探针。5. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于:小分子化合物选自小分子多肤或维生 素。6. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于:小分子化合物为PEG6-TATE。7. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：反应缓冲液为乙酸盐溶液或无水乙 腊。8. 根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：乙酸盐缓冲液的浓度为0.1-0.5mol/ L，抑为 3-6.5。9. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于:在乙酸盐缓冲液中，每0.55-1.11 GBq 的"F离子中加入6nmol的AlCbW及54.5-136nmol 的NOTA-PEGs-TATE。10. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：在无水乙腊中，每0.55-1.11 GBq 的"F离子中加入52-260nmol 的AlCb W及26.4-264.5nmol NOTA-PEGs-TATE，W及26.4- 264.5nmol冰乙酸。
【文档编号】C07K7/06GK106084005SQ201610423679
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月15日 公开号201610423679.4, CN 106084005 A, CN 106084005A, CN 201610423679, CN-A-106084005, CN106084005 A, CN106084005A, CN201610423679, CN201610423679.4
【发明人】尹吉林, 王欣璐, 张蓉琴, 王成
【申请人】广州军区广州总医院