头孢克洛的药物组合物及其对急性肺损伤的保护作用
【专利摘要】本发明公开了头孢克洛的药物组合物及其对急性肺损伤的保护作用，本发明提供的头孢克洛的药物组合物中含有头孢克洛和一种从石菖蒲的干燥根茎中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，头孢克洛和该天然产物单独作用时，对肺损伤具有防治作用；二者联合作用时，对肺损伤的防治作用进一步提高，可以开发成防治肺损伤的药物。本发明与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
头孢克洛的药物组合物及其对急性肺损伤的保护作用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及头孢克洛的新用途，具体涉及一种头孢克洛的药 物组合物及其对急性肺损伤的保护作用。
【背景技术】
[0002] 头孢克洛属第二代口服头孢菌素，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有很 强的杀灭作用。本品为广谱半合成头孢菌素类抗生素。对产青霉素酶金黄色葡萄球菌、A组 溶血性链球菌、草绿色链球菌和表皮葡萄球菌的活性与头孢羟氨苄相同，对不产酶金黄色 葡萄球菌和肺炎球菌的抗菌作用较头孢羟氨苄强2~4倍。对革兰阴性杆菌包括对大肠埃希 菌和肺炎克雷伯菌等的活性较头孢氨苄强，与头孢羟氨苄相仿，对奇异变形杆菌、沙门菌属 和志贺菌属的活性较头孢羟氨苄强。
[0003] 该品的作用机制是抑制细菌细胞壁的合成。
[0004] 目前尚未见头孢克洛与肺损伤防治的相关报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种头孢克洛的药物组合物，该药物组合物中含有头孢克 洛和一种从石菖蒲中分离得到的结构新颖的天然产物，头孢克洛和该天然产物可以协同治 疗肺损伤。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] -种头孢克洛的药物组合物，包括头孢克洛、如上所述的化合物（I)和药学上可以 接受的载体。
[0010] 如上所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将石菖蒲的干燥根茎 粉碎，用85~95 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱10个柱体积，再用70%乙醇洗脱12 个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱 得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和2:1 的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相 硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗 脱液减压浓缩得到化合物(I)。
[0011] 进一步地，步骤(a)中用90%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0012]进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0013] 如上所述的化合物(I)在制备治疗肺损伤的药物中的应用。
[0014] 如上所述的头孢克洛的药物组合物在制备治疗肺损伤的药物中的应用。
[0015] 本发明的优点：
[0016] 本发明提供的头孢克洛的药物组合物中含有头孢克洛和一种从石菖蒲中分离得 到的结构新颖的天然产物，头孢克洛和该天然产物单独作用时，对肺损伤具有防治作用;二 者联合作用时，对肺损伤的防治作用进一步提高，可以开发成防治肺损伤的药物。本发明与 现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0018] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0019]分离方法：（a)将石菖蒲的干燥根茎（2kg)粉碎，用90 %乙醇热回流提取（20L X 3 次），合并提取液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4LX3次）、乙酸乙酯(4LX3次)和水饱 和的正丁醇(4LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱10个柱体积，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中 70 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1 (8个柱体积）、20 :1 (8个柱体 积）、10:1(8个柱体积)和5:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8个柱体积）、5:1(10个柱体积） 和2:1(5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷 基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个 柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (395mg，HPLC归一化纯度大于98% )。
[0020] 结构确证：白色无定形粉末，册431-1^显示[1+!1]+为111/2 469.3243，结合核磁特 征可得分子式为〇3〇1144〇4，不饱和度为9。核磁共振氢谱数据511(。。111，00(]13,60〇]\〇2):!1-1 (1.49，m)，H-l(2.91，ddd，J=13.3,7.0,4.2Hz)，H-2(2.41，ddd，J=15.4,6.8,4.2Hz)，H-2 (2.65，ddd，J=15.4，11.2,7.0Hz)，H-5(1.34，d，J=11.2Hz)，H-6(1.48，m)，H-6(1.63，m)， H-7(1.68，m)，H-7(1.87，m)，H-9(2.47，s)，H-16(2.21，d，J=13.1Hz)，H-16(2.43，d，J = 13.1Hz)，H-18(2.46，d，J=8.4Hz)，H-19(1.41，m)，Η-20(1·10，m)，H-21(1.28，m)，H-21 (1.48，m)，H-22(1.36，m)，H-22(1.51，m)，H-23(1.02，s)，H-24(0.82，s)，H-25(1.19，s)，H-26(1.22，s)，H-27(1.36，s)，H-28(0.87，s)，H-29(0.85，d，J = 6.3Hz)，H-30(0.93，d，J = 6 · 1Hz)，OH-12(6 · 38，s);核磁共振碳谱数据δ。(ppm，CDC13，125MHz): 39 · 2(CH2，1-C)，34 · 3 (CH2,2-C)，215.6(C，3-C)，47.5(C，4-C)，55.2(CH，5-C)，19.7(CH2,6-C)，38.4(CH 2,7-C)， 46.5(C，8-C)，54.7(CH，9-C)，37.2(C，10-C)，196.2(C，11-C)，140.8(C，12-C)，143.2(C，13-C)，58.6(C，14-C)，209.4(C，15-C)，54.3(CH2，16-C)，53.4(C，17-C)，48.0(CH，18-C)，39.9 (CH，19-C)，40.5(CH，20-C)，30.8(CH2,21-C)，38.8(CH2,22-C)，26.6(CH 3,23-C)，15.7(CH3， 24-C)，13.7(CH3,25-C)，19.7(CH3,26-C)，14.3(CH3,27-C)，19.3(CH3,28-C)，17.2(CH 3,29-〇,2〇.4((：!13,3〇-〇。红外波谱表明该化合物含有€[，0-不饱和羰基（1705(^_ 1)，羟基 (3425cm-羰基（1760cm-双键（1663cm-4 和偕二甲基（1380cm-4 基团。13C-匪R、DEPT 和 HSQC谱中显示有30个碳信号，包括八个甲基，七个亚甲基，五个次甲基，三个羰基，一对四取 代烯烃碳，以及五个季碳，以上功能结构再结合不饱和数表明该化合物为五环三萜结构。 ^-NMR谱结合HSQC谱显示的六个叔甲基质子信号δ Η 1.02(3H，s)，0.82(3H，s)，1.19(3H，s)， 1.22(3H，s)，1.36(3H，s)和0.87(3H，s)，两个仲甲基质子信号δ Η 0.85(3H，d，J = 6.3Hz)， 0.93(3!1，(1，1 = 6.1他）以及1!1-匪1?数据表明该化合物为乌苏烷型三萜类化合物。在该乌苏 烷型化合物中，C-3、C-11和C-15位形成酮基，C-12与C-13形成双键结构。HMBC谱中H 3-23和 H3-24与C-3，H2-16和H3-27与C-15的相关性以及它们的碳化学位移进一步确证C-3和C-15位 形成酮基。另HMBC谱中H-9和H-18与C-12，H-18和H 3-27与C-13以及OH-12与C-12相关信号以 及它们的碳化学位移表明该化合物存在烯醇式结构，羟基连接在C-12位与C-12和C-13形成 的双键构成烯醇式结构。此外，OH-12和H-9与C-11的相关信号以及碳化学位移确认C-11位 形成羰基。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确 定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。化学 结构式和碳原子编号如下：
[0021]
[0022] 实施例2:药理作用 [0023] 1、材料与方法
[0024] 1.1动物
[0025]选用健康雄性清洁级SD大鼠，体重320-370g(由南京军区总医院动物实验中心提 供）。动物饲养在温度(22 ± 1) °C、相对湿度55 %~65 %、12h光照周期的通风干燥环境中，采 用大小鼠维持料1022饲养。
[0026] 1.2试剂与样品
[0027] 头孢克洛购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。大 鼠肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-IO(IL-IO)，酶联免疫吸附 法(ELISA)检测试剂盒购自美国Biosource International公司；大鼠 HMGB1ELISA检测试剂 盒购自日本Shino-Test公司产品。
[0028] 1.3大鼠分组及模型制备
[0029]采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒血症模型，术前禁食12h，以乌拉坦（1250mg/ kg)腹腔注射剂量麻醉，沿腹正中线做一 2cm长的切口，进腹找到盲肠，以4-0丝线环形结扎 盲肠根部，以18G针头在游离端对穿1次后挤出粪便少许，送回腹腔，随后依次缝合腹膜和皮 肤。Sham组仅做剖腹、分离盲肠远端、关腹手术。术后立即皮下注射生理盐水lmL补充术中液 体丢失。大鼠随机分为5组，每组10只，分别为假手术组(Sham组）、模型对照组(CLP组）、头孢 克洛组（l〇mg · kg-Ο、化合物（I)组（10mg · kg-"、头孢克洛与化合物（I)组合物组【5mg · kg 4头孢克洛+5mg · kg<化合物（I)】<XLP+药物组于CLP后即时及6h后腹腔分别注射药物； Sham组于假手术后即时及6h后、CLP组于CLP后0及6h腹腔分别注射生理盐水lmL。
[0030] 1.4检测指标及方法
[0031] 各组动物均于CLP后24h取股静脉血2mL，离心10min后取血清-80°C保存。采用 ELISA法检测血清中TNF-a、HMGBl及IL-10的水平。此外，CLP 24h后检测肺组织干湿重比(W/ D)、髓过氧化物酶活性(ΜΡ0)。
[0032] 1.5统计学方法
[0033] 采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，计量资料以均数土标准差(X 土 s)表示，多 组间比较采用单因素方差分析，P〈〇.05为差异有统计学意义。
[0034] 2、实验结果
[0035] 2.1对脓毒血症大鼠 TNF_a、HMGBl及IL-10水平的影响
[0036] 与Sham组比较，CLP明显增加血浆TNF-a、HMGBl及IL-10水平。CLP+药物组CLP后24h 时的TNF-a和HMGB1水平低于CLP组；与模型对照组比较，头孢克洛与化合物（I)组合物组血 浆TNF-a、HMGB1及IL-10水平明显降低(P<0.01);与模型对照组比较，头孢克洛组、化合物 (I)组血浆TNF-a、HMGBl及IL-10水平降低(Ρ<0·05)。结果如下。
[0037] 2.2对脓毒血症大鼠肺组织W/D及ΜΡ0活性的影响
[0038] 与Sham组比较，CLP明显增加肺组织W/D及ΜΡ0活性，（Ρ〈0·05);而CLP+药物组肺组 织W/D及ΜΡ0活性低于CLP组。与模型对照组比较，头孢克洛与化合物（I)组合物组肺组织W/D 及ΜΡ0活性明显降低(P<0.01);与模型对照组比较，头孢克洛组、化合物（I)组肺组织W/D及 ΜΡ0活性降低(P<0.05)。结果见下表。
[0039]
[0040] 上述结果表明，头孢克洛与化合物（I)组合物可以显著降低脓毒血症引发的肺损 伤，且效果优于头孢克洛或化合物（I)单独作用的结果，可以开发成治疗急性肺损伤的药 物。
[0041] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种头抱克洛的药物组合物，其特征在于:包括头抱克洛、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可W接受的载体。3. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将石 富蒲的干燥根茎粉碎，用85~95%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石 油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇 萃取物；（b)步骤(a)中正下醇萃取物用大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱10个柱体积，再用 70%乙醇洗脱12个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b) 中70 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲 烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比 为8:1、5:1和2:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基 硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。4. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用90%乙醇热 回流提取，合并提取液。5. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。6. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗肺损伤的药物中的应用。7. 权利要求2所述的头抱克洛的药物组合物在制备治疗肺损伤的药物中的应用。
【文档编号】A61P11/00GK106083980SQ201610411907
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月13日 公开号201610411907.6, CN 106083980 A, CN 106083980A, CN 201610411907, CN-A-106083980, CN106083980 A, CN106083980A, CN201610411907, CN201610411907.6
【发明人】不公告发明人
【申请人】崔坤峰