磺胺苯甲醛衍生物制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种抗原材料制备方法，具体为磺胺苯甲醛衍生物制备方法，取磺胺溶于溶剂中，配得溶液1；所述的溶剂为1，4?二氧六环、DMF或DMA中的一种；选取邻苯二甲醛、香草醛、对羟基苯甲醛中一种溶解于1，4?二氧六环中，配得溶液2；溶液2加热逐滴加入溶液1，保温搅拌反应1h；冷却至室温析晶、过滤干燥，提纯。本发明提供的磺胺苯甲醛衍生物制备方法，在磺胺的芳氨基链接一个侧臂后再制备磺胺抗原课得到高效的免疫原，以制备族特异性抗体。
【专利说明】
横胺苯甲酵衍生物制备方法
技术领域
[0001] 本发明设及一种抗原材料制备方法，具体为横胺苯甲醒衍生物制备方法。
【背景技术】
[0002] 由于横胺分子量较小，必须将其与载体偶联形成完全抗原后才能制备相应抗体， 因此，合成高质量的免疫原是小分子物质免疫分析的关键。合成免疫原一般采用化学方法 使半抗原与载体蛋白偶联。抗体通常对远离联结位点的半抗原部分具有较好的识别能力， 因此半抗原与载体蛋白的偶联位置最好远离重要的抗原决定簇。横胺半抗原的合成必须从 N端构建间隔臂和活性基团W连接载体蛋白，从而将它们的共同母核结构暴露出来作为抗 原决定簇。
【发明内容】
[0003] 针对上述技术问题本发明提供一种横胺苯甲醒衍生物制备方法。
[0004] 横胺苯甲醒衍生物制备方法，包括W下步骤：
[0005] (1)取横胺溶于溶剂中，配得溶液1;所述的溶剂为1,4-二氧六环、DMF或DMA中的一 种；
[0006] (2)选取邻苯二甲醒、香草醒、对径基苯甲醒中一种溶解于1，4-二氧六环中，配得 溶液2;
[0007] (3)溶液巧日热80°C揽拌，逐滴加入溶液1，保溫揽拌反应化;溶液1中的溶质和溶液 2中的溶质摩尔量相同。
[000引（4)反应结束后将反应液冷却至室溫析晶化，过滤干燥，得到横胺衍生物粗品；
[0009] (5)通过制备液相制得横胺衍生物纯品。
[0010] 本发明提供的横胺苯甲醒衍生物制备方法，在横胺的芳氨基链接一个侧臂后再制 备横胺抗原课得到高效的免疫原，W制备族特异性抗体。
【附图说明】
[0011] 图1为实施例1的横胺半抗原的ESI-MS质谱之一；
[0012] 图2为实施例1的横胺半抗原的ESI-MS质谱之二；
[001 ；3 ]图3为实施例1的横胺半抗原的iH-NMR;
[0014] 图4为实施例1的横胺半抗原的"C-NMR。
【具体实施方式】
[0015] 结合【附图说明】本发明【具体实施方式】。
[0016] 实施例中所用的试剂与药品：横胺、邻二苯甲醒、水溶性碳二亚胺化DC)、戊二醒、 N，N-二甲基甲酯胺(DMF)、1，4-二氧六环等均购自上海晶纯生化科技股份有限公司；牛血清 蛋白（BSA)、鸡卵清蛋白（OVA)、牛血清白蛋白（BSA，纯度98% )、卵清蛋白（OVA，纯度99 % )均 购自Si卵a公司。
[0017] 实施例中所用的仪器与设备：IRsolution红外光谱仪旧本岛津公司），AVANCE- 500核磁共振仪(瑞：t化uker公司），高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），电喷雾电离质谱 (美国安捷伦公司），751GW型紫外分光光度计（上海分析仪器厂），BS214D型电子天平（陕西 鹏展科技有限公司），各种玻璃仪器(天津玻璃仪器厂），RE-2000E旋转蒸发仪(上海亚荣生 仪器厂）。
[0018] 横胺苯甲醒衍生物制备过程：
[0019] 取横胺0.34g(2mmol)，溶于5mll，4-二氧六环溶液中，配得溶液1，称取邻苯二甲醒 0.27g( 2mmol)溶于15ml 1，4-二氧六环，配得溶液2，溶液巧日入至50ml锥形瓶中80°C揽拌，逐 滴加入溶液1，80°C揽拌反应化，反应结束后将反应液冷却至室溫析晶化，过滤干燥，得到横 胺衍生物粗品。通过制备液相（Column: Sunf ire，（ 3.加 m，150*4.6mm)流动相A:此0(0.01 % TFA)-B:乙腊（0.01%TFA)l-9min 5%B-95%B，9-14min，95%B，14-15min 95%B-5%B，流 速1.OmL/min，柱溫40°C)制得横胺衍生物纯品，用红外光谱扫描仪、ESI-MS与核磁共振法进 行鉴定。
[0020] 反应过程为：
[0021]
[0022] 对实施例的产物进行检验与分析：
[0023] 1.半抗原鉴定
[0024] (1)横胺半抗原红外光谱鉴定
[0025] 根据横胺半抗原的红外光谱，其中波数2820。111^2720細^醒基乂(：-即及收峰； 3518cm-i处吸收峰为半抗原中-N此吸收峰，1383-133。111-1，1161-1105(3111-1是￥3〇2吸收峰， 1503cm-i为vc = N的特征吸收；1668cm-i强吸收峰为幾基特征峰。由2820cm-i、2720cm-i、 1668cm-i醒基的特征吸收与1503cm-ic = N的特征吸收可推断横胺与邻二苯甲醒连结成功。
[0026] (2)横胺半抗原质谱的鉴定
[0027] 横胺半抗原的(+化SI-MS全扫描质谱如图1和图2,出现m/z 289的[M+l]+准分子离 子峰与半抗原分子质量对应。为了进一步确定其结构，对m/z 389.3的分子离子进行了（ + ) ESI-MS2分析，m/z 289的分子离子裂解后出现m/z 272、224、208、178等碎牙离子峰，都能合 理归属，因此m/z289分子离子可归属为半抗原横胺邻二苯甲醒衍生物。
[0028] m/z289可能的碎裂机理：
[0029]
[0032] 图 3是横胺半抗原 1h-醒R: (500MHz，DMS0-d6)88.11 (d，2H，J = 8.5Hz，CHAr)，7.86 (d，2H，J = 8.5Hz，CHAr)，7.83(d，lH，J =細z，CH0) ,7.71 (dd，2H，J= 10Hz，7Hz，CSAr) ,7.57 (m，-N = 巧），7.35(s，2H，CpR)，5.10(s，2H，NH2)。图4是横胺半抗原l3c-NMR:(500MHz，DMS0- d6)Sl67.1(CH0)，142.2(C-l)，141.1(C-4)，138.9(C-2'),132.7(C-1'),131.9(C-3')， 128.3(C-6' ),126.7(C-3,5)，123.4(04' ),123.5(C-5' ),118.6(C-2,6)，50.4(N=CH)。从 碳原子与氨原子归属情况可推断横胺成功连接了邻二苯甲醒。
[0033] 实施例2
[0034] 取横胺0.34g (2mmo 1)，溶于5ml 1，4-二氧六环溶剂中，配得溶液1，称取邻苯二甲醒 0.27g( 2mmol)溶于15ml 1，4-二氧六环，配得溶液2，溶液巧日入至50ml锥形瓶中80°C揽拌，逐 滴加入溶液1，80°C揽拌反应化，反应结束后将反应液冷却至室溫析晶化，过滤干燥，得到横 胺衍生物粗品。
[0035] 实施例3
[0036] 取横胺0 . %g( 2mmol)，溶于5ml DMF或DMA溶液中，配得溶液1，称取邻苯二甲醒 0.27g( 2mmol)溶于15ml 1，4-二氧六环，配得溶液2，溶液巧日入至50ml锥形瓶中80°C揽拌，逐 滴加入溶液1，80°C揽拌反应化，反应结束后将反应液冷却至室溫析晶化，过滤干燥，得到横 胺衍生物粗品。
[0037] 实施例4
[003引取横胺0.34g(2mmol)，溶于5ml 1，4-二氧六环溶液中，配得溶液1，称取香草醒 0.24g( 2mmol)溶于15ml 1，4-二氧六环，配得溶液2，溶液巧日入至50ml锥形瓶中80°C揽拌，逐 滴加入溶液1，80°C揽拌反应化，反应结束后将反应液冷却至室溫析晶化，过滤干燥，得到横 胺衍生物粗品。
[0039] 实施例5
[0040] 取横胺〇.34g(2mmol)，溶于5mll，4-二氧六环溶液中，配得溶液1，称取对径基苯甲 醒0.24g (2mmol)溶于15ml 1，4-二氧六环，配得溶液2，溶液巧日入至50ml锥形瓶中80°C揽拌， 逐滴加入溶液1，80°C揽拌反应比，反应结束后将反应液冷却至室溫析晶化，过滤干燥，得到 横胺衍生物粗品。
【主权项】
1.磺胺苯甲醛衍生物制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 取磺胺溶于溶剂中，配得溶液1;所述的溶剂为1，4_二氧六环、DMF或DMA中的一种； (2) 选取邻苯二甲醛、香草醛、对羟基苯甲醛中一种溶解于1，4_二氧六环中，配得溶液 2； (3) 溶液2加热80 °C搅拌，逐滴加入溶液1，保温搅拌反应lh;溶液1中的溶质和溶液2中 的溶质摩尔量相同； (4) 反应结束后将反应液冷却至室温析晶2h，过滤干燥，得到磺胺衍生物粗品； (5) 通过制备液相制得磺胺衍生物纯品。
【文档编号】C07C311/39GK106083662SQ201610368335
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年5月21日
【发明人】魏东, 冯亭亭, 黄智鸿, 邢艳安, 乔文珍, 张秀敏, 郭振慧, 栗慧, 金艳丹
【申请人】魏东