芥子碱氯化盐的合成及其应用
【专利摘要】本发明属于天然活性药物领域，具体涉及到芥子碱氯化盐的合成和在治疗炎症方面上的应用。首先通过油菜籽粕制得芥子碱氯化盐，其次通过采用小鼠耳肿胀试验方法证明芥子碱氯化盐可应用在治疗炎症方面的药物上。本发明的有益效果是芥子碱氯化盐药物在抗炎上无副作用、作用效果强、无剂量依赖性、半衰期短、能够长期使用等优点，能够满足治疗炎症的要求。
【专利说明】
芥子碱氯化盐的合成及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于天然活性药物领域，具体涉及到芥子碱氯化盐的合成和在治疗炎症方 面上的应用。
【背景技术】
[0002] 炎症（Inflammation)是许多疾病的主要病理反应，是机体组织对各种损伤因子发 生的防御为主的反应。主要是在血管、体液和细胞的参与下，机体组织局部出现一系列变 化，包括有利于清除致炎因子的反应，也包括可以引起自身细胞、组织乃至器官的病变反 应，所以炎症反应本质上是一种损伤和抗损伤的过程。
[0003] 炎症的恢复效果往往取决于损伤和抗损伤作用的比较，如果炎症反应比较剧烈， 致炎因子未能得到及时清除，受损组织或器官没有得到很好的修复，炎症反应的结果不但 严重影响人们的正常学习生活，甚至会对生命构成威胁。如胸膜炎引起的胸腔积液、心包炎 引起的纤维粘连、类风湿性关节炎引起的关节畸形等都会对机体健康构成严重危害。
[0004]在我国，炎症用药随处可见，几乎所有的患者靠吃消炎药抑制一些疼痛症状。生活 中常用非留体抗炎药主要包括一些解热镇痛药，例如抗炎药阿司匹林对胃黏膜有损害，口 服阿司匹林后，药物直接接触胃黏膜，它不仅可使黏膜上皮细胞层完整性丧失，还能分解黏 液层，因此破坏了胃黏膜屏障;长期服用布洛芬，会导致肾功能衰竭。如今，炎症治疗主要通 过抑制炎症介质的合成，起到解热、镇痛、抗炎的作用。因此寻找有效的、副作用小的、能够 长期使用的新药具有重要意义。
【发明内容】
[0005] 为了克服上述的不足，本发明的目的在于提供中药中生物活性成份芥子碱氯化盐 的合成以及其在治疗炎症方面上的新应用。
[0006] 本发明采取的技术方案包括芥子碱氯化盐的合成和其应用。
[0007] 制备芥子碱氯化盐的方法包括如下步骤：
[0008] 1)首先将水完全没过油菜籽柏，其中：油菜籽柏kg:自来水L= 1:4~1:10，浸泡2~ 6个小时，然后放置在电加热套上加热，使用电压调节仪调节电压，使其始终保持在微沸腾 状态，每分钟搅拌5~6下，提取3~4次，每次3~5小时，提取所需水量比例为5:4:4:3，用6层 纱布过滤，将滤液用旋转蒸发仪浓缩，得到浸膏，以浸膏：乙醇= 1:10~1:20的比例用乙醇 对所得浸膏进行萃取，萃取3~4次，每次3~4小时;将萃取所得溶液进行抽滤，沉淀层丢弃， 乙醇抽滤层用旋转蒸发仪进行浓缩至无醇味；
[0009] 2)将浓缩至无醇味的浸膏用蒸馏水进行稀释，比例为水毫升:浸膏克= 10:1~30: 1，把稀释的溶液抽滤，加入适量的20%硫氰酸钾，将硫氰化钾溶液与稀释液充分混合，置于 4°C冰箱中冷却48~72小时，后将沉淀层滤出，沉淀层即为所得芥子碱硫氰酸盐，滤除沉淀 后，继续放置在4°C冰箱中冷却结晶12~24小时，取出过滤，如此反复结晶，将芥子碱硫氰酸 盐用40°C~50°C的甲醇溶解，芥子碱硫氰酸盐克：甲醇毫升=1:100~1:200，溶解后趁热过 滤，滤液层在室温下静置6~8小时，有灰色结晶物产生，将结晶刮出，放在减压干燥箱里干 燥24~48h，就得到芥子碱硫氰酸盐的粉末，沉淀层再用40°C~50°C甲醇溶解，有部分溶解， 按照上面操作3~5次，得到纯度大于90%的芥子碱硫氰酸盐。
[0010] 3)芥子碱氯化盐的制备:称取芥子碱硫氰酸盐1克，溶于800-1000毫升水中，加上 上海国药生产的717阴离子交换树脂150-160克，30分钟后用氯化铁溶液进行检测，芥子碱 硫氰酸盐遇氯化铁溶液成血红色，与芥子碱氯化盐不变色。树脂处理方法用2 %的氢氧化钠 400-500毫升浸泡1.5-2小时，用约1800-2000毫升蒸馏水冲至中性，再以2%盐酸浸泡1.5-2 小时，用1800-2000毫升蒸馏水冲至中性，待用。
[0011] 芥子碱氯化盐可应用在治疗炎症方面的药物上。
[0012] 本发明的有益效果是芥子碱氯化盐药物在抗炎上无副作用、作用效果强、无剂量 依赖性、半衰期短、能够长期使用等优点，能够满足治疗炎症的要求。
【附图说明】
[0013]图1是肿胀度均值图；
[0014] 图2是肿胀率均值图。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合图1、图2和实施例对本发明做进一步说明本发明。
[0016] 制备芥子碱氯化盐的方法包括如下步骤：
[0017] 1)首先将水完全没过油菜籽柏，其中：油菜籽柏kg:自来水L= 1:4~1:10，浸泡2~ 6个小时，然后放置在电加热套上加热，使用电压调节仪调节电压，使其始终保持在微沸腾 状态，每分钟搅拌5~6下，提取3~4次，每次3~5小时，提取所需水量比例为5:4:4:3，用6层 纱布过滤，将滤液用旋转蒸发仪浓缩，得到浸膏，以浸膏：乙醇= 1:10~1:20的比例用乙醇 对所得浸膏进行萃取，萃取3~4次，每次3~4小时;将萃取所得溶液进行抽滤，沉淀层丢弃， 乙醇抽滤层用旋转蒸发仪进行浓缩至无醇味；
[0018] 2)将浓缩至无醇味的浸膏用蒸馏水进行稀释，比例为水毫升:浸膏克= 10:1~30: 1，把稀释的溶液抽滤，加入适量的20%硫氰酸钾，将硫氰化钾溶液与稀释液充分混合，置于 4°C冰箱中冷却48~72小时，后将沉淀层滤出，沉淀层即为所得芥子碱硫氰酸盐，滤除沉淀 后，继续放置在4°C冰箱中冷却结晶12~24小时，取出过滤，如此反复结晶，将芥子碱硫氰酸 盐用40°C~50°C的甲醇溶解，芥子碱硫氰酸盐克：甲醇毫升=1:100~1:200，溶解后趁热过 滤，滤液层在室温下静置6~8小时，有灰色结晶物产生，将结晶刮出，放在减压干燥箱里干 燥24~48h，就得到芥子碱硫氰酸盐的粉末，沉淀层再用40°C~50°C甲醇溶解，有部分溶解， 按照上面操作3~5次，得到纯度大于90%的芥子碱硫氰酸盐。
[0019] 3)芥子碱氯化盐的制备:称取芥子碱硫氰酸盐1克，溶于800-1000毫升水中，加上 上海国药生产的717阴离子交换树脂150-160克，30分钟后用氯化铁溶液进行检测，芥子碱 硫氰酸盐遇氯化铁溶液成血红色，与芥子碱氯化盐不变色。树脂处理方法用2 %的氢氧化钠 400-500毫升浸泡1.5-2小时，用约1800-2000毫升蒸馏水冲至中性，再以2%盐酸浸泡1.5-2 小时，用1800-2000毫升蒸馏水冲至中性，待用。
[0020] 芥子碱氯化盐的抗炎作用。
[0021 ] 1.方法:采用小鼠耳肿胀试验方法。
[0022] 2.材料:已合成芥子碱氯化盐，小鼠由大连大学实验动物饲养中心提供，二甲苯由 天津市科密欧化学试剂有限公司提供，地塞米松磷酸注射液由广州康和药业有限公司提 供，其余试剂均为市售AR级。
[0023]仪器设备：电子天平，卡特勒-托利多仪器(上海)有限公司，型号为AL104。
[0024] 3.实验过程
[0025] 3.1实验药品的准备:浓度梯度稀释法配置15. Omg/ml芥子碱氯化盐溶液和7.5mg/ ml芥子碱氯化盐溶液，生理盐水，地塞米松磷酸注射液。
[0026] 3.2实验小鼠分组:取昆明种小鼠92只，雌雄各半，随机分为四组，芥子碱氯化盐低 剂量组、芥子碱氯化盐高剂量组、生理盐水组(空白对照组）、阳性对照组(地晒米松组）。 [0027] 3.3实验小鼠给药:采用腹腔注射给药。生理盐水组每只小鼠给生理盐水0.2ml，芥 子碱氯化盐低剂量组每只小鼠给7.5mg/ml芥子碱氯化盐0.2ml，芥子碱氯化盐高剂量组每 只小鼠给15. Omg/ml芥子碱氯化盐0.2ml，地塞米松组每只小鼠给地塞米松液0.2ml。
[0028] 3.4实验小鼠致炎:每只小鼠给药30分钟后，取二甲苯50微升均匀涂抹在小鼠左耳 前后两侧。
[0029] 3.5处死小鼠，取耳片:每只小鼠致炎一小时后，脱颈处死小鼠，用医用剪刀分别剪 出小鼠左右耳，然后用7毫米打孔器在左右耳对称位置处沿耳朵边缘打下耳片。
[0030] 3.6实验结果处理:将取得耳片，立即用精密电子天平称重，记录其质量，计算肿胀 度和肿胀率。
[0031]肿胀度=左耳质量-右耳质量；
[0032] 肿胀率=(左耳质量-右耳质量)/右耳质量*100%。
[0033] 4、结果：
[0034]表1实验数据均值结果
[0036] 注：芥子碱氯化盐组与生理盐水组相比较，乍〈0.05 ;芥子碱氯化盐组与地塞米松 组相比较，#P〈〇.〇5。
[0037]利用SPSS数据处理软件单因素方差分析得到，其肿胀度(P = 0.026〈0.05)显著性 明显。再此之后检验，多重比较，发现生理盐水组与芥子碱氯化盐15mg/ml (P = 0.005〈0.05) 具有显著性，芥子碱氯化盐7.5mg/ml与芥子碱氯化盐1511^/1111(? = 0.015〈0.05)具有显著 性。其肿胀率(P = 0.019〈0.05)显著性明显。再此之后检验，多重比较，发现生理盐水组与芥 子碱氯化盐15mg/ml (P = 0.008〈0.05)具有显著性，地塞米松组与芥子碱氯化盐15mg/ml (P =0.028〈0.05)具有显著性，芥子碱氯化盐7.511^/1111与芥子碱氯化盐1511^/1111(? = 0.006〈 0.05)具有显著性。结合图1和图2分析，芥子碱氯化盐低高剂量组、地塞米松组与生理盐水 组比较，芥子碱氯化盐与地塞米松都对小鼠二甲苯致炎有抗炎作用，且芥子碱氯化盐浓度 在7.5mg/ml时其抗炎效果与地塞米松组相比，地塞米松抗炎效果更好，而芥子碱氯化盐浓 度为15. Omg/ml时其抗炎效果与地塞米松组比较，芥子碱氯化盐15. Omg/ml组抗炎效果明显 高于地塞米松组。
[0038] 本发明实验表明：芥子碱氯化盐对二甲苯所引起小鼠耳朵致炎后具有抗炎作用， 其抗炎作用强弱与阳性对照组相比较，芥子碱氯化盐在高剂量时抗炎作用强于地塞米松 组，芥子碱氯化盐在低剂量时抗炎作用低于地塞米松组，芥子碱氯化盐低高剂量组相比较， 发现随着芥子碱氯化盐浓度升高，抗炎作用增强。前期研究发现芥子碱氯化盐还有抑制一 氧化氮作用，结合本研究为芥子碱氯化盐治疗相关炎症提供帮助。
[0039] 以上所述，仅为本发明的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何 熟悉本技术领域的技术人员在本发明技术披露的范围内，根据本发明的技术方案及其发明 构思加以等同替换或改变，都应涵盖与本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 芥子碱氯化盐的合成及其应用，其特征在于，芥子碱氯化盐可应用在治疗炎症方面 的药物上。2. 根据权利要求1所述的芥子碱氯化盐的合成，其特征在于，包括如下步骤： 1) 首先将水完全没过油菜籽柏，其中：油菜籽柏kg:自来水L= 1:4~1:10,浸泡2~6个 小时，然后放置在电加热套上加热，使用电压调节仪调节电压，使其始终保持在微沸腾状 态，每分钟搅拌5~6下，提取3~4次，每次3~5小时，提取所需水量比例为5:4:4:3，用6层纱 布过滤，将滤液用旋转蒸发仪浓缩，得到浸膏，以浸膏：乙醇= 1:10~1:20的比例用乙醇对 所得浸膏进行萃取，萃取3~4次，每次3~4小时;将萃取所得溶液进行抽滤，沉淀层丢弃，乙 醇抽滤层用旋转蒸发仪进行浓缩至无醇味； 2) 将浓缩至无醇味的浸膏用蒸馏水进行稀释，比例为水毫升:浸膏克=10:1~30:1，把 稀释的溶液抽滤，加入适量的20 %硫氰酸钾，将硫氰化钾溶液与稀释液充分混合，置于4°C 冰箱中冷却48~72小时，后将沉淀层滤出，沉淀层即为所得芥子碱硫氰酸盐，滤除沉淀后， 继续放置在4°C冰箱中冷却结晶12~24小时，取出过滤，如此反复结晶，将芥子碱硫氰酸盐 用40°C~50 °C的甲醇溶解，芥子碱硫氰酸盐克：甲醇毫升=1:100~1: 200，溶解后趁热过 滤，滤液层在室温下静置6~8小时，有灰色结晶物产生，将结晶刮出，放在减压干燥箱里干 燥24~48h，就得到芥子碱硫氰酸盐的粉末，沉淀层再用40°C~50°C甲醇溶解，有部分溶解， 按照上面操作3~5次，得到纯度大于90%的芥子碱硫氰酸盐； 3) 芥子碱氯化盐的制备:称取芥子碱硫氰酸盐1克，溶于800-1000毫升水中，加上阴离 子交换树脂150-160克，30分钟后用氯化铁溶液进行检测，芥子碱硫氰酸盐遇氯化铁溶液成 血红色，与芥子碱氯化盐不变色，树脂处理方法用2 %的氢氧化钠400-500毫升浸泡1.5-2小 时，用约1800-2000毫升蒸馏水冲至中性，再以2 %盐酸浸泡1.5-2小时，用1800-2000毫升蒸 馏水冲至中性，待用。
【文档编号】A61K31/216GK106045866SQ201610520277
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月5日
【发明人】王惠国, 赵小红, 张楠楠, 卢轩, 秦海宏, 汤红翠, 刘璐, 邵晨, 冯宝民
【申请人】大连大学