生产油脂成分的方法、高级不饱和脂肪酸的制造方法、以及衣藻种jsc4株的利记博彩app
【专利摘要】一种生产油脂成分的方法，在通过培养藻类生产油脂成分的方法中，其特征在于，用含有海盐的培养基培养海生的衣藻(Chlamydomonas)属的藻类。FERM BP-2226620140305
【专利说明】
生产油脂成分的方法、高级不饱和脂肪酸的制造方法、以及衣 藻种JSG4株
技术领域
[0001] 本发明涉及作为燃料、化学品原料等有用的油脂成分的生产方法，特别是涉及特 征在于用含有海盐的培养基培养衣藻(Ch lamy domonas)属的藻类的油脂成分的生产方法。
【背景技术】
[0002] 光合作用生物是利用光能固定C02的生物的总称，特别是藻类是只要培养条件良 好就具有高光合作用效率的光合作用生物的一种。藻类的工业培养已进行了半个世纪以 上，有其作为工业原料、燃料、饲料和精细化工的原料以及作为健康食品的需求，可认为在 今后藻类生产在产业上也会占据重要的位置。
[0003] 在藻类的培养过程中，通过固定C02的工序来生产各种有用的碳成分，因此一直以 来广泛地进行了藻类的培养以及通过培养生产各种碳成分的研究。
[0004] 由于担心今后会出现化石燃料的枯竭化，因此越来越需要进行替代燃料的早期探 索，而且由于需求者对健康意识的提高，对于有利于维持/改善健康的功能性化学品的需求 增加，对于藻类所产生的有用成分的关注在日益增长。
[0005] 以往，作为使用了藻类制造碳成分的方法，例如作为燃料、化学品原料等有用的乙 醇的制造，专利文献1中记载有:在海水的盐分浓度下生长并在细胞内蓄积淀粉并且通过保 持在黑暗且厌氧性环境中从而由细胞内的淀粉生成乙醇的属于衣藻属的微藻类 Chlamydomonas sp.MT-JE-SH-1。作为解决上述课题的方法，专利文献1中记载了 ：（1)通过 在海水的盐分浓度下使其生长并在细胞内蓄积淀粉，保持在黑暗且厌氧性环境中，从而由 细胞内的淀粉生成乙醇的属于衣藻属的微藻类Chlamydomonas sp. MT-JE-SH-1;以及(2)在 海水的盐分浓度下培养属于衣藻属的微藻类Chlamydomonas sp.MT-JE-SH-1并使淀粉蓄积 在细胞内之后，一边将含有所培养的藻体的浆料的pH保持在6.0~9.0的范围，一边保持在 黑暗且厌氧性环境下从而生成乙醇的方法。
[0006] 另外，作为油脂成分的制造方法，专利文献中2记载了 ：培养作为属于网黏菌科网 黏菌属（1^&71'；[111:11111&06&6 1^&71'；[111:11111&8611118.)的4,7，10，13，16-二十二碳五稀酸产生 菌L59株(FERM P-18987)的微生物，使作为构成脂肪酸含有4，7，10，13，16-二十二碳五烯酸 的油脂蓄积在菌体中，之后分离菌体，利用溶剂从分离后的菌体中抽提上述油脂后，水解该 抽提物的方法。
[0007] 非专利文献1中记载了：对使用海生藻类生产油脂与培养时的盐浓度的关系进行 了研究，盐浓度在初始浓度超过1.5M的情况下，抑制藻类的生长，在0.5~1.0M的情况下，以 尚含有率生成油脂。
[0008] 现有技术文献
[0009] 专利文献
[0010] 专利文献1:日本专利第3837589号公报 [0011] 专利文献2:日本专利第4081794号公报
[0012] 非专利文献
[0013] 非专利文献1:生物科学与工程杂志（亇一于少才文，彳才f彳工^7 ^ K， 彳才工^^二71]^夕、、），101卷，223-226页（2006年）（了〇11^1&1(^81〇8(^61^6 &11(1 Bioengineering,Vol 101,223-226(2006))
【发明内容】
[0014] 发明要解决的问题
[0015]在以上的【背景技术】中，虽然藻类生产有用的碳成分，但大多生产效率低，无法充分 响应需求者的要求，期待提供一种使用生产效率高的藻类生产有用碳成分的方法。
[0016]因此，鉴于上述【背景技术】，本发明的课题是提供使用了藻类的高效率生产有用碳 成分的方法。
[0017] 用于解决问题的方案
[0018] 本发明人等为了解决上述课题，对藻类的探索和该藻类的培养方法进行了详细地 研究，解决了课题。
[0019] 即，本发明中，通过提供以下所述的生产油脂成分的方法、以及新型微藻类，从而 解决了上述课题。
[0020] [1]-种生产油脂成分的方法，其为通过培养藻类生产油脂成分的方法，其特征在 于:用含有海盐的培养基培养海生的衣藻(Chlamydomonas)属的藻类。
[0021 ] [ 2 ]根据[1 ]所述的生产油脂成分的方法，其中，属于衣藻(Ch 1 amydomonas)属的藻 类为衣藻种JSW株(Chlamydomonas sp.JSC4) 〇
[0022] [3]根据[1]或[2]所述的生产油脂成分的方法，其中，含有海盐的培养基在220nm 的波长下测定硝酸盐含量时，含量为l〇mg/L以下。
[0023] [4]根据[1]~[3]中任意一项所述的生产油脂成分的方法，其中，培养基中的海盐 的质量％为〇. 5~5质量％的范围。
[0024] [5]根据[1]~[4]中任意一项所述的生产油脂成分的方法，其中，含有海盐的培养 基是含有海水、浓缩海水或人工海水的培养基。
[0025] [6]-种高级不饱和脂肪酸的制造方法，其特征在于，对通过[1]~[5]中任意一项 所述的生产油脂成分的方法得到的油脂成分进行水解。
[0026] [7]根据[6]所述的高级不饱和脂肪酸的制造方法，其中，高级不饱和脂肪酸为油 酸或亚麻酸。
[0027] [8]-种衣藻种JSC4株(Chlamydomonas sp.JSC4)，其具有油脂成分生产能力。 [0028] 发明的效果
[0029] 根据本发明，能够提供使用了藻类的以高效率生产有用碳成分的方法。
【附图说明】
[0030] 图1是衣藻种JSC4株的营养细胞(在适宜的生长环境、丰富的营养条件下旺盛地进 行增殖的状态的细胞)的显微镜照片。
[0031] 图2是近缘的衣藻种的18S rDNA序列的比较。
[0032]图3是近缘的衣藻种的18S rDNA序列的比较。
[0033]图4是近缘的衣藻种的18S rDNA序列的比较。
[0034]图5是表示OD22Qr?与硝酸盐浓度的关系的标准曲线。
[0035]图6是在氮充足条件下或氮缺陷条件下培养的衣藻种JSC4株（Chlamydomonas sp.JSC4)的脂肪酸的组成分析的结果。
[0036]图7是用不同的海盐浓度培养的衣藻种JSC4株的C02固定化能力分析结果。
[0037]图8是用不同的海盐浓度培养的衣藻种JSC4株的C02固定化能力分析结果。
[0038]图9是用不同的海盐浓度培养的衣藻种JSC4株的C02固定化能力分析结果。
[0039]图10是用不同的海盐浓度培养的衣藻种JSC4株的C02固定化能力分析结果。
【具体实施方式】
[0040] [藻类]
[0041] 本发明中使用的藻类的特征在于，其为衣藻(Chlamydomonas)属的藻类。
[0042] 衣藻是由属于绿藻纲衣藻目（或者团藻目）的单细胞的鞭毛虫组成的属。多数衣藻 是淡水产的，但也有生长在海水中的。本发明的海生的衣藻(Chlamydomonas)属的藻类是指 能够在海中、淡咸水中或含有海盐的培养基中生长的衣藻(Chlamydomonas)属的藻类。
[0043]本发明中使用的衣藻(Ch 1 amydomonas)属的藻类只要为海生的藻类，则没有特别 限定。
[0044] 由于海水中存在营养源，所以不需要在培养基中另外添加营养源。另外，也不需要 使用纯水。而且，藻类的培养中糖源不是必需的。本发明生产油脂成分的方法在成本方面也 很优异。
[0045] 而且，由于培养基中的盐浓度高，所以培养液没有污染的危险。本发明在能够简便 地培养衣藻(Chlamydomonas)属的藻类，在能够以大量培养、大规模地生产油脂成分这方面 也很优异。
[0046] 为了解决上述课题，本发明人等对以高效率生产作为目的的油脂成分的藻类进行 了探索，发现作为藻类优选为衣藻属的藻类。
[0047] 而且还发现：由于高效率生产油脂成分，因而在衣藻属中特别优选为衣藻种JSC4 株(Chlamydomonas sp.JSW)，从而完成了本发明。
[0048][衣藻种JSC4株]
[0049] 本发明中使用的衣藻种JSC4株(Chlamydomonas SP.JSC4)的分离精制通过下述步 骤来进行。
[0050] 即，利用常规方法从台湾中西部海岸采集的淡咸水样品中仅对1个细胞进行分离、 无菌化。使用示出以下组成的HSM琼脂培养基，通过在20°C、8~15WH01光子(photons)/m 2/ 秒、12小时光期、12小时暗期的光条件下培养该细胞，每两周进行一次传代培养来建立藻 株，根据形态观察及其他确定为衣藻属的绿藻，并命名为JSC4株。
[0051] [表1]
[0053]衣藻种JSC4株的藻类学性质如下所述。将衣藻种JSC4株的营养细胞(在适宜的生 长环境、丰富的营养条件下旺盛地进行增殖的状态的细胞)的显微镜照片示于图1。
[0054](形态性质）
[0055] (1)营养细胞为椭圆形，大小约为10M1。营养细胞中具有两根与细胞长度约等倍的 鞭毛。营养细胞具有运动性。
[0056] (2)营养细胞的外围被细胞壁包围，内部存在一个核、叶绿体，另外可以看到线粒 体、高尔基体、液胞、油滴等。叶绿体内的基底部具有蛋白核(pyrenoid)。
[0057](生殖方式）
[0058] (1)在营养细胞内形成二~八个内生孢子，均匀分布在细胞内。内生孢子在该细胞 内具有一个核、叶绿体。
[0059] (2)也进行通过二分裂的增殖。
[0060](生理/生化性状）
[0061 ] (1)培养液:能够在海中、淡咸水中和含有海盐的培养液中生长。
[0062] (2)光合作用能力:能够进行利用光合作用的光自养生长。
[0063] (3)含有色素:叶绿素a、叶绿素b、及其它的类胡萝卜素类。
[0064] (4)同化贮藏物质：淀粉。
[0065] (5)生长温度区域：15 °C~35 °C (最适温度25 °C)。
[0066] (6)生长pH 区域:pH6.0~10.0(最适pH为 7.0)。
[0067]由上述内容可知，衣藻种JSC4株根据形态观察及其他被确定为衣藻属的绿藻。 [0068] 衣藻种JSC4株的18S rDNA基因的盐基序列示于序列表的序列号1。图2~图4是对 近缘的衣藻种的18S rDNA序列进行比较的图。阴影(shaded)是衣藻种JSC4株的分子标记序 列。衣藻种JS(34株的最近缘的物种为德巴衣藻(Chlamydomonas debaryana)，但若着眼于分 子标记序列，则并非为相同物种。由此，由比较18S rDNA序列的观点来看，将衣藻种JSC4株 判断为新型的微藻类株。
[0069]衣藻种JSC4株在2014年3月5日被保藏于独立行政法人制品评价技术基盘机构专 利生物保藏中心（千叶县木更津市上总镰足2-5-8)，根据布达佩斯条约的规定，以保藏号 FERM BP-22266进行了国际保藏。
[0070] [培养基]
[0071] 本发明中，在培养属于衣藻属的藻类时优选使用培养基。
[0072] 使用的培养基只要是属于衣藻属的藻类生长的条件则没有限制，但含有海水、浓 缩海水或人工海水的培养基使油脂产生能力提高，因此特别优选含有海盐的培养基。
[0073]例如，作为这样的培养基，特别是可以优选使用改良Bold 3N培养基。
[0074]作为其他可以使用的培养基，可列举出改良Basal培养基、改良Bristol培养基、 BG-11培养基、改良HSM(High Salt medium)培养基等，但从能够以高效率生产油脂成分的 观点出发，特别优选为改良Bold 3N培养基。
[0075] 作为本发明中使用的培养的特征，可列举出在氮含量低的条件下的培养。
[0076] 在氮含量低的条件下的培养既可以是伴随增殖的氮消耗所导致的氮缺陷状态下 的培养，也可以是通过将藻体移植在氮含量低的培养基等的培养。
[0077] 本发明中，培养基中所含的氮含量可以通过在220nm的波长下测定培养基中所含 的硝酸盐的含量来评价。
[0078] 培养基中所含的氮含量并不限定于该方法，例如也可通过利用离子传感器、利用 显色试剂的吸光度测定等对硝酸盐、铵盐的含量进行测定来评价。
[0079]测定法是对由1999年Collos等报告的方法进行改良而进行的（文献:应用藻类学 亇一于少才。歹彳 K 彳 口 口'2-），11 卷，179-184页（1999年）（Journal of Applied Phycology，Volume ll，P179_184(1999))〇
[0080] 详细的测定法记载于下述实施例。
[0081] 以下记载了本发明中使用的改良Bold 3N培养基的组成。
[0082] [表 2]
[0084] [海盐]
[0085] 本发明中发现:培养基中的海盐的浓度（占培养基整体的质量％)对油脂成分的生 产能力产生很大影响。因此，通过在上述培养基中添加最佳浓度的海盐，从而能够提高油脂 成分的生产效率。
[0086]本发明中可以使用的海盐可列举出已知的传统海盐。本发明中使用的海盐既可以 是使海水蒸发干燥而得到的海盐，也可以使用海水、海水的浓缩液，但为了调整培养基中所 含的浓度，更优选使用作为海水的固体成分的海盐。
[0087] 另外，也可以使用人工海水。本发明中使用的人工海水是模拟海水的组成并经人 工调节后的粉末、浓缩液，在饲养、培养需要海水的生物时，从获得性、再现性、廉价性等理 由出发作为替代天然海水的物质。可以使用市售的人工海水，但市售的人工海水将氯化钠 作为主要成分，含有各种各样的无机盐类、pH调节剂等，根据用途通过用自来水、蒸馏水进 行稀释而成为接近海水成分的物质。
[0088] 另外，即使不是上述的海盐等，也可以调整并使用可以使用的盐作为适合本发明 的目的的培养基。
[0089] 本发明中发现上述海盐浓度对油脂生产效率产生很大影响。
[0090] 在评价藻类的油脂生产能力(mg/L/天)时，作为优选的海盐浓度，可列举出0.5~5 质量％，其中2.0~5.0质量％的范围作为目的的油脂成分的含量也高，因而特别优选。
[0091] 需要说明的是，在假定进行藻类的大量培养时，使用海水具有便利性，但即使使用 氯化钠，对于生产油脂也具有相同的效果，因而可优选使用。
[0092] [培养方法]
[0093] 本发明中，属于衣藻属的藻类的培养方法可通过用已知的传统方法来进行。
[0094] 培养时可以使用本发明中的上述培养基。
[0095] 作为本发明使用的培养方法，也可以使用静置培养法，但考虑到藻类的藻体生产 率和油脂成分的生产率，则优选为通过振荡培养法或深部通气搅拌培养法的培养。振荡培 养既可以是往复振荡，也可以是旋转振荡。作为培养温度，通常可在15~40°C下进行藻体产 生。
[0096] 如上所述，利用本发明的培养方法培养海洋性微藻类时，不仅显示出稳定的增殖， 而且也可得到油脂成分的比例极其高的衣藻藻类。
[0097]另外，光条件只要是能够进行光合作用的条件则没有特别限制，但优选为连续光。
[0098] 培养结束后，从作为得到粗油脂的方法的培养液中回收藻体，可通过作为一般的 方法的离心分离法、利用滤纸和玻璃滤器的过滤法等进行。以此方式回收的藻体可保持原 状、或者通过冷冻干燥法、热风干燥法等制成干燥藻体。可从得到的藻体或其干燥藻体中抽 提油脂成分。
[0099] 本发明中优选供给普通二氧化碳气体进行。
[0100] 作为二氧化碳气体的供给法，可用已知的传统方法进行，例如可通过在培养液中 通气来适宜地供给二氧化碳气体。
[0101 ]本发明中生产的油脂成分的特征在于，其为甘油三酯。
[0102]甘油三酯是甘油的酰基体，通过进行烷基酯化从而可期待用作生物柴油燃料。
[0103] 本发明中作为甘油三酯列举的化合物是甘油与脂肪酸的酯体，脂肪酸是碳原子数 为10~30的高级饱和或者不饱和脂肪酸。
[0104] 另外，本发明也提供作为生物柴油燃料有用的高级不饱和脂肪酸的制造方法。
[0105] 即，可通过对本发明的方法中得到的油脂成分进行水解，来制造燃烧效率高的高 级不饱和脂肪酸。
[0106] 作为燃烧效率高的高级不饱和脂肪酸，可列举出油酸或亚麻酸，由于燃烧效率特 别高，因而特别优选为油酸。
[0107] 对用于生产上述高级不饱和脂肪酸的最佳海盐浓度进行研究的结果，可举出优选 为0.5~5质量％，特别优选为2.0~5质量％的范围。
[0108] [油脂的抽提方法]
[0109] 作为从藻体抽提油脂成分的方法，可以使用通常的油脂的抽提方法，特别是可以 使用通过由Fo 1 ch法、B1 i gh-Dy er法代表的氯仿/甲醇系等有机溶剂的一般抽提方法，但并 不限定于此。
[0110]实施例
[0111]以下举出实施例进一步详细说明本发明，但本发明并不限定于这些实施例。
[0112](培养液中的藻浓度的测定）
[0113]用预先精密秤量好的0.45M1孔径的过滤器过滤来自光生物反应器的液体样品，对 其进行冷冻干燥直至恒重并进行精密秤量。用过滤前后的过滤器质量之间的差除以过滤后 的液体样品量，确定了藻浓度。
[0114](培养液中的氮含量的测定）
[0115]用0.22M1孔径的过滤器过滤来自光生物反应器的液体样品，用蒸馏水稀释至20 倍。使用UV/VIS分光光度计，通过在220nm(0D22Q)波长下的光密度确定了硝酸盐含量。
[0116] 即，使用图5所示的OD22Q和硝酸盐含量的标准曲线，将OD22Q中的值换算成硝酸盐浓 度。
[0117](藻体中的油脂成分的分析）
[0118] 将15mg冷冻干燥后的藻体量取到装有0.5g直径0.5mm的玻璃珠的微量瓶中，向其 中加入lmL的0.5M浓度K0H溶液，用珠磨式均质器进行40分钟破碎处理。一边用7mL的0.5M浓 度K0H溶液进行润洗，一边将处理液转移至50mL体积的耐热玻璃瓶进行密封，在水浴中100 °C下处理15分钟。冷却至室温后，加入8mL的0.7M浓度HC1甲醇溶液和10mL的14% (v/v)三氟 化硼甲醇溶液(Sigma-Aldrich Corporation)，再次在水浴中100°C下处理15分钟。冷却至 室温后，加入4mL的饱和食盐水和3mL的正己烷，用涡流混合器搅拌5分钟。将搅拌后的液体 转移至50mL体积的塑料离心管中，并以7000rpm离心分离2分钟。取出100yL上清至微量离心 管(Eppendorf)，加入890此的正己烧和10yL的内标物质（十五烧酸甲酯，Sigma公司），之后 以lOOOOrpm离心分离3分钟，用GCMS分析装置对上清进行分析。
[0119] 在GCMS分析装置（GCMS-QP2010Plus，岛津制作所）中安装DB-23毛细管色谱柱 (0.25mm<}) X60m，0.15iim膜厚，Agilent Technologies Inc.)，以2.3mL/分钟流动氦气。喷 射器、离子源和接口温度分别设为230、230和250°C，色谱柱温度在注入样品后1分钟保持在 50°C，之后以25°C/分钟升温至175°C，进而以4°C/分钟升温至230°C后保持5分钟。注入lyL 上述上清，并以分流比5:1进行色谱柱分离，以50~500m/z的全扫描模式检测出脂肪酸甲酯 的每个成分，以内标的添加量作为基准进行定量并将其作为油脂量。
[0120] (C〇2固定化能力的分析）
[0121] 使用生物质的浓度(g/L)的随时间经过分布图，计算出对应于干燥藻体单位重量 的时间曲线的增殖率。
[0122] 生物质产生速度(Pbi_ss;mg/L/天）由下式求得。
[0123] [数学式1]
[01 24] Pbiomass = A X/ A t
[0125] 式中，AX表示培养时间A t(d)中的生物质的浓度(mg/L)的变化量。
[0126] 而且，C02固定化速度(PGQ2; mg/L/天）由下式求得。
[0127] [数学式2]
[0128] PCQ2(mg/L/天）=1 ? 88 X Pbi_ss
[0129] 作为藻类的生物质的典型的分子式，使用COq.48Hi.83Nq.iiPq.oi。
[0130] C〇2固定化率（％)由下式求得。
[0131] [数学式3]
[0132] C02 固定化率（％) =
[01 33] 100 X ( Cc〇2, influent-Cc〇2, effluent) /Cc〇2, influent
[0134] 式中，0〇]24也1_*和0〇]2,册1_*分别表示(》 2的流入浓度和流出浓度。
[0135] (实施例1)
[0136] (培养基的比较）
[0137] 制备将表3中示出组成的改良Basal培养基、改良Bristol培养基、BG-11培养基、改 良Bold 3N培养基、改良HSM(High Salt medium)培养基各1升，分别放入体积1升的光生物 反应器中，用高压釜进行灭菌。在各光生物反应器中以藻浓度成为约l〇〇mg/L的方式接种衣 藻种JS(34株(Chlamydomonas sp ? JS(34)，在室温下连续照射24小时200iimol光子/m2/秒强度 的荧光灯光、以50mL/分钟通气含2%二氧化碳气体空气，用搅拌器以200rpm进行搅拌，以上 述条件培养5.7天。
[0138] 表4中示出对各培养液的油脂成分进行分析后的结果。藻体中的油脂含量、单位培 养液的油脂产生速度均是改良Bold 3N培养基的最高。
[0139] [表 3]
[0143] (实施例2)
[0144] (海盐的添加效果）
[0145] 制备将表3中示出组成的改良Bold 3N培养基中海盐（Sea Salt)添加量设为 0.5 %、2 %、3.5 %、以及5% (w/v)的培养基各1升，分别放入体积1升的光生物反应器中用高 压釜灭菌。在各光生物反应器中以藻浓度成为约l〇〇mg/L的方式接种衣藻种JSC4株 (Chlamydomonas sp. JSC4)，在室温下连续照射24小时200_〇1光子/m2/秒强度的焚光灯 光，以50mL/分钟通气含2%二氧化碳气体空气，用搅拌器以200rpm进行搅拌，以上述的条件 培养10天。
[0146] 所有样品均随着藻体的增殖培养液中的硝酸盐含量降低，在1.9或2.7天时变为 10mg/L以下。其后藻体中的油脂含量和油脂产生速度显著增加。尤其是在海盐的添加量为 2%、3.5%、以及5%时，藻体中的油脂含量达到50%以上的高含量，最大的油脂产生速度为 非常高的140mg/L/天以上。
[0147] [表 5]
[0149](实施例3)
[0150](在氮缺陷条件下的培养对生物柴油的品质带来的效果）
[0151] 生物柴油的品质通过不饱和脂肪酸相对于饱和脂肪酸的比例进行评价。生物柴油 中的饱和脂肪酸含量影响在高温下的氧化抑制。另一方面，不饱和脂肪酸含量影响在低温 下的流动性。为了对生物柴油赋予低温下和高温下的良好特性，重要的是，生物柴油中的饱 和脂肪酸和不饱和脂肪酸是等量的。脂肪酸的特征受到培养基中的营养成分、外部气温以 及光强度产生的环境压力的影响。这些压力中，氮缺陷条件是影响藻类的脂肪代谢最重要 的因素。
[0152] 在氮充足条件下以及氮缺陷条件下培养的衣藻种JSC4株（Chlamydomonas sp.JSC4)的脂肪酸的组成示于图6。图6中，作为对照，与源自大豆油的脂肪酸的组成进行比 较。衣藻种JSC4株的培养条件与实施例2相同。
[0153]如图6所示，证实了在氮缺陷条件下衣藻种JSC4株中的脂肪的蓄积存在油酸(C18: 1)增加的倾向并且存在亚麻酸(C18:3)减少的倾向。根据生物柴油的特性，通过以高比例含 有油酸，从而具备更好的氧化稳定性和在低外部气温下的冷滤点(CFPP)。而且，基于欧洲生 物燃料标准(EN14214)，亚麻酸(C18:3)的含量被限定为最大12%(m/m)。因此，证实了由衣 藻种JSC4株生成的油脂用于制造生物燃料具有合适的品质。
[0154]而且，如图6所示，与源自大豆油的脂肪酸的组成相比，衣藻种JSC4株显示出高的 饱和脂肪酸含量和低的多元不饱和脂肪酸(n多2)含量。通常油脂中的饱和脂肪酸的高含量 使生物燃料具有优异的流动性和密度。另一方面，多元不饱和脂肪酸的低含量不仅使在低 外部气温下的氧化稳定性增加，而且也可赋予合适的冷滤点。因此，从油脂中具有合适的脂 肪酸的特征的观点出发，证实了衣藻种JSC4株是适用于制造生物燃料的株。
[0155] (实施例4)
[0156] (控制海盐和氮源也对衣藻种JSC4株的C02固定带来效果）
[0157] 以一定时间间隔对用不同的海盐浓度培养的衣藻种JSC4株的C02固定化能力进行 调查。结果示于图7~图10。如图7~图10所示，不同的海盐浓度中的C0 2固定化率和C02固定 速度随着时间经过显示出与整体相同的倾向。即，显示出在培养2-3天后达到最高值之后逐 渐减少的钟形的曲线。
[0158] 图7~图10中，在海盐的添加量为2%的条件下获得⑶2固定化率和⑶2固定速度的 最大值，分别为54.9 %和1319. Omg/L/天。由于具有优异的C〇2固定能力，因而证实了衣藻种 JSC4株是对使用了工业气体的C02固定实用的株。
[0159] 以上说明的各实施方式中的各构成以及它们的组合等为一个例子，在不脱离本发 明的要旨的范围内，可以对构成部分进行添加、省略、置换、以及其他变更。另外，本发明不 限于各实施方式，仅限于权利要求(claim)的范围。
[0160] 产业上的可利用性
[0161] 根据本发明，能够使用藻类以高效率生产有用碳成分。
【主权项】
1. 一种生产油脂成分的方法，其为通过培养藻类生产油脂成分的方法，其特征在于，用 含有海盐的培养基培养海生的衣藻(Chlamydomonas)属的藻类。2. 根据权利要求1所述的生产油脂成分的方法，其中，属于衣藻(Ch 1 amydomonas)属的 藻类为衣藻种JSC4株(Chlamydomonas sp.JSC4) 〇3. 根据权利要求1或2所述的生产油脂成分的方法，其中，含有海盐的培养基在220nm的 波长下测定硝酸盐含量时，含量为l〇mg/L以下。4. 根据权利要求1~3中任一项所述的生产油脂成分的方法，其中，培养基中的海盐的 质量％为〇.5~5质量％的范围。5. 根据权利要求1~4中任一项所述的生产油脂成分的方法，其中，含有海盐的培养基 是含有海水、浓缩海水或人工海水的培养基。6. -种高级不饱和脂肪酸的制造方法，其特征在于，对通过权利要求1~5中任一项所 述的生产油脂成分的方法得到的油脂成分进行水解。7. 根据权利要求6所述的高级不饱和脂肪酸的制造方法，其中，高级不饱和脂肪酸为油 酸或亚麻酸。8. -种衣藻种JSC4株(Chlamydomonas sp. JSC4)，其具有油脂成分生产能力。
【文档编号】C12P7/64GK106029893SQ201480057777
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2014年3月17日
【发明人】近藤昭彦, 莲沼诚久, 贺诗欣, 皆川纯, 西江晴男, 太郎田博之, 张嘉修
【申请人】国立大学法人神户大学, 大学共同利用机关法人自然科学研究机构, Dic株式会社