甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物及其制备方法和用图
【专利摘要】本发明公开了一种甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物及其制备方法和用途。所述甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物具有式(Ⅲ)结构。所述制备方法包括：(1)有机溶剂中，甘草次酸与卤代异戊烷反应，得式(Ⅱ)化合物；(2)有机溶剂中，式(Ⅱ)化合物与苯胺或取代苯胺反应，得所述的甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物。本发明还公开所述衍生物的应用。本发明的新型甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物对细菌具有明显的抑制作用，可以应用于制备抗菌药物。
【专利说明】
甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物及其制备方法和用途
技术领域
[0001] 本发明涉及化学合成，尤其涉及一类新型甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物及其制备 方法与作为抗菌药物的用途。
【背景技术】
[0002] 甘草是一种常见的中草药，它广泛分布在我国的西北、西南和东北，共有八个品 种。其有效成分是甘草酸及甘草酸盐类物质，而甘草次酸是甘草酸经胃酸水解或经肝中β_ 葡萄糖醛酸酶分解形成的活性成分之一，它具有抗病毒、抗肿瘤、抗炎抗菌、抗心血管疾病、 抗氧化、保护肝细胞、免疫调节及肾上腺皮质激素样作用等多方面的生物活性和药理活性。 甘草酸的药理作用实质上是甘草次酸的效用。
[0003] 酰胺只要是指羧基和氨基缩合后具有酰胺键的一类有机化合物，通常酰胺类化合 物是由氨基和羧基缩合而成。因此对甘草次酸的结构进行修饰，合成酰胺类衍生物，增强其 菌活性，是很有意义的课题。
【发明内容】
[0004] 发明目的：本发明提供了一类具有抗菌效果的甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物，本 发明的另一个目的是提供其制备方法和用途。
[0005] -种甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物，它具有如下通式：
[0006]
[0007] 式(m)中，
9被至少一个甲氧基取代的苯基。
[0008] 进一步的，
为被1~2个甲氧基取代的苯基。
[0009] 进一步的，
[0010] 本发明还提供了所述甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物的制备方法，包括：
[0011] (1)有机溶剂中，甘草次酸与卤代异戊烷反应，得式（Π )化合物；
[0012]
[0013] (2)有机溶剂中，式（Π )化合物与苯胺或取代苯胺反应，得所述的甘草次酸异戊烷 酰胺类衍生物；
[0014
[0015] 本发明利用甘草次酸与卤代异戊烷反应生成了甘草次酸异戊烷，提高了产物的脂 溶性，更有利于人体吸收;甘草次酸异戊烷再与苯胺或取代苯胺反应生产相应的酰胺类衍 生物，达到提高抗菌活性的目的。
[0016] 步骤(1)中，有机溶剂为DMF。反应温度为60~80°C，反应时间为5~8h。
[0017] 所述的卤代异戊烷为溴代异戊烷、氯代异戊烷或氟代异戊烷。
[0018] 步骤(2)中，有机溶剂为二氯甲烷。反应温度为20~30°C，反应时间为12~16h。
[0019] 步骤(2)中，反应体系还含有EDC和Η0ΒΤ。
[0020] 本发明还提供了所述甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物在制备药物中的应用。
[0021] 本发明还提供了一种药物，包括所述的甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物。
[0022] 以有效量的甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物为活性成分，添加药学上可接受的载 体，可以制备成相应的药物。
[0023] 所述的药物为抗细菌药物。细菌可以为革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌，具体为大 肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌等。
[0024] 与现有技术相比，本发明的有益效果包括：
[0025] 实验结果表明，本发明的新型甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物对细菌具有明显的抑 制作用。因此本发明的甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物可以应用于制备抗菌药物。
【具体实施方式】
[0026] 以下将结合实施例更详细的解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技 术方案，本发明的范围并不受这些实例的任何限制。
[0027] EDC: 1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐 [0028] H0BT:1-羟基苯并三唑
[0029] EA:乙酸乙酯 [0030] DMS0:二甲基亚砜
[0031] DMF:二甲基甲酰胺
[0032] 实施例1甘草次酸异戊烷酰苯胺(化合物1)的制备
[0033] ik会物1的结拔I为.
[0034]
[0035] 步骤（1):于20ml DMF中加入4.7g甘草次酸（式（I)所示）和1.25ml溴代异戊烷 (CAS: 107-82-4)，80°C加热回流反应5h。反应结束后，取样点板，EA萃取，有机相水洗后减压 蒸馏得白色固体甘草次酸异戊烷酯(式（Π )所示）。
[0036；
[0037] 步骤（2):1.2mmolEDC、1.2mmolH0BT加入到6ml二氯甲烷中，28°C活化30min后加 入lmmol甘草次酸异戊烷酯，加入lmmol苯胺到10ml二氯甲烷中溶解，常温(一般为25°C)下 反应过夜(一般为12h)，EA萃取，有机相进行硅胶柱层析，EA:石油醚= 1:15冲洗，收集流出 液，减压蒸馏得到白色固体，过滤，干燥，得到目标化合物。
[0038] 产率95%，Μρ: 174-176Γ .? NMR(DMS0,300MHz)，9.98(s，lH，NH)，8.42(s，lH， CH) ,7.85-7.83(d,J = 6.06Hz,lH,ArH),7.68-7.62(d,J=1.23Hz,lH,ArH),7.38-7.32(m, 3H,ArH),5.56(s,lH,CH),3.47(m,2H,CH2),3.32(m,1H,CH),2.01(m,3H,CH),1.85-1.92(m, 8H，CH2)，1.55-1.67(m，10H，CH2)，1.29(s，3H，CH3)，1.10(s，3H，CH3)，1.05(s，3H，CH 3)，0.93 (m，2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH3)，0.66(s，3H，CH 3)，0.67(s， 3H，CH3) ·MS(ESI):615·94(C41H61NO3，[M+H] +) ·Ana 1 ·Ca 1 cd for C41H61NO3:C，79.95;H，9.98; N,2.27% .Found:C,79.63；H,9.93；N,2.35%
[0039] 实施例2甘草次酸异戊烷酰邻甲氧苯胺(化合物2)的制备
[0040] 化合物2的结构为：
[0041]
[0042] 制备方法同实施例1。以邻甲氧基苯胺代替苯胺，得到目标化合物。
[0043] 白色粉末，产率92% ,1^163-1671^? NMR(DMS0,300MHz) ,9.98(s，lH,NH) ,8.42 (s,lH,CH),7.68-7.62(d,J=1.23Hz,ΙΗ,ΑγΗ),7.38-7.32(m,3H,ArH),5.56(s,lH,CH), 3.65(s,3H,0CH 3) ,3.47(m,2H,CH2) ,3.32(m,lH,CH) ,2.01(m,3H,CH) ,1.85-1.92(m,8H, CH2) ,1.55-1.67(m，10H，CH2)，1.29(s，3H，CH3)，1.10(s，3H，CH3)，1.05(s，3H，CH 3)，0.93(m， 2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH3)，0.66(s，3H，CH 3)，0.67(s，3H， CH3) · MS (ESI): 645 · 97 (C42H63NO4，[M+H] + ) · Anal · Calcd for C42H63NO4: C，78 · 09; H，9 · 83; N， 2.17% .Found：C,78.48；H,9.93；N,2.46%
[0044] 实施例3甘草次酸异戊烷酰间甲氧苯胺(化合物3)的制备
[0045] 化合物3的结构为：
[0046]
[0047] 制备方法同实施例1，以间甲氧基苯胺代替苯胺，得到目标化合物。
[0048] 白色粉末，产率91 %，Mpl94-196°C ; 4 NMR(DMS0，300MHz)，9 · 98(s，1H，NH)，8 · 42 (s,lH,CH),7.85-7.83(d,J = 6.06Hz,lH,ArH),7.68-7.62(dJ=1.23Hz,lH,ArH),7.38-7.32(m,2H,ArH),5.56(s,lH,CH),3.72(s,3H,0CH3),3.47(m,2H,CH2),3.32(m,lH,CH),2.01 (m,3H,CH),1.85-1.92(m,8H,CH 2),1.55-1.67(m,10H,CH2),1.29(s,3H,CH3) ,1.10(s,3H, CH3)，1.05(s，3H，CH3)，0.93(m，2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH 3)， 0 · 66 (s，3H，CH3)，0 · 67 (s，3H，CH3) · MS(ESI): 645 · 97 (C42H63NO4，[M+H] + ) · Anal · Calcd for C42H63N〇4：C,78.09；H,9.83；N,2.17% .Found：C,78.52；H,9.68；N,2.03%
[0049] 实施例4甘草次酸异戊烷酰对甲氧苯胺(化合物4)的制备
[0050] 化合物4的结构为：
[0051]
[0052] 制备方法同实施例1，以对甲氧基苯胺代替苯胺，得到目标化合物。
[0053] 白色粉末，产率94%，Μρ168-170Γ ;4 NMR(DMS0，300MHz)，9 · 98(s，1H，NH)，8· 42 (s,lH,CH),7.85-7.83(d,J = 6.06Hz,lH,ArH),7.68-7.62(dJ=1.23Hz,lH,ArH),7.38-7.32(m,2H,ArH),5.56(s,lH,CH),3.58(s,3H,0CH3),3.47(m,2H,CH2),3.32(m,lH,CH),2.01 (m,3H,CH),1.85-1.92(m,8H,CH 2),1.55-1.67(m,10H,CH2),1.29(s,3H,CH3) ,1.10(s,3H, CH3)，1.05(s，3H，CH3)，0.93(m，2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH 3)， 0.66(s，3H，CH3)，0.67(s，3H，CH3) .MS(ESI :645.97(C42H63N〇4, [M+H] + ) .Anal. Calcd for C42H63N〇4：C,78.09；H,9.83；N,2.17% .Found：C,78.56；H,9.23；N,2.08% .
[0054] 实施例5甘草次酸异戊烷酰-(2,6-二甲氧基)_苯胺(化合物5)的制备 [0055]化合物5的结构为：
[0056]
[0057]制备方法同实施例1，以2,6_二甲氧基苯胺代替苯胺，得到目标化合物。
[0058] 白色粉末，产率92% ,1^153-1561^? NMR(DMS0,300MHz)，9.98(s，lH，NH) ,8.42 (s,lH,CH),7.38-7.32(m,3H,ArH),5.56(s,lH,CH),3.68(s,6H,0CH 3),3.47(m,2H,CH2), 3.32(m,lH,CH) ,2.01 (m,3H,CH) ,1.85-1.92(m,8H,CH2) ,1.55-1.67(m,10H,CH2),1.29(s, 3H,CH3) ,1.10(s,3H,CH3)a.05(s,3H,CH3),0.93(m,2H,CH2),0.98(s,6H,CH 3)0.88(s,3H, CH3)，0.85(s，3H，CH3)，0.66(s，3H，CH3)，0.67(s，3H，CH3).MS(ESI :676.00(C43H65N05，[M+H] + ).Anal.Calcd for C43H65NO5:C,76.40；H,9.69；N,2.07% .Found：C,76.57；H,9.86；N, 2.08% .
[0059] 实施例6甘草次酸异戊烷酰-(2,4-二甲氧基)_苯胺(化合物6)的制备
[0060] 化合物6的结构为：
[0061]
[0062] 制备方法同实施例1，以2,4_二甲氧基苯胺代替苯胺，得到目标化合物。
[0063] 白色粉末，产率92% ,1^147-1461^? NMR(DMS0,300MHz)，9.98(s，lH,NH) ,8.42 (s,lH,CH),7.68-7.62(d,J=1.23Hz,ΙΗ,ΑγΗ),7.38-7.32(m,2H,ArH),5.56(s,lH,CH), 3.61(s,6H,0CH 3) ,3.47(m,2H,CH2) ,3.32(m,lH,CH) ,2.01(m,3H,CH) ,1.85-1.92(m,8H, CH2) ,1.55-1.67(m，10H，CH2)，1.29(s，3H，CH3)，1.10(s，3H，CH3)，1.05(s，3H，CH 3)，0.93(m， 2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH3)，0.66(s，3H，CH 3)，0.67(s，3H， CH3) .MS(ESI:676.00(C43H65N〇5，[M+H] + ) .Anal .Calcd for C43H65N05:C，76.40;H，9.69;N， 2.07% .Found：C,76.57；H,9.86；N,2.08% .
[0064] 实施例7甘草次酸异戊烷酰-(2,3-二甲氧基)_苯胺(化合物7)的制备 [0065]化合物7的结构为：
[0066]
[0067] 制备方法同实施例1，以2,3_二甲氧基苯胺代替苯胺，得到目标化合物。
[0068] 白色粉末，产率92%，Mpl55-157°C ; 4 NMR(DMS0，300MHz)，9 · 98(s，1H，NH)，8 · 42 (s,lH,CH),7.68-7.62(d,J=1.23Hz,ΙΗ,ΑγΗ),7.38-7.32(m,2H,ArH),5.56(s,lH,CH), 3.72(s,6H,0CH 3) ,3.47(m,2H,CH2) ,3.32(m,lH,CH) ,2.01(m,3H,CH) ,1.85-1.92(m,8H, CH2) ,1.55-1.67(m，10H，CH2)，1.29(s，3H，CH3)，1.10(s，3H，CH3)，1.05(s，3H，CH 3)，0.93(m， 2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH3)，0.66(s，3H，CH 3)，0.67(s，3H， CH3) .MS(ESI:676.00(C43H65N〇5，[M+H] + ) .Anal .Calcd for C43H65N05:C，76.40;H，9.69;N， 2.07% .Found：C,76.57；H,9.86；N,2.08% .
[0069] 实施例8甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物抗菌活性研究
[0070] 1.实验材料和方法
[0071] 1.1药品与试剂
[0072] Mueller-Hinton培养基（牛肉浸粉5g，酪蛋白水解物17.5g，淀粉1.5g，琼脂12.5g， 加入1000mL蒸馏水中）、氯霉素、青霉素、DMS0、MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2，_二苯基四氮 唑溴盐，商品名为噻唑蓝）、异丙醇、盐酸、均为分析纯试剂、合成的化合物1-6、PBS缓冲液 (磷酸盐缓冲液0 · 0 lmo 1 /L，pH7 · 4，Na2HP〇4 · 12H20 2 · 9g，KH2P〇4〇 · 2g，NaCl8 · Og，KC10 · 2g，蒸 馏水 lOOOmL)。
[0073] 1.2 菌种
[0074] 大肠杆菌(E. coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、枯草芽孢杆菌(B. subtilis)、铜 绿假单胞菌(P · aeruginosa)
[0075] 1.3实验方法
[0076] 1.3.1培养基的配制
[0077]取牛肉浸粉5g，酪蛋白水解物17.5g，淀粉1.5g，琼脂12.5g，加入1 OOOrnL蒸馏水中， 加热煮沸溶解，分装，121°C高压灭菌15分钟备用。
[0078] 1.3.2试验菌的培养
[0079] 在无菌室内，取大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌四种试 验菌株，于酒精灯下用接种针分别在四种试验菌株斜面上，刮取少量斜面菌苔，用一定量的 无菌水制成菌悬液，然后取一定量加到已融化又冷却至50°C左右的MH培养基(Mueller-Hinton培养基）中，摇匀，即刻倒入无菌培养皿中，待充分冷凝后用胶塞密封后，于37°C培养 18-24h备用。吸取菌液lmL，用MH培养基按1:1000稀释，使菌液浓度约为105cfu/mL。
[0080] 1.3.3抗菌实验：
[0081]将待测药品溶于DMS0中配制成2mg/mL的溶液，然后用二倍稀释法将药品稀释成一 定浓度梯度（50yg/mL，25yg/mL，12 · 5pg/mL，6 · 25yg/mL，3 · 125yg/mL)与 DMS0 中。于灭菌微量 滴定板第一条中分别加入l〇〇yL的培养基，第二条为阳性对照，加入100此菌悬液。其余的孔 中加入90yL的菌悬液和10yL的药物溶液。每个药物溶液浓度平行3次。在微量滴定板底部标 明细菌名称。将处理完的培养皿于37 °C培养24h，观察。
[0082] 1.3.4 MIC的测定
[0083]在每个微量滴定板都可以直观的测定其MIC值之后，在板的每个孔中加入50yL PBS缓冲液（磷酸盐缓冲液0 · 0lmo 1/L，pH7 · 4，Na2HP〇4 · 2H202 · 9g，KH2P〇4〇 · 2g，NaC18 · 0g， KC10.2g，蒸馏水1000mL)，其中包含2mg MTT/mL。在室温下继续孵育4-5h。将孔中的物质移 出并加入100yL含有5%lmol/L HC1的异丙醇来萃取染料。继续在室温下赋育12h，于酶标仪 测定各孔光吸收(0D值），测定波长550nm。根据各孔0D值计算药物对细菌生长的最小抑制浓 度。
[0084]最小抑制浓度(minimum inhibitory concentration，MIC):在特定环境下孵育24 小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑制浓度，根据测定的光密 度(0D值），制作细菌生长抑制率的标准曲线，在标准曲线上求得其对应的药物浓度。测得的 MIC见表1所示 [0085] 2.实验结果
[0086]表1本发明所列甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物对细菌的抑制MIC值(yg/mL)
[0087]
[0089]对照:氯胺苯醇;盘尼西林，甘草次酸
[0090]结果表明：甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 杆菌、铜绿假单胞都有不同程度的抑制作用，衍生物的抗菌效果优于甘草次酸。
【主权项】
1. 一种甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物，其特征在于，它具有如下通式：式(m)中％被至少一个甲氧基取代的苯基。2. 根据权利要求1所述的甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物，其特征在于，%被1~2个甲氧基取代的苯基。3. 根据权利要求1所述的甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物，其特征在于，4. 根据权利要求1所述的甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物的制备方法，其特征在于，包 括： (1) 有机溶剂中，甘草次酸与卤代异戊烷反应，得式（Π )化合物；(2) 有机溶剂中，式（Π )化合物与苯胺或取代苯胺反应，得所述的甘草次酸异戊烷酰胺 类衍生物；5. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（I)中，有机溶剂为DMF。反应温度 为60~80°C，反应时间为5~8h。6. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的卤代异戊烷为溴代异戊烷、氯 代异戊烷或氟代异戊烷。7. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，有机溶剂为二氯甲烷。反 应温度为20~30°C，反应时间为12~16h。8. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)中，反应体系还含有EDC和 HOBT。9. 根据权利要求1~3任一项所述的甘草次酸异戊烷酰胺类衍生物在制备药物中的应 用。10. -种药物，其特征在于，包括权利要求1~3任一项所述的甘草次酸异戊烷酰胺类衍 生物。
【文档编号】A61P31/04GK106008652SQ201610345455
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月23日
【发明人】石璐, 袁继文, 钟慧, 金显友, 魏元刚, 易铭, 杨永安
【申请人】江苏耐雀生物工程技术有限公司