盐酸氯胺酮的药物组合物及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了盐酸氯胺酮的药物组合物及其在生物医药中的应用，本发明提供的盐酸氯胺酮的药物组合物中含有盐酸氯胺酮和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，盐酸氯胺酮、化合物(Ⅰ)单独作用时，对急性痛风性关节炎具有治疗作用；盐酸氯胺酮和化合物(Ⅰ)联合作用时，对急性痛风性关节炎的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗急性痛风性关节炎的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
盐酸氯胺酮的药物组合物及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及盐酸氯胺酮的新用途，具体涉及盐酸氯胺酮的药 物组合物及其在生物医药中的应用。
【背景技术】
[0002] 盐酸氯胺酮主要是选择性的抑制丘脑的内侧核，阻滞脊髓至网状结构的上行传 导，兴奋边缘系统，并对中枢神经和脊髓中的阿片受体有亲和力。产生麻醉作用，主要是抑 制兴奋性神经递质（乙酰胆碱、L 一谷氨酸)及N-甲基一 D-天门冬酸受体的结果;镇痛作用 主要由于阻滞脊髓至网状结构对痛觉传入的信号及与阿片受体的结合，而对脊髓丘脑传导 无影响，故对内脏疼痛改善有限。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种盐酸氯胺酮的药物组合物，该药物组合物中含有盐酸 氯胺酮和一种结构新颖的天然产物，盐酸氯胺酮和该天然产物可以协同治疗急性痛风性关 节炎。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] -站 η 士 λ士仗t 士 奶儿人序w τ、
[0006]
[0007] -种盐酸氯胺酮的药物组合物，包括盐酸氯胺酮、如权利要求1所述的化合物（I) 和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0008] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将余甘子粉碎，用65~85%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇萃取物 用大孔树脂除杂，先用6 %乙醇洗脱8个柱体积，再用70 %乙醇洗脱8个柱体积，收集70 %洗 脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化 合物(I)。
[0011] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用75%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0013]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备治疗急性痛风性关节炎的药物中的应用。
[0015] 上述盐酸氯胺酮的药物组合物在制备治疗急性痛风性关节炎的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点：
[0017] 本发明提供的盐酸氯胺酮的药物组合物中含有盐酸氯胺酮和一种结构新颖的天 然产物，盐酸氯胺酮、化合物（I)单独作用时，对急性痛风性关节炎具有治疗作用;盐酸氯胺 酮和化合物（I)联合作用时，对急性痛风性关节炎的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗 急性痛风性关节炎的药物。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020]分离方法：（a)将余甘子(3kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取(20LX 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水饱和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用6%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个 柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓 缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1 (8个柱体积）、25:1 (8个柱体积）、15:1 (8个柱体 积)和5:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正 相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1(8个柱体积）、5:1(10个柱体积)和2:1(5个柱体 积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)(纯度大于98% )。
[0021] 结构确证:册431-]\^显示[]\?1]+为111/2 425.2978，结合核磁特征可得分子式为 C28H4Q〇3，不饱和度为9。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρπι，CD30D，500MHz): H-la(1 · 94，m)，H-lb (1.78，m)，H-2(6.03，ddd，J=12.0,7.3,5.4Hz)，H-3(6.25，dd，J=12.0,7.5Hz)，H-4a (2.22，dd，J=11.6,7.5Hz)，H-4b(1.89，d，J = 11.6Hz)，H-7(6.15，s)，H-ll(5.76，s)，H-12a (2.33，dd，J = 17.8,3.7Hz)，H-12b(l .89，dd，J=17.8,4.5Hz)，H-15a(2.11，m)，H-15b (1.65，m)，H-16a(1.53，m)，H-16b(1.44，m)，H-17(1.61，m)，H-18(0.95，s)，H-19(1.21，s)， H-20(2.14，m)，H-21(1.06，d，J = 6.7Hz)，H-22(5.23，dd，J=15.3,7.8Hz)，H-23(5.25，dd，J = 15.3,7.3Hz)，H-24(1.83，m)，H-25(1.47，m)，H-26(0.85，d，J = 7.5Hz)，H-27(0.84，d，J = 7.5泡），!1-28(0.93，(1，了 = 6.6!^);核磁共振碳谱数据3。(？?111，〇〇3〇0，1251!^):35.3(012，1-C)，132.1(CH，2-C)131.7(CH，3-C)，43.4(CH 2,4-C)，79.9(C，5-C)，196.8(C，6-C)，160·4 (CH，7-C)，124.5(C，8-C)，131.2(C，9-C)，42.3(C，10-C)，116.5(CH，n-C)，39.7(CH 2，12-C)，46.4(C，13-C)，82.5(C，14-C)，34.6(CH2，15-C)，27.6(CH2，16-C)，53.3(CH，17-C)，18.9 (CH 3，18-C)，23.7(CH3，19-C)，41.7(CH，20-C)，23.1(CH3,21-C)，136.6(CH，22-C)，132.5 (CH，23-C)，44.5(CH，24-C)，34.7(CH，25-C)，20.1(CH3,26-C)，20.6(CH3,27-C)，18.7(CH 3， 28-C)。红外吸收带（1645(31^1)与紫外最大吸收波长(242nm)表明该化合物含有共辄二烯结 构。氢谱显示出两个单峰甲基信号[5 110.95(3!1，8，]\^-18)和1.21(3!1，8，]^-19)]，四个双峰 甲基信号[SHl.06(3H，d，J = 6.7Hz，Me-21)，0.85(3H，d，J = 7.5Hz，Me-26)，0.84(3H，d，J = 7.5他，]\^-27)和0.93(3!1，(1，1 = 6.6取，]\^-28)]，六个烯属次甲基质子信号[5116.03(1!1， ddd，J=12.0,7.3,5.4Hz，H-2)，6.25(lH，dd，J=12.0,7.5Hz，H-3)，6.15(lH，s，H-7)，5.76 (lH，s，H-ll)，5.23(lH，dd，J=15.3,7.8Hz，H-22WP5.25(lH，dd，J=15.3,7.3Hz，H-23)]。 该新化合物的碳谱显示出28个碳信号，包括六个甲基，五个亚甲基，十个次甲基(六个烯烃 碳）以及七个季碳(一个酮羰基碳，两个烯烃季碳以及两个含氧季碳）。综合核磁谱图数据以 及高分质谱数据，该化合物可能为一个孕留烷型的留体类化合物。查阅文献可以推论出该 化合物和已知化合物Fomentaro 1 A具有相似的结构。比较两者核磁数据发现，两者的唯一 区别在于，新化合物中失去了 C-3和C-6位连氧碳信号的同时多出了一组双键和一个酮羰基 信号。据此，可以推测出新化合物可能为一个Fomentarol A的衍生物。HMBC谱中，H-7与C-6 以及H-4与C-6的相关性可以证明该化合物中的C-6位是一个酮羰基碳。同时，H-1与C-3，H-3 与C-2以及H-4与C-2的相关性说明，该化合物在C-2和C-3之间存在一个环内双键。N0ESY谱 中，将该化合物在吡啶中重新做谱发现，Hax-4，H-7以及Hax-12都向低场位移，这点证明了 5 α以及14α等构型。通过比较化合物中的C-26，C-27以及C-28的核磁数据和具有（24R)-22E-或者(24S)-22E-侧链的化合物进行比较发现，新化合物C-24位的绝对构型依然是24R型的。 综合氢谱、碳谱、HMBC谱和N0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物 如下所示，立体构型进一步通过EO)试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式 及碳原子编号如下：
[0022]
[0023] 实施例2:药理作用
[0024]本实例使用尿酸钠制备急性痛风性关节炎大鼠模型，观察药物治疗前后受试关节 周径、关节腔组织中前列腺素 E2(PGE)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)含量及关节腔积液白细胞 数。
[0025] 1、材料与方法
[0026] 1.1动物
[0027] SD大鼠，雄性，清洁级，体重200~250g，由广东医学院实验动物中心提供（。在实验 室正常饲养3d后供试。
[0028] 1.2试剂与样品
[0029] 盐酸氯胺酮购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。 尿酸钠(Sigma公司提供），前列腺素 E2(PGE2)放射免疫试剂盒(北京东亚免疫技术研究所提 供），肿瘤坏死因子-a(TNF-a)试剂盒(军事医学科学院研究所提供）。
[0030] 1.3大鼠分组及模型制备
[0031] 大鼠随机分为5组，每组12只，分别为正常对照组（不造模）、模型对照组和盐酸氯 胺酮组（80mg · kg<)、化合物（I)组（80mg · kg<)、盐酸氯胺酮与化合物（I)组合物组 【40mg · kg^1盐酸氯胺酮+40mg · kg^1化合物（I)】。造模方法：用6号注射针在受试大鼠右侧 踝关节背侧以45°角插入胫骨肌腱内侧，将10%尿酸钠溶液按0.2mL/只注入踝关节腔内。 [0032]造模第二天，给药组按照上述剂量灌胃给药，每日一次，连续3天;正常对照组和模 型对照组灌胃等量的生理盐水。
[0033] 1.4大鼠关节肿胀度测定实验
[0034]各组大鼠在造模前、造模后3h(给药前）及最后一次给药后3d，分别在受试踝关节 相同部位用无弹性软尺测量其周长，观察造模前及治疗前后大鼠踝关节周长的变化。
[0035] 1 · 5关节腔中PGE2、TNF_a、白细胞的测定实验
[0036]各组大鼠在最后一次给药治疗72h后断头处死，打开受试关节腔取关节积液，涂 片，进行白细胞计数；取下关节腔周围软组织，匀浆后采用放射免疫测定法测定组织中 PGE2、TNF-a，按试剂盒说明书操作。
[0037] 1.6统计学方法
[0038]应用SPSS 18.0版统计软件进行单因素方差分析和t检验，以P<0.05为差异有统 计意义。
[0039] 2、实验结果
[0040] 2.1对痛风性关节炎大鼠踝关节肿胀的影响
[0041]与正常对照组比较，模型对照组大鼠踝关节肿胀度明显增加(P<0.01)。与模型对 照组比较，盐酸氯胺酮组、化合物（I)组大鼠关节肿胀程度明显减小(P<〇.05)，盐酸氯胺酮 与化合物(I)组合物组关节肿胀程度减小(P0.01)。结果见表1。
[0042] 2.2对痛风性关节炎大鼠关节腔组织中PGE2、TNF-a水平及白细胞计数的影响 [0043]与正常对照组比，模型组大鼠关节腔组织中PGE2、TNF-a含量显著升高(P<0.01); 与模型对照组比较，盐酸氯胺酮组、化合物（I)组大鼠关节腔组织中PGE 2、TNF_a含量降低(P <〇.〇5);与模型对照组比较，盐酸氯胺酮与化合物（I)组合物组关节腔组织中PGE2、TNF_a 含量显著降低(P<〇.01)。与正常对照组相比，模型对照组大鼠关节腔积液中白细胞数量明 显升高(P<〇.01);与模型对照组比，盐酸氯胺酮组、化合物（I)组大鼠关节腔积液中白细胞 数量降低(P<〇.05)，盐酸氯胺酮与化合物（I)组合物组显著降低(P<0.01)。结果见表2。 [0044]表1各组关节肿胀度变化的比较(mm)
[0045]
[0047] 表2各组大鼠关节腔组织中PGE2、TNF_a含量及白细胞计数
[0048]
[0049] 痛风为遗传性和(或)获得性引起的尿酸排泄减少和(或)嘌呤代谢障碍，急性痛风 性关节炎的根本病因是高尿酸血症及其导致的关节局部尿酸钠晶体的析出。应用尿酸钠局 部关节注射造成痛风性关节炎模型被认为是经典的痛风性关节炎的造模方法，可用于评价 抗痛风性关节炎药物的疗效。
[0050] 尿酸钠沉积到关节腔周围时，诱使单核-巨噬细胞吞噬晶体、肥大细胞、多形核嗜 中性粒细胞聚集到其周围，并释放出致炎、致痛物质，如组胺、前列腺素(PG)、白细胞三烯 B4、TNF_a等炎症递质，产生很强的炎症效应及致痛效应。PG作为第三信使是炎症反应的重 要递质，炎症的发生发展与局部PG含量有密切关系。一般认为，在关节炎的发病过程中， PGE2的作用最为强烈。TNF-a作为炎症趋化因子和激活因子在痛风性关节炎的发生、发展过 程中亦起重要作用。分析受试关节腔组织中PGE 2、TNF_a含量及关节积液中白细胞数量有利 于指导痛风的临床诊断和治疗。
[0051] 上述结果表明，盐酸氯胺酮、化合物（I)单独作用时，对急性痛风性关节炎具有治 疗作用；盐酸氯胺酮和化合物（I)联合作用时，对急性痛风性关节炎的治疗效果进一步提 高，可以开发成治疗急性痛风性关节炎的药物。
[0052] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种盐酸氯胺酮的药物组合物，其特征在于:包括盐酸氯胺酮、如权利要求1所述的 化合物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的盐酸氯胺酮的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载 体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载 体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的盐酸氯胺酮的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、 胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射 剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将余 甘子粉碎，用65~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用6%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱 8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70 %乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用75%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗急性痛风性关节炎的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的盐酸氯胺酮的药物组合物在制备治疗急性痛风性关节炎 的药物中的应用。
【文档编号】A61P19/02GK106008638SQ201610335393
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月15日
【发明人】刘雨
【申请人】刘雨