基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法和装置的制造方法
【专利摘要】本发明涉及一种基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法和装置。该基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法包括如下步骤：(1)在多孔板的反应孔内注入一定量的核酸粗提液或高纯核酸试样；(2)对多孔板的反应孔内的核酸粗提液或高纯核酸试样进行磁性粒子吸附操作，之后去除液体；(3)将其他反应孔内的核酸粗提液或高纯核酸试样定量地移入步骤(2)的反应孔内，进行磁性粒子吸附操作后去除液体；(4)重复步骤(2)?(3)，直至磁性粒子吸附的痕量靶标核酸达到可分析的量为止；(5)洗脱吸附在磁性粒子上的核酸。本发明以多孔板为载体能自动完成痕量靶标核酸的富集，使自动化微生物分子检测设备对痕量试样进行全自动检测成为可能。
【专利说明】
基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法和装置
技术领域
[0001]本发明属于微生物的测定或检验方法技术领域，特别涉及一种基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法和装置。【背景技术】
[0002]用磁性粒子吸附核酸是常用的核酸提纯方法，如申请号为200980123037.0的发明创造公开的一种从固定组织中提纯核酸的方法就主要采用了用磁性粒子吸附并洗脱核酸的思想。
[0003]对于需要成批量处理的试样，多孔板是一种常用的载体。申请号为 201380018553.3的发明创造公开了一种用于自动分析生物试样的设备以及方法，其在纯化时采用了多孔板试剂盒，一个多孔板试剂盒内置入的待测试样的量是很小的，如果靶标核酸的含量不高，则现有技术是无法采用自动化设备检测的。即:对于痕量试样，一个多孔板反应孔内的核酸裂解液所含的靶标核酸达不到被检出的含量，现有技术中的自动化检测设备尚未有解决的办法。这成为自动化微生物分子检测设备发展的瓶颈。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法，使装在多孔板内的痕量试样可以方便地实现核酸的富集。
[0005]本发明解决所述技术问题的方案是:一种基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法，包括如下步骤:
[0006](1)在多孔板的反应孔内注入一定量的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样；
[0007](2)对多孔板的反应孔内的核酸粗提液或高纯核酸试样进行磁性粒子吸附操作， 之后去除液体；
[0008](3)将其他反应孔内的核酸粗提液或高纯核酸试样定量地移入步骤(2)的反应孔内，进行磁性粒子吸附操作后去除液体；
[0009](4)重复步骤(2)-(3)，直至磁性粒子吸附的痕量靶标核酸达到可分析的量为止；
[0010](5)加入核酸洗脱液，洗脱吸附在磁性粒子上的核酸。
[0011]作为改进，所述核酸裂解液经过如下处理步骤得到:(1)取一定质量或体积的试样放入多孔板；(2)加入细胞裂解液，根据需要进行加热和/或振荡处理；(3)过滤后得到核酸粗提液。
[0012]作为改进，所述核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样的移运由多通道移液枪进行。
[0013]作为改进，同一种试样的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样位于同一块多孔板的同一行或同一列上。
[0014]作为改进，同一种试样的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样位于不同多孔板的相同位置上。
[0015]作为改进，所述磁性粒子吸附操作的步骤为:(1)将磁性粒子加入至多孔板的反应孔，并振摇；(2)在多孔板反应孔的周围施加磁场；(3)在磁场保持住磁性粒子的前提下移除液体。
[0016]本发明的另一目的是提供一种实现上述方法的装置，其技术方案为:
[0017]—种基于多孔板的痕量靶标核酸的富集装置，包括多孔板、磁场产生装置、由机械臂控制的多通道移液枪，磁场产生装置用于在多孔板周围产生磁场，由机械臂控制的多通道移液枪用于将液体加入多孔板的反应孔内或将液体从多孔板的反应孔移除。
[0018]作为改进，所述磁场产生装置为电磁式磁场产生装置，磁场产生装置的顶部有用于容置多孔板的凹陷。
[0019]作为改进，所述多孔板的数量大于2块，每块多孔板的相同位置放置同种试样的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样。
[0020]本申请以多孔板为载体，其主要思路为:将一定质量或体积的试样置于多孔板的反应孔内并使试样完成裂解得到核酸裂解液，核酸裂解液经过过滤后得到核酸粗提液，核酸粗提液经过磁性粒子的吸附提纯后得到高纯核酸试样。本申请富集的对象既可以是核酸粗提液，也可以是纯化后得到的高纯核酸试样。同一种试样可以位于同一块多孔板的同一行或同一列，同一种试样也可位于不同多孔板的相同位置，以方便多通道移液枪将同种试样移入加有磁性粒子的反应孔内，使经过多次吸附后的磁性粒子所含的核酸达到可检测的剂量。本申请使位于多孔板反应孔内的核酸得到富集，而且一次可以对多个试样的核酸进行富集，提高了工作效率，使现有技术中的自动化微生物分子检测设备对痕量试样进行全自动检测成为可能。【附图说明】[0021 ]图1为本发明所述装置的结构示意图。
[0022]图中:1、多孔板;2、磁场产生装置;21、凹陷;3、机械臂;4、多通道移液枪。【具体实施方式】 [〇〇23] 实施例1
[0024]—种基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法，包括如下步骤:
[0025](1)采用多通道移液枪在多孔板的反应孔内注入一定量的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样，同一种试样的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样位于同一块多孔板的同一行或同一列上，同一种试样的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样也可位于不同多孔板的相同位置上；
[0026](2)对多孔板的反应孔内的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样进行磁性粒子吸附操作，之后采用多通道移液枪去除液体；
[0027](3)将其他反应孔内的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样采用多通道移液枪定量地移入步骤(2)的反应孔内，进行磁性粒子吸附操作后采用多通道移液枪去除液体；
[0028](4)重复步骤(2)_(3 )，直至磁性粒子吸附的痕量靶标核酸达到可分析的量为止；
[0029] (5)加入核酸洗脱液，洗脱吸附在磁性粒子上的核酸。[〇〇3〇]所述核酸裂解液经过如下处理步骤得到:(1)取一定质量或体积的试样放入多孔板;(2)加入细胞裂解液，根据需要进行加热和/或振荡处理；(3)过滤后得到核酸粗提液。
[0031]所述磁性粒子吸附操作的步骤为:(1)将磁性粒子加入至多孔板的反应孔，并振摇；(2)在多孔板反应孔的周围施加磁场；(3)在磁场保持住磁性粒子的前提下采用多通道移液枪移除液体。
[0032]与该方法对应的装置如图1所示，一种基于多孔板的痕量靶标核酸的富集装置，包括多孔板1、磁场产生装置2、由机械臂3控制的多通道移液枪4,多孔板1在提纯核酸时位于磁场产生装置2之上，磁场产生装置2用于在多孔板1周围产生磁场，由机械臂3控制的多通道移液枪4用于将液体加入多孔板1的反应孔内或将液体从多孔板1的反应孔移除。
[0033]磁场产生装置2为电磁式磁场产生装置，通电后产生磁场，关闭电源后磁场消失。 磁场产生装置2的顶部有用于容置多孔板1的凹陷21。[〇〇34]多孔板1的数量大于2块，每块多孔板1的相同位置放置同种试样的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样。富集时，一块多孔板1位于磁场产生装置2的凹陷21内，其他多孔板1位于操作台面上，所有多孔板1在相同位置的反应孔内放置的是相同试样的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样。
【主权项】
1.一种基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法，其特征在于，包括如下步骤:(1)在多孔板的反应孔内注入一定量的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试 样；(2)对多孔板的反应孔内的核酸粗提液或高纯核酸试样进行磁性粒子吸附操作，之后 去除液体；(3)将其他反应孔内的核酸粗提液或高纯核酸试样定量地移入步骤(2)的反应孔内，进 行磁性粒子吸附操作后去除液体；(4)重复步骤(2)-(3)，直至磁性粒子吸附的痕量靶标核酸达到可分析的量为止；(5)加入核酸洗脱液，洗脱吸附在磁性粒子上的核酸。2.如权利要求1所述的基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法，其特征在于，所述核酸 粗提液经过如下处理步骤得到:(1)取一定质量或体积的试样放入多孔板；(2)加入细胞裂 解液，根据需要进行加热和/或振荡处理；(3)过滤后得到核酸粗提液。3.如权利要求1所述的基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法，其特征在于，所述核酸 粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样的移运由多通道移液枪进行。4.如权利要求1所述的基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法，其特征在于，同一种试 样的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样位于同一块多孔板的同一行或同一列 上。5.如权利要求1所述的基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法，其特征在于，同一种试 样的核酸粗提液或经过纯化后得到的高纯核酸试样位于不同多孔板的相同位置上。6.如权利要求1所述的基于多孔板的痕量靶标核酸的富集方法，其特征在于，所述磁性 粒子吸附操作的步骤为:(1)将磁性粒子加入至多孔板的反应孔，并振摇；(2)在多孔板反应 孔的周围施加磁场；(3)在磁场保持住磁性粒子的前提下移除液体。7.—种基于多孔板的痕量靶标核酸的富集装置，其特征在于，包括多孔板(1)、磁场产 生装置(2)、由机械臂(3)控制的多通道移液枪(4)，磁场产生装置(2)用于在多孔板(1)周围 产生磁场，由机械臂(3)控制的多通道移液枪(4)用于将液体加入多孔板(1)的反应孔内或 将液体从多孔板(1)的反应孔移除。8.如权利要求7所述的基于多孔板的痕量靶标核酸的富集装置，其特征在于，所述磁场 产生装置(2)为电磁式磁场产生装置，磁场产生装置(2)的顶部有用于容置多孔板(1)的凹 陷(21)。9.如权利要求7所述的基于多孔板的痕量靶标核酸的富集装置，其特征在于，所述多孔 板(1)的数量大于2块，每块多孔板(1)的相同位置放置同种试样的核酸粗提液或经过纯化 后得到的高纯核酸试样。
【文档编号】C12M1/00GK105969899SQ201610580044
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年7月19日
【发明人】吴酬飞
【申请人】湖州高亿诺生物科技有限公司