一种灵芝的多阶段液态深层发酵方法
【专利摘要】本发明公开了一种灵芝的多阶段液态深层发酵方法，该发酵方法中温度为26℃，搅拌转速100r/min，其中通气比在发酵前期(0?31.2h)为l.0?1.4vvm、发酵中期(31.2?43h)为l.6?2.0vvm、发酵中后期(43?55h)为l.0?1.4vvm、发酵后期(55h以后)为0.8?l.2vvm，发酵至110?120h结束。利用本发明的方法生产的灵芝菌丝体，能有效地提高灵芝多糖的产量。
【专利说明】
一种灵芝的多阶段液态深层发酵方法
技术领域
[0001]本发明涉及食用菌生产领域，具体的说涉及一种灵芝的多阶段液态深层发酵方法。
【背景技术】
[0002]目前，液态深层发酵获得灵芝胞内多糖已经取得不少成果，国内外的文献报道中，关于液态深层发酵灵芝胞内多糖的研究更多的集中在其生物活性方面，对于如何提高菌丝体产量，大多集中在利用摇瓶发酵的优化，包括对培养基和培养条件等优化方面。而对于利用发酵罐对灵芝液态深层发酵条件进行的研究较少。
【发明内容】
[0003]本发明的目的首先是提供一种灵芝的多阶段液态深层发酵方法，该发酵方法中温度为26°C，搅拌转速100r/min，其中通气比为:
[0004](I)发酵前期(0-31.2h):控制通气比为1.0-1.4vvm；
[0005](可缩短菌丝体生长延滞期，提高菌丝体生长速率。)
[0006](2)发酵中期(31.2-43h):提高通气比至I.6-2.0vvm;
[0007](可维持较高的菌丝体生长速率和灵芝多糖合成速率。)
[0008](3)发酵中后期(43-55h):降低通气比至1.0_1.4vvm ；
[0009](可继续维持较高的菌丝体生长速率和灵芝多糖合成速率。)
[0010](4)发酵后期(55h以后):降低通气比至0.8-1.2vvm，发酵至110-120h结束。
[0011](可以提高菌丝体催化合成灵芝多糖的能力。)
[0012]优选的灵芝的多阶段液态深层发酵方法该发酵方法中温度为26°C，搅拌转速100r/min，
[0013]其中通气比为::
[0014](I)发酵前期(0-31.2h):控制通气比为1.2vvm;
[0015](2)发酵中期(31.2-43h):提高通气比至I.8vvmn；
[0016](3)发酵中后期(43_55h):降低通气比至1.2vvm；
[0017](4)发酵后期(55h以后):降低通气比至1.(^观，发酵至110-1201!结束。
[0018]本发明还提供了一种灵芝多糖，该灵芝多糖是利用前述方法生产得到的灵芝菌丝体进行水提得到的。
[0019]具体的说，本发明的灵芝多糖，是利用前述的多阶段液态深层发酵方法生产得到的灵芝菌丝体，进行沸水提取得到的。
[0020]有益效果
[0021]本发明的优点在于发酵工艺简便易行，能有效地提高灵芝菌丝体中灵芝多糖的产量。
[0022]本发明的有益效果:利用本发明的方法生产的灵芝菌丝体，采用分阶段采用不同的通气比，能有效地提高灵芝多糖的产量。本发明所提供的多阶段控制发酵工艺简便、高效，使发酵时间缩短，灵芝多糖产量增高，因此有着重要的工业应用价值，同时对其它食药用菌的液态深层发酵生产具有一定的指导意义。
【具体实施方式】
[0023]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0024]灵芝菌株:沪农灵芝I 号Ganoderma Iuc idum，已在[B1techno 1gy andB1process Engineering 2014年第19卷第4期727-732]公开。
[0025]斜面培养基(g/L):39g马铃薯葡萄糖琼脂溶于IL去离子水中灭菌后即得。
[0026]种子培养基的组分为:酵母粉2g/L，无水葡萄糖25g/L，七水硫酸镁1.5g/L，磷酸二氢钾3.0g/L，自然pH。
[0027]发酵培养基为:酵母粉3g/L，无水葡萄糖30g/L，七水硫酸镁2.0g/L，磷酸二氢钾2.0g/L，自然pH。
[0028]灵芝种子液培养方法:将保藏好的菌种在斜面培养基上活化7天，挑取4块菌丝体接入种子培养基，温度26 0C，摇床转速150r/min，摇瓶培养1天得种子液。
[0029]实施例一
[°03°]将培养好的种子液以10 % (v/v)的接种量接入到6L发酵罐中的4.0L发酵培养基中，进行液态深层发酵培养。
[0031]发酵前期(0-31.2h)，控制通气比为1.2vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min;发酵中期(31.2-43h)，提高通气比至1.8vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min;发酵中后期(43-55h)，降低通气比至1.2vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min;发酵后期(55h以后)，降低通气比至1.0vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min，发酵至115h结束。
[0032]将烘干后的灵芝菌丝体研磨成粉末，称取10mg加入10ml蒸馏水，沸水浴提取3h。冷却后定容至100ml，将溶液在1000rpm下离心15min后取上清液，即为得到灵芝多糖。
[0033]测定灵芝多糖的产量为3.25g/L。
[0034]实施例二
[0035]将培养好的种子液以10% (v/v)的接种量接入到6L发酵罐中的4.0L发酵培养基中，进行液态深层发酵培养。
[0036]发酵前期(0-31.2h)，控制通气比为1.4vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min;发酵中期(31.2-43h)，提高通气比至2.0VVm，温度为26°C，搅拌转速100r/min;发酵中后期(43-55h) ，降低通气比至1.4vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min;发酵后期(55h以后)，降低通气比至1.2vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min，发酵至115h结束。
[0037]将烘干后的灵芝菌丝体研磨成粉末，称取10mg加入10ml蒸馏水，沸水浴提取3h。冷却后定容至100ml，将溶液在1000rpm下离心15min后取上清液，即为得到灵芝多糖。
[0038]测定灵芝多糖的产量为2.95g/L。
[0039]实施例三[OO4O]将培养好的种子液以10 % (v/v)的接种量接入到6L发酵罐中的4.0L发酵培养基中，进行液态深层发酵培养。
[0041 ] 发酵前期(0-31.2h)，控制通气比为1.0^111，温度为26°(:，搅拌转速10(^/1^11;发酵中期(31.2-43h)，提高通气比至1.6vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min;发酵中后期(43-55h)，降低通气比至1.0vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min;发酵后期(55h以后)，降低通气比至0.8vvm，温度为26 V，搅拌转速10r/min，发酵至115h结束。
[0042]将烘干后的灵芝菌丝体研磨成粉末，称取10mg加入10ml蒸馏水，沸水浴提取3h。冷却后定容至100ml，将溶液在1000rpm下离心15min后取上清液，即为得到灵芝多糖。
[0043]测定灵芝多糖的产量为3.01g/L。
[0044]对照实施例1:发酵过程中恒定通气比为0.8vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min，发酵至115h结束，灵芝多糖的产量为0.94g/L0
[0045]对照实施例2:发酵过程中恒定通气比为1.0vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min，发酵至115h结束，灵芝多糖的产量为1.01g/L。
[0046]对照实施例3:发酵过程中恒定通气比为1.2vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min，发酵至115h结束，灵芝多糖的产量为1.73g/L。
[0047]对照实施例4:发酵过程中恒定通气比为1.4vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min，发酵至115h结束，灵芝多糖的产量为1.51g/L。
[0048]对照实施例5:发酵过程中恒定通气比为1.6vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min，发酵至115h结束，灵芝多糖的产量为1.38g/L。
[0049]对照实施例6:发酵过程中恒定通气比为1.8vvm，温度为26°C，搅拌转速100r/min，发酵至115h结束，灵芝多糖的产量为1.82g/L。
[0050]对照实施例7:发酵过程中恒定通气比为2.0^111，温度为26°(:，搅拌转速10(^/1^11，发酵至115h结束，灵芝多糖的产量为1.24g/L。
[0051 ]其中灵芝多糖的测定方法为:
[0052]将烘干后的灵芝菌丝体研磨成粉末，称取10mg加入10ml蒸馏水，沸水浴提取3h。冷却后定容至100ml，将溶液在1000rpm下离心15min后取上清液，上清液即为待测样品溶液。
[0053]取上清液稀释50倍，取稀释后的样品Iml到试管中(设3个重复)，然后加入5%苯酚(重蒸苯酸)0.5mI，混勾，再加入2.5ml浓硫酸，振荡，放沸水浴中加热15min，放在冷水下迅速冷却，然后在490nm处检测吸光度值，根据标准曲线计算出多糖含量。
【主权项】
1.一种灵芝的多阶段液态深层发酵方法，该发酵方法中温度为26°c，搅拌转速10r/min，其中通气比为: (1)发酵前期(0-31.2h):控制通气比为1.0-1.4vvm ； (2)发酵中期(31.2-43h):提高通气比至1.6-2.0vvm; (3)发酵中后期(43_55h):降低通气比至1.0-1.4vvm; (4)发酵后期(55h以后):降低通气比至0.8-1.2vvm，发酵至110-120h结束。2.根据权利要求1所述的灵芝的多阶段液态深层发酵方法，该发酵方法中温度为26°C，搅拌转速100r/min，其中通气比为: (1)发酵前期(0-31.210:控制通气比为1.2￥糧； (2)发酵中期(31.2-43h):提高通气比至1.8vvmn; (3)发酵中后期(43-55h):降低通气比至1.2vvm; (4)发酵后期(55h以后):降低通气比至1.0^111，发酵至110-12011结束。3.—种灵芝多糖，该灵芝多糖是利用权利要求1或2的多阶段液态深层发酵方法生产得到的灵芝菌丝体进行水提得到的。4.根据权利要求3所述的灵芝多糖，其是利用灵芝菌丝体进行沸水提取得到的。
【文档编号】C12P19/04GK105907812SQ201610532035
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年7月7日
【发明人】张劲松, 冯杰, 王国瑞, 冯娜, 唐庆九, 杨焱, 周帅, 刘方, 刘艳芳, 唐传红, 贾薇, 吴迪, 颜梦秋, 张忠, 庄海宁
【申请人】上海市农业科学院