一种吲哚二酮哌嗪类化合物的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种吲哚二酮哌嗪类化合物的制备方法。本发明从深海真菌Dichotomom yces cejpii FS110发酵产物的乙酸乙酯提取物中分离到化合物1,2,3,4?tetrahydro?2?methyl?3?methylene?1,4?dioxopyrazino[1,2?a]indole。从而为化合物1,2,3,4?tetrahydro?2?methyl?3?met hylene?1,4?dioxopyrazino[1,2?a]indole的制备提供了一条途径。
【专利说明】
一种吲哚二酮哌嗪类化合物的制备方法
技术领域
[0001 ]本发明属于生物和医药领域，具体涉及利用南海深海沉积物的真菌 Dichotomomyces ce jpi i FS110制备化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methy lene-1，4_dioxopyrazino[l，2_a]indole的方法。
【背景技术】：
[0002] 海洋拥有特殊的环境，像高盐、弱碱性、低营养、缺氧等，栖息于海洋环境的海洋微 生物为了适应这些特殊环境，产生了独特的代谢途径，由此能够产生结构特异、生物活性特 殊的次级代谢产物。近年来从海洋微生物中发现了大量结构新颖、活性显著的化合物，如生 物碱类、萜类、聚酮类等(Blunt J.W.et al.2015;Yang J.G.et al.2013)。目前，海洋微生 物已经成为天然产物研究的重要资源。与其它海洋微生物相比，海洋真菌来源的次生代谢 产物不仅数量占到整个海洋微生物的一半左右，还具有产量大、结构和活性多样等特点，目 前已经成为海洋微生物天然产物的研究热点（Bugni T.S.et al.2013;Saleem M.et al.2013；Rateb M.E.2011；Blunt J.W.et al.2013)〇
[0003] 本发明的前期研究表明，深海真菌Dichotomomyces cejpii FS110的发酵液乙酸 乙酯粗提物具有很好的细胞毒和抗菌活性，因此我们对该深海真菌次级代谢产物进行了深 入的研究。
[0004] 化合物1，2,3,4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxopyrazino[l，2_ a]indole，其结构如式（I)所示，其公开于文献"Wan-Ling Liang，Xiu Le，Hou-Jin Li，et al.Exploring the chemodiversity and biological activities of the secondary metabolites from the marine fungus Neosartorya pseudofischeri[J].Mar.Drugs, 2014,12(11):5657-5676. "中。
【发明内容】
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[0006] 本发明的第一个目的是提供化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methy 1-3-methylene-1,4-dioxopyra zino[ 1，2_a]indole的制备方法。
[0007] -种化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxopyrazino [1，2-a] indole的制备方法，其特征在于，所述的化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl_3-methylene-1，4_dioxopyrazino[ 1，2_a] indole是从深海真菌Dichotomomyces cejpii FS110的发酵培养物中制备得到。
[0008] 优选，具体步骤如下：
[0009] 制备Dichotomomyces cejpii FS110的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和 菌丝体分离，发酵液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经浓缩后得到浸膏；将浸膏过硅胶柱，先 用石油醚-乙酸乙酯从30:l，20 :l，10:l，7:l，9:2,3:l，2 :l，l:l，l:2v/v梯度洗脱，收集浸膏 被石油醚：乙酸乙酯=1: lv/v洗脱的馏分F13组分，F13组份过Sephadex LH-20,以二氯甲 烧：甲醇=1: lv/v洗脱，收集洗脱的馏分，再经纯化后得到化合物1，2,3,4-七61:瓜117(11'〇-2-methyl-3-methylene-l,4-dioxo pyrazino[1，2_a]indole。
[0010]所述的经纯化后得到化合物1，2,3,4-七61:瓜117(11'〇-2-11161:1171-3-11161:11716116-1，4-dioxo pyrazino[ 1，2-a]indole优选是将洗脱的馏分过正相制备HPLC(YMC柱，流动相:体积 比70: 30的n-hexa ne/EtOAc，流速10ml/min)，于保留时间tR= 16min处得到化合物1，2，3， 4-tetrahydr〇-2_meth yl-3-methylene-l,4-dioxo pyrazino[1，2_a]indole。
[0011] 本发明的第二个目的是提供Dichotomomyces cejpii FS110在制备化合物1,2,3， 4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene_l，4_dioxopyrazino[ 1，2_a] indole中的应用。 [0012] 本发明从Dichotomomyces cejpii FS110发酵培养物中分离得一个吲噪二酮哌嗪 类化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxopyrazin。[ 1，2_a] indole。从而为化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene_l ,4-dioxopyrazino [1，2-a]indole的制备提供了一条途径。
[0013] 本发明所涉及的深海真菌Dichotomomyces cejpii FS110公开于文献:杨小M，陈 玉婵，李浩华，章卫民.23株海洋真菌的分子鉴定及其抗植物病原真菌和细胞毒活性研究 2014,（8): 132-137。该菌株本
【申请人】也持有，并保证自申请日起20年内向公众提供。
【附图说明】：
[0014] 图1是化合物1的1H-NMR谱；
[0015] 图2是化合物1的13C-NMR谱；
[0016] 图3是化合物1的质谱。
【具体实施方式】：
[0017] 以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0018] 实施例1:
[0019] 将活化的Dichotomomyces cejpii FS110接入含质量分数1.5%海盐的马铃薯葡 萄糖(PD)液体培养基（即在每升PD培养基中含有15g的海盐）中，28°C，120rpm，培养5d制得 种子液10L，将种子液以体积比10%的接种量接入含质量分数1.5%海盐的PD液体培养基 中，28°C，120rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物100L。将该发酵培养物的发酵液和菌丝体 分离，发酵液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经浓缩后得到浸膏。将浸膏过硅胶柱，先用石油 醚-乙酸乙酯从30 :1，20:1，10:1，7:1，9:2,3 :1，2:1，1:1，1:2(V/V)梯度洗脱，再用乙酸乙酯 洗脱，最后用二氯甲烷：甲醇=5: l(v/v)洗脱;收集浸膏被石油醚：乙酸乙酯= 1:1洗脱的馏 分F13，该馏分过Sephadex LH-20柱，以二氯甲烧：甲醇= l:l(v/v)洗脱，收集洗脱的馏分， 然后过正相制备HPLC(YMC柱，n-hexane/EtOAc，70:30，流速10ml/min)，于tR= 16min得到化 合物1 (化合物1，2,3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxopyrazino[ 1，2_a] indole 3.2mg，）。
[0020] 化合物的H-NMR谱、13C-NMR谱和质谱分别如图1、2和3所示，经质谱和核磁共振波谱 分析，其结构鉴定如下：
[0021] 化合物1具有以下理化和波谱特性：白色固体;ESMS m/z ATSDM+NaFjH-NMR (500MHz,DMS0-d6)5H:8.39(lH,dt ,J = 8.3,1.0Hz,H-6), 7.83( lH,dt,J = 8.0,1.0Hz,H-9), 7.56(lH,ddd ,J = 8.3,7.2,1.0Hz,H-7) ,7.53( lH,t,J = 〇· 5Hz,H-10) ,7.44( lH,ddd,J = 8.0,7.2,1.0Hz,H-8),5.95(lH,d ,J = 1.7Hz,H-3a), 5.45( lH,d,J=1.7Hz,H-3a), 3.31 (3H, s，H-2a).13C NMR( 125MHz，CDCl3)SH: 155.2(C-4), 154.7(C-1 ),138.0(03),135.9(C-9a), 129.2(C-5a),128.4(C-7),127.9(C-10a),125.8(C-8),123.1(C-9),117.3(C-6),115.6(C-10) ,106.3 (C-12)，29.9(C-2a)。经文献检索，该化合物波谱数据为与文献（Wan-Ling 1^已即，父;[111^，!1011-了;[111^，6七&1.2014)报道化合物1，2,3,4-七61:抑117(11'0-2-11161:1171-3-methylene-1，4-dioxopyra zino[l，2_a]indole的一致，故鉴定化合物1为化合物1，2,3,4_ tetrahydr〇-2-methy1-3-methylene-1,4-dioxopyra zino[1,2~a]indole〇
[0022] 经过上述方法分离的目标化合物1为1,2,3,4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methy lene-1,4_dioxopyrazino[ 1,2_a] indole，其结构式如式（I)所示：
【主权项】
1. 一种化合物I，2,3,4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4_dioxopyrazino[l， 2- a] indole的制备方法，其特征在于，所述的化合物1，2,3,4-七61:抑117(11'〇-21161:1171-3-methylene-1，4_dioxopyrazino[ I，2_a] indole是从深海真菌Dichotomomyces ce jpii FS110的发酵培养物中制备得到的。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下： 制备Dichotomomyces cejpii FSllO的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝 体分离，发酵液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经浓缩后得到浸膏；将浸膏过硅胶柱，先用石 油醚-乙酸乙酯从30:1,20:1，10:1，7:1，9:2,3:1，2:1，l :l，l:2v/v梯度洗脱，收集浸膏被石 油醚：乙酸乙酯=1: lv/v洗脱的馏分F13组分，F13组份过Sephadex LH-20柱，以二氯甲烧： 甲醇=I: lv/v洗脱，收集洗脱的馏分，再经纯化后得到化合物1，2,3,4-七61:^117(11'〇-2-methy1-3-methylene-1，4_dioxo pyrazino[I，2_a]indole。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的经纯化后得到化合物1，2,3,4_ tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxo pyrazino[I，2_a]indole是将洗脱的馈分 过正相制备HPLC(YMC柱，流动相:体积比70:30的正己烷/乙酸乙酯，流速10ml/min)，于保留 时间tR= 16min处得到化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxo pyrazino[I，2_a]indole。4·真菌Dichotomomyces cejpii FSl 10在制备化合物I，2，3，4-tetrahydr〇-2_methyl- 3- methylene-l，4_dioxopyrazino[ I，2_a] indole中的应用。
【文档编号】C12P17/18GK105884782SQ201610251501
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月20日
【发明人】李浩华, 范震, 章卫民, 孙章华, 刘洪新, 叶伟
【申请人】广东省微生物研究所