一种富马酸比索洛尔的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种富马酸比索洛尔的药物组合物及其医药用途，本发明提供的富马酸比索洛尔的药物组合物中含有富马酸比索洛尔和一种从干燥的枇杷叶中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，富马酸比索洛尔与化合物(Ⅰ)组合物具有明显的抗炎止咳作用，且优于富马酸比索洛尔或化合物(Ⅰ)单独的抗炎止咳作用，可以开发成抗炎止咳的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种富马酸比索洛尔的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及富马酸比索洛尔的新用途，具体涉及富马酸比索 洛尔的药物组合物及其在抗炎止咳中的应用。
【背景技术】
[0002] 富马酸比索洛尔为β受体阻滞剂，对支气管和血管平滑肌的β?-受体有高亲和力， 从而使血管扩张，血压降低。适用于高血压、冠心病、及中度至重度慢性稳定性心力衰竭等 症。
[0003] 富马酸比索洛尔是一种高选择性的m-肾上腺受体拮抗剂，无内在拟交感活性和 膜稳定活性。富马酸比索洛尔对支气管和血管平滑肌的m-受体有高亲和力，对支气管和血 管平滑肌和调节代谢的β2-受体仅有很低的亲和力。因此，富马酸比索洛尔通常不会影响呼 吸道阻力和β2-受体调节的代谢效应。富马酸比索洛尔在超出治疗剂量时仍具有m-受体选 择性作用。
[0004] 迄今为止，尚未见富马酸比索洛尔及其药物组合物与抗炎止咳的相关性报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种富马酸比索洛尔的药物组合物，该药物组合物中含有 富马酸比索洛尔和一种天然产物，富马酸比索洛尔和该天然产物可以协同抗炎止咳。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0009] -种富马酸比索洛尔的药物组合物，包括富马酸比索洛尔、如权利要求1所述的化 合物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0010] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0011] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0012] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将干燥的枇杷叶粉碎，用70~ 80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正 丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇 萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱10个柱体积，收 集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正 相硅胶分离，依次用体积比为80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组 分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、15:1和2:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离， 用体积百分浓度为72 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓 缩得到纯的化合物(I)。
[0013] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用75%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0014] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0015]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制备抗炎止咳的药物中的应用。
[0017] 上述富马酸比索洛尔的药物组合物在制备抗炎止咳的药物中的应用。
[0018] 本发明的优点：
[0019] 本发明提供的富马酸比索洛尔的药物组合物中含有富马酸比索洛尔和一种从干 燥的枇杷叶中分离得到的结构新颖的天然产物，富马酸比索洛尔和该天然产物单独作用 时，具有抗炎止咳作用;二者联合作用时，抗炎止咳效果更好，可以开发成抗炎止咳的药物。 本发明与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021 ]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023]分离方法：（a)将干燥的枇杷叶（2kg)粉碎，用75 %乙醇热回流提取(20L X 3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯(4L X 3次)和水饱和的正 丁醇（4LX 3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中正丁醇萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇 洗脱10个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙 醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (8个柱体积）、30:1 (8个柱体积）、15:1 (8个柱体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组 分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1(8个柱体积）、15:1(10个柱体积)和2:1(5 个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为72 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗 脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (259mg，HPLC归一化纯度大于98% )。
[0024] 结构确证:册431-]\^显示[]\?1]+为111/2 405.2027，结合核磁特征可得分子式为 C26H28〇5，不饱和度为 13。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρπι，CD30D，500MHz): H-6 (6.62，s)，H-7 (7.95，d，J=15.4Hz)，H-8(6.84，d，J=15.4Hz)，H-10(7.52，d，J = 7.1Hz)，H-ll(7.33，t，J = 7.3Hz)，H-12(7.24，t，J = 7.3Hz)，H-13(7.33，t，J = 7.3Hz)，H-14(7.52，d，J = 7.1Hz)，H-Γ (3.18，d，J = 9.8Hz)，H-2'（2.62，dd，J = 9.8,7.6Hz)，H-4'（1.42，s)，H-5'（1.67， overlap)，H_5'(1·97，m)，H_6'(1.68，overlap)，H_6'(1·70，overlap)，H_7 '(2.45，m)，H_9' (1 · 42，s)，H-10 '（0 · 83，s)，3-0Me(3 · 85，s);核磁共振碳谱数据(ppm，CD30D，125MHz): 141.6(C3-C)，103.7(C，2-C)，160.4(C，3-C)，112.1(C，4-C)，158.4(C，5-C)，109.3(CH，6-C)，131.2(CH，7-C)，130.4(CH，8-C)，139.3(C，9-C)，127.4(CH，10-C)，129.5(CH，n-C)， 128.2(CH，12-C)，129.5(CH，13-C)，127.4(CH，14-C)，175.3(C，15-C)，37.3(CH，1，-C)，38.2 (CH，2'-C)，85.6(C，3'-C)，27.2(CH 3,4'-C)，39.5(CH2,5'-C)，26.3(CH2,6'-C)，47.5(C，7'-C)，39.8(C，8'-C)，33.6(CH3,9'-C)，17.8(CH 3，10'-C)，63.1(CH3,3-0Me)。红外波谱表明该 化合物含有羰基（1748cm-芳香环（1618cm- 1,1557m-1,1445cm-1)基团。13C-匪R、DEPT 和 HSQC谱中显示有26个碳信号，包括四个甲基(一个甲氧基），两个亚甲基，十一个次甲基（二 个烯烃碳，六个芳烃碳），以及九个季碳(六个芳烃碳，一个烯烃碳，两个羰基）；以上功能结 构再结合不饱和数表明该化合物为五环结构。 1H-NMR谱存在一组无取代苯环质子信号δΗ 7.52(2!1，(1，1 = 7.1抱）、7.33(2!1，^ = 7.3抱）与7.24(1!1，^ = 7.3抱）与一组反式烯烃质 子信号知7.95(1!1，(1，1=15.4泡）与6.84(1!1，(1，1=15.4泡）暗示结构中有反式二苯乙烯片 段，三个次甲基质子信号知 3.18(lH，d，J = 9.8Hz)，2.62(lH，d，J = 9.8,7.6Hz)&2.45(lH， m)，两个亚甲基质子信号1 ·67(lH，overlap)与 1.97(lH，m)以及δΗ 1.68(lH，overlap)与 1.70(1!1，(^64&口），三个甲基质子信号5[11.42(3!1，8)，1.42(3!1，8)与0.83(3!1，8)，一个甲 氧基质子信号δ Η 3.85(3H，s)。由13C_NMR谱中C-3与C-5的化学位移δ。-3160.9与5。- 5158.6可 知C-3、C-5皆为连氧碳，另HMBC谱中，甲氧基质子与C-3的相关信号表明了C-3位连有甲氧 基，而Η-Γ、H-2 '、H3-4 '、H2-5 '与C-3 '存在相关信号，C-3 '的化学位移为δ。-3,80.7提示C-3 ' 也为连氧碳。HMBC谱中Η3-9'和Η3-10'与C-l'、C-7'和C-8'的相关信号以及 1H-1!! COSY谱中 Η-Γ与H-2 '以及H-2 '与H-7 '相关信号暗示化合物含有二甲基环丁烷结构，而Η-Γ与C-4相 关信号确认了二甲基环丁烷与反式二苯乙烯通过C-4-C-1'键相连。另HMBC谱中存在Η-Γ与 C-4、C-2 '和C-3 '，H3-4 '与C-2 '和C-3 '相关信号以及COSY谱中Η-Γ与H-2 '相关信号， 结合C-5，C-3 '皆为连氧碳可以推测C-Γ -C-2 ' -C-3 '链与反式二苯乙烯单元中的苯环C-4， C-5位分别通过碳-碳直接相连和碳-氧-碳相连环化为苯并吡喃结构。此外，1H-1!! COSY谱中 H2-57H2-6'/H-7'/H-2'相关信号，及HMBC谱中H-2' 与C-3'和C-7'，H2-5' 与(：-2'、(：-3'、(：-4 '、C-6 '和C-7 '相关信号可知C-2 ' -C-3 ' -C-5 ' -C-6 ' -C-7 '形成一个环戊烷结构单元。HMBC 谱中还确证了H-6与C-7以及H-8与C-1的相关信号，从而可知与反式二苯乙烯单元连接方 式。HMBC谱中H-6与C-2和C-15的相关信号则确知了结构中羧基与C-2相连。综合氢谱、碳谱、 HMBC谱和R0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下式所示，立 体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号 如下：
[0026] 实施例2:药理作用 [0027] 1、材料与方法
[0028] 1.1药物和试剂
[0029] 富马酸比索洛尔购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施 例1。冰醋酸，广西南宁化学试剂厂生产;二甲苯，中国医药集团上海化学试剂公司生产;伊 文思兰，上海化学试剂采购供应站分装厂生产。阿司匹林片（l〇〇mg/片），拜尔制药公司生 产;桂龙咳喘宁胶囊，山西桂龙医药有限公司生产;橘红冲剂，南昌康正德制药有限公司生 产。
[0030] 1.2实验动物
[0031]昆明种小白鼠90只，体质量（20±2)g，雌雄各半;Wistar大鼠60只，体质量（200± 20) g，雌雄各半，均由湖北省实验动物中心提供。
[0032] 1.3 器材
[0033] 1.80-2型离心机，上海手术器械厂生产；721型分光光度计，上海第三分析仪器厂 生产;AEU-210型电子天平，日本岛津生产。
[0034] 1.4抗炎实验
[0035] 1.4.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的影响
[0036] 取小鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别为：生理盐水组，阿司匹林组（300mg/ kg)，富马酸比索洛尔组(80mg/kg)、化合物（I)组(80mg/kg)、富马酸比索洛尔与化合物（I) 组合物组【40mg/kg富马酸比索洛尔+40mg/kg化合物（I)】各组按相应剂量给药，生理盐水组 灌服等量生理盐水。各组均灌胃给药，每天1次，连续5d。末次给药lh后，各组小鼠右耳涂以 二甲苯0.05ml/只，左耳不涂作自身空白对照。涂抹二甲苯30min后，将小鼠颈椎脱位处死， 用内径6mm的打孔器打下左、右双耳相同部位的圆片，分别称质量，以右耳质量与左耳质量 差为肿胀度，比较各组的肿胀度。
[0037] 1.4.2对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的作用
[0038] 取小鼠50只，分组及给药同1.4.1。各组给予药物每天1次，连续3d。末次给药lh后， 小鼠尾静脉注射0.5%伊文思兰的生理盐水0.1ml/10g后，立即于小鼠腹腔注射0.6%醋酸 0.2ml/只，20min后，断头放血处死小鼠，用5ml生理盐水冲洗腹腔3次，收集洗涤液，离心 (1000rpm)5min，在721型分光光度计590nm处测定吸收度(0D值）。
[0039] 1.5止咳实验
[0040] 1.5.1对S02致咳小鼠的影响
[0041 ] 取小鼠50只，随机分为5组，每组10只，即生理盐水组、富马酸比索洛尔组（80mg/ kg)、化合物（I)组(80mg/kg)、富马酸比索洛尔与化合物（I)组合物组【40mg/kg富马酸比索 洛尔+40mg/kg化合物（I)】、桂龙咳喘宁组(5g/kg)。各组按相应剂量给药，生理盐水组灌服 等量生理盐水，每天1次，共7d。末次给药后lh，将小鼠放入500ml的广口瓶中，通入S0 26ml引 咳，以小鼠出现明显的张口喘息为咳嗽指标，观察并记录小鼠放入瓶中到咳嗽发生的潜伏 期和3min内咳嗽次数。
[0042] 1.5.2对大鼠排痰量的影响
[0043] 取Wistar大鼠50只，随机分为5组，每组10只，即生理盐水组、富马酸比索洛尔组 (80mg/kg)、化合物（I)组(80mg/kg)、富马酸比索洛尔与化合物（I)组合物组【40mg/kg富马 酸比索洛尔+40mg/kg化合物（I)】、橘红冲剂组(5g/kg)。各组按相应剂量给药，生理盐水组 灌服等量生理盐水，每天1次，共7d。实验前禁食不禁水12h，末次给药30min后，用戊巴比妥 钠30mg/kg麻醉，仰卧位固定，剪开颈正中皮肤，分离气管，在甲状软骨下缘正中两软骨环之 中，用注射针头扎一小孔，然后插入直径0.5ml的已知质量(G1)的毛细管一根，长10cm。使毛 细玻管刚好接触气管部表面，以吸取气管中的痰液，若一支玻管吸满，马上换一支玻管，收 集大鼠60min的排痰量，然后用电子称称量收集有痰液的玻管的重量(G2)，G2_G1即为大鼠 60min的排痰量，计算60min/100g的引流mg数作为祛痰指标。
[0044] 1.6统计学方法
[0045] 应用SPSS11.5软件包进行数据处理。计量资料以x±s表示，组间比较采用t检验。P 〈0.05为差异有统计学意义。
[0046] 2、实验结果
[0047] 2.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀及对醋酸致小鼠腹腔毛细血管渗透性增加的作用 的影响
[0048]与生理盐水组比较，富马酸比索洛尔与化合物（I)组合物组和阿司匹林组的肿胀 度和0D值均明显降低，差异有统计学意义(P〈0.01)，富马酸比索洛尔组、化合物（I)组也可 显著降低肿胀度和0D值(P〈0.05)，说明富马酸比索洛尔与化合物（I)组合物的消炎作用较 明显，且能显著降低0D值，较明显抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管渗透性增加。
[0049] 试验结果见表1。
[0050] 表1抗炎试验结果(X土s，n = 10)
[0052] 2.3对小鼠 S02致咳的止咳作用
[0053]与生理盐水组比较，富马酸比索洛尔与化合物（I)组合物组和桂龙咳喘宁组均能 减少小鼠 S〇2致咳的咳嗽次数，延长咳嗽潜伏期，差异有统计学意义(P〈0.01)，富马酸比索 洛尔组、化合物(I)组也能减少咳嗽次数，延长咳嗽潜伏期(P〈〇. 05)。
[0054] 试验结果见表2。
[0055] 表2对小鼠 S02致咳的止咳作用(X土s，n=10)
[0057] 2.4对大鼠排痰量的影响
[0058]富马酸比索洛尔组、化合物（1)组和橘红冲剂组6〇1^11/10(^引流的11^数为3.21± 0.57、3.25±0.37和3.28±0.42均高于生理盐水组（2.24±0.43)，差异有统计学意义（卩〈 〇. 05)，富马酸比索洛尔与化合物（I)组合物组为3.54± 0.68,显著高于生理盐水组（P〈 0·01)〇
[0059] 综上所述，本发明提供的富马酸比索洛尔与化合物（I)组合物具有明显的抗炎止 咳作用，且优于富马酸比索洛尔或化合物(I)单独的抗炎止咳作用。
[0060] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种富马酸比索洛尔的药物组合物，其特征在于:包括富马酸比索洛尔、如权利要求 1所述的化合物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的富马酸比索洛尔的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受 的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸 附载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的富马酸比索洛尔的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片 剂、胶囊剂、□服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将干 燥的枇杷叶粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、 乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物；（b)步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用70% 乙醇洗脱10个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中 70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 25:1、15:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基 硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为72 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用75%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为DlOl型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备抗炎止咳的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的富马酸比索洛尔的药物组合物在制备抗炎止咳的药物中 的应用。
【文档编号】A61K31/138GK105884741SQ201610263999
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月23日
【发明人】徐挺
【申请人】徐挺