一种格列本脲的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种格列本脲的药物组合物及其医药用途，本发明提供的格列本脲的药物组合物中含有格列本脲和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，格列本脲、化合物(Ⅰ)单独作用时，具有抗炎镇痛作用；格列本脲和化合物(Ⅰ)联合作用时，抗炎镇痛效果进一步提高，可以开发成抗炎镇痛药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种格列本脲的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及格列本脲的新用途，具体涉及一种格列本脲的药 物组合物及其医药用途。
【背景技术】
[0002] 格列本脲通过增加门静脉胰岛素水平或对肝脏直接作用，抑制肝糖原分解和糖原 异生作用，肝生成和输出葡萄糖减少；口服吸收快，蛋白结合率很高，为95%，口服后2~5小 时血药浓度达峰值，持续作用24小时。T1/2为10小时。在肝内代谢，由肝和肾排出各约50%。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种格列本脲的药物组合物，该药物组合物中含有格列本 脲和一种结构新颖的天然产物，格列本脲和该天然产物可以协同抗炎镇痛。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0007] -种格列本脲的药物组合物，包括格列本脲、如权利要求1所述的化合物（I)和药 学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0008] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将地骨皮粉碎，用70~90%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇取物用 大孔树脂除杂，先用20 %乙醇洗脱12个柱体积，再用80 %乙醇洗脱15个柱体积，收集80 %洗 脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中80%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为80 :1、40:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得至1」4个组分；（(1)步 骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1和15:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积 百分浓度为65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~17个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得 到化合物(I)。
[0011]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用80%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012]进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0013]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备抗炎镇痛的药物中的应用。
[0015] 上述格列本脲的药物组合物在制备抗炎镇痛的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点：
[0017] 本发明提供的格列本脲的药物组合物中含有格列本脲和一种结构新颖的天然产 物，格列本脲和该天然产物单独作用时，具有抗炎镇痛作用；二者联合作用时，抗炎镇痛作 用进一步提高，可以开发成抗炎镇痛的药物。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020]分离方法：（a)将地骨皮(2kg)粉碎，用80%乙醇热回流提取（15LX 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水饱和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用20 %乙醇洗脱12个柱体积，再用80 %乙醇洗 脱15个柱体积，收集80%洗脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中80%乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (10个柱体积）、40:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积)和10:1(9个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组 分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1(7个柱体积）、20:1(8个柱体积)和15:1(7 个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~17个柱体积 洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (HPLC归一化纯度大于98% )。
[0021] 结构确证:册431-]\^显示[]\?^]+为111/2 257.1528，结合核磁特征可得分子式为 〇15出202，不饱和度为5。核磁共振氢谱数据5(1( ??111，0130-(16,50(^取）：!1-1(2.15，111)，!1-2 (6.24，m)，H-3(6.23，m)，H-4(2.31，m)，H-5(1.49，m)，H-6(0.34，t，J=9.4)，H-7(0.76，q，J = 9.4)，H-8(1.75，m，2H)，H-9(2.27，dd，J = 6.5,6.0)，H-12(1.08，s)，H-13(3.37，d，J = 10.9)，H-13(3.24，d，J=10.9)，H-14(1.23，s)，H-15(0.89，d，J = 6.8);核磁共振碳谱数据 Sc(ppm，DMS0-d6，125MHz):60.8(CH，l-C)，133.5(CH，2-C)，133.6(CH，3-C)，44.7(CH，4-C)， 32.3(CH，5-C)，19.3(CH，6-C)，20.4(CH，7-C)，29.1(CH2,8-C)，62.4(CH，9-C)，62.7(C，10-C)，25.8(C，n-C)，11.5(CH 3，12-C)，73.3(CH2，13-C)，27.6(CH3，14-C)，16.1(CH3，15-C)。 13C-匪R谱显示了 15个碳信号，包括三个甲基，两个亚甲基（一个含氧亚甲基），八个次甲基 (两个烯属次甲基，一个含氧次甲基）以及两个季碳(一个含氧季碳）。两个烯属质子信号S H6.24(m，H-2)和6.23(m，H-3)表明C-2和C-3之间为双键。两个高场次甲基质子信号δΗ0.34 (t，J = 9.4Hz，Η-6)和0.76 (q，J = 9.4Hz，Η-7)表明该化合物含有一个环丙烷基。通过核磁数 据可知高场季碳C-l 1位连有一个羟甲基;HMBC谱中羟甲基质子信号（δΗ3.37和3.24)与C-6 0(：19.3)、(：-70〇2〇.4)和(：-110〇25.8)的相关性验证了上述推论。此外，甲基质子信号]^-12(δΗ1.08)与环丙烷次甲基C-6和C-7以及C-13(SC73.3)的相关性表明C-11位还连有一个 甲基。两个含氧碳信号（SC62.4和62.7)表明该化合物含有一个9,10-环氧基团；HMBC谱中 Me-14与C-10和C-9，H-9与C-10的相关性验证了上述推论。NOESY谱中，H-6与Me-14,以及H-7 与Me-14的相关性表明H-6，H-7和Me-14为β构型。这些数据同时反应了 H-1和H-5为相反的立 体构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定 该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合 物化学式及碳原子编号如下：
〇
[0023] 实施例2:药理作用 [0024] 1、材料与方法
[0025] 1.1动物
[0026]昆明种小白鼠，雌雄各半(个别实验用雄性），体质量(20±2)g;WiStar大鼠，雄性， 体质量(200 ± 20) g，均由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。
[0027] 1.2试剂与样品
[0028] 格列本脲购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。阿 司匹林肠溶片(河南新汇制药有限公司产品）；二甲苯、冰醋酸等化学试剂均为分析纯，鸡蛋 清溶液为新鲜配制。
[0029] 1.3仪器
[0030] 自制足趾肿胀测定仪
[0031] 1.4二甲苯所致小鼠耳肿胀实验
[0032]取小鼠50只，雄性，按体质量随机分为5组，每组10只，各组分别为空白对照组、阳 性对照组(阿司匹林，500mg · kg-4和格列本脲组(80mg · kg-4、化合物（I)组(80mg · kg-4、 格列本脲与化合物（I)组合物组【40mg · kg^1格列本脲+40mg · kg^1化合物（I)】。空白对照组 灌服等量生理盐水，其余按照药物给药，灌胃给药连续3天。末次给药30min后，立即在小鼠 左耳前后两面涂抹二甲苯〇.〇5mL，lh后将小鼠脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下左右两耳片，用 6mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称两耳重量，计算耳肿胀度。
[0033] 1.5蛋清所致大鼠足肿胀实验
[0034]取大鼠 50只，雄性，按体质量随机分成5组(分组同1.4)，每组10只。实验前在各鼠 右后足踝关节处作标记，用容积测定法测定各鼠右后足容积两次，取平均值作为正常足容 积。空白对照组灌服等量生理盐水，其余按照药物给药，连续3天，末次给药30min后每只大 鼠右后足跖部皮下注射10%新鲜鸡蛋清生理盐水溶液O.lmL致炎，于致炎后2.Oh测定大鼠 足容积，连续2次，平均值为测定值，计算各鼠致炎前后右后足跖容积变化值、肿胀率及抑制 率。
[0035] 1.6醋酸所致小鼠扭体反应实验
[0036]取小鼠 50只，雌雄各半，按体质量随机分为5组(分组及给药量同1.4)，每组10只， 各组连续3天灌胃给药，末次给药30min后腹腔注射0.3%HAc溶液0. lmL/10g，观察注射后 15min内小鼠出现扭体的次数。
[0037] 1.7统计学方法
[0038]以均数土标准差（I 土s)表示，数据处理用SPSS13.0统计软件进行成组设计t检 验。
[0039] 2、实验结果
[0040] 2.1对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
[0041]肿胀程度=每鼠左耳片质量一右耳片质量
[0042]与空白对照组比，阳性对照组小鼠耳肿胀程度显著降低(P<0.01);与空白对照组 比，格列本脲组、化合物（I)组小鼠耳肿胀程度降低(P<〇.05);与空白对照组比，格列本脲 组和化合物（I)组合物组小鼠耳肿胀程度显著降低(P<〇. 01)。结果见表1。
[0043] 2.2对蛋清所致大鼠足肿胀的影响
[0044] 肿胀率=(致炎后足跖容积一致炎前足跖容积)/致炎前足跖容积X 100% ;
[0045] 抑制率=(空白对照组肿胀率一给药组肿胀率)/空白对照组肿胀率X 100%。
[0046]与空白对照组比，阳性对照组大鼠足肿胀度显著降低（P<0.01);与空白对照组 比，格列本脲组、化合物（I)组大鼠足肿胀度降低(P<〇.05);与空白对照组比，格列本脲组 和化合物（I)组合物组大鼠足肿胀度显著降低(p<0.01)。结果见表1。
[0047] 2.3对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
[0048]与空白对照组比，阳性对照组小鼠扭体次数显著降低（P<0.01);与空白对照组 比，格列本脲组、化合物（I)组小鼠扭体次数降低(P<〇.05);与空白对照组比，格列本脲组 和化合物（I)组合物组小鼠扭体次数显著降低(p<0.01)。结果见表1。
[0049]表1对小鼠耳肿胀、大鼠足肿胀、小鼠扭体反应的影响
[0050]
[0051] 上述结果表明，格列本脲、化合物（I)单独作用时，具有抗炎镇痛作用;格列本脲和 化合物(I)联合作用时，抗炎镇痛效果进一步提高，可以开发成抗炎镇痛药物。
[0052] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的仆,合物α) ·2. -种格列本脲的药物纽_甘物，兵狩世仕t:迅估份列I脲、卯仪利要求1所述的化合 物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的格列本脲的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载体 包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体 或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的格列本脲的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、胶 囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、 栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将地 骨皮粉碎，用70~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱12个柱体积，再用80%乙醇洗脱 15个柱体积，收集80%洗脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中80%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、40:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1 和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合 的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~17个柱体积洗 脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用80%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为DlOl型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备抗炎镇痛的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的格列本脲的药物组合物在制备抗炎镇痛的药物中的应 用。
【文档编号】A61K31/64GK105884716SQ201610335081
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年5月19日
【发明人】王昌荣
【申请人】王昌荣