一种从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，本发明通过大量实验筛选出最佳的乙醚提取工艺、氢氧化钠水解工艺、丙酮去杂工艺和硅胶柱层析和C18柱柱层析去杂工艺。本发明以废弃银杏叶药渣为原料，变废为宝，整个工艺设计合理，可操作性强，制备得到的聚戊烯醇纯度可达95％以上，可实现工业化生产，具有重要的应用价值，可解决现有技术工艺方案制备得到的聚戊烯醇纯度低，应用价值低等不足。
【专利说明】
一种从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种化合物的制备方法，具体涉及一种从银杏内酯注射液的银杏叶药 渣中提取精制聚戊烯醇的方法。
【背景技术】
[0002] 银杏叶聚戊烯醇是由14~24(以17~19为主)个异戊烯基单元构成的桦木萜醇类 聚戊烯醇，它与人体及哺乳动物脏器中所含的多萜醇结构接近，并可在人体中代谢成多萜 醇磷酸酯，作为糖蛋白生物合成的载体。对银杏叶聚戊烯醇的含量分析表明，无论绿叶还是 黄叶，其含量都比较高，可高达1.0%~1.5%，有的甚至达到1.96%。
[0003] 在银杏内酯注射液生产制造过程中产生大量的固体废弃物，这些废弃物中含非内 酯多类型资源性化学物质，其中含有丰富的聚戊烯醇类、黄酮类资源性化学物质。传统的药 渣处理方式，对药渣进行填埋、焚烧等，造成了大量的资源浪费又给环境造成了污染。因此 亟需建立方法对银杏叶药渣进行综合系统的利用，以提升资源利用价值和利用效率。
[0004] 近20年来，关于银杏聚戊烯醇的国内专利较少，集中在聚戊烯醇的提取精制方法 保护。在产品开发上，以药品为主，包括胶囊剂、凝胶剂、注射剂等剂型，涉及肝损伤保护、抗 氧化、抗病毒、抑菌、预防和/或治疗阿尔茨海默病、抗肿瘤、调节免疫等活性。聚戊烯醇合成 或半合成产物多萜醇及其酯具有促进人体造血功能、抑菌等活性。
[0005] 传统的方法获得的聚戊烯醇纯度较低，利用价值不高。
【发明内容】
[0006] 发明目的:本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种工艺设计合理，可操作 性强，以银杏叶药渣为原料，变废为宝的高纯度聚戊烯醇的制备方法，该方法制备得到的聚 戊烯醇纯度可达95 %以上，回收率85 %以上，利用价值高。
[0007] 技术方案:为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
[0008] -种从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，包括如下步骤：
[0009] (1)以银杏叶药渣为原料，经粉碎过筛后，加入石油醚，浸置0~2小时，20~60 °C条 件下，回流提取1~3次，每次0.5~2.5小时，过滤，取滤液，浓缩，得石油醚提取物；
[0010] (2)取步骤(1)石油醚提取物，加入氢氧化钠甲醇溶液，超声10~60分钟，然后加入 石油醚萃取1~3次，合并萃取液，浓缩至干，得干燥物；
[0011] (3)取步骤(2)制备得到的干燥物，加入丙酮，超声溶解后，置于0-4°C静置2~4小 时，过滤，取滤液，浓缩至干，得聚戊烯醇粗品；
[0012] (4)取步骤(3)制备得到的聚戊烯醇粗品，上硅胶柱，以石油醚和乙酸乙酯混合溶 液洗脱，合并含有聚戊烯醇的洗脱液，浓缩至干，得含聚戊烯醇的洗脱物；
[0013] 洗脱物上C18柱，以甲醇和异丙醇混合溶液洗脱，经高效液相检测，合并含有聚戊烯 醇洗脱液，浓缩至干，得精制聚戊烯醇。
[0014] 作为优选方案，以上所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，步骤（1)银 杏叶药渣和石油醚的重量体积比为1:10~1:50。
[0015] 作为优选方案，以上所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，步骤（1) 中，取银杏叶药渣粉碎过三号筛（50目），银杏叶药渣和石油醚的重量体积比为1: 30,预浸 0.511，在40°(：回流提取111。
[0016] 作为优选方案，以上所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，步骤（2) 中，石油醚提取物与氢氧化钠甲醇溶液的体积为1:1，氢氧化钠甲醇溶液的质量浓度为1~ 8%，超声20~40分钟，超声频率100ΚΗz，然后加入石油醚萃取2次，合并萃取液。
[0017] 作为优选方案，以上所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，步骤（2) 中，氢氧化钠甲醇溶液的质量浓度为2%，超声20分钟;所述的氢氧化钠甲醇溶液中甲醇与 水的体积比为1:4。
[0018] 作为优选方案，以上所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，步骤（3) 中，干燥物的重量与丙酮的体积比为1:5~1:10,超声溶解后置于4°C条件下静置4小时。
[0019] 作为优选方案，以上所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，步骤(4) 中，石油醚和乙酸乙酯的体积比为19:1。
[0020] 作为优选方案，以上所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，步骤(4) 中，甲醇与异丙醇的体积比为25:75。
[0021] 作为优选方案，以上所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，精制聚戊 烯醇的纯度为95 %。
[0022] 本发明所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，所述的银杏叶药渣为银 杏内酯注射液生产过程中，银杏叶水煎煮1~3次后产生的银杏叶药渣，加水量为银杏叶重 量的6~15倍体积;或者也可以为其它以银杏叶为原料提取后的银杏叶药渣，如采用乙醇回 流或连续回流提取银杏叶中黄酮后剩下的药渣。
[0023] 本发明在提取优化中，以药渣原料过筛、溶剂、预浸时间、提取时间、提取温度、料 液比、提取次数为考察因素，通过单因素试验筛选结果表明，药渣颗粒大小对聚戊烯醇含量 的影响极为显著，预浸时间对聚戊烯醇的含量影响显著。
[0024] 本发明为了考察最佳的提取工艺，以银杏叶提取物中聚戊烯醇的含量为指标，采 用正交实验设计对步骤（1)的提取，进行4因素(银杏叶药渣颗粒粒径，预浸时间，提取温度， 提取时间）3水平的优化;确定最优条件如下：银杏叶药渣过三号筛，预浸时间0.5h，提取温 度为40°C，提取时间为lh。在此工艺条件下进行3次平行实验，得到聚戊烯醇的含量为 4.17%，大于正交试验中的任何一项，验证了所建模型的正确性。
[0025] 本发明在水解优化中，以氢氧化钠溶液浓度、醇的筛选、醇水比、超声时间、超声频 率为考察因素，通过单因素试验发现醇水比对聚戊烯醇的含量影响显著。采用正交实验设 计对步骤(2)的水解，进行3因素(超声时间，醇水比，碱浓度)3水平的优化，并进行验证，确 定最优条件如下:超声20min，甲醇:水体积比为1:4，氢氧化钠浓度为2%。在此工艺条件下 进行3次平行实验，得到聚戊烯醇的含量为4.18%，大于正交试验中的任何一项，验证了所 建模型的正确性。
[0026] 为了进一步提高聚戊烯醇的纯度，本发明上硅胶柱层析，以优选体积比的石油醚 和乙酸乙酯混合溶液进行洗脱，合并含有聚戊烯醇的洗脱液，浓缩至干，得含聚戊烯醇的洗 脱物;再通过大量实验筛选，上C 18柱进行柱层析，操作简单，工艺收率高，可重复利用，获得 的聚戊烯醇纯度大，生产批量大，适合工业生产。本发明采用C18柱，可有效除去极性相似且 丙酮除不了的物质，大大的增加了聚戊烯醇的纯度，可制备得到纯度为95%以上的聚戊烯 醇。
[0027] 有益效果:本发明提供的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，以废弃银杏 叶药渣为原料，变废为宝，整个工艺设计合理，可操作性强，可实现工业化生产。本发明通过 大量实验筛选出最佳的乙醚提取工艺，氢氧化钠水解工艺，丙酮去杂工艺，尤其是硅胶柱层 析和C 18柱柱层析去杂工艺，制备得到的聚戊烯醇纯度可达95%以上，具有重要的应用价值， 可解决现有技术工艺方案制备得到的聚戊烯醇纯度底，应用价值低的不足。
【附图说明】
[0028] 图1为本发明制备得到的聚戊烯醇的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0029]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以下实施例是对本发明的解释，本 发明不局限于以下实施例。
[0030] 实施例1聚戊烯醇提取单因素的优选
[0031] 将银杏内酯注射液生产过程，银杏叶水煎煮3次，每次2小时后产生的银杏叶药渣 分成六份，一份不粉碎其余分别粉碎过1、2、3、4、5号筛(药典标准），分别加入银杏叶药渣原 料重量体积比为（1:10、1:20、1:30、1:40、1:50)的（正己烷、石油醚、乙酸乙酯），预浸(0、 0.5、1、1.5、21〇，在(20、30、40、50、60°(：)条件下提取(0.5、1、1.5、2、2.511)，提取（1、2、3)次。 抽滤，吸取2mL提取液，加入2mL 4%的氢氧化钠甲醇水溶液，超声lh，溶液旋转浓缩至干，加 入2mL正己烷，进高效液相色谱仪，测定聚戊烯醇含量，优选出较佳因素水平。结果如表1所 示：
[0032] 表1聚戊烯醇提取的单因素优选的结果
[0033]
[0034]实施例2聚戊烯醇提取的正交优选试验
[0035] 以银杏叶药渣原料的颗粒大小、预浸时间、提取时间、提取温度为考察因素，通过 正交试验确定最优提取方案。
[0036] 表2聚戊烯醇提取工艺试验安排及结果 「00371
[0038] 表3聚戊烯醇提取方差分析结果
[0039]
[0040] 极差R结果表明，影响银杏叶药渣中聚戊烯醇的提取工艺程度依次为:D(颗粒大 小)>A(预浸时间）>C(提取温度)>B(提取时间）4、0(?〈0.05)两个因素对银杏叶药渣中聚戊 烯醇的提取工艺有明显的影响，因素 B、C均没有明显的差异，为了节约资源，经综合考虑，得 出最佳的提取工艺为，即银杏叶药渣原料过三号筛，预浸时间为0.5h，提取温度为 40°(：，提取时间为111。
[0041] 实施例3聚戊烯醇水解单因素的优选
[0042] 将银杏内酯注射液生产过程中产生的银杏叶药渣粉碎过3号筛，加入原料重量比 溶剂体积为1:30的石油醚，预浸0.5h，40 °C条件下提取lh，提取2次。抽滤，吸取2mL提取液， 分别加入2mL(质量浓度1 %、2 %、4%、6 %、8 % )的氢氧化钠（甲醇、乙醇）水(醇水体积比为 1:4、2:3、3:2、4:1、0:1)溶液，超声（10、20、30、40、50、60min)、超声频率为（60、70、80、90、 100ΚΗz)，溶液旋转浓缩至干，加入2mL正己烷，进高效液相色谱仪，优选出较佳因素水平。结 果如表4所示：
[0043] 表4聚戊烯醇水解单因素优选的实验结果
[0044]
[0045] 实施例4聚戊烯醇水解的正交优选试验
[0046] 以氢氧化钠溶液浓度、醇水比、超声时间为考察因素，通过正交试验确定最优的水 解方案。
[0047] 表5聚戊烯醇水解工艺试验安排及结果
[0050]极差R结果表明，影响银杏叶药渣中聚戊烯醇的水解工艺程度依次为:B(醇水比）> C(碱浓度)>A(超声时间），B(P〈0.05)对银杏叶药渣中聚戊烯醇的水解工艺有明显的影响， 因素 A、C均没有明显的差异，为了节约资源，经综合考虑，得出最佳的提取工艺为AiBsCi，即 超声20min，醇水比为1:4,氢氧化钠浓度为2% (w/w)。
[0051 ] 实施例5
[0052] -种从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，包括如下步骤：
[0053] (1)取银杏内酯注射液生产过程中，银杏叶水煎煮3次，每次2小时后产生的银杏叶 药渣，干燥、粉碎过3号筛，称取lOOg原料，加入原料重量体积比为1:30的石油醚，预浸0.5h， 40 °C条件下提取lh，提取2次，过滤，旋转浓缩至滤液浓度相当于原药材lg/mL。
[0054] (2)加入等体积浓度为2 %的氢氧化钠甲醇水溶液（甲醇:水体积比为1:4 )，超声时 间20min，超声频率100ΚΗz，然后用等体积石油醚萃取2次，旋转浓缩至干，得到不皂化物。
[0055] (3)按不皂化物重量与溶剂的体积比例为1:10加入丙酮，超声溶解后，置于4°C条 件下静置4小时，过滤，滤液旋转浓缩至干得到聚戊烯醇粗提物。
[0056] (4)按聚戊烯醇粗提物重量与硅胶重量1:1加入硅胶，加入少量石油醚拌样，按拌 样硅胶重量与装柱硅胶重量为1:20装柱。经薄层点板确定以石油醚体积与乙酸乙酯体积为 19:1冲柱，经高效液相色谱仪鉴定，将聚戊烯醇洗脱液合并，旋转浓缩至干;然后按洗脱物 重量与C 18重量1:1加入C18,以少量异丙醇拌样。按拌样C18重量与装柱C18重量为1:20装柱。经 高效液相色谱仪确定以甲醇体积与异丙醇体积为25:75冲柱，经高效液相色谱仪鉴定(如图 1所示），将聚戊烯醇合并，旋转浓缩至干，得到纯度为95.38 %的聚戊烯醇。
[0057] 实施例6
[0058] 一种从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，包括如下步骤：
[0059] (1)取银杏内酯注射液生产过程中，银杏叶水煎煮3次，每次2小时后产生的银杏叶 药渣，干燥、粉碎过3号筛，称取100g原料，加入原料重量体积比为1:30的石油醚，预浸lh，40 °C条件下提取2h，提取3次，过滤，旋转浓缩至滤液浓度相当于原药材lg/mL。
[0060] (2)加入等体积浓度为4 %的氢氧化钠甲醇水溶液（甲醇:水体积比为1:4 )，超声时 间40min，等体积石油醚萃取2次，旋转浓缩至干，得到不皂化物。
[0061] (3)按不皂化物重量与溶剂的体积比例为1:5加入丙酮，超声溶解后，置于4°C条件 下静置4小时，过滤，滤液旋转浓缩至干得到聚戊烯醇粗提物。
[0062] (4)按聚戊烯醇粗提物重量与硅胶重量1:1加入硅胶，加入少量石油醚拌样，按拌 样硅胶重量与装柱硅胶重量为1:20装柱。经薄层点板确定以石油醚体积与乙酸乙酯体积为 19:1冲柱，经高效液相色谱仪鉴定，将聚戊烯醇洗脱液合并，旋转浓缩至干;然后按洗脱物 重量与C 18重量1:1加入C18,以少量异丙醇拌样。按拌样C18重量与装柱C18重量为1:20装柱。经 高效液相色谱仪确定以甲醇体积与异丙醇体积为25:75冲柱，经高效液相色谱仪鉴定(如图 1所示），将聚戊烯醇合并，旋转浓缩至干，得到纯度为95.02 %的聚戊烯醇。
[0063] 以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的 人了解本
【发明内容】
并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实 质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一种从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 以银杏叶药渣为原料，经粉碎过筛后，加入石油醚，浸置O~2小时，20~60 °C条件 下，回流提取1~3次，每次0.5~2.5小时，过滤，取滤液，浓缩，得石油醚提取物； (2) 取步骤（1)石油醚提取物，加入氢氧化钠甲醇溶液，超声10~60分钟，然后加入石油 醚萃取1~3次，合并萃取液，浓缩至干，得干燥物； (3) 取步骤(2)制备得到的干燥物，加入丙酮，超声溶解后，置于0-4°C静置2~4小时，过 滤，取滤液，浓缩至干，得聚戊烯醇粗品； (4) 取步骤(3)制备得到的聚戊烯醇粗品，上硅胶柱，以石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗 脱，合并含有聚戊烯醇的洗脱液，浓缩至干，得含聚戊烯醇的洗脱物； 洗脱物上C18柱，以甲醇和异丙醇混合溶液洗脱，经高效液相检测，合并含有聚戊烯醇洗 脱液，浓缩至干，得精制聚戊烯醇。2. 根据权利要求1所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，其特征在于，步骤 (1)银杏叶药渣和石油醚的重量体积比为1:10~1:50。3. 根据权利要求2所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，其特征在于，步骤 (1) 中，取银杏叶药渣粉碎过三号筛，银杏叶药渣和石油醚的重量体积比为1:30，预浸0.5h， 在40 °C回流提取Ih。4. 根据权利要求1所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，其特征在于，步骤 (2) 中，石油醚提取物与氢氧化钠甲醇溶液的体积为1:1，氢氧化钠甲醇溶液的质量浓度为1 ~8%，超声20~40分钟，超声频率IOOKHz，然后加入石油醚萃取2次，合并萃取液。5. 根据权利要求4所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，其特征在于，步骤 (2) 中，氢氧化钠甲醇溶液的质量浓度为2%，超声20分钟;所述的氢氧化钠甲醇溶液中甲醇 与水的体积比为1:4。6. 根据权利要求1所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，其特征在于，步骤 (3) 中，干燥物的重量与丙酮的体积比为1:5~1:10,超声溶解后置于4°C条件下静置4小时。7. 根据权利要求1所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，其特征在于，步骤 (4) 中，石油醚和乙酸乙酯的体积比为19:1。8. 根据权利要求1所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，其特征在于，步骤 (4)中，甲醇与异丙醇的体积比为25:75。9. 根据权利要求1所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，其特征在于，精制 聚戊烯醇的纯度为95 %。10. 根据权利要求1至9任一项所述的从银杏叶药渣中提取精制聚戊烯醇的方法，其特 征在于，所述的银杏叶药渣为银杏内酯注射液生产过程中产生的银杏叶药渣或银杏叶乙醇 提取黄酮后的药渣。
【文档编号】C07C29/76GK105884572SQ201610260228
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月25日
【发明人】刘培, 段金廒, 钱大玮, 江曙
【申请人】南京中医药大学