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【专利摘要】本发明涉及一种包含p75N?TR(NBP)部分和免疫球蛋白部分的p75NTR神经营养因子结合蛋白(NBP)?Fc融合蛋白。在某些实施方案中，p75NTR(NBP)?Fc融合蛋白用于治疗疼痛和/或疼痛症状。
【专利说明】融合蛋白
[000。发明背景
[0002]神经营养因子、神经营养生长因子(NGF)、脑衍生神经营养因子(m)NF)、神经营养 因子3(NT-3)和神经营养因子4/5(NT-4/5)通过4种受体：低亲和力p75神经营养受体 (P75NTR)和高亲和力酪氨酸激酶受体化kA、TrkB和化kC发挥作用。低亲和力受体P75NTR结 合并且被全部4种神经营养因子激活并且已经报道独立于其他受体发挥作用。但是，更选择 性地激活化k受体，即，NGF是化kA的选择性配体，抓NF是TrkB的配体，并且NT-3、NT-4/5是 化kC的配体。此外已经报道，当P75NTR蛋白和Trk蛋白共表达时，它们形成改变两种受体的 信号传导的复合物化Uang和Reichar化，2003，生物化学年评(Annu Rev Biochem.)72:609-42)。实际上，已经提出P75NTR促进每种神经营养因子对其相应Trk受体的选择性。
[0003 ] P75NTR是肿瘤坏死因子受体超家族(TNFR-SF)的成员并且是运个超家族中充分表 征的第一个成员。运个超家族(在人类中由大约30个基因编码）由配体结合结构域定义，所 述配体结合结构域由首先在P75NTR中鉴定的40氨基酸富含半脫氨酸结构域(CRD)的一个或 多个（一般4个）重复序列组成（Johnson等人，1986细胞（Cell )47:545-554 ;Radeke等人， 1987自然(化化re) 325:593-597)。与之相反，全部TNFR-SF家族成员的胞内结构域不共有序 列基序。因此，TNFR-SF蛋白的信号传导机制大幅度变动。
[0004] P75NTR结构的不寻常特征是存在借助跨膜结构域内部的半脫氨酷残基形成的二 硫键连接的P75NTR二聚体。运个二硫键是P75NTR进行有效神经营养因子依赖性信号传导所 需要的并且在胞内和胞外结构域的形成中发挥重要作用(Vilar等人，2009神经元(Neuron) 62:72-83)。神经营养因子在生理学上作为非共价缔合的二聚体存在(Bothwell和化OOter， 1977生物化学杂志(J Biol Chem. )252(23) :8532-6),分布半寿期为大致5分钟（Tria等人， 1994实验神经学化邱Neurol.) 127(2): 178-83)。神经营养因子依赖性P75NTR激活包含神 经营养因子二聚体与P75NTR二聚体的两个胞外结构域的C畑2-4缔合化e和Garcia,2004科 学(Science) 304:870-875)。最近的研究支持一种模型，其中神经营养因子结合造成P75NTR 二聚体的两个胞外结构域移动靠得更近，迫使胞内结构域W该二硫键为中屯、的蜗牛错样 (snail-tong-like)运动展开并允许胞内结构域与信号传导衔接蛋白NRIF和TRAF6缔合 (ViIar等人，2009细胞科学杂志（J Cell Sci )122:3351-3357 ,Vilar等人，2009神经元 (Neuron) 62:72-83)。W前尚未在其他TNFR-SF家族成员中或任何其他膜蛋白中描述跨膜结 构域内二硫键，如P75NTR中存在的那些。
[0005] p75NTRW类似于刻缺蛋白（Notch)和0-淀粉样前体蛋白（0-amyloid precursor protein)的切割赖性信号传导途径的方式依次接受a-分泌酶活性和丫-分泌酶活性和基质 金属蛋白酶(MMP)的蛋白酶剪切，释放其胞内结构域(ICD)至细胞质中（Jung等人，2003生物 化学杂志（J Biol 化em)，278:42161-42169;Kanning等人，2003神经科学杂志（J Neuro-sci)23:5425-5436)Dp75NTR ICD通过运条途径的胞质释放促进相关NRIF的信号传导 化enchappa等人，2006神经元(Neuron)SO :219-232)。在a-分泌酶活性和丫-分泌酶活性和 MMP的蛋白酶剪切后，P75NTR胞外结构域的作用未得到充分理解。
[0006] 已经记录，NGF和其他神经营养因子(BDNF、NT-3和NT-4/5)在病理学例如因骨关节 炎、膜腺炎、类风湿性关节炎、银屑病、搔痒症和多发性硬化所致的疼痛中发挥重要作用 (Wannabe等人，2008神经研究杂志（J化urosci Res. )86(16) :3566-74);Raychau化Uri等 人，2011关节炎风湿病(Arthritis )63(11) :3243-52;Ba;rthel等人，2009关节炎研 究疗法（A;rth;ritis Res Hier. 11)(3) =RSSilYuzzi等人，2011 细胞死亡分化（Cell Death Differ. )18:948-58;McDonald等人，2011 当今药物化学（Curr Med 化em. )18:2:34-44; Yamaoka等人，2007皮肤病学科学杂志（J Dermatol Sci. )46(1) :41-51)。证实针对任何神 经营养因子;NGF或抓NF、NT-3和NT-4/5的选择性抗体显著地减少疼痛。另外，还已经证实针 对神经营养因子受体P75NTR化k A、化k B或Trk C的抗体在疼痛模型中有效(Orita S等 人，2010 整形外科研究杂志（J Orthop Res.)28:1614-20;Svensson P 等人，2010 疼痛 (化in. )148:473-80; Iwakura等人，2010手外科学美国卷（J 化nd Surg Am. )35:267-73; Cirilio等人，2010细胞分子神经生物学（Cell Mol Neurobiol. )30:51-62;Pezet等人， 2010疼痛（Pain. )90:113-25;化yashi等人，2011 疼痛杂志（J Pain. )12:1059-68;Chu等人， 2011 疼痛(Pain. )152:1832-7;Ueda等人，2010药学科学杂志（J Pharmacol Sci. )112:438-43;加 i Iardi 等人，2010 骨（Bone. )48:389-98 ; Fukui 等人，2010 整形外科研究杂志（J Odhop Res . )2010; 28: 279-83) dF址Ui等人(2010)在一个疼痛模型中（坐骨神经挤压后的 机械性异常疼痛）用抗P75NTR抗体治疗后显示疼痛相关性终点方面的显著功效。从运项研 究得出结论，用P75NTR抑制性抗体治疗减少CGRP和P75NTR表达，导致显著减少疼痛。
[0007]本发明设及一种P75NTR神经营养因子结合蛋白（NBP)-Fc融合蛋白。我们描述了运 种分子的亲和力和体内动力学，W及动物模型中治疗疼痛的有效性。p75NTR(NBP)-Fc融合 蛋白可用于治疗疼痛和其他神经营养因子相关性疾病，如银屑病、湿疹、类风湿性关节炎、 膀脫炎、子宫内膜异位症和骨关节炎。
[000引发明概述
[0009] 根据本发明的第一方面，提供一种P75NTR神经营养因子结合蛋白（NBP)-Fc融合蛋 白，所述融合蛋白包含：
[0010] (a)p75NTR(NBP)部分;和
[0011] (b)免疫球蛋白化部分。
[0012] 优选地，p75NTR(NBP)部分和化部分经接头连接。更优选地，接头包含式Gx的肤，其 中X是1、2、3、4、5或6。
[0013] 在根据本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的特别优选的实施方案中，P75NTR (NBP)是人p75NTR(NBP)。在根据本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的另一个特别优选的实 施方案中，Fc是人Fc。
[0014] 在又一个优选的实施方案中，本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白包含SEQ ID NO.3中所述的氨基酸序列或由SEQ ID NO.3中所述的氨基酸序列组成。在另一个优选的实 施方案中，本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白包含SEQIDN0.15中所述的氨基酸序列或由 SEQ ID NO. 15中所述的氨基酸序列组成。
[0015] 在一个优选实施方案中，根据本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白W通过表面等离 子体共振在20°C所测量的约O.OlnM至约50nM之间的结合亲和力化d)与NGF、BDNF、NT3或 NT4/5的任一者结合。
[0016] 在本发明的第二方面，根据本发明任何其他方面提供如所述那样的p75NTR(NBP)- Fe融合蛋白用于治疗疼痛或疼痛症状。
[0017] 在本发明的第S方面，提供编码根据本发明第一方面或第二方面的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的核酸分子，所述核酸分子任选地还包括编码信号序列。
[0018] 在本发明的第四方面，提供一种用于转染细胞、可选地转染哺乳动物细胞的复制 型表达载体，所述载体包含根据本发明的第=方面的核酸分子。
[0019] 优选地，该复制型表达载体是病毒载体。
[0020] 在本发明的第五方面，提供一种携带本发明的第=方面的核酸分子的宿主细胞。
[0021] 在本发明的第六方面，根据本发明第=方面的核酸分子或根据本发明第四方面的 载体用于治疗疼痛或疼痛症状。
[0022] 疼痛或疼痛症状包括但不限于:急性疼痛;慢性疼痛;炎性疼痛;伤害性疼痛;神经 病理性疼痛(neuropathic pain);痛觉过敏；异常性疼痛(allodynia);中枢性疼痛；癌疼 痛；术后疼痛；内脏疼痛;肌肉骨骼疼痛；屯、脏或血管疼痛；头部疼痛，包括偏头痛；口面疼 痛，包括牙疼痛和背痛。疼痛的治疗包括，但不限于，预防疼痛和/或疼痛症状、改善疼痛和/ 或疼痛症状、控制疼痛和/或疼痛症状、减少疼痛和/或疼痛症状的发生率，或延迟疼痛和/ 或疼痛症状形成或进展。
[0023] 在第屯方面，提供根据第一方面或第二方面的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白，或根据 第S方面或第四方面的核酸或载体，其中p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白或核酸分子或载体组合 中与第二药理活性化合物组合时分别、依次或同时使用。
[0024] 在第八方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含根据本发明任何 方面的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白或根据本发明任何方面的核酸分子或载体，和药学上可接 受的载体和/或赋形剂。
[0025] 优选地，药物组合物用于W下任一种或多种情况:预防疼痛和/或疼痛症状、改善 疼痛和/或疼痛症状、控制疼痛和/或疼痛症状、减少疼痛和/或疼痛症状的发生率或延迟疼 痛和/或疼痛症状形成或进展。
[00%]在本发明的又一个方面，提供一种试剂盒;其包含：
[0027] (a)根据本发明任何方面的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白或根据本发明任何方面的核 酸分子或载体，或根据第八方面的药物组合物;和
[0028] (b)用于针对W下任一种或多种情况向个体给药有效量的所述p75NTR(NBP)-Fc融 合蛋白、核酸分子、载体或药物组合物的说明书:预防或治疗疼痛和/或疼痛症状或用于缓 解疼痛和/或疼痛症状、控制疼痛和/或疼痛症状、减少疼痛和/或疼痛症状的发生率，或延 迟疼痛和/或疼痛症状形成或进展。
[0029] 在本发明的又一个方面，提供一种治疗和或预防个体中疼痛和/或疼痛症状的方 法，所述方法包括向所述个体给药治疗有效量根据本发明任何方面的p75NTR(NBP) -Fe融合 蛋白或根据本发明任何方面的核酸分子或载体，任选地进一步包括药学上可接受的载体， 或者根据本发明第八方面的药物组合物。
【附图说明】
[0030] 图1.根据本发明的P75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的氨基酸序列（SEQ ID N0.1)。。分泌 酶切割位点和丫分泌酶切割位点W粗体显示。IgGlFc部分W斜体显示。
[0031] 图2.图4中所述的核酸序列（SEQ ID NO.4)的翻译产物（SEQ ID NO.2)，从起始密 码子至终止密码子。
[0032] 图3.根据本发明的优选的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的氨基酸序列（SEQ ID NO. 3) JgGlFc部分W斜体显示。p75NTR(NBP)部分和Fc部分之间的接头序列加下划线显示。
[0033] 图4.从5'克隆位点至3'克隆位点的完整产物基因的核酸序列(SEQ ID NO.4)
[0034] 图5.p75-NTR(NBP)-Fc融合蛋白变体：l:p75_NTR-p75-NTR序列（SEQ ID N0.6);2: 市售p75-NTR-Fc融合蛋白（SEQ ID NO. 7); 3: p75_Fc-Fc序列相对于IgGlza的Lonza恒定区 被修饰的市售p75-NTR-Fc融合蛋白（SEQ ID N0.8);4:p75_Fc_C222S-Fc序列相对于IgGlza 的Lonza恒定区被修饰及位置222处额外半脫氨酸突变成丝氨酸的市售P75-NTR-FC融合蛋 白（沈Q ID ^.9);5:口75_。(3_64別-变体1，提出的具有4残基甘氨酸接头的口75-肿1?斗(3融合 蛋白（SEQ ID N0.10);6:p75_Fc_G4Sxl-变体2,所提出的具有单个四甘氨酸丝氨酸接头的 P75-NTR-FC融合蛋白（SEQ ID N0.11);7:p75_Fc_G4Sx2-变体3,提出具有两个四甘氨酸丝 氨酸接头的p75-NTR-Fc融合蛋白（SEQ ID N0.12);8:IgGlza的Lonza恒定区（SEQ ID NO.13)。
[0035] 在运个比对结果中，一种格式方案用来突出显示推定性受体、Fc-融合蛋白和Fc恒 定区之间具有相似性的区域:加框的类型用来显示变体蛋白和P75-NTR之间序列相同的区 域;单下划线用来显示全部化-融合蛋白和Lonza IgGlza化之间序列相同的区域;斜体用 来显示在P75-NTR和化恒定区交界处的接头区域;双下划线和粗体类型用来显示接头区域 外部序列不相同的位置，在等同于亲本P75-NTR Fc-融合蛋白中222的位置处。
[0036] 图6:p75NTR-Fc在MIA诱导的晒齿动物OA模型中显著减少疼痛。冲<0.1并且*冲< 0.05
[0037] 图7:根据本发明的优选的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的氨基酸序列（SEQ ID NO. 15) JgGlFc部分W斜体显示。p75NTR(NBP)部分和化部分之间的接头序列加下划线显 /J、- O
[003引发明详述
[0039] 根据本发明的第一方面，提供一种P75NTR神经营养因子结合蛋白（NBP)-Fc融合蛋 白，所述融合蛋白包含：
[0040] (a)p75NTR(NBP)部分;和
[0041 ] (b)免疫球蛋白化部分。
[0042] 优选地，p75NTR(NBP)部分和化部分经接头连接。更优选地，接头包含式Gx的肤，其 中X是1、2、3、4、5或6。
[0043] 在根据本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的特别优选的实施方案中，P75NTR (NBP)是人p75NTR(NBP)。在根据本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的另一个特别优选的实 施方案中，Fc是人Fc。
[0044] 在又一个优选的实施方案中，本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白包含SEQ ID NO.3中所述的氨基酸序列或由SEQ ID NO.3中所述的氨基酸序列组成。在另一个优选的实 施方案中，本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白包含SEQIDN0.15中所述的氨基酸序列或由 SEQ ID NO. 15中所述的氨基酸序列组成。
[0045] 优选地，P75NTR神经营养因子结合蛋白p75NTR(NBP)是聚乙二醇化的，进一步优选 地它是糖基化的。
[0046] 本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白优选地与NGF、抓NF、NT3或NT4/5的任一者或多 者W约0.OlnM至约50nM之间的结合亲和力化d)结合。在一些优选的实施方案中，结合亲和 力化d)在约 0.0111]\1和约0.111]\1、0.化]\1、0.511]\1、111]\1、1.511]\1、化]\1、2.511]\1、化]\1、3.511]\1、411]\1、 4.5nM、5nM、5.5nM、6nM、6.5nM、7nM、7.5nM、8nM、8.5nM、9nM、9.5nM、10nM、15nM、20nM、25nM、 30nM、35nM、40nM、45nM或50nM的任一者之间，如针对NGF、抓NF、NT3或NT4/5的体外结合测定 法中如本文所述那样测量，优选地通过表面等离子体共振在2(TC测量。在一些其他的优选 实施方案中，结合亲和力化d)是或小于约250pM、300pM、350pM、400pM、450pM、500pM、550pM、 600口]?、6509]\1、7009]\1、7509]\1、8009]\1、8509]\1、9509]\1或1碰的任一者，如采用神经营养因子在 p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的体外结合测定法中如本文所述那样测量，优选地通过表面等离 子体共振在20°C所测量。在又一个更优选的实施方案中，结合亲和力化d)是约0.3nM或约 InM,如采用神经营养因子在p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的体外结合测定法中如本文所述那 样测量，优选地通过表面等离子体共振在20°C所测量。
[0047] 优选地，本发明的p75NTR(NBP)-化融合蛋白用于治疗疼痛或疼痛症状的用途。不 希望受任何具体理论约束，发明人认为通过实现前述神经营养因子NGF、抓NF、NT3或NT4/5 的功能活性(定义为调节或者上调或下调神经营养因子的功能活性），例如，前述神经营养 因子因其与其相应受体相互作用而产生的功能活性，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白实现治疗疼 痛或疼痛症状的效力。
[004引优选地，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白实现抓NF的功能活性，如通过W下任一者的功 能测定法所评估:神经元和突触的生长和分化、神经元细胞培养中的存活和分化、Trk信号 传导、体外或体内刺激轴突增生。
[0049] 优选地，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白实现NGF的功能活性，如通过测量NGF与化kA结 合和TrkA激活所评估，如经典神经元存活测定法（如在Cowan等人，神经科学年鉴 (Annu.Rev.Neurosci . )2〇01 ;24:55I-GOO中提供）中所展示。
[0050] 优选地，p75NTR( NBP)-化融合蛋白实现NGF的功能活性，如通过测量NT3与内源性 Trk受体结合和内源性Trk受体活性激活所评估，如在化k受体憐酸化、促分裂原活化蛋白激 酶憐酸化报道分子测定法或细胞存活和神经突延展测定法中所展示。
[0051 ] 优选地，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白实现NT4/5的功能活性，如通过测量NT4/5体外 或体内憐酸化和激活测定法所评估，例如，在髓銷碱性蛋白(MBP)憐酸化测定法或可选地在 体内在血管内皮生长因子（VEGF)/碱性成纤维细胞生长因子诱导的血管发生 (angiogenesis)的基质胶血管发生测定法中所评估。
[0化2] 优选地，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白与神经营养因子NGF、NT3、抓NF和NT4/5中一者 或多者的接触残基结合，如化和Garcia(2001)科学(Science), 301，第870-805页中所显示。
[0053] 优选地，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白是可溶的，优选地可溶于水性溶液中，优选地可 溶于生物流体如血清、血浆、血液中。
[0054] 如本文所用，术语"Fe"或"免疫球蛋白化"或"Ig Fe"理解为意指免疫球蛋白链恒 定区的簇基端部分，优选地免疫球蛋白重链恒定区的簇基端部分，或其部分。优选地，免疫 球蛋白化包含1) CHl域、CH2域和C册域，任选地连同免疫球蛋白较链区，2 )邸1域和C肥域，任 选地连同免疫球蛋白较链区，3 )CH1域和CH3域，任选地连同免疫球蛋白较链区，4)CH2域和 CH3域，任选地连同免疫球蛋白较链区或5)选自但不限于CH1、CH2和CH3的两个或更多个结 构域的组合，任选地与免疫球蛋白较链区组合。优选地，免疫球蛋白Fc至少包含免疫球蛋白 较链区、CH2结构域和C册结构域，和任选地CHl结构域。优选地，免疫球蛋白Fc包含具有W下 同种型的免疫球蛋白的Fc或Fc部分或由其组成，所述同种型包括但不限于IgG、IgM、IgA、 1邑0、1旨6，进一步优选地1旨61、1旨62、1旨63、1旨64、1旨41、1旨42、31旨4，更优选地1旨61、1旨62或 IgG4，最优选地IgGl。任选地，免疫球蛋白Fe还包含了起到使补体固定或抗体依赖性细胞毒 性最小化或改善与Fe受体结合的亲和力的氨基酸突变、缺失、置换或化学修饰。
[0055] 进一步优选地，免疫球蛋白化包含W下任一者或由其组成：（a)CH2域或其部分和 CH3域或其部分，（b)CH2域或其部分，或（c)CH3域或其部分，其中免疫球蛋白化或其部分具 有W下同种型，所述同种型包括但不限于1邑6、1邑1、1邑4、1曲、1巧、进一步优选地1邑61、1邑62、 I gG3、I gG4、I gA 1、I gA2、SI gA、更优选地 I gG 1、I gG2或 I gG4，最优选地 I gG 1。
[0056] 优选地，免疫球蛋白化包含免疫球蛋白重链的簇基末端区域或由其组成，并且可 W包含来自IgGJgA或I曲抗体同种型的CH2域和/或C册域或其部分，或来自IgM或I巧的C肥 域和/或C册域和/或CH4域或其部分。优选地，免疫球蛋白化包含化片段或由其组成，所述化 片主要段包含CH3和小部分的CH2,如通过胃蛋白酶消化免疫球蛋白可衍生。优选地，免疫球 蛋白化包含完整Fe区或由其组成，所述完整化区包含C肥和C册，额外地与较链区连接，所述 较链区是在完整免疫球蛋白中连接CHl区和C肥区的重链短片段，如可W通过木瓜蛋白酶消 化免疫球蛋白产生。优选地，免疫球蛋白较链区包含较链区或较链区的部分或由其组成，所 述较链区或较链区的部分源自IgG、优选人IgG,更优选地选自但不限于IgGl、IgG2、IgG3或 IgG4,最优选IgGl,或可选地是前述较链区实施方案的物种变体或等位变体。所述较链区或 免疫球蛋白较链区的部分可W位于Fe区的C或N末端处，优选地在N末端处。
[0057] 根据本发明的一个优选实施方案，免疫球蛋白Fe优选地包含免疫球蛋白的化或化 的部分或由其组成，所述免疫球蛋白在CH2区中包含野生型序列的减少化效应子功能的一 个或多个氨基酸突变。优选地，运些突变是A330、P331至S330、S331(氨基酸编号相对于野生 型IgGl序列，其中CH2区域处于人重链IgGl恒定区中[欧洲免疫学杂志化ur.J. Immunol.) (1999)29: 2613-2624]。优选地，免疫球蛋白化是糖基化并且在生理抑高度带电，因此有助 于增溶p75NTR(NBP)dFc区还允许通过抗Fe酶联免疫吸附测定巧LISA)检测p75NTR(NBP)，例 如出于诊断目的。本发明的p75NTR(NBP)优选地在正常糖基化位点处使Ig Fe糖基化的细胞 中合成。
[0化引优选地，免疫球蛋白化包含人免疫球蛋白化区或由其组成。
[0059]根据本发明，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白优选地显示出有利的生物学特性:改善的 p75NTR(NBP)溶解度和/或p75NTR(NBP)稳定性和/或改善的p75NTR(NBP)血清半寿期。改善 的溶解度是合乎需要的，旨在p75NTR(NBP)的生物利用率在给药时最大化并且可W确定并 实施p75NTR(NBP)的精确剂量。改善的溶解度有利于克服聚集体问题，所述聚集体是不想要 的，在体内递送时造成疼痛并且导致潜在的炎症。改善的血清半寿期具有W下优点:促进在 治疗使用期间为实现递送的p75NTR(NBP)的等同治疗作用或维持治疗作用所要求的剂量水 平减少或给药频率减少。在血液或血清中延长的半寿期和更高的稳定性具有如下优点：允 许较少频率给药和/或较低给药水平的剂量方案，因此减少体内潜在毒性或副作用。在运种 情况下，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白在其治疗作用方面更强有力和/或在循环中更稳定。所得 的较低或较少给药频率在最小化与p75NTR(NBP)给药可能相关的任何潜在毒性作用或副作 用方面是有利的。p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的分子量还超过单独的p75NTR(NBP)增加，运具 有W下优点：当静脉内给药时，该分子将充分留在血液循环中，从而降低渗透至非目的部位 (例如中枢神经系统）的风险，并且产生适于在祀向的组织中停留或浓缩的分子。
[0060] 优选地，与单独的p75NTR(NBP)相比，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白显示改善的P75NTR (NBP)溶解度和/或改善的p75NTR(NBP)稳定性和/或改善的血清半寿期。优选地，改善的溶 解度是在水性溶液(如水）中的、优选地含有赋形剂如缓冲剂和/或盐、优选地在生理pH、优 选地在抑5至抑8之间、优选地在约抑7时的溶解度，或是在生物流体如血清或血液中的 溶解度。优选地，改善的稳定性是在一段时间范围内、在一个储存时间期间或在冷冻和融化 后p75NTR(NBP)蛋白的活性或结构完整性因变性、氧化、片段化或聚集效应所致的稳定性。 结构稳定性可W由变性、氧化、团集或聚集的标准计量判定，可W通过本文中公开的结合测 定法或功能测定法测量活性的稳定性，测量蛋白质血清半寿期的方法是已知的。
[0061 ]优选地，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白可W从多种哺乳动物宿主细胞W高水平表达W 提供单一种类并且可W有效地通过亲和层析纯化，例如通过与金黄色葡萄球菌 (Staphylococ州S aureus)蛋白A结合来纯化。优选地，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白可W二聚 化，并且优选地，与单独的p75NTR(NBP)相比，二聚体对于神经营养因子NGF、抓NF、NT3或 NT4/5具有增加的亲和力。更紧密的结合具有更高效力和更高治疗功效的优点，如通过 p75NTR(NBP)效果所判定，例如，如通过本文中公开的神经营养因子功能测定法所测定。更 高的效力具有如下益处:p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白可W按较低剂量使用W实现相同的治疗 功效，因此减少体内潜在毒性或副作用。
[0062] 优选地，本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白具有约或大于W下任一者的体内半寿 期：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、 54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、 104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、 142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、 180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208或210小时+/-1小时， 本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白进一步优选地具有约或大于24小时的体内半寿期。
[0063] 本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白进一步优选地具有约或大于W下任一者的体 外半寿期：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、 50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、 100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、 138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、 176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208或210日+/-1日，本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白进一步优选地具有约或大于6日的体外半寿期。优 选地在约生理pH、在缓冲的水性溶液，优选地在20°C或37 °C测量稳定性。
[0064] 根据前述优选实施方案，体内半寿期优选地是在大鼠中的半寿期或在人类中的半 寿期，更优选地是在人类中的半寿期。优选地，在体内给药例如通过静脉内或皮下注射后， 从本发明p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的血清测量水平确定半寿期。
[0065] p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的p75NTR(NBP)和免疫球蛋白化部分可W由接头连接。 接头优选地包含一个或多个氨基酸或由其组成或者包含具有如下个氨基酸的多肤序列或 由其组成:优选地约1至约25个氨基酸、优选地1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸的任意个氨基 酸、进一步优选地约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23 或 24 个氨基酸的任一 个氨基酸，最优选地13个氨基酸。
[0066] 优选地，接头包含缺少任何稳定二级结构如a螺旋、0链、310螺旋和Pi螺旋、多聚脯 氨酸螺旋、a折叠的氨基酸的多肤序列或由其组成。优选地，接头区域包含限定柔性或动态 或非结构化多肤如柔性环、随机卷曲或柔性转角的氨基酸的多肤序列或由其组成，经常发 现运类非结构化多肤连接大蛋白质分子中的二级结构区域。
[0067] 优选地，接头是如下氨基酸的多肤序列，所述氨基酸包含p75NTR(NBP)中大于或约 50 %的甘氨酸和/或丙氨酸和/或丝氨酸，进一步优选地包含p75NTR(NBP)中大于或约55 %、 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%的甘氨酸和/或丙氨酸和/或丝氨酸。 接头区域优选地包含如下氨基酸的多肤序列或由其组成，所述氨基酸包含甘氨酸和丝氨酸 二者，优选地甘氨酸的比例大于丝氨酸的比例，接头区域优选地包含柔性接头或由其组成。
[0068] 不希望受任何具体理论约束，发明人认为，柔性接头克服或防止空间位阻，其中与 单独的p75NTR(NBP)相比时，所述空间位阻可能干扰p75NTR(NBP)-Fc融合物的前述神经营 养因子结合能力或生物活性。因此，接头区域优选地允许p75NTR(NBP)部分和免疫球蛋白化 部分之间的柔性并且与单独的游离或天然p75NTR(NBP)相比，允许保留或改善P75NTR (NBP)-Fc融合蛋白的前述生物活性，如使用如本文所述的结合测定法通过与神经营养因子 的结合所测定。
[0069] 进一步优选地，接头是免疫上惰性的，从而它不触发补体介导的溶解，不刺激抗体 依赖细胞介导的细胞毒性(ADCC)，不活化小胶质细胞或T细胞。优选地，接头区域在运些活 性的一种或多种活性方面减弱。
[0070] 进一步优选地，接头包含从结构分析或结构预测中已知或预测为柔性或动态或非 结构化多肤或缺少稳定二级结构的多肤或由其组成。
[0071 ]最优选地，接头包含式Gx的肤或由其组成，其中X是1、2、3、4、5或6。
[0072] 本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白还可W包含蛋白酶剪切位点，所述剪切位点任 选地间插在p75NTR(NBP)部分和免疫球蛋白化部分之间。该蛋白酶剪切位点可W位于接头 中或接头与p75NTR(NBP)部分或/和免疫球蛋白化部分的交界处。p75NTR(NBP)可W任选地 在配制和或为治疗目的给药之前从免疫球蛋白Fc部分切下。
[0073] 备选地，本发明的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白可W经工程化W移除蛋白酶剪切位 点。在一个优选实施方案中，可W移除a分泌酶切割位点和丫分泌酶切割位点。在一个特别 优选的实施方案中，移除序列GSSQPWTRGTTDNDIEGR MD(SEQ ID N0.5)。
[0074] 在其他的优选实施方案中，可W改变p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白中的某些氨基酸W 改善特性如产率或溶解度。一个特别优选的实施方案是将位置222处的半脫氨酸残基变成 丝氨酸残基，发现所述改变在制造该蛋白质期间从C册细胞表达时减少蛋白质的聚集。
[0075] 优选地，接头和/或免疫球蛋白化部分不损害或不明显损害p75NTR(NBP)部分：
[0076] (a)对神经营养因子NGF、抓NF、NT3或NT4/5的功能活性的影响（定义为调节或上调 或下调神经营养因子的功能活性），
[0077] (b)针对NGF、抓NF、NT3或NT4/5中任一者的结合亲和力，结合亲和力在约O.lnM至 约50nM之间，
[007引 （C)与神经营养因子NGF、NT3、抓NF和NT4/5每一者、优选地与人NGF、NT3、抓NF和 NT4/5结合的能力。
[0079] 根据本发明的另一个方面，提供编码根据第一方面或第二方面的p75NTR(NBP)-Fc 融合蛋白的核酸分子。优选地，该核酸分子用于治疗疼痛。
[0080] 根据本发明的一个优选实施方案，该核酸分子还可W包含编码信号序列，优选地 P75NTR信号序列的区域，例如DNA或RNA序列。
[0081] 根据本发明的另一个方面，提供一种用于转染细胞的可复制表达载体，所述载体 包含第=方面的核酸分子，优选地该载体是病毒载体。优选地，该载体用于治疗疼痛的用 途。
[0082] 进一步根据本发明的W上方面，提供一种表达本发明的核酸分子或载体W产生或 分泌p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的方法。优选地，该方法包括将核酸分子或载体引入细胞并 且在其中表达所述核酸W产生或分泌p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白。优选地，将核酸分子或载 体体外引入细胞中，可选地体内引入。优选地，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的表达是体外表 达，任选地进一步分离并纯化，备选地，p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白的表达优选地是体内表 达，体内表达优选地构成基因治疗。优选地，载体是可复制表达载体，任选地用于转染哺乳 动物细胞，优选地，载体是病毒载体。
[0083] 根据本发明的另一个方面，提供一种携带第=方面或第四方面的核酸分子或载体 的宿主细胞，优选地，细胞是哺乳动物细胞。
[0084] 根据本发明的另一个方面，提供用于治疗疼痛或疼痛症状的p75NTR(NBP)-Fc融合 蛋白，或用于治疗疼痛或疼痛症状的核酸或载体。疼痛或疼痛症状可W包括但不限于：
[0085] (a)急性疼痛和/或自发性疼痛，
[0086] (b)慢性疼痛和或持续性疼痛，
[0087] (C)炎性疼痛，包括W下任一种:关节炎疼痛、因骨关节炎或类风湿性关节炎产生 的疼痛、因炎性肠病、银屑病和湿疹产生的疼痛，
[0088] (d)伤害性疼痛，
[0089] (e)神经性疼痛，包括痛苦的糖尿病性神经病或与瘤疹后神经痛相关的疼痛，
[0090] (f)痛觉过敏，
[0091] (g)异常性疼痛，
[0092] 化）中枢性疼痛、中枢性中风后疼痛、因多发性硬化产生的疼痛、因脊髓损伤产生 的疼痛或因帕金森病或癒痛产生的疼痛，
[0093] (i)癌症疼痛，
[0094] (j)术后疼痛，
[0095] 化）内脏疼痛，包括消化道内脏疼痛和非消化道内脏疼痛，因胃肠(GI)素乱所致的 疼痛、因功能性肠病症(FBD)产生的疼痛、因炎性肠病（IBD)产生的疼痛、因痛经、盆腔疼痛、 膀脫炎、间质性膀脫炎或膜腺炎产生的疼痛，
[0096] (1)肌肉骨骼疼痛、肌痛、纤维肌痛、脊柱炎、血清阴性(非类风湿性)关节病、非关 节风湿病、抗肌萎缩蛋白病、糖原分解、多发性肌炎、化脈性肌炎，
[0097] (m)屯、脏或血管疼痛、因屯、绞痛(angina)、屯、肌梗死、二尖瓣狭窄、屯、包炎、雷诺氏 现象、硬皮病(scleredoma)、硬皮病或骨骼肌局部缺血所致的疼痛，
[0098] (n)头部疼痛，其包括偏头痛、有先兆偏头痛、无先兆偏头痛、化集性头痛、紧张型 头痛。
[0099] (O) 口面疼痛，其包括牙疼痛、飄额肌筋膜疼痛或耳鸣，或
[0100] (P)背痛、滑囊炎(menstrual pain)、月经疼痛、偏头痛、牵涉痛、兰叉神经痛、超敏 (hypersensitisation)、因脊柱创伤和/或变性或脑卒中（stroke)产生的疼痛D
[0101] 疼痛的治疗包括，但不限于，预防疼痛和/或疼痛症状、改善疼痛和/或疼痛症状、 控制疼痛和/或疼痛症状、减少疼痛和/或疼痛症状的发生率，或延迟疼痛和/或疼痛症状形 成或进展。
[0102] 根据本发明的另一方面，提供根据第一方面或第二方面或其优选实施方案的 p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白，或根据第兰方面和第四方面的核酸分子或载体，其中P75NTR (NBP)-Fc融合蛋白或核酸分子或载体在组合中与第二药理活性化合物组合时分别、依次或 同时使用。优选地，组合的第二药理活性化合物可W包括但不限于：
[0103] ?阿片类镇痛药，例如吗啡（morphine)、海洛因 （hero in)、氨吗啡酬 (hydromorphone)、鞋吗啡酬（OX ymorphone)、左啡诺（Ievorphanol)、左洛啡焼 (Ievallorphan)、美沙酬（methadone)、贼替晚（meperidine)、芬太尼（fentanyl)、可卡因 (cocaine)、可待因（codeine)、双氨可待因（diihydrocodeine)、鞋考酬（0巧codone)、氨可酬 化y虹ocodone)、右丙氧芬（propo巧phene)、纳美芬（nalmefene)、締丙吗啡（nalorphine)、 纳洛酬（naloxone)、纳曲酬（naltrexone)、下丙诺啡（buprenoi'phine)、布托啡诺 (butorphanol)、纳布啡(na化uphine)或喷他佐辛（pentazocine);
[0104] ?非酱体抗炎药（NSAID)，例如阿司匹林、双氯芬酸（diclofenac)、二氣尼柳 (diflusinal)、依托度酸（etodolac)、芬布芬（fenbufen)、非诺洛芬（fenoprofen)、氣苯柳 (fIufenisal)、氣比洛芬（flurbiprofen)、布洛芬（ibuprofen)、嘲噪美辛（indomethacin)、 酬洛芬（ketoprofen)、酬咯酸（ketorolac)、甲氯芬那酸（meclofenamic acid)、甲芬那酸 (mefenamic acid)、美洛昔康(meloxicam)、薰了美酬（nabumetone)、薰普生（naproxen)、尼 美舒利（nimesulide)、硝基氣比洛芬（nitrof Iurbiprofen)、奥沙控秦（olsalazine)、奥沙 普秦（oxaprozin)、保泰松（phenylbutazone)、f?罗昔康（piroxicam)、柳氮(6黄fI比晚 (sulfasalazine)、舒林酸（sulindac)、托美了（tolmetin)或佐美酸（zomepirac);
[010日]?己比妥类镇静剂，例如异戊己比妥（amobarbital)、阿普比妥（aprobarbital)、 仲下己比妥（butabarbital)、布他比妥(butabital)、甲苯比妥(mephobarbital)、美沙比妥 (me t harb i tal )、美索比妥（me thohexital)、戊己比妥（pentobarbital)、苯己比妥 (phenobai'tital)、司可己比妥（secobarbital)、他布比妥（ta化Utal)、塞米乐（theamylal) 或硫喷妥（thiopental);
[0106] ?具有镇静作用的苯二氮草（b e n Z O d i a Z e P i n e )，例如氯氮幕 (chlordiazepoxide)、氯控孽酉堇(CIorazepate)、地西泮(diaz邱am)、氣西泮(f Iurazepam)、 劳控西泮（Iorazepam)、奥沙西泮（oxazepam )、替马西泮（temazepam)或SP坐仑 (triazolam);
[0107] ?具有镇静剂作用的Hi掉抗剂，例如苯海控明（diphenhydramine)、fl比控明 (pyrilamine)、异丙嗦（promethazine)、氯苯那敏（chIorpheniramine)或氯环利嗦 (chlorcyclizine);
[0108] ?镇静剂，如格鲁米特（glutethimide )、甲丙氨醋（meprobamate )、甲唾酬 (methaqualone)^^^^if tk#(dichloralphenazone)；
[0109] ?骨骼肌松弛药、例如己氯芬（baclofen)、卡立普多（carisoprodol)、氯P坐沙宗 (chlorzoxazone)、环苯扎林（cyclobenzaprine)、美索己莫(methocarbamol)或邻甲苯海控 明（orphrenadine);
[0110] ? MWDA受体掉抗齐I」，例如右美沙芬（dextromethoi'phan) (( + )-3-H-N-甲基吗啡 喃）或其代谢物右啡焼(dextrorphan)(( + )-3-H-N-甲基吗啡喃）、氯胺酬(ketamine)、美金 巧Ij (memantine)、fl比咯并唾嘟奎宁（pyrroloquinoline quinine)、顺-4-(麟醜甲基）-2-贼晚 簇酸、布地品（budipine)、EN-323UMorphiDex带，吗啡和右美沙芬（dextromethOTphan) 的组合制剂）、托化醋（topiramate)、奈控美生(neramexane)或培净福太(perzinfotel)，包 括NR2B掉抗剂，例如艾芬地尔Qfe叩rodil)、曲索罗地(traxoprodil)或（-)-(R)-6-{2-[4-(3-氣苯基)-4-鞋-1-贼晚基]-1-?乙基-3,4-二氨-2(1H)-唾嘟酬；
[0111] ? Q-肾上腺素能药，例如多沙蜂嗦（doxazosin)、坦索罗辛（tamsulosin)、可乐定 (clonidine)、脈法辛（guanfacine)、右美托咪定（dexmetatomidine)、莫达非尼 (111〇(13争111。）、或4-氨基-6,7-二甲氧基-2-(5-甲焼-亚礦醜氨基-1，2,3,4-四氨异唾嘟-2-基)-5-(2-化晚基)唾蜂嘟；
[0112] ? S环抗忧郁药，例如地昔帕明（desipramine)、丙米嗦（imipramine)、阿米替林 (amitriptyline)或去甲替林(nortriptyline);
[0113] ?抗惊厥药，例如卡马西平、控莫S嗦（lamotrigine)、托fI比醋（topiratmate)或丙 戊酸盐（valproate);
[0114] ?速激版(NK)掉抗齐I」，特别地是NK-3、NK-2或NK-I掉抗剂，例如（aR，9R)-7-[3,5- 双(S氣甲基）苄基]-8,9,10,11-四氨-9-甲基-5-(4-甲基苯基)-7H-[l，4]二氮杂环辛并 [2，1-容][1，7]-薰晚-6-13-二酬（了八1(-637)、5-[[(2民，35)-2-[(1民)-1-[3,5-双(兰氣甲基） 苯基]乙氧基-3-(4-氣苯基)-4-吗嘟基]-甲基]-1,2-二氨-3H-1，2,4-SP坐-3-酬(MK-869)、 阿瑞化坦（aprepitant)、控奈匹坦（Ianepitant)、达匹坦（dapitant)或3-[ [2-甲氧基-5-(兰氣甲氧基)苯基]-甲氨基]-2-苯基贼晚(2S，3S);
[011日]?毒葦碱掉抗剂，例如奥昔布宁（oxybutynin)、托特罗定（tolterodine)、丙贼维 林（propiverine)、曲司氯馈（tropsium chloride)、达非那新（darifenacin)、索利那辛 (soIifenacin)、替米维林（temiverine)和异丙托馈（ipratropium);
[0116] ?C0X-2选择性抑制剂，例如塞来考昔（celecoxib)、罗非考昔（rofecoxib)、帕瑞 考昔（parecoxiLb)、伐地考昔（valdecoxib)、地控考昔（deracoxiib)、依托考昔（etoricoxib) 或鲁米考昔（lumiracoxiLb);
[0117] ?煤焦油镇痛药，尤其朴热息痛(paracetamol);
[0118] ?神经安定药，如氣贼利多（droperidol)、氯丙嗦（chlorpromazine)、氣贼晚醇 (haloperidol)、奋乃静（perphenazine)、硫利达嗦（thioridazine)、美索达嗦 (mesoridazine)、S氣控嗦（trifluoperazine)、氣奋乃静（fIuphenazine)、氯氮平 (clozapine)、奥氮平（olanzapine)、利培酬（risperidone)、齐控西酬（Ziprasidone)、唾硫 平（quetiapine)、舍嘲噪（sertindole)、阿立贼 P坐（aripiprazole)、索奈贼 口坐 (sonepiprazole)、布南色林（blonanserin)、伊潘立酬（iloperidone)、赃罗匹隆 (perospirone)、雷氯必利（raclopride)、佐替平（ZOtepine)、联苯芦诺（bifeprunox)、阿塞 那平（asenapine)、鲁拉西酬（Iuras idone)、氨横必利（amisulpr ide)、己拉皮利酬 (balaperidone)、帕林朵（palindore)、依利色林（邱Iivanserin)、奥沙奈坦（osanetant)、 利莫纳班(rimonabant)、美兰纳坦(mecline;rtant)、Miraxi〇n够或沙立佐坦（sarizotan);
[0119] ?香草素受体(vanilloid receptor)激动剂（例如树胶脂毒素(resinferatoxin) 或括抗剂（例如辣椒平（capsazepine));
[0120] ? 0-肾上腺素能药如普糞洛尔（propranolol);
[0121 ] ?局部麻醉药如美西律(mexiletine);
[0122] ?皮质类固醇如地塞米松（dexamethasone);
[012引 ? 5-HT受体激动剂或括抗剂，特别地5-HTiB/iD激动剂如依立曲坦(eletriptan)、舒 马曲坦（sumatriptan)、那拉曲坦（naratriptan)、佐米曲坦（zolmihiptan)或利扎曲坦 (rizatriptan)；
[0124] ? 5-HT2A雙体括抗剂如R( + )-a-(2,3-二甲氧基-苯基)-1-[2-(4-氣苯乙基）]-4-赃 晚甲醇(MDk100 907);
[01巧]?胆碱能（烟碱)镇痛药，如异丙克兰（ispronicline)(TC-1734)、化)-N-甲基-4-(3-化晚基)-3-下締-1-胺(RJR-2403)、（R)-5-(2-日丫下晚基甲氧基)-2-氯化晚(ABT-594)或 尼古下；
[0126] ?化巧多饭（Tramado愼）；
[0127] . PDEV抑制剂，如5-[2-乙氧基-5-(4-甲基-1-赃嗦基-横酷基)苯基]-1-甲基-3-正丙基-1,6-二氨-7H-化挫并[4,3-d]喀晚-7-酬（西地那非（sildenafil))、（6R，12aR)-2， 3，6，7，12，12a-六氨-2-甲基-6-(3，4-亚甲二氧苯基)-化嗦并[2 '，1' ： 6，1 ]-化晚并[3，4-b ] 吗隙-1,4-二酬（IC-351或他达拉非（tadalafil))、2-[2-乙氧基-5-(4-乙基-赃嗦-1-基-1-横酷基）-苯基]-5-甲基-7-丙基-3H-咪挫并[5，1-門[1，2,4]立嗦-4-酬（伐地那非 (￥曰'(16]1曰門1))、5-(5-乙酷基-2-了氧基-3-11比晚基）-3-乙基-2-(1-乙基-3-日丫了晚基）-2, 6- 二氨-7H-化挫并[4,3-d]喀晚-7-酬、5-(5-乙酷基-2-丙氧基-3-化晚基)-3-乙基-2-(1-异丙基-3-日丫下晚基)-2,6-二氨-7H-化挫并[4,3-d]喀晚-7-酬、5-[2-乙氧基-5-(4-乙基赃 嗦-1-基横酷基川比晚-3-基]-3-乙基-2-[2-甲氧乙基]-2,6-二氨-7H-化挫并[4,3-d]喀晚- 7- 酬、4-[(3-氯-4-甲氧苄基）氨基]-2-[(25)-2-(径甲基川比咯烧-1-基]-N-(喀晚-2-基甲 基)喀晚-5-甲酯胺、3-(1-甲基-7-氧代-3-丙基-6,7-二氨-IH-化挫并[4,3-d]喀晚-5-基)-N-[2-( 1-甲基[I比咯烧-2-基）乙基]-4-丙氧基苯横酷胺；
[01 巧]?大麻素（cannabinoid);
[0129] ?促代谢型谷氨酸盐亚型1受体(mGluRl)括抗剂；
[0130] ?血清素再吸收抑制剂，如舍曲林（sertraline)、舍曲林代谢物-去甲基舍曲林、 氣西汀（f Iuoxetine)、诺氣西汀（norf IuoxetineK氣西汀去甲基代谢物）、氣伏沙明 (fluvoxamine)、帕罗西汀(paroxetine)、西献普兰山;[1日109招111)、西献普兰代谢物-去甲基 西献普兰（(16311161：1171。；[1日10口抑111)、艾司西献普兰（63。；[1日10口^111)、(1,1-芬氣拉明（(1,1-fenfluramine)、非莫西汀（femoxetine)、伊福西汀（ifoxetine)、氯基度硫平 (cyanodothiepin)、利托西汀（Iitoxetine)、达泊西汀（dapoxetine)、奈法挫酬 (nefazodone)、西文氯胺（cericl amine)和曲挫酬（trazodone);去甲肾上腺素 (noradrenalineK去甲肾上腺素 （norepinephrine ))再吸收抑制剂，如马普替林 (maprotiline)、洛非帕明（Iofepramine)、米氮平（mirtazepine)、径丙替林 (oxaprotiline)、非挫拉明（fezolamine)、托莫西汀（tomoxetine)、米安色林(mianserin)、 安非他酬（buproprion)、安非他酬代谢物-?安非他酬化ydroxyb叫roprion)、诺米芬辛 (nomifensine)和维洛沙秦(ViIoxazine)( VivalaiT货）、.特别地是选择性去甲肾上腺素再 吸收抑制剂如瑞波西汀(reboxetine)、尤其(S，S)-瑞波西汀；
[0131] ?血清素-去甲肾上腺素再吸收双重抑制剂，如文拉法辛（venlafaxine)、文拉法 辛代谢物O-去甲基文拉法辛（〇-desmethylvenlafaxine)、氯米帕明（clomipramine)、氯米 帕明代谢物-去甲基氯米帕明（desmethylclomipramine)、度洛西汀（duloxetine)、米那普 仑(milnacipran)和丙咪嗦（imipramine);
[0132] .诱导型一氧化氮合酶（iNOS)抑制剂，如S-[2-[(l-亚氨乙基)氨基]乙基]-心同 型半脫氨酸、S-[2-[(l-亚氨乙基)氨基]乙基]-4,4-二氧代半脫氨酸、S-[2-[(l-亚氨乙 基)氨基]乙基]-2-甲基-k半脫氨酸、（2S，5Z)-2-氨基-2-甲基-7-[(l-亚氨乙基)氨基]-5-庚締酸、2-[[(lR，3S)-3-氨基-4-径-1-(5-嚷挫基）下基]硫代]-5-氯-3-化晚甲腊；2-[[(13,35)-3-氨基-4-径-1-(5-嚷挫基)-下基]硫代]-4-氯苯腊、（25,41〇-2-氨基-4-[[2-氯-5-(S氣甲基）苯基]硫代]-5-嚷挫下醇、2-[[(13,35)-3-氨基-4-径-1-(5-嚷挫基）下 基]硫代]-6-(S氣甲基)-3-化晚甲腊、2-[[(lR，3S)-3-氨基-4-径-1-(5-嚷挫基）下基]硫 代]-5-氯苯腊、N-[4-[2-(3-氯节氨基）乙基]苯基]嚷吩-2-甲脉或脈基乙基二硫酸；
[0133] ?乙酷胆碱醋酶抑制剂，如多奈赃齐(donepezil);
[0134] ?前列腺素 E2亚型4(EP4)括抗剂，如N-[({2-[4-(2-乙基-4,6-二甲基-IH-咪挫并 [4,5-c]化晚-1-基）苯基]乙基}氨基）-幾基]-4-甲基苯横酷胺或4-[(lS)-1-({[5-氯-2-(3-氣苯氧基川比晚-3-基]幾基}氨基）乙基]苯甲酸；
[0135] ?白S締 B4括抗剂;如1-(3-联苯基-4-基甲基-4-?-苯并二氨化喃-7-基)-环戊 烧簇酸(CP-105696)、5-[2-(2-簇乙基)-3-[6-(4-甲氧苯基)-祀-己締基]氧苯氧基]-戊酸 (0N0-4057)或DPC-I1870，
[0136] ? 5-脂加氧酶抑制剂，如齐留通^11611*〇11)、6-[(3-氣-5-[4-甲氧基-3,4,5,6-四 氨-2H-化喃-4-基])苯氧甲基]-1-甲基-2-哇诺酬(ZD-2138)或2,3,5-S甲基-6-(3-化晚基 甲基）、1，4-苯酿(CV-6504);
[0137] ?钢通道阻滞剂，如利多卡因（Iidocaine);或
[013引 ? 5-HT3括抗剂，如昂丹司琼(ondansetron);
[0139] W及它们药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0140] 根据本发明的又一个方面，提供一种治疗、预防、缓解、控制、减少个体中疼痛形成 或进展或任何前述疼痛和/或疼痛症状的发生率或延迟疼痛形成或进展或任何前述疼痛 和/或疼痛症状的方法，所述方法包括向个体给药有效量的根据第一方面或第二方面或其 优选实施方案的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白或根据第=方面和第四方面的核酸分子或载体。
[0141] 本发明适用于人类医学和兽医医学领域。优选地，个体是哺乳动物，例如伴侣动物 如马、猫或犬或家畜如羊、牛或猪。最优选地，个体是人。
[0142] 根据本发明的第八方面，提供一种用于治疗、预防、缓解、控制、减少疼痛形成或进 展或任何前述疼痛和/或疼痛症状的发生率或延迟疼痛形成或进展或任何前述疼痛和/或 疼痛症状的组合物，所述组合物包含根据第一方面或第二方面或其优选实施方案的P75NTR (NBP)-Fc融合蛋白，或根据第S方面和第四方面的核酸分子或载体和药学上可接受的载体 和/或赋形剂。
[0143] 优选地，制备根据第一方面或第二方面或其优选实施方案的p75NTR(NBP)-Fc融合 蛋白或根据第=方面和第四方面的核酸分子或载体或第八方面的药物用于或适于口服、舌 下、颊部、局部、直肠、吸入、透皮、皮下、静脉内、动脉内、肌内、屯、内、骨内、皮内、腹膜内、经 粘膜、阴道、玻璃体内、关节内、关节周、局部或皮内给药。
[0144] 优选地，制备根据第一方面或第二方面或其优选实施方案的p75NTR(NBP)-Fc融合 蛋白、或根据第=方面和第四方面的核酸分子或载体或第八方面的药物组合物是用于或适 于疼痛发作之前和/或期间和/或之后给药或用于或适于运类用途。
[0145] 优选地，制备根据第一方面或第二方面或其优选实施方案的p75NTR(NBP)-Fc或根 据第=方面和第四方面的核酸分子或载体或第八方面的药物组合物用于或适于每周1次至 7次之间给药，进一步优选地每月1次至4次之间给药、进一步优选地每6个月时间1次至6次 之间给药，进一步优选地每年1次至12次给药。优选地，将药物意在或制备意在W包括但不 限于W下的时间外周地给药:每日1次、每2、3、4、5或6日1次、每周1次、每2周1次、每3周1次、 每月1次、每2个月1次、每3个月1次、每4个月1次、每5个月1次、每6个月1次、每7个月1次、每8 个月1次、每9个月1次、每10个月1次、每11个月1次或每年1次。
[0146] 进一步优选地，将根据第一方面或第二方面或其优选实施方案的p75NTR(NBP)-Fc 融合蛋白或根据第=方面和第四方面的核酸分子或载体或第八方面的药物组合物意在或 制备意在通过包括但不限于W下的一个或多个途径外周地给药：口服、舌下、经颊地、局部、 直肠、通过吸入、经皮、皮下、静脉内、动脉内或肌内、通过屯、内给药、骨内、皮内、腹膜内、经 粘膜、阴道、玻璃体内、表皮、关节内、关节周或局部途径。
[0147] 优选地，制备根据第一方面或第二方面或其优选实施方案的p75NTR(NBP)-Fc融合 蛋白，或根据第=方面和第四方面的核酸分子或载体或第八方面的药物组合物用于或适于 W约0.05mg/ml至约200mg/ml之间的浓度；优选地在W如下任一个浓度：约0.05mg/ml、 0.Img/ml、0.5mg/ml、Img/ml、5mg/ml、1Omg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ ml、40mg/ml、45mg/ml、50mg/ml、55mg/ml、60mg/ml、65mg/ml、70mg/ml、75mg/ml、80mg/ml、 85mg/ml、90mg/ml、95mg/ml、lOOmg/ml、IlOmg/ml、120mg/ml、130mg/ml、140mg/ml、lSOmg/ ml、160mg/ml、170mg/ml、180mg/ml、190mg/ml 或 200mg/ml+/-约 10 % 误差，最优选地在兽医 应用中W约3mg/ml及人类中Wo. Img/ml给药。
[0148] 优选地，制备根据第一方面或第二方面或其优选实施方案的p75NTR(NBP)-Fc融合 蛋白或根据第=方面和第四方面的核酸分子或载体或第八方面的药物组合物用于或适于 W约0 . Img/kg至约200mg/kg体重之间的浓度;优选地在W如下任一个浓度：约0.5mg/kg、 Img/kg、5mg/kg、lOmg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/ kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、7〇mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、 95mg/kg、lOOmg/kg、11Omg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/ kg、180mg/kg、190mg/kg或约200mg/kg体重+/-约10 %误差，最优选地在兽医应用中W约 lOmg/kg及人类中Wo. 3mg/kg给药。
[0149 ]根据本发明的第九方面，提供一种试剂盒，其包含：
[0150] (a)根据第一方面或第二方面或其优选实施方案的p75NTR(NBP)-化融合蛋白，或 根据第=方面和第四方面的核酸分子或载体或第八方面的药物组合物;和
[0151] (b)针对W下任一种或多种情况向个体给药有效量的所述p75NTR(NBP)-Fc融合蛋 白、核酸分子、载体或药物组合物的说明书:预防或治疗疼痛和/或疼痛症状或用于缓解疼 痛和/或疼痛症状、控制疼痛和/或疼痛症状、减少疼痛和/或疼痛症状的发生率，或延迟疼 痛和/或疼痛症状形成或进展。
[0152] 该试剂盒可W包含一个或多个容器，所述容器含有本文所述的p75NTR(NBP)-Fc融 合蛋白、核酸、载体或药物组合物，和根据本发明任何方法和用途的使用说明书。试剂盒还 可W包含选择适于治疗的个体的描述，所述选择基于鉴定该个体是否具有疼痛或疼痛症状 或面临具有运种疼痛或疼痛症状的风险。用于给药药物组合物的说明书可W包含信息，如 关于预期治疗的剂量、给药方案和给药途径。
[0153] 根据本发明的又一个方面，提供根据第一方面或第二方面或其优选实施方案的 p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白或根据第S方面和第四方面的核酸分子或载体或第八方面的药 物组合物用于W下任一种或多种情况:预防或治疗病状或病状的症状或缓解该病状或该病 状的症状、控制该病状或该病状的症状、减少该病状或该病状的症状发生率，或延迟该病状 或该病状的症状形成或进展，所述病状与神经营养因子NGF、BDNF、NT-3、NT-4/5的任一种或 多种相关。
[0154] -NGF(神经生长因子）与至少两类受体P75NTR和化kA(-种参与轴突生长、支化和 伸长的跨膜酪氨酸激酶)结合。与NGF相关的病状和症状是已知的。NGF在炎性病症和疼痛中 表达并与之相关[蛋白质序列NP_002497.2，NP_038637]。另外，已经显示NGF在许多屯、血管 疾病如冠状动脉粥样硬化、肥胖症、2型糖尿病和代谢综合征中W及在多发性硬化中发挥作 用。降低的NGF血浆水平（W及另外降低的抓NF血浆水平）已经与急性冠状动脉综合征和代 谢综合征相关。NGF还与各种精神病症相关，如痴呆、抑郁、精神分裂症、孤独症、Rett综合 征、神经性厌食和神经性贪食，并且还已经设及阿尔茨海默病和神经变性病的形成。还已经 显示NGF加速伤口愈合，并且存在它可W用于治疗皮肤溃瘍和角膜溃瘍的证据，已经显示它 减少神经变性并在大鼠中促进外周神经再生。
[01W] -m)NF(脑衍生神经营养因子)是在神经系统发育期间支持神经元存活和生长的神 经营养因子[蛋白质序列肥_001137277.1、肥_001041604]。抓^结合细胞表面受体化48和 P75NTR并且还调节a-7烟酸受体的活性。与抓NF相关的病状和症状是已知的。已经显示抓NF 在生理疼痛和病理疼痛传递方面、特别在其中发现BDNF合成大大增加的急性疼痛、炎性疼 痛和神经性疼痛的模型中发挥重要作用;还已经显示抓NF在慢性疼痛病状W及其他病状如 湿疹和银屑病中上调。在抑郁、精神分裂症、强迫性障碍、阿尔茨海默病、亨廷顿病病、Rett 综合征和痴呆W及神经性厌食和神经性贪食中观察到BDNF的下调。
[0156]-神经营养因子-4(NT-4)，也称作神经营养因子-5(NT-5)，是优势地经P75NTR受体 和化kB受体传导信号并促进外周感觉交感神经神经元存活的神经营养因子。运种蛋白质的 成熟肤在检查过的全部哺乳动物（包含人、猪、大鼠和小鼠）中是相同的[蛋白质序列NP_ 006170，NP_937833LNT-4大多由背根神经节(DRG)的神经元和椎旁和椎前交感神经节、脊 髓背角和腹角中的那些神经元合成，并且发现在许多组织（包括前列腺、胸腺、胎盘和骨骼 肌）中表达。与NT-4/5相关的病状和症状是已知的。NT4/5中的缺陷与原发性开角型青光眼 的易患性相关。还已经显示神经营养因子子4有助于乳腺癌细胞存活并且是抑制肿瘤生长 的祀。NT-4/5已知参与疼痛-信号传导系统，如伤害性疼痛，还在皮肤慢性炎性病症中观察 到NT-4/5的上调，如皮炎、湿疹、异位性皮炎的痒疹病灶。在阿尔茨海默病、亨廷顿病病中观 察到NT-4/5的下调。
[0157] -神经营养因子-3(NT-3)，是结构上与0-NGF、抓NF和NT-4相关并控制哺乳动物神 经元存活和分化及成体神经系统维持的神经营养因子，并且在人胎盘中表达时可W影响胚 胎中神经元的发育。与NT3相关的病状和症状是已知的。通过基因打祀产生的NTF3-缺陷小 鼠显示严重的肢体运动缺陷。NT-3通过化k受体进行信号传导并促进神经和神经胶质细胞 的生长和存活[蛋白质序列NP_001096124.1和NP_032768]。人、小鼠和大鼠 NT-3的氨基酸序 列相同。已知NT3及其同族受体，酪氨酸激酶C(TrkC),调节神经性疼痛和伤害性疼痛和伤害 感受及本体感受机制，例如NT3表达在神经病理动物的小DRG细胞中增加。NT3表达还与神经 病如糖尿病性多发性神经病和HIV相关性神经病、大纤维神经病(包括萎缩)相关，它还参与 痛觉过敏(通常有害的刺激的阔值下降）、异常性疼痛(无害刺激变得有害）和自发性疼痛 (明显缺乏刺激的情况下疼痛）的形成并且是肌肉疼痛的已知调节物。
[0158] 现在将参W下实施例描述本发明，其中提供所述实施例W说明而非限制本发明。 实施例
[0159] p75NTR-Fc序列的免疫原性计算机检验（In silico immunogenixy testing)
[0160] 目前利用重组DNA技术产生广泛类型的生物药物，包括新类别的基于单克隆抗体 (HiAb)的Fc(可结晶片段）的多功能治疗性融合蛋白化Uang 2009生物技术新观点（Curr Opin Biotechnol)，20(6)，692-9)。治疗性蛋白与化结构域融合通过两种不同方式延长分 子的血清半寿期，增强生物制药的总体治疗作用。首先，通过pH依赖的新生Fc受体(Fe化)结 合作用，再循环性Fc-融合物减少治疗性蛋白在内体中的降解。其次，相对治疗性分子，通过 添加 Fc-结构域和通过化-介导的与治疗性蛋白二聚化增加分子大小有助于限制肾清除作 用。
[0161] 可W通过将两个或更多个结构域直接连接在一起产生融合蛋白。但是，运可能在 所得的融合蛋白中导致不利的分子特性，如受损的生物活性(Bai等人，2005美国科学院院 刊（Proc.化tl. Acad. Sci.) 102 7292-7296)、蛋白质错误折叠（Zhao等人，2008蛋白质表达 和纯化（Protein Expr. Purif . )61 ,73-77)或低产率（Amet等人，2009制药研究 (Pharm. ReS.) 26，523-528)。可W在结构域之间插入接头序列W解决运些潜在问题，但是必 须考虑几种因素 W选出适宜的接头。首先，接头必须反映融合蛋白内部结构域的总体预期 功能。在一些情况下，结构域必须独立地发挥作用，因此需要接头柔性。相反，如果将结构域 固定，则可能需要刚性接头。第二，接头不得通过翻译后修饰(PTM)向融合蛋白引入任何不 想要的官能性。最后，必须考虑接头和接头旁侧区域的潜在免疫原性，因为接头可W是不天 然存在于人体中的从头设计序列。
[0162] 大部分治疗性蛋白不同程度地具有免疫原性(Van Walle等人，2007生物治疗专家 意见化邱ert Opin Biol Ilier. )7(3):405-18,Stas等人，2009抗体疗法的免疫原性评价 (Immunogenicity assessment of antibody therapeutics.)剑桥大学出片反社（Cambridge University Press)，剑桥）并且甚至所谓全人类抗体治疗药可能含有免疫原性区域 化arding等人，2010单克隆抗体(MAbs. )2,256-265)。免疫原性是诱导Th(辅助T细胞(T-helper))反应的能力，其中独特T细胞受体识别与抗原呈递细胞上展示的HLA II类分子结 合的肤时，所述反应触发。肤从抗原呈递细胞内化的蛋白质生成，所述蛋白质随后通过内体 切割途径加工。仅对HLA II类分子具有足够亲和力的肤将呈递在细胞表面上，并且或许可 能触发化反应。
[0163] 因此，可W通过移除Th表位降低免疫原性潜力，一个称作去免疫化的过程 (化amberlain 2002监管评估（The RegulatoiT Review)5,4-9!Baker和Jones2007药物发 现和发现的新观点（化rr.Opin Drug Discov.Devel. )10,219-227)。运通过W下方式实现： 预测治疗性蛋白中的哪些肤可W与HLA II类分子结合并随后引入置换消除或减少肤对HLA II类分子的结合亲和力。
[0164] 存在几个化A II类基因并且几乎均具有高度多态性。另外，HLA II类分子由a和0 链组成，所述链各自衍生自不同基因，所述基因连同内在多态性一起进一步增加变异。具体 而言，每位个体表达基因：DRA/DRB、DQA/DQB和DPA/DPB。运些基因当中，仅DRA无多态性。此 外，'第二'DRB基因（DRB3、DRB4或DRB5)也可W是存在的，其产物也与DRA链结合。
[0165] 去免疫化期间，重点在于DR同种异型，已知W比DQ和DP更高的水平表达化aupeze 等人，1999 人类免疫学化 um. Immunol. )60,591-597, Gansbacher 和 Zier 1988 细胞免疫学 (Cell Immunol. )117,22-34，Berdoz等人，1987免疫学杂志（J.Immunol. )139，1336-1341， SUmz等人，1989免疫学杂志（J. Immunol. )143,3081-3086) eDR同种异型通常通过DRB基因 提到，因为DRA基因保持恒定，例如DRBl *01:01，其中数字是等位基因特异的。
[0166] 个体表位的严重性评定基于混杂标准，即与特定表位结合的HLA同种异型的数目， W及群体中同种异型的重要性(频率)和HLA:肤复合物结合强度的定性评定。由于已经选择 个体的T细胞群体不识别'自身肤'，所W可能筛选正在对下述肤去免疫化的蛋白质，所述肤 对应于正常情况下不应当诱导化反应的（已知）自身肤。尽管不知道哪些内源蛋白在T细胞 成熟期间内化并且因此产生自身肤，但是抗体属于运些内源蛋白化irschmann等人，1995免 疫学杂志（J. Immunol.) 155,5655-5662,Verreck等人，1996免疫遗传学（Immunogenetics) 43，392-397，化rding等人，2010单克隆抗体(MAbs.) 2，256-265)。
[0167] P75-NTR Fc-融合蛋白设计
[0168] P75-NTR Fc-融合蛋白的化部分的特定同种异型是IgG pCon载体IgGza(见上文）。
[0169] P75-NTR Fc-融合蛋白的设计按几个阶段推进：
[0170] ?确定化-融合蛋白中待使用的P75-NTR序列的确切结构。考虑几种因素，包括：
[0171] Dp75-NTR Fc-融合物应当能够结合几种神经营养因子，至少包括NGF、抓NF、NT-3 和NT-4;必须在P75-NTR Fe-融合蛋白中保留柔性。
[0172] 。不想要的a-分泌酶切割位点存在于p75-NTR-Fc(SEQ ID N0.1)上的胞外结构域 中，运些切割位点必须从该序列移除，因为它们将受到切割并且因此减少p75-化产物在体 内的生物学活性和PK谱(PK profile)。原始的p75-Fc产物(参见SEQ ID NO. 1)含有a-分泌 酶切割位点并且与SEQ ID NO.3相比，半寿期和生物学活性（PK/PD)因此显著减少（见下 文)。
[0173] 鉴定了适用于P75-NTR Fc-融合蛋白中连接胞外P75-NTR结构域和化的适宜实证 性接头。排除了含有可能潜在参与翻译后修饰(PTM)的位点的接头序列。
[0174] 使用具有化区的适宜部分的所确定的P75-NTR构建体，使用不同的潜在接头序列， W计算机方式构建P75-NTR Fc-融合蛋白的几种变体。尝试P75-NTR胞外结构域C末端、Fc较 链区和潜在接头的结构建模和分析(参见表1)。
[0175] 使用化ibase?，对具有不同接头序列的变体筛选潜在化表位。
[0176] 基于预测的免疫原性风险，提出表达的序列3p75-NTR Fc-融合蛋白（SEQ ID NO.3)。
[0177] Fc-融合蛋白序列分析
[0178] 13种目前可用的治疗性Fc-融合蛋白的蛋白质序列从美国采用名称化SAN)网址获 得化ttp://www.曰m曰-曰ssn.org/曰m曰/pub/physici曰n-resources/medic曰l-science/)。在可 能的情况下，将蛋白质序列交叉参比并且相对于其他在线资源（如在线专利信息网址)检 查。使用在线资源，研究级Fc-融合蛋白的蛋白质序列从其他商业供应商获得。
[0179] 为了鉴定衍生多种化-融合蛋白的推定性亲本序列，使用MAFFT，将化-融合蛋白序 列与自有Lonza IgG pCon载体的翻译蛋白质产物比对化atoh等人,2002核酸研究(Nucleic Acids Res. )30,3059-3066)。比对的化-融合蛋白序列随后在其中化-融合物开始匹配IgG 序列的位置处截短。为了确定IgG序列在何处开始，使用=个连续IgG残基标准。
[0180]使用无 IgG序列的截短型Fc-融合蛋白序列，进行加 iprot数据库（UniProt协会 (The UniProt Consodium) ,UniProt发布2012-09-0ct3,2012)自有副本的Blast检索 (Altschul等人，1997核酸研究(Nucleic Acids Res. )253389-3402)，W鉴定匹配最接近的 蛋白质序列。每个Fc-融合蛋白序列随后针对化iprot数据库中存在的匹配最接近的序列和 匹配最接近的Lonza IgG pCon序列手工再比。随后提取融合配偶体和化区之间的交界并且 产生两个集合，一个集合针对13种治疗性Fc-融合蛋白和一个结合针对市售Fc-融合蛋白。 随后从运两个集合限定接头区域。
[0181] 市售化-融合蛋白序列集合随后在其中相对于匹配最接近的Lonza IgG pCon序列 找到序列同一性的N末端位置处截短。随后分选截短的序列并且生成无冗余序列集合。
[0182] Epibase?免疫概况分析
[0183] 使用Global集合中的85个HLA II类同种异型，对化-融合蛋白变体进行化ibase? 免疫概况分析。
[0184] 仅使用HLA结合作用预测，就免疫原性风险比较Fc-融合蛋白变体是非常困难的。 运是因为几个重要因素未考虑：
[0185] ..结合肤可能不由加工装置生成并且因此它将从未作为肤-HLA复合物由抗原 呈递细胞暴露于化细胞。
[0186] ??肤-HLA复合物可能不被化细胞识别。
[0187] 鉴于运些考虑，可W使用化化ase?免疫概况分析在变体序列之间进行S个类型的 定量比较。首先，可W比较DRBl、DRB3/4/5、DQ和DP同种异型集合中每个集合的关键表位数 目，其中与相同组的多个同种异型结合的肤计为一个。运种表位计数显示，每个集合内部独 特表位的数目和变体之间的差异掲示完全移除或添加潜在化表位。
[0188] 由于许多表位，尤其杂乱表位，结合多个同种异型，独特化表位计数的变化可能模 糊变体间免疫原性潜力的实际减少或增加。因此，第二定量比较是在全部化表位范围内每 个HLA同种异型水平上，其中变体的每种同种异型的结合肤计数，连同血清型和群体频率一 起，允许在血清型水平或同种异型水平比较。其=，表达最差情况下免疫原性风险的近似评 分可W如下计算：
[0189] 评分=I：(表位计数X同种异型频率）
[0190] 从预测与给定同种异型结合的表位的数目和受影响同种异型的等位基因频率计 算每个受影响同种异型的乘积。本研究中使用的全部受影响DRBl、DRB3/4/5、DQ和DP同种异 型的乘积。应当指出个体同种异型评分不是借此测量免疫原性风险的绝对度量，因为应当 考虑全部选择的HFA同种异型(01?81、01^3/4/5、09和0口）。
[0191] 认为人抗体种系序列（如衍生自Lonza pCon IgG化的那些)无免疫原性，因为它 们存在于呈递给人免疫系统的循环型抗体池中并且可W视为自身肤。类似地，认为P75-NTR 内在地无免疫原性，因为它在人体中天然表达。因此，从展示的计数评分和免疫原性评分排 除因完全从人抗体种系序列或从P75-NTR衍生的肤产生的关键表位。
[0192] 结构建模
[0193] 使用Lonza的建模平台，生成所提出的P75-NTR Fc-融合蛋白的结构模型。基于其 序列同一性，W及模板结构的定性结晶学量值，如分辨率m埃(A)计），将P75-NTR和化部 分的候选结构性模板片段评分、排序并且从自有抗体数据库和蛋白质数据库(PDB)选出。
[0194] 生成结构性模板片段与P75-NTR Fc-融合蛋白的序列比对结果。模板片段连同序 列比对结果由MODEF阳R(Sal等人，1993分子生物学杂志（J.Mol. Biol )234,779-815)处理。 运个方案产生从所比对的结构性模板集合导出的构象性约束。通过共辆梯度法和模拟退火 优化法产生满足运些约束的全体结构。基于衍生自蛋白结构评分的能量评分和满足构象约 束，从运个全体选出一个或多个模型结构。检查模型并且使用侧链优化算法，将祀和模板之 间差异的位置的侧链优化并使能量最小化。一套可视化和计算工具用来评估各结构的构象 变异性，W及结构域的核屯、堆积和局部堆积W选择一个或多个优选的模型。
[01M] P75-NTR Fc-融合蛋白设计
[0196] 设计了P75-NTR Fc-融合蛋白的S个接头变体。鉴于尝试在最终Fc-融合蛋白中 P75-NTR区域内保留柔性的设计约束因素和避开不利的a分泌酶和丫分泌酶切割位点的要 求，将胞外P75-NTR序列在位置G237处截短。原始P75NTR-FC序列1 (SEQ ID NO. 1)在位置 A250处截短。已经在P75-NTR的胞外部分中位置241-242和位置244-245之间鉴定到a分泌酶 切割位点（Zampieri等人，2005生物化学杂志（J Biol化em)280,14563-71)并且已经通过 位置282的区域内的序列同源性推断出一个推定性丫分泌酶切割位点。从序列1的PK/PD显 而易见，与序列3(SEQ ID NO.3)相比，序列USEQ ID NO. 1)的PK和生物学活性显著减少。从 运些实验得出结论，a分泌酶位点和丫分泌酶位点促成体内活性减少。
[0197] 为变体所选择的接头的关键要求是Fc-融合蛋白中允许融合配偶体的柔性W避免 引入能够造成PTM的任何残基并维持低免疫原性风险。
[019引存在两类可用于连接P75-NTR至Fc恒定区的接头，实证性接头和衍生自天然蛋白 质的接头。衍生自天然蛋白质的接头可能引入能够造成不利PTM的位点并且归因于其性质， 可能具有更大的引入免疫原性的风险。出于运些原因，期待对实证性接头进一步研究并且 可W将它们广义地划分为柔性或刚性。下文列出重复单元实证性接头的序列，连同它们的 柔性分类：
[0199] ? (G4S)广柔性
[0200] ? Gx-柔性
[0201] ? A(EAAAK)XA-刚性(SEQ ID NO. 14)
[020^ ? (PA)X-刚性
[0203] 鉴于需要柔性W确保与最终Fc-融合蛋白中的多个神经营养性配体（至少包括 NGF、抓NF、NT3和NT4)结合，仅考虑柔性接头。
[0204] 基于运些考虑，构建=种变体:一种使用聚甘氨酸接头的变体和两种使用四甘氨 酸丝氨酸接头的变体。变体均将原始P75-NTR序列中的G209(表达的蛋白质，参见序列3(SEQ ID NO. 3))视为接头序列的部分。此外，变体在与原始P75-NTR Fe-融合蛋白序列USEQ ID NO. 1)中位置222等同的位置含有半脫氨酸至丝氨酸突变。图5中显示变体的接头区域。
[0205] 使用化化ase?，分析图1中所示的每种变体和其余序列的免疫原性潜力。下文在表 1中显示影响Global集合中85种HLA II类同种异型的关键表位的预测免疫原性评分。另外， 表1中还显示受非关键表位影响的同种异型的数目信息。
[0206] 表1:总结计算的关键表位评分
[0207]
[0208] 基于预测的免疫原性和缺少能够PTM的任何位点，变体l(p75_Fc_G4xl)具有S种 变体的最佳特征并且产生W便体内检验。
[0209] 序列 1(沈Q ID N0.1)和序列3(沈Q ID N0.3)p75NTR-Fc对NGF的亲和力
[0210] Biacore忍片W其中蛋白A胺法偶联于流动小室1和2的实验制备。测量与捕获的 p75-Fc结合的NGF的单循环动力学。
[0211] 忍片表面的结合容量(Rmax)取决于配体(融合蛋白）的固定化水平。对于动力学研 究，建议50RU-100RU的Rmax。通过使用p75-Fc和NGF的分子量，可W计算融合蛋白的所需固定 水平。
[0212] Rmax= (NGF分子量/融合蛋白分子量)x固定化水平X化学计量比率:50 = (13,500/ 102,000)x固定化水平XI。
[0213] 因此，要求的固定化水平=(102,000/13,500)x 50 = 378RU。在单一循环动力学之 前，将序列USEQ ID N0.1)和序列3(SEQ ID N0.3)p75NTR-化和NTR-化固定在蛋白A忍片 上。
[0214]使用手工运行，序列化75-Fc(SEQ ID NO.3)捕获到蛋白A忍片的流动小室2上直至 约380抓的所需水平实现。运个过程用22秒注射W流速IOiil/分钟和序列化75-Fc(SEQ ID N0.3)浓度10iig/ml进行，运导致418RU融合蛋白捕获到蛋白A表面上。
[0別引在第一种情况下，现聯lOnM、5nM、2.5nM、1.25nM和0.625nM的NGF浓度。测试运些浓 度，因为融合蛋白的Kd近似处于运个NGF浓度范围内部。
[0216] 单一循环动力学方法设及：
[0217] -W30iil/分钟注射0.625nM NG巧禍获的p75-Fc上持续120秒 [0別引-随后W1.25nM，随后2.5nM、5nM和IOnM注射NGF，重复运个过程
[0219] -在已经注射NGF终浓度后，通过使运行缓冲液化BS-EP)在忍片流过，进行600秒解 离相。
[0220] 一旦完成，通过按30iil/分钟注射IOmM甘氨酸HCl，pH2持续60秒，使忍片再生恢复 其蛋白A表面。
[0221] 随后通过按流速IOiil/分钟WlOiig/ml浓度注射38秒，将序列USEQ ID N0.1)p75-Fc捕获到忍片上。运实现430RU所需水平。随后重复上文描述的单一循环动力学法。
[0222] 数据分析
[0223] 按W下方式使用Biacore T200评价软件VI，分析融合蛋白-NGF结合数据：
[0224] -记录NGF与流动小室2上的融合蛋白结合(Fe = 2)和NGF在对照流动小室1上流过 (Fc = I;单独的蛋白A)的数据。
[0。引-来自化=1的数据随后从化=2扣除W产生"2-r结合数据。
[0226] -随后从全部2-1结合数据扣除注射OnM(单独的皿S-EP运行缓冲液)时2-1结合数 据W控制整个实验期间基线的任何漂移。
[0227] -最后，数据则拟合于1:1结合模型W计算结合特征，包括结合速率化a)、解离速率 化d)和亲和力化D)。
[022引-
[0229] 与捕获的序列1(沈Q ID N0.1)和序列3(沈Q ID N0.3)p75-Fc融合蛋白结合的NGF 的单一循环动力学数据
[0230] 两种融合蛋白与NGF的结合特征均是400pM(SEQ ID N0.1)和360pM(SEQ ID NO. 3)。从运些研究显而易见，序列3(SEQ ID NO. 3)对NGF具有比序列USEQ ID NO. 1)更大 的亲和力。
[0231] 序列1(沈Q ID N0.1)和序列3(沈Q ID N0.3)p75NTR-Fc的体内药物代谢动力学
[0232] 运项研究中使用抵达时重120g-150g的雄性Wistar大鼠（来自英国查尔斯河 (化arles River UK))。每只动物在抵达时受到检查并且外观显得健康。将它们随机分配至 两个笼子之一并且按尾上印记的刺青，对每只大鼠分配一个独特识别编号。在第0日启动研 究前，动物适应于动物设施至少10天。
[0233] 一旦大鼠已经适应其环境，则将它们转移至其中实施全部体内流程的储藏室/流 程室。如1986年内政部动物（科学流程）法案（Home Office Animals(Scientific ProceduresMct)中推荐，通过设定成产生12小时光照-黑暗循环(07:00开灯，19:00关灯） 的巧光灯，对动物给予照明。调节各房间的空气并且常规测量空气溫度(2rc+/-2°c)和相 对湿度。
[0234] 大鼠采食照射的膳食(科学的动物食品与工程学(Scientific Animal Food and 化gineering)，Augy，法国）并且整个研究期间可随意获得高压灭菌水。检查每个批次的膳 食并且常规筛查组成和污染物。将筑窝材料和笼子高压灭菌并且每个笼子独立通风（IVC系 统)。
[0235] 研究如此设计，从而存在如表2中所概述的5个处理组。
[0236] 表2:处理组
[0238] 在第2、4、6、8、12和15日在大致相同的时间（早10点-11:30点），从大鼠尾静脉取得 血液样品并制备血浆。
[0239] 从尾静脉对血液采样
[0240] 将大鼠置于设定在38°C的加溫盒中持续最少5分钟但不超过10分钟，W引起尾静 脉血管舒张并且促进出血。将大鼠束缚于适宜的大小限位器(restrainer)中，使用无菌23 号针头穿刺尾静脉并且允许血液流入CB300微量采血管(Sarste化16，444)。在全部时间点 从每只大鼠采集最少I(K)山和最多30化1的血液。选择不同部位W反复采样并且大鼠在整个 手术期间平静。大鼠良好耐受反复血液采样，无渺紫迹象。采集的血液用来制备血浆。
[0241] 来自屯、脏的最终血液样品
[0242] 在异氣烧麻醉药作用下通过屯、脏穿刺，用Terumo Iml注射器和23号针头取得最终 血液样品（termina 1 b 1 ood samp 1 eS)。随后通过颈椎脱白法处死动物。采集的血液用来制 备血清。
[0243] 血浆制备
[0244] 将含有来自尾静脉的血液的微量采血管溫和地颠倒几次W确保与抗凝血剂(钟-EDTA)良好混合。采血管随后置于冰上，之后W2700X g离屯、10分钟，并且将血浆等分入聚丙 締管(每个时间点每只动物两份等分试样，例外是在第2日，此时仅制备一个等分试样）。全 部血浆样品立即冷冻并胆存在-80°C直至需要。
[0245] 血清制备
[0246] 允许在第15日通过屯、脏穿刺采集的血液在室溫在聚丙締管中凝固2小时至3小时 (最长3小时）。随后将凝固的血液W4000X g离屯、5分钟并且将血清等分到聚丙締管(每只动 物两份等分试样）。血清样品立即冷冻并胆存在-80°C。
[0247] 血浆p75NTR-Fc的测定
[0248] 使用针对p75NTR(R&D Systems)和IgGlFc ELISA(R&D Systems)的改良化ISA作为 确定完整P75NTR-FC总血浆浓度的手段，测量血浆P75NTR-FC。
[0249] 测定序列1(沈Q ID N0.1)和序列3(沈Q ID N0.3)p75NTR-Fc的药物代谢动力学。
[0巧0]
["i-u I J 二口 k巴
[0巧2] 与序列3(沈9 10側.3)相比，通过移除序列1(沈9 10側.1)975饥'1?斗(3的〇分泌酶 切割位点和丫分泌酶切割位点，则显著地改善P75NTR-FC的PK及随后改善效力，如慢性治疗 后通过疼痛评分所评估。序列1 (SEQ ID NO. 1 )p75NTR-Fc的a分泌酶切割位点和丫分泌酶切 割位点使得运种化合物不适合作为治疗疼痛和与神经营养因子生物学有关的其他病变(例 如呼吸道疾病)的体内药物。
[0巧3] 序列3(569 10^.3)是稳定的，与序列1(569 10^.1)相比，具有改善的?1(/抑特 征和更大的神经营养因子亲和力。
[0254] ?75饥'3斗。(沈9 10備.3)有镇痛性。
[0巧5] 运项研究的目的是研究口75卿3斗(3(569 10顯.3)长期暴露对大鼠中舰乙酸单钢 (MIA)所致骨关节炎(OA)的疼痛效力的影响。
[0256] 先前，我们还已经证实，可W通过使用双足平衡测痛仪（incapacitance tester) 测量静态承重进行自发性疼痛的评定并且运种与膝部组织病理学相关。使用疼痛新治疗药 的临床前研究已经因其引起数据偏倚的能力受到批评。为了解决运个问题，随机选择左膝 和右膝用于诱导0A，并且因每日执行体内任务的全部操作员不知道每个膝部的状态。一般 从文献得知，OA的诱导仅在右膝实施，但是在此前研究中，我们发现无论使用什么时间点或 MIA剂量，在左膝与右膝中诱导OA之间无恒定差异。
[0巧7] MIA的制备
[0258] 按0.3mg/50]il ETF-PBS(用于每次关节内注射的体积）制备MIA，运等同于6mg/ml 母液。称量出302mg MIA并溶解于中50.3ml ETF-PBS。提前一天制备MIA并且避光胆存在4°C 直至需要。
[0巧9] 动物
[0260]运项研究中使用抵达时重110g-130g的44只雄性Wistar大鼠（来自英国查尔斯 河）。每只动物在抵达时受到检查并且外观显得健康。将它们随机分配至两个笼子之一并且 按尾上的刺青，对每只大鼠分配一个独特识别编号。在第0日启动研究前，动物适应于动物 设施至少10天。一旦大鼠已经适应其环境，则将它们转移至其中实施全部体内流程的储藏 室/流程室。如1986年内政部动物(科学流程)法案中推荐，通过设定成产生12小时光照-黑 暗循环(07:00开灯，19:00关灯)的巧光灯，对动物给予照明。调节各房间的空气并且常规测 量空气溫度(2 rc+/-2 °C)和相对湿度。
[0261] 大鼠采食照射的膳食(科学的动物食品与工程学，Augy,法国）并且可随意获得高 压灭菌水。检查每个批次的膳食并且常规筛查组成和污染物。将筑窝材料和笼子高压灭菌 并且每个笼子独立通风（IVC系统）。
[0262] 实验设计
[0263] 研究如此设计，从而存在5组动物:对照人抗体(n = 6)、0.3mg/kg P75NTR-FC (SEQ ID N0.3)、lmg/kg p75NTR-Fc(沈Q ID N0.3)、3mg/kg p75NTR-Fc(沈Q ID N0.3)和3mg/kg PG-007(辉瑞他尼珠单抗(Tanezumab)的生物仿制药抗NGF抗体）。
[0264] 每5天通过皮下注射给药抗体和975饥'3斗(3(5日9 10^.3)，持续25天。
[0265] 在第-2日清晨，测量体重和从尾静脉取得基线血液样品。在大致相同的时间，在 第-1日，测量基线静态承重。在第0日，再次在大致相同的时间，将全部大鼠用相应的抗体或 P75NTR-FC融合蛋白处理。S小时后，向全部动物给予关节内注射0.3mg MIA至一个膝部 化TF-PBS注入对侧膝部）。
[0%6] 处理的随机化
[0267] 在启动本研究之前，将大鼠称重并且每个笼两只大鼠随机分配至处理组，从而每 个组中动物的平均体重大致相等。除每只大鼠分配特定处理组之外，还实施进一步随机化， 从而将每只大鼠的左膝或右膝用MIA注射(来自每只大鼠的对侧膝部用ETFPBS注射）。使用 Mac用微软Excel (版本14.1.1)中的随机数字发生器生成处理组分配和每只大鼠的哪个膝 部接受治疗。不接触动物的员工实施随机化流程和分配。
[0268] 对每只动物标记两个7ml聚丙締小瓶W指示左膝或右膝（总计88个小瓶）。两个人 (一个人评定并检查主要随机化工作薄并且一个人等分关节内注射用溶液)准备运88个小 瓶。等分过程依次实施，从而首先灌装MIA小瓶，接着剩下的小瓶用ETF-PBS灌装(运是用于 每只动物的对侧膝部小瓶）。在整个体内研究期间，科学家不知道全部动物的处理状态。
[0269] 动物手术
[0270] 膝部的关节内注射
[0271] 全部大鼠均使用Boyles装置，通过吸入异氣烧麻醉。剔除每只动物的两个膝部上 的毛发并且膝部用乙醇擦拭。使用0.5ml无菌Becton Dickinson Micro-Fine膜岛素注射器 连同随附的27号（27G)针头，用ETF-PBS中的SOiil 0.3mg MIA或单独ETF-PBS经骸初带内注 射每只膝部。
[0272] 自发性疼痛的评定
[0273] 通过使用双足平衡测痛仪(林顿仪器化inton Instruments),英国）测量左后肢和 右后肢的承重，测定每只动物的自发性疼痛。将大鼠置于双足平衡测痛仪上适当大小的有 机玻璃动物盒中，从而它们后足坐在分离的传感器上。盒的大小允许大鼠在不挤压的情况 下舒适地坐下，但是类似地不允许它有足够空间转身。一旦大鼠坐稳并平静，记录每个肢体 的承重5秒并且记录W克计由双后肢发出的平均力量。在每个时间点测定每只大鼠后爪的 重量分布5次(我们事先已经展示其正确性），并且计算5个读数的均数。通过右侧肢体的重 量除W双后肢的总重量，将各个承重数据换算成重量分布。
[0274] MIA诱导OA后的自发性疼痛测量
[0275] 使用双足平衡测痛仪测量经过后肢的重量分布，评定自发性疼痛。在基线和在MIA 处理后的3周实施评定。
[0276] 数据在图6中显示并且作为总重量对后肢的比例显示。
[0277] 对于从未用过药的动物，后肢上重量比例之间不存在统计显著差异并且理论期望 值是0.5。
[0278] 对于对照抗体处理的动物，与未处理的肢体相比，在处理的肢体上存在统计显著 更少的重量(39%与61%)。在用抗NGF抗体(PG-007他尼珠单抗生物仿制药3mg/kg)处理的 动物和用P75NTR-FC(沈Q ID N0.3)按0.3mg/kg和Img/kg处理的那些动物中，在处理的后肢 体上重量比例之间不存在统计(P<〇.01)显著差异并且理论期望值为〇.5(双后肢之间均匀 分布)在测量的任何时间点。与相应的对照相比，3mg/kg的P75NTR-FC(SEQ ID NO.3)的镇痛 作用甚至更统计显著(P<〇.05)。
[02巧]从运些研究显而易见，P75NTR-化（SEQ ID NO.3)在OA的MIA大鼠模型中具有镇痛 性。p75NTR-Fc(SEQ ID NO.3)的镇痛作用比针对抗NGF抗体(PG-007:生物相似的辉瑞抗NGF 抗体他尼珠单抗)在相似剂量皮下3mg/kg时观察到的镇痛作用更大。
[0280] P75NTR-FC分子序列3和序列15对各个神经营养因子的亲和力的改善在意料之外 [0%1]从文献和现有技术普遍认为，对p75神经营养因子受体的亲和力低并且对全部神 经营养因子具有约InM的相似亲和力（IcMm等人，2012实验细胞研究化XP Cell Res)318 (11): 1221-8)。另外，阿波罗生命科学（Apollo Life Sciences)(分子及其嵌合分子US 20090232808A1)的现有技术进一步例示p75神经营养因子受体对各种神经营养因子的亲和 力的相似性。"NGF是一种作为427个氨基酸糖蛋白合成的I型膜蛋白，运种糖蛋白包含一个 28氨基酸信号肤。NGFW相等的亲和力结合全部神经营养因子"。
[0282] 从Biacore等离子体共振研究中，我们已经证实使用GGG接头间隔团与人IgGlFc偶 联的序列3和序列15的结合亲和力显著变化。
[0283] 表3:序列3和序列15对每种神经营养因子的Biacore亲和力 「W841
[0285] 降低等电点（pi):
[0286] 序列3和在阿波罗生命科学(Apollo Life Science)现有技术中公开的那些序列 理论上具有4.11的pi。然而，运两类分子显著糖基化，导致实际上Pl处于3-4范围内。
[0287] 序列15具有4.23的理论Pl并且比其他P75NTR较少糖基化。从而，Pl处于4-5范围 内。运提供胜过序列3和阿波罗生命科学现有技术中先前公开的序列的显著优点(配制改善 和分子结构的变异性较小，原因在于糖基化位点和糖基化数量的变异）。
[0288] 本发明在范围方面不受本文中描述的具体实施方案限制。实际上，除了本文描述 的那些修改之外，本发明的各种修改将因前文描述和附图是本领域技术人员显而易见。运 类修改意在落入所附权利要求的范围内。另外，如果适宜，本文所述的全部实施方案将视为 与任何和全部其他一致性实施方案广义适用和与之可组合。
[0289]本文中援引多种出版物是，其公开内容通过引用的方式完整并入。
【主权项】
1. 一种P75NTR神经营养因子结合蛋白（NBP)-Fc融合蛋白，所述融合蛋白包含： (a) p75NTR(NBP)部分；和 (b) 免疫球蛋白Fc部分。2. 根据权利要求1所述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白，其中所述p75NTR(NBP)部分和Fc部 分经接头连接。3. 根据权利要求2所述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白，其中所述接头包含式Gx的肽，其中X 是1、2、3、4、5或 6。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白，其中所述p75NTR (NBP)是人 p75NTR(NBP)。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白，其中所述Fc是人Fc。6. 根据任何一项前述权利要求所述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白，所述融合蛋白包含 SEQ ID NO.3中所述的氨基酸序列或由SEQ ID NO.3中所述的氨基酸序列组成。7. 根据权利要求1至5中任一项所述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白，所述融合蛋白包含 SEQ ID NO. 15中所述的氨基酸序列或由SEQ ID NO. 15中所述的氨基酸序列组成。8. 根据任何一项前述权利要求所述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白，其中所述p75NTR (NBP)以通过表面等离子体共振在20°C所测量的约O.OlnM至约50nM之间的结合亲和力(Kd) 与NGF、BDNF、NT3或NT4/5的任一者结合。9. 根据任何一项前述权利要求所述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白，用于治疗疼痛或疼痛 症状的用途。10. -种核酸分子，所述核酸分子编码根据权利要求1至8中任一项所述的p75NTR (NBP)-Fc融合蛋白，任选地还包括编码信号序列。11. 一种可复制表达的载体，所述载体用于转染细胞、任选地用于转染哺乳动物细胞， 所述载体包含根据权利要求10所述的核酸分子。12. 根据权利要求11所述的可复制表达的载体，其中所述载体是病毒载体。13. -种宿主细胞，所述宿主细胞携带根据权利要求10所述的核酸分子。14. 根据权利要求10所述的核酸分子或根据权利要求11或12中任一项所述的载体，用 于治疗疼痛或疼痛症状的用途。15. 根据权利要求1至8或权利要求9中任一项所述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白，或根据 权利要求10至14中任一项所述的核酸或载体，其中所述p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白或核酸分 子或载体在组合中与第二药理活性化合物组合时分别、依次或同时使用。16. -种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至8或权利要求9中任一项所 述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白或根据权利要求11至14所述的核酸分子或载体，和药学上可 接受的载体和/或赋形剂。17. -种试剂盒，所述试剂盒包含： (a) 根据权利要求1至8或权利要求9中任一项所述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白或根据 权利要求10至14所述的核酸分子或载体，和 (b) 针对以下任一种或多种情况向个体给药有效量的所述p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白、 核酸分子、载体或药物组合物的说明书:预防或治疗疼痛和/或疼痛症状或用于缓解疼痛 和/或疼痛症状、控制疼痛和/或疼痛症状、减少疼痛和/或疼痛症状的发生率，或延迟疼痛 和/或疼痛症状形成或进展。18. -种治疗和或预防个体中疼痛和或疼痛症状的方法，所述方法包括向所述个体给 药治疗有效量的根据权利要求1至8或权利要求9中任一项所述的p75NTR(NBP)-Fc融合蛋白 或根据权利要求10至14所述的核酸分子或载体，任选地进一步包括药学上可接受的载体。
【文档编号】C07K14/705GK105873943SQ201480060027
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2014年9月18日
【发明人】S·韦斯特布鲁克
【申请人】利维塞普特有限公司