一种羟甲香豆素的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种羟甲香豆素的药物组合物及其医药用途，本发明提供的羟甲香豆素的药物组合物中含有羟甲香豆素和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，羟甲香豆素、化合物(Ⅰ)单独作用时，对高脂血症具有治疗作用；羟甲香豆素和化合物(Ⅰ)联合作用时，对高脂血症的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗高脂血症的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种羟甲香豆素的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及羟甲香豆素的新用途，具体涉及羟甲香豆素的药 物组合物及其在治疗高脂血症中的应用。
【背景技术】
[0002] 羟甲香豆素为香豆素衍生物，能松弛奥狄括约肌，具有较强的解痉、镇痛作用，同 时也能温和、持续地促进胆汁分泌，加强胆囊收缩和抑菌作用，具有明显的利胆作用，有利 于结石排出，对胆总管结石有一定排石效果。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种羟甲香豆素的药物组合物，该药物组合物中含有羟甲 香豆素和一种天然产物，羟甲香豆素和该天然产物可以协同治疗高脂血症。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] 一种具有下述结构式的化合物a)，
[0006
[0007] -种羟甲香豆素的药物组合物，包括羟甲香豆素、如权利要求1所述的化合物（I) 和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0008] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将巴戟天粉碎，用70~80%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇萃取物 用大孔树脂除杂，先用15 %乙醇洗脱6个柱体积，再用70 %乙醇洗脱10个柱体积，收集70 % 洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶 分离，依次用体积比为80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d) 步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、15:1和2:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体 积百分浓度为72 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得 到纯的化合物(I)。
[0011] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用75%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为DlOl型大孔吸附树脂。
[0013]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备治疗高脂血症的药物中的应用。
[0015] 上述羟甲香豆素的药物组合物在制备治疗高脂血症的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点：
[0017]本发明提供的羟甲香豆素的药物组合物中含有羟甲香豆素和一种结构新颖的天 然产物，羟甲香豆素和该天然产物单独作用时，具有治疗高脂血症作用；二者联合作用时， 治疗高脂血症效果更好，可以开发成治疗高脂血症的药物。本发明与现有技术相比具有突 出的实质性特点和显著的进步。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0021]分离方法：（a)将巴戟天(2kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取(20LX3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水饱和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 正丁醇萃取物用DlOl型大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱10 个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (8个柱体积）、30:1 (8个柱体积）、15:1 (8个柱 体积)和5:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分3用 正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1 (8个柱体积）、15:1 (10个柱体积)和2:1 (5个柱 体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为72%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)(纯度大于98% )。
[0022] 结构确证:HR-ESI-MS显示[Μ+Na]+为m/z 591.2604,结合核磁特征可得分子式为 C32H4Q〇9，不饱和度为 13。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρπι，DMSO-Cl6，400MHz): H-2 (5 · 86，dd，J = 10.0,2.0)，H-3(6.56，ddd，J=10.0,4.8,2.4)，H-4(2.63，m)，H-4(3.10，m)，H-6(5.47，d，J =6.0)，H-7(2.04，m)，H-7(2.77，m)，H-8(1.94，m)，H-9(2.84，m)，H-11(1.60，m)，H-11 (2.60，m)，H-12(2.04，m)，H-12(2.77，m)，H-15(5.41，dd，J = 9.9,8.0)，H-16(2.76，dd，J = 11 ·2,9·9)，H-16(3.02，dd，J=ll ·2,8·0)，H-18(4.65，d，J=ll .6)，H-18(5.02，d，J = 11.6)，H-19(1.19，s)，H-21(1.71，s)，H-22(5.21，dd，J=13.2,2.9)，H-23(2.59，m)，H-23 (3.06，m)，H-27(1.98，s)，H-28(1.81，s)，15-0Ac(2.17，s)，18-0Ac(2.06，s);核磁共振碳谱 数据S c(ppm，DMS〇-d6,125MHz) :204.0(C，1-C)，128.1 (CH，2-C)，145.8(CH，3-C)，33.5(CH2， 4-C)，135.2(C，5-C)，125.9(CH，6-C)，26.3(CH2,7-C)，38.2(CH，8-C)，36.7(CH，9-C)，51.1 (C，10-C)，23.6(CH2，11-C)，26.4(CH2，12-C)，57.9(C，13-C)，79.8(C，14-C)，77.1(CH，15-C)，43.0(CH2，16-C)，53.8(C，17-C)，65.1(CH2，18-C)，19.1(CH 3，19-C)，69.2(C，20-C)，19.3 (CH3,21-C)，81.7(CH，22-C)，34.5(CH2,23-C)，150.8(C，24-C)，121.7(C，25-C)，166.8(C， 26-C)，13.1(CH 3,27-C)，20.6(CH3,28-C)，171.1(C，15-0Ac)，21.7(CH3，15-0Ac)，171.3(C， 18-OAc)，21 ·8(CH3，18-OAc)。IR光谱表明该化合物含有羟基(3260cm-1)，双键（I640cm- 1)和 酯基（1740cm-3基团。1H-NMR 谱显示四个甲基信号[5!11.19(3!1，8，]\^-19)，1.71(3!1，8，]\^- 21) ，1.98(3!1，8，]\^-27)和1.81(3!1，8，]\^-28)]，两个乙酰甲基[5!12.17(3!1，8，15-(^(3)和 2.06(3!1，8，18-(^(3)]，一个含氧亚甲基[5!14.65(1!1，(1，了=11.6!^，!1-18)和5.02(1!1，(1，了 = 11.6抱，!1-18)]，三个烯烃次甲基质子信号[5!15.86(1!1，(1(1，1=10.0,2.0抱，!1-2)，6.56(1!1， (1(1(1，了=10.0,4.8,2.4!^，!1-3)和5.47(1!1，(1，了 = 6.0取，!1-6)]，两个含氧次甲基[3!15.41 (lH，dd，J = 9.9,8.OHz，H-15)和5.21(lH，dd，J = 13.2，2.9Hz，H-22)] C313C-NMR谱显示32个共 振碳信号，六个甲基(两个乙酰甲基），七个亚甲基(一个含氧亚甲基），七个次甲基(三个烯 属次甲基和两个含氧次甲基）以及十二个季碳(一个酮羰基，三个酯羰基，三个烯烃季碳和 三个含氧季碳）。上述核磁数据表明该化合物为六元环结构。核磁数据表明该化合物含有一 个二甲基取代的 α，β-不饱和-γ-内酯结构 WC81.7(C-22)，34.5(C-23)，150.8(C-24)， 121.7(025)，166.8(026)，13.1(027)和20.6(〇28);3!15.21(1!1，(1(1，了=13.2,2.9抱，!1- 22) ，2.59(lH，m，H-23)，3.06(lH，m，H-23)，1.98(3H，s，H-27WP1.81(3H，s，H-28)]，一fl-氧代-2,5二烯结构[50204.0(01)，128.1(02)，145.8((：-3)，135.2((：-5)和125.9((：-6)]， 以及一个环氧结构[SC53.8(C-17)和69.2((：-20)]。圓8(：谱中，H-15和H 2-18与相应乙酰碳(δ C171.1和171.3)的相关性表明015和(：-18位各连有一个乙酰氧基。1?(^3￥谱中!1-15与!1-18 (δΗ5.02)的相关性表明C-15位的乙酰氧基为α构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和ROESY谱，以 及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试 验确定，理论值与实验值基本一致。
[0023]该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0024]
6
[0025] 实施例2:药理作用
[0026] 本实施例给以一定量的高脂饲料喂饲建立高脂血症动物模型，通过血液脂质和血 液流变学的测定，观察药物的降脂作用。
[0027] 1、材料与方法
[0028] 1.1动物
[0029]雄性SD大鼠60只，体重(200 ± 20)g，由湖北中医学院动物室提供。
[0030] 1.2试剂与样品
[0031 ]羟甲香豆素购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。 非诺贝特，由广州威尔曼药业有限公司生产。血脂测定试剂盒，由浙江东瓯生物工程公司提 供;胆固醇，北京市海淀区微生物培养基制品厂生产;胆盐、硫氧嘧啶，上海化学试剂采购供 应站;猪油，市售。
[0032] 1.3仪器
[0033] TBA-40FA全自动生化分析仪，日本TOSHIBA公司产品；FASC0-3010全自动血流变快 测仪，重庆大学维多生物工程研究所产品。
[0034] 1.4大鼠分组及模型制备
[0035] 高胆固醇血症造型组膳食配制：常规膳加20 %胆固醇，10 %猪油，0.1 %甲基硫氧 嘧啶，0.2 %胆酸钠。自造模第1天起，羟甲香豆素组每天给与400mg/kg羟甲香豆素拌入饲料 中；化合物（I)组组每天给与400mg/kg化合物（I)组拌入饲料中；羟甲香豆素与化合物（I)组 合物组每天给与200mg/kg羟甲香豆素和200mg/kg化合物（I)拌入饲料中。阳性对照组每日 给予非诺贝特26.8mg/kg，另设空白及高脂对照组（模型对照组），分别给予常规膳及高脂 膳。各组大鼠每天每鼠定量给予各自的膳食20g，饮水不限，饲喂1个月。
[0036] 1.5大鼠血脂水平测定实验
[0037] 各组动物在造型1个月后，用水合氯醛腹腔注射进行麻醉，开放式心脏采血，根据 血脂测定试剂盒，测定TG，TC，HDL-C，LDL-C。
[0038] 1.6大鼠血液流变学指标的检测实验
[0039] 各组动物在造模1个月后，用水合氯醛腹腔注射进行麻醉，开放式心脏采血，测定 血液流变学指标。
[0040] 1.7统计学方法
[0041] 实验数据用均数土标准差（上S)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
[0042] 2、实验结果
[0043] 2.1 对大鼠 了6，1'(：，0^-(：，!101^-(：水平(111111〇1.1/1)的影响
[0044] 与空白对照组比，模型组大鼠 TG、TC、LDL-C水平显著升高(P<0.01 )，HDL-C水平显 著降低(p<0.01)，说明造模成功。与模型对照组比，阳性对照组大鼠 TG、TC、LDL-C水平显著 降低(P<〇.〇l)，HDL_C水平显著升高（P<0.01);与模型对照组比，羟甲香豆素组、化合物 (I)组大鼠 TG、TC、LDL-C水平降低（P < 0.05)，HDL-C水平升高（P < 0.05);与模型对照组相 比，羟甲香豆素与化合物（I)组合物组大鼠 TG、TC、LDL-C水平显著降低(P < 0.01 )，HDL-C水 平显著升高(Ρ<〇.〇1)。
[0045] 试验结果见表1。
[0046] 2.2对大鼠血液流变学的影响
[0047]与空白对照组比，模型组大鼠血浆比粘度(mpas)升高(P < 0.05 )，说明造模成功。 与模型对照组比，阳性对照组大鼠血浆比粘度降低(P<〇.05);与模型对照组比，羟甲香豆 素与化合物（I)组合物组大鼠血浆比粘度降低(P<〇.01)。
[0048] 试验结果见表1。
[0049] 表1对高脂血症模型大鼠血脂水平和血液流变学的影响（J±s)
L0051J 上述结果表明，羟甲香豆素、化合物（I)单独作用时，对高脂血症具有治疗作用；羟 甲香豆素和化合物（I)联合作用时，对高脂血症的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗高 脂血症的药物。
[0052]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物α)，2. -种羟甲香豆素的药物组合物，其特征在于:包括羟甲香豆素、如权利要求1所述的 化合物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的羟甲香豆素的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载 体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载 体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的羟甲香豆素的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、 胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射 剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将巴 戟天粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗 脱10个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、15:1 和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为72%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用75%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗高脂血症的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的羟甲香豆素的药物组合物在制备治疗高脂血症的药物中 的应用。
【文档编号】A61K31/37GK105859819SQ201610332765
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年5月19日
【发明人】蒋灵锟
【申请人】蒋灵锟