一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ace抑制肽的方法
【专利摘要】一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，将魔芋飞粉加入到水中，溶解后调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀；再将魔芋蛋白沉淀加水溶解后，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的温度为25?45℃、pH值为3?8，然后加入胰凝乳蛋白酶进行酶解，得到酶解液；将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液；将上清液经超滤装置后收集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。本发明对实现魔芋飞粉有效利用，生产其高附加值产品具有重要意义。本发明方法工艺路线简单易行，操作简单，所使用的设备为成熟设备，投资成本较低，ACE抑制肽回收率高。
【专利说明】
-种膜凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备A化抑制化的方法
技术领域
[0001] 本发明属于ACE抑制肤制备领域，具体设及一种膜凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备 ACE抑制肤的方法。
【背景技术】
[0002] 高血压是一种W动脉血压持续升高为主要表现的慢性疾病，常引起屯、、脑、肾等重 要器官的病变并出现相应的后果。高血压患者一般需要长期服用降血压药物，运可能会导 致出现咳嗽、肾功能减退、蛋白尿、肝功能异常、血管神经性水肿等不良反应。因此天然、有 效、无副作用、可长期服用的ACE抑制肤成为高血压药物方面研究的热点。目前，在ACE抑制 肤来源研究方面，仅是从豆巧、大豆、酪蛋白、牛乳、麦胚蛋白、牡颇等原料中发现了ACE抑制 肤。而有关W魔芋为原料制备ACE抑制肤的研究甚少。
[0003] 我国是魔芋生产大国，全国年产魔芋飞粉1500-2000吨。魔芋飞粉含蛋白质20%左 右，目前对魔芋的利用主要集中于魔芋精粉(葡甘聚糖），而魔芋飞粉大多W低价作为饲料 或干燥剂出售，利用价值低。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种膜凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肤的方法， 提高魔芋飞粉的利用价值，同时拓宽了 ACE抑制剂的来源。
[0005] 为实现上述目的，本发明所采取得技术方案是：
[0006] -种膜凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肤的方法，包括W下步骤：
[0007] 1)将魔芋飞粉加入到水中，溶解后调节抑值至等电点，离屯、得魔芋蛋白沉淀;再将 魔芋蛋白沉淀加水溶解后，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的溫度为25-45°C、pH值 为3-8，然后加入膜凝乳蛋白酶进行酶解，得到酶解液；
[000引2)将酶解液灭酶后调节抑值为3.8后离屯、，收集上清液;将上清液经超滤装置后收 集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肤。
[0009] 步骤1)中将魔芋飞粉加入到水中时，魔芋飞粉与水的质量比为1:50。
[0010] 步骤1)和2)中pH值均是采用盐酸调节的。
[ocm]步骤1)中魔芋蛋白溶液的质量浓度为1-10%。
[0012] 步骤1)中每克魔芋蛋白溶液重加入膜凝乳蛋白酶的量为3000-8000U。
[0013] 步骤1)中酶解的时间为120-300min。
[0014] 步骤1)中离屯、的速率为3000-4000巧m，时间20-40min。
[0015] 步骤2)中灭酶具体是在9(TC下保溫至少lOmin。
[0016] 步骤2)中离屯、的转速为8000-10000巧m，时间为15-30min。
[0017]将步骤2)得到ACE抑制肤还经过DA-201大孔吸附树脂脱盐纯化。
[0018] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0019] 本发明W魔芋飞粉为原料，经膜凝乳蛋白酶进行酶解后，得到酶解液，将酶解液灭 酶后得至IjACE抑制肤，本发明得到的ACE抑制肤的抑制率高达65% W上，说明制备得到了ACE 抑制肤，并且活性较高，可制成各种制剂。本发明利用魔芋飞粉制备了 ACE抑制肤，一方面将 低价值的魔芋飞粉转化为具有较高价值的ACE抑制肤，变废为宝，充分利用了资源，拓宽了 魔芋飞粉的开发利用领域，另一方便也拓宽了 ACE抑制肤的来源;本发明制备方法简单，利 于大量生产，并且成本低。本发明对实现魔芋飞粉有效利用，生产其高附加值产品具有重要 意义。本发明方法工艺路线简单易行，操作简单，所使用的设备为成熟设备，投资成本较低， ACE抑制肤回收率高。
[0020] 进一步的，将得到的酶解液加热至90°C，保溫至少lOmin，W使其中的膜凝乳蛋白 酶灭活，再进行离屯、。
[0021] 进一步的，将步骤2)得到ACE抑制肤还经过DA-201大孔吸附树脂脱盐纯化，可W得 至崎纯度的ACE抑制肤。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。
[0023] 本发明所采用的ACE抑制活性的测定，具体步骤为：
[0024] 按要求配制所需试剂，如表1所示，将各试剂加入到试管中，于37°C水浴中反应 30min，反应结束后，加入Imol/L盐酸终止反应(样品C需要提前加入盐酸），然后向试管中加 入1.9mL的乙酸乙醋，震荡15s，静置5min，吸取ImL的乙酸乙醋层，于100°C的烘箱内蒸干， 40min后取出冷却，再将其重新溶解于3mL的去离子水中，于波长228nm处测定吸光度。
[00巧]表1ACE抑制率检测方法
[0026]
[0027] ACE抑制率计算公式为：
[002引
[0029] 式中；
[0030] Aa:是反应中ACE抑制剂及ACE同时存在的吸光度；
[0031] Ab:是反应中不加 ACE抑制剂的吸光度；
[0032] Ac:是ACE和扭正空白反应的吸光度。
[0033] 实施例1
[0034] 1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1:50进行混合溶解，边揽拌边滴加盐酸溶液(浓 度为l.Omol/L)，使抑值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离屯、机在3000巧111下离 屯、40min后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；
[0035] 2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为1%的魔芋蛋白溶液;采用磁力加热 揽拌器进行揽拌，溫度为30°C，揽拌速度为80化pm，边揽拌边滴加盐酸溶液调抑值至7，加入 膜凝乳蛋白酶，酶解ISOmin，得到酶解液;其中，每克魔芋蛋白溶液重加入膜凝乳蛋白酶的 量为3000U。
[0036] 3)将酶解液置于90°C恒溫水浴锅中保持IOmin灭酶活，之后自然冷却至室溫，将酶 解液调至抑值为3.8，在1000化pm离屯、20min，收集上清液；
[0037] 4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肤。经ACE抑制活性的测定，其 对ACE活性的抑制率> 60 %。
[003引实施例2
[0039] 1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1:50进行混合溶解，边揽拌边滴加盐酸溶液，使 pH值达到3.8,魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离屯、机在4000巧m下离屯、20min后，弃去上 清液，得魔芋蛋白沉淀；
[0040] 2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为10%的魔芋蛋白溶液;采用磁力加 热揽拌器进行揽拌，溫度为35 °C，揽拌速度为80化pm，边揽拌边滴加盐酸溶液调抑值至7.5， 加入膜凝乳蛋白酶，酶解210min，得到酶解液;其中，每克魔芋蛋白溶液重加入膜凝乳蛋白 酶的量为4000U。
[0041] 3)将酶解液置于90°C恒溫水浴锅中保持IOmin灭酶活，之后自然冷却至室溫，将酶 解液调至抑值为3.8，在1000化pm离屯、15min，收集上清液；
[0042] 4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肤。经ACE抑制活性的测定，其 对ACE活性的抑制率>55%。
[0043] 实施例3
[0044] 1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1:50进行混合溶解，边揽拌边滴加盐酸溶液，使 pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离屯、机在3500巧111下离屯、35111111后，弃去上 清液，得魔芋蛋白沉淀；
[0045] 2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为4%的魔芋蛋白溶液;采用磁力加热 揽拌器进行揽拌，溫度为40°C，揽拌速度为80化pm，边揽拌边滴加盐酸溶液调抑值至8，加入 膜凝乳蛋白酶，酶解240min，得到酶解液;其中，每克魔芋蛋白溶液重加入膜凝乳蛋白酶的 量为6000U。
[0046] 3)将酶解液置于90°C恒溫水浴锅中保持IOmin灭酶活，之后自然冷却至室溫，将酶 解液调至抑值为3.8，在9000巧m离屯、30min，收集上清液；
[0047] 4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肤。经ACE抑制活性的测定，其 对ACE活性的抑制率>65%。
[004引实施例4
[0049] 1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1:50进行混合溶解，边揽拌边滴加盐酸溶液，使 混合液的pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离屯、机在3000巧m下离屯、40min 后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；
[0050] 2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为7%的魔芋蛋白溶液;采用磁力加热 揽拌器进行揽拌，溫度为37°C，揽拌速度为80化pm，边揽拌边滴加盐酸溶液调抑值至3,加入 膜凝乳蛋白酶，酶解300min，得到酶解液;其中，每克魔芋蛋白溶液重加入膜凝乳蛋白酶的 量为8000U。
[0051] 3)将酶解液置于90°C恒溫水浴锅中保持IOmin灭酶活，之后自然冷却至室溫，将酶 解液调至抑值为3.8，在9500巧m离屯、25min，收集上清液；
[0052] 4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肤。经ACE抑制活性的测定，其 对ACE活性的抑制率> 60 %。
[0化3] 实施例5
[0054] 1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1:50进行混合溶解，边揽拌边滴加盐酸溶液，使 混合液的pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离屯、机在4000巧m下离屯、30min 后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；
[0055] 2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为9%的魔芋蛋白溶液;采用磁力加热 揽拌器进行揽拌，溫度为37°C，揽拌速度为80化pm，边揽拌边滴加盐酸溶液调抑值至5,加入 膜凝乳蛋白酶，酶解210min，得到酶解液;其中，每克魔芋蛋白溶液重加入膜凝乳蛋白酶的 量为7000U。
[0056] 3)将酶解液置于90°C恒溫水浴锅中保持IOmin灭酶活，之后自然冷却至室溫，将酶 解液调至抑值为3.8，在8000巧m离屯、25min，收集上清液；
[0057] 4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肤。经ACE抑制活性的测定，其 对ACE活性的抑制率> 50 %。
[0化引实施例6
[0059] 1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1:50进行混合溶解，边揽拌边滴加盐酸溶液，使 混合液的pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离屯、机在4000巧m下离屯、30min 后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；
[0060] 2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为9%的魔芋蛋白溶液;采用磁力加热 揽拌器进行揽拌，溫度为37°C，揽拌速度为80化pm，边揽拌边滴加盐酸溶液调抑值至5,加入 膜凝乳蛋白酶，酶解120min，得到酶解液;其中，每克魔芋蛋白溶液重加入膜凝乳蛋白酶的 量为7000U。
[0061] 3)将酶解液置于90°C恒溫水浴锅中保持IOmin灭酶活，之后自然冷却至室溫，将酶 解液调至抑值为3.8，在8000巧m离屯、25min，收集上清液；
[0062] 4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肤。
【主权项】
1. 一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括以下步 骤： 1) 将魔芋飞粉加入到水中，溶解后调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀;再将魔芋 蛋白沉淀加水溶解后，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的温度为25-45°C、pH值为3-8，然后加入胰凝乳蛋白酶进行酶解，得到酶解液； 2) 将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液;将上清液经超滤装置后收集滤 液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。2. 根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特 征在于，步骤1)中将魔芋飞粉加入到水中时，魔芋飞粉与水的质量比为1:50。3. 根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特 征在于，步骤1)和2)中pH值均是采用盐酸调节的。4. 根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特 征在于，步骤1)中魔芋蛋白溶液的质量浓度为1-10%。5. 根据权利要求4所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特 征在于，步骤1)中每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为3000-8000U。6. 根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特 征在于，步骤1)中酶解的时间为120-300min。7. 根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特 征在于，步骤1)中离心的速率为3000-4000rpm，时间20_40min。8. 根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特 征在于，步骤2)中灭酶具体是在90°C下保温至少lOmin。9. 根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特 征在于，步骤2)中离心的转速为8000-1 OOOOrpm，时间为15-30min。10. 根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其 特征在于，将步骤2)得到ACE抑制肽还经过DA-201大孔吸附树脂脱盐纯化。
【文档编号】C12P21/06GK105838766SQ201610311392
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年5月11日
【发明人】毛跟年, 贺磊, 周亚丽, 曹晴, 许牡丹
【申请人】陕西科技大学