一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法
【专利摘要】一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，涉及一种蛋白的制备方法，所述方法包括以下过程：取水飞蓟分离蛋白，溶于去离子水，使其质量浓度为1.2g/100mL；用0.1mol/L NaOH调（1）的pH值至11，然后加热到50℃，磁力搅拌30min，于室温下冷却；按配比加入糖，搅拌30min后用0.1mol/L HCl溶液调体系pH值，直至产生沉淀；再磁力搅拌30min后，离心，去上清的沉淀进行冷冻干燥，得到水飞蓟蛋白与糖混合物冻干粉；将冻干粉置于干燥器内，干燥器内装有饱和KI溶液，反应后取样，即为水飞蓟蛋白糖基化复合物。本发明具有操作简单、反应条件温和，蛋白质与糖接枝效果明显等特点。该发明可以增加水飞蓟蛋白质的附加值、提高资源综合利用率、减少浪费。
【专利说明】
一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种蛋白质制备方法，特别是涉及一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法。
【背景技术】
[0002]水飞蓟，Silybum marianum(L.)Gaertn，别名水飞雉、奶蓟，为菊科一至二年生草本植物。水飞蓟蛋白是一种优质植物蛋白，不仅蛋白质含量高且氨基酸种类齐全，具有较高的营养价值，其效价介于大豆蛋白和小麦蛋白之间。研究中发现，水飞蓟蛋白质的部分功能性质表现不是特别优秀，如溶解性、起泡性等。基于此点，拟对水飞蓟蛋白质进行改性，以期改善其部分功能性质，使其更好地应用与推广。
[0003]糖基化改性蛋白质是基于美拉德反应，将碳水化合物以共价键与蛋白质分子上的a_或ε_氨基相连接而形成糖基化蛋白的化学反应，属于化学改性范畴，但反应中不需添加任何化学试剂，仅加热反应就能自发进行，属于“绿色加工工艺” ο蛋白质-糖的接枝物对于外部条件具有较高的稳定性，与蛋白质-糖非共价复合物相比，接枝物不受热或pH值的变化而破坏。因糖链的引入，整个分子的功能性质得到显著提高。
[0004]本发明主要是对水飞蓟分离蛋白进行糖基化改性，通过测定接枝度和褐变指数，研究物料比、反应时间、反应温度对糖基化改性的影响，进而用响应面法优化制备糖基化水飞蓟分离蛋白的工艺。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，该方法通过单因素及响应面实验，优化糖基化水飞蓟分离蛋白的制备工艺;该制备方法为干法糖基化制备工艺，操作简单、反应条件温和，蛋白质与糖接枝效果明显。
[0006]本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，所述方法包括以下过程:
(1)取水飞蓟分离蛋白，溶于去离子水，使其质量浓度为1.2g/100mL;
(2)用0.Imo 1/L NaOH调(I)的pH值至11，然后加热到50°C，磁力搅拌30min，于室温下冷却；
(3)按配比加入糖，搅拌30min后用0.lmol/L HCl溶液调体系pH值，直至产生沉淀；
(4)再磁力搅拌30min后，离心，去上清的沉淀进行冷冻干燥，得到水飞蓟蛋白与糖混合物冻干粉；
(5)将冻干粉置于干燥器内，干燥器内装有饱和KI溶液，反应后取样，即为水飞蓟蛋白糖基化复合物。
[0007]所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，所述步骤(I)中的水飞蓟分离蛋白为纯化后广品。
[0008]所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，所述步骤(3)中糖为单糖、双糖和多糖中的一种或一种以上。
[0009]所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，所述单糖为葡萄糖、果糖或半乳糖;双糖为乳糖;多糖为葡聚糖、卡拉胶和可溶性淀粉中的一种或一种以上。
[0010]所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(4)中的离心条件为低温(4°C)冷冻离心4000r/min，离心20min。
[0011]所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，提取过程中浸泡原料用水、缓冲液的配置用水均为去离子水。
[0012]本发明的优点与效果是:
1.本发明对水飞蓟分离蛋白进行糖基化改性，以接枝度和褐变指数为指标，研究物料比、反应时间、反应温度等因素对糖基化改性的影响，进而用响应面法优化制备糖基化水飞蓟分离蛋白的工艺。
[0013]2.本发明方法，具有操作简单、反应条件温和，蛋白质与糖接枝效果明显等特点。该发明可以增加水飞蓟蛋白质的附加值、提高资源综合利用率、减少浪费。
【具体实施方式】
[0014]下面结合实施例对本发明进行详细说明。
[0015]—种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，采用以下步骤制备:
(I)取水飞蓟蛋白，溶于去离子水，使其质量浓度为1.2g/100mL。
[0016](2)用0.lmol/L NaOH调(I)的pH值至11，然后加热到50°C，磁力搅拌30min，于室温下冷却。
[0017](3)按配比加入糖，搅拌30min后用0.lmol/L HCl溶液调体系pH值，直至产生沉淀。
[0018](4)再磁力搅拌30min后，离心，去上清的沉淀进行冷冻干燥，得到水飞蓟蛋白与糖混合物冻干粉。
[0019](5)将冻干粉置于干燥器内(装有饱和KI溶液)，反应一段时间后取样，即为水飞蓟蛋白糖基化复合物。
[0020]步骤(I)中所述的水飞蓟分离蛋白为纯化后产品。
[0021]步骤(3)中所述的糖为单糖、双糖和多糖中的一种或一种以上。
[0022]单糖为葡萄糖、果糖或半乳糖;所述双糖为乳糖;所述多糖为葡聚糖、卡拉胶和可溶性淀粉中的一种或一种以上。
[0023]步骤(4)中所述的离心条件为低温(4°C)冷冻离心4000r/min，离心20min。
[0024]提取过程中浸泡原料用水、缓冲液的配置用水均为去离子水。
[0025]本发明可以用于按上述方法制备糖基化水飞蓟分离蛋白，也可用于提供上述糖基化水飞蓟蛋白的应用领域。
[0026]以下实施例中所用糖类物质为葡聚糖。
[0027]实施例1
将温度定为60°C、物料质量比(水飞蓟蛋白/葡聚糖)为1: 3、反应时间为30h的条件下，按照权利要求1-7中所述方法制备糖基化水飞蓟分离蛋白。所得产品外观色泽较好，复合物接枝度最高。
[0028]实施例2 结合单因素试验，通过响应面分析，得到了糖基化水飞蓟蛋白优化制备条件为:物料质量比(水飞蓟蛋白/葡聚糖)为1:3.02、反应时间42.98h、反应温度59.82°C，在此条件下所得的糖基化复合物接枝度为42.55%，褐变指数为0.931。
【主权项】
1.一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下过程: (1)取水飞蓟分离蛋白，溶于去离子水，使其质量浓度为1.2g/100mL; (2)用0.lmol/LNaOH调(I)的pH值至11，然后加热到50°C，磁力搅拌30min，于室温下冷却； (3)按配比加入糖，搅拌30min后用0.lmol/L HCl溶液调体系pH值，直至产生沉淀； (4)再磁力搅拌30min后，离心，去上清的沉淀进行冷冻干燥，得到水飞蓟蛋白与糖混合物冻干粉； (5)将冻干粉置于干燥器内，干燥器内装有饱和KI溶液，反应后取样，即为水飞蓟蛋白糖基化复合物。2.根据权利要求1所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤(I)中的水飞蓟分离蛋白为纯化后产品。3.根据权利要求1所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中糖为单糖、双糖和多糖中的一种或一种以上。4.根据权利要求1所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，其特征在于，所述单糖为葡萄糖、果糖或半乳糖;双糖为乳糖；多糖为葡聚糖、卡拉胶和可溶性淀粉中的一种或一种以上。5.根据权利要求1所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(4)中的离心条件为低温(4°C)冷冻离心4000r/min，离心20min。6.根据权利要求1所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法，其特征在于，提取过程中浸泡原料用水、缓冲液的配置用水均为去离子水。
【文档编号】C07K14/415GK105837668SQ201610174605
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年3月25日
【发明人】岳静, 柏杰麟, 闫铭, 李娇
【申请人】沈阳化工大学