一种定性判断材料抗菌率的方法及其应用
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种定性判断材料抗菌率的方法及其应用。
【背景技术】
[0002]抑菌圈法是定性判定材料抗菌率的常用方法，抑菌圈的大小代表被测物质抗菌力的强弱。此方法是将菌液与营养物质混合固化成实验平板，把被测材料加工成圆盘置于平板中央。在37°C培养18h后，此圆盘上会出现菌生长禁止圈(抑菌圈)，通过比较抗菌材料与参比材料的抑菌圈面积，来评价抗菌性能的大小。
[0003 ]抑菌圈法可以定性的评估抗菌剂对细菌的抑菌活性，其中杯碟法和纸片法应用最为广泛，但是这两种方法在定性实验实施中出现了弊端。例如，利用纸片法在测试材料的抑菌性时，在取样品时，样品的浓度随机性较高，抗菌剂在琼脂里的扩散程度在一定程度上会影响抑菌圈的大小，该方法定性结果可信度差;杯碟法对于测试溶解度小的抗菌剂来说抑菌测试结果一般，抗菌剂在琼脂里的扩散程度在一定程度上也会影响抑菌圈的大小，结果可信度不高。
[0004]为了克服上述弊端，实施一种适用于溶解性差，在琼脂里扩散程度小，分解温度高的抗菌剂定性测试抑菌性的方法，并加以应用，这也是本发明的创新之处。
【发明内容】
[0005]本发明是要解决杯碟法和纸片法在定性试验中产生弊端的情况下而提供的一种定性判断材料抗菌率的方法及其应用。
[0006]本发明一种定性判断材料抗菌率的方法具体步骤为:
①胰蛋白胨10?15g，酵母提取物5?10g，NaC110?15g，琼脂粉10?15g，加入850?900mL去离子水中。摇动容器直至溶质溶解，定容I?1.5L;
②将溶液分装于50?OOmL的锥形瓶内，将称量好的抗菌剂(不同浓度梯度，包括空白组)分别加入到标记好相应浓度的锥形瓶内摇匀，用3?5mol/LNa0H调pH至7.0?7.4。将培养液放到高压灭菌锅内灭菌(0.05?0.1MPa，15?20min)；
③灭菌好的带有抗菌剂的培养基分别倒入标记好相应浓度的培养皿中，冷却定型。将菌液涂覆于不同梯度和空白组的培养基中，放入细菌培养箱培养；
④24?48小时后观测灭菌效果，量取抑菌直径，进行抑菌评价。
[0007]本发明的优点:便于操作，定性容易，得到的对比图易分析，数据可靠。适用对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等常见菌种的抑菌测试。
【附图说明】
[0008]
以下结合附图和【具体实施方式】对本发明加以详细说明。
[0009]图1为抗菌剂的IR图图2为抗菌剂的UV图图3为抗菌剂的TG图图4为抗菌剂的SEM图图5为未加抗菌剂前大肠杆菌菌落图图6为加入抗菌剂后大肠杆菌的抑菌图图7为未加抗菌剂前金黄色葡萄球菌落图图8为加入抗菌剂后金黄色葡萄球菌的抑菌图图9为未加抗菌剂前枯草芽孢杆菌菌落图图10为加入抗菌剂后枯草芽孢杆菌的抑菌图
【具体实施方式】
[0010]实施例1:自制抗菌剂杂多酸盐MnMonNi，称取5.035gNa2Mo04.2出0溶于100.01^去离子水中，0.318gMnS04.出0溶于10.0mL去离子水中，0.214g3CdS04.8H2O溶于10.0mL去离子水中(超声溶解)，用冰乙酸酸化Na2MoO4.2H20溶液直至pH=6左右，在不断的搅拌下加入MnSO4.H2O溶液，继续酸化混合液至pH=5?6，在70°C左右的条件下加热搅拌混合液至澄清(过程中会出现沉淀，在搅拌的过程中要不断调节pH)，然后分几次加入3CdS04.SH2O溶液，在70?80°C下继续反应I h，冷却至室温，在不断的搅拌下分批加入适量的固体KC1，再加入无水乙醇，静置，下层出现黄色沉淀，放在冰箱中结晶3天，抽滤，干燥，得到的黄色粉末为MnMonNi。
[0011]实施例2:附图1是抗菌剂的IR图，从图中可以看出，在700?1100cm—1指纹区范围内出现了Keggin结构的杂多酸盐的四个特征吸收峰。其中，786.40cm—1处的吸收峰是Mo-Oc-Mo键的反对称伸缩振动，897.03cm—1处的吸收峰是Mo-Ob-Mo键的反对称伸缩振动，922.68cm—1处的特征峰属于Mo=Od键的反对称伸缩振动，1050.26cm—1处的特征峰属于Cu-Oa键的反对称伸缩振动。这表明CuMonNi符合K egg in结构的基本特征。除此之外，在1571.87cm—1和1648.94cm—1处的吸收峰是水分子的H-O-H键的弯曲振动，3415.09cm—1处的吸收峰是水分子中O-H键的对称伸缩振动，从中可以看出，所合成的杂多酸盐含有结晶水。
[0012]实施例3:附图2是抗菌剂的UV图，在210nm和230nm处出现了两个吸收谱带，分别对应于Od—Mo间的荷移跃迀和Ob/U—Mo间的荷移跃迀。其中，210nm处是高能量吸收峰，230nm处是低能量吸收峰，也就是210nm处的电子跃迀能更大。MnMonNi具有Keggin结构。
[0013]实施例4:附图3是抗菌剂的TG图，TG曲线是研究杂多酸化合物热稳定性的有力工具。从曲线上可以看出,MnMonNi有三个失重过程，从20弋开始失重，至526 °C左右基本恒重，这说明MnMonNi的热稳定性较好。第一步失重范围是20 °C?110 °C，这部分失去的是吸附水，第二步失重范围是110 °C?234 °C，失去的是结晶水，第三步在234 °C?526 °C失重，失去的也是结晶水，但后两步失去的结晶水是有差别的，结晶水是以氢键的形式与杂多酸盐结合的，结晶水一般有两种存在形态，一种可能是结晶水与极氧形成氢键，另一种可能是结晶水与赤道氧形成氢键。526 °C?700 °C的范围内，曲线上是一条直线，杂多酸盐不再失重，在整个过程中，杂多酸盐没有分解，有较好的热稳定性。
[0014]实施例5:附图4分别是抗菌剂的SEM，由图可以看出材料表现为，杂多酸盐MnMo11Ni呈现出比较规则的晶体形状，在放大之后可以明显地看到它的形貌也是微米棒状的，棒的大小相近，分布也较均匀。
[0015]实施例6:测试方法具体实施步骤，将950mL去离子水中加入胰蛋白胨1g，酵母提取物5g，NaC110g，琼脂粉1g?15g。摇动容器直至溶质溶解，定容1L;将溶液分装于50mL的锥形瓶内，将杂多酸盐抗菌剂11通011附分别配制成0.0(^/1、0.0]^/1、0.]^/1，分别加入到标记好相应浓度的锥形瓶内摇匀，用5mol/LNa0H调pH至7.0-7.4。将培养液放到高压灭菌锅内灭菌(0.1MPa，20min);将灭菌好的带有抗菌剂的培养基分别倒入标记好相应浓度的培养皿中，冷却固化;将最佳繁殖期的、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液分别涂覆于不同浓度梯度和空白组的培养基中，放入细菌培养箱培养;24?48小时后观测灭菌效果。
[0016]实施例7:大肠杆菌的抑菌图。图5是未加抗菌剂的抑菌图，从图中看到，经过24小时培养后，培养皿表面出现大量的菌落;图6是0.01g/L抗菌剂对大肠杆菌的抑菌图，培养皿中能看到个别的菌落，说明0.01g/L抗菌剂对大肠杆菌有较好的抑菌效果。
[0017]实施例8:金黄色葡萄球菌的抑菌图。图7是未加抗菌剂的抑菌图，从图中看到，经过24小时培养后，培养皿表面出现大量的菌落；图8是0.01g/L抗菌剂对金黄色葡萄球菌的抑菌图，培养皿中未看到菌落，说明0.01g/L抗菌剂对金黄色葡萄球菌有很好的抑菌效果。
[0018]实施例9:枯草芽孢杆菌的抑菌图。图9是未加抗菌剂的抑菌图，从图中看到，经过24小时培养后，培养皿表面出现大量的菌落;图10是0.01g/L抗菌剂对枯草芽孢杆菌的抑菌图，培养皿中未看到菌落，说明0.01g/L抗菌剂对枯草芽孢杆菌有非常好的抑菌效果。
【主权项】
1.一种定性判断材料抗菌率的方法，该方法具体步骤如下: ①胰蛋白胨10?15g，酵母提取物5?10g，NaC110?15g，琼脂粉10?15g，加入850?900mL去离子水中，摇动容器直至溶质溶解，定容I?1.5L; ②将溶液分装于50?OOmL的锥形瓶内，将称量好的抗菌剂(不同浓度梯度，包括空白组)分别加入到标记好相应浓度的锥形瓶内摇匀，用3~5mol/LNaOH调pH至7.0-7.4,将培养液放到高压灭菌锅内灭菌(0.05?0.1MPa，15?20min)； ③灭菌好的带有抗菌剂的培养基分别倒入标记好相应浓度的培养皿中，冷却定型，将菌液涂覆于不同浓度梯度和空白组的培养基中，放入细菌培养箱培养； ④24?48小时后观测灭菌效果，查看菌落数，进行抑菌评价。2.如权利要求1所述的一种定性判断材料抗菌率的方法，其特征在于适用于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等常见菌种。3.如权利要求1所述的一种定性判断材料抗菌率的方法，其特征在于抗菌剂分解温度在 300~350°C 以上。4.如权利要求1所述的一种定性判断材料抗菌率的方法，其特征在于抗菌剂在常温常压条件下溶解性差。5.如权利要求1所述的一种定性判断材料抗菌率的方法，其特征在于抗菌剂在琼脂里扩散程度小。
【专利摘要】本发明公开了一种定性判断材料抗菌率的方法及其应用，该方法适用于溶解性差，在琼脂里扩散程度小，分解温度高的抗菌剂定性测试抑菌性。该方法便于操作，定性容易，得到的对比图易分析，数据可靠。适用对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等常见菌种的抑菌测试。
【IPC分类】C12Q1/18, C12R1/445, C12R1/19, C12R1/125
【公开号】CN105603044
【申请号】CN201610011352
【发明人】杨万丽, 张欣佳, 张哲 , 苏兆轩, 陈林, 马荣华
【申请人】齐齐哈尔大学
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年1月9日