超声波法提取猪鼻骨中的硫酸软骨素的利记博彩app
【技术领域】
[0001 ]本发明属于生物技术领域，属于从猪鼻骨中提取硫酸软骨素的方法。
【背景技术】
[0002] 硫酸软骨素 (Chondroitin sulfate)是一种酸性粘多糖，广泛存在于哺乳动物的 软骨、喉骨、鼻骨和气管中。硫酸软骨素是由葡萄糖醛酸和氨基己糖交替连结而成的双糖聚 合物，它含有50~70个双糖基本结构，分子量为10000~50000。按其化学组成和结构，可分 为05六、(：、04^、!1等多种同分异构体，药用硫酸软骨素是从动物软骨中提取的，主要是八、〇 及各种硫酸软骨素的混合物。CSA和CSC均由D2氨基葡萄糖醛和N2乙酰2D2氨基半乳糖组 成，只是硫酸基团位置不同。
[0003] 硫酸软骨素通常与蛋白质结合成糖蛋白的形式存在，当其水解时发生消去反应， 连接硫酸软骨素与蛋白质中丝氨酸羟基的苷键断裂，可以得到游离态的硫酸软骨素。硫酸 软骨素为白色或微黄色粉末，具有吸湿性，易溶于水而成粘度较大的溶液，难溶于甲醇、乙 醇、乙醚、丙醇、丙酮和冰醋酸等有机溶剂，并且遇热不稳定，乙酰基易发生水解脱落，在酸 性条件下更易水解成不同聚合度的低聚糖。硫酸软骨素具有降血脂、抗凝血、抗炎症及抗肿 瘤等生理活性，临床上可用于预防动脉粥状硬化、提高机体免疫力、治疗风湿病和肾炎及由 链霉素引起的听觉障碍。硫酸软骨素与铜等金属离子结合可用于治疗皮肤病，与硝酸铋或 氢氧化铝反应得到的络合物可用于治疗消化性溃疡，与苯甲酸酯、利多卡因或布比卡因作 用生成的衍生物可用作麻醉剂。作为食品添加剂，硫酸软骨素可用于食品的乳化、保湿和祛 除异味。在化妆品中添加硫酸软骨素，可调节皮肤的细胞代谢，促进营养的吸收，保持皮肤 的水分和改善发质。
[0004] 随着硫酸软骨素生物活性不断被揭示和其应用领域的不断扩展，有关硫酸软骨素 的提取、纯化和分离技术已取得了一定的研究成果，但应用于生产实际还有许多需要改进 和完善之处。目前，硫酸软骨素生产厂家主要采用的方法成本高，产率和纯度低。所以，本公 司开发了超声波法从猪鼻骨中提取硫酸软骨素，以降低成本，提高效益。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种全新的方法(超声波法)从猪鼻骨中提取硫酸软骨素，能够有效 地降低成本，并提高产品的产率和纯度。
[0006 ]为此，本发明通过以下技术方案予以实现： 1.碱解 将猪鼻骨粉碎，放入80°c水中煮4~6小时，然后按原料(干质量)与8%的氢氧化钠溶液 的比例为1:7.52的量加入氢氧化钠溶液，于35°C下提取3小时，然后用盐酸调pH到6~6.5， 双层纱布过滤；留下滤液，滤渣再以1:7.52的质量比加入8%的氢氧化钠溶液，于35°C下提取 2小时，再用双层滤布过滤;弃滤渣，取滤液。合并2次滤液。
[0007] 2.超声 将频率可调超声波发生器的频率调节至39854赫兹后，对上一步的滤液使用超声波手 段处理，用双层纱布过滤后，再用超声波二次处理使杂蛋白解离。
[0008] 3.吸附 过滤后加入高岭土和活性炭吸附。用氯仿反萃取法萃取滤液，留水层。
[0009] 4.沉淀 调节水层pH至6.8~7.2，再加入2.5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后，静置12小时以 上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索。
[0010] 5.纯化 将硫酸软骨素溶于浓度为3%(m/v)的氯化钠溶液中，加入少量乙醇，于低温下静置后离 心，将其上清液中再加入少量乙醇，重复以上步骤，可依次得到较高纯度的硫酸软骨素。 [0011] 6.脱水 最后，用95%以上的丙酮对产品进行脱水，再真空干燥，即可。
[0012] 本发明的有益效果是：用超声波法分离猪鼻骨中的硫酸软骨素，并且增加了纯化 过程，有效地降低了生产成本，并且提高了产品的产率和纯度。
[0013] 四、【具体实施方式】 下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0014] 1.碱解 称取100千克猪鼻骨粉碎，放入80°C水中煮4~6小时，然后加入8%的氢氧化钠溶液752 升，35°C下提取3小时，然后用盐酸调pH到6~6.5,双层纱布过滤；留下滤液，滤渣再以1: 7.52的质量比加入8%的氢氧化钠溶液，于35°C下提取2小时，再用双层滤布过滤;弃滤渣，取 滤液。合并2次滤液。
[0015] 2.超声 将频率可调超声波发生器的频率调节至39854赫兹后，对上一步的滤液使用超声波手 段处理，用双层纱布过滤后，再用超声波二次处理使杂蛋白解离。
[0016] 3.吸附 过滤后加入高岭土和活性炭吸附。用氯仿反萃取法萃取滤液，留水层。
[0017] 4.沉淀 调节水层pH至6.8~7.2，再加入2.5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后，静置12小时以 上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索。
[0018] 5.纯化 将硫酸软骨素溶于浓度为3%(m/v)的氯化钠溶液中，加入少量乙醇，于低温下静置后离 心，将其上清液中再加入少量乙醇，重复以上步骤，可依次得到较高纯度的硫酸软骨素。 [0019] 6.脱水 最后，用95%以上的丙酮对产品进行脱水，再真空干燥，即可。
[0020] 7.对照 称取100千克同一批次的猪鼻骨，采用传统工艺提取其中的硫酸软骨素。通过对照发 现:传统工艺明显地成本高，效益低。
[0021 ] 表1两种工艺产出效果对照表 方法 |投料量(kg) I乙醇用量(1) I硫酸软骨素(kg) I纯度(％) I产率(％)
【主权项】
1. 一种新的提取猪鼻骨中的硫酸软骨素的方法，其特征在于:采用超声波法将猪鼻骨 中的硫酸软骨素提取出来。2. 根据权利要求1所述的的方法，其特征在于:提取猪鼻骨中的硫酸软骨素采用如下步 骤： (1) 碱解:将猪鼻骨粉碎，放入80°c水中煮4~6小时，然后按原料(干质量)与8%的氢氧 化钠溶液的比例为1:7.52的量加入氢氧化钠溶液，于35°C下提取3小时，然后用盐酸调pH到 6~6.5，双层纱布过滤；留下滤液，滤渣再以1: 7.52的质量比加入8%的氢氧化钠溶液，于35 °C下提取2小时，再用双层滤布过滤;弃滤渣，取滤液;合并2次滤液； (2) 超声：将频率可调超声波发生器的频率调节至39854赫兹后，对上一步的滤液使用 超声波手段处理，用双层纱布过滤后，再用超声波二次处理使杂蛋白解离； (3) 吸附:过滤后加入高岭土和活性炭吸附，用氯仿反萃取法萃取滤液，留水层； (4) 沉淀：调节水层pH至6.8~7.2，再加入2.5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后，静置 12小时以上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索； (5) 纯化:将硫酸软骨素溶于浓度为3%(m/v)的氯化钠溶液中，加入少量乙醇，于低温下 静置后离心，将其上清液中再加入少量乙醇，重复以上步骤，可依次得到较高纯度的硫酸软 骨素； (6) 脱水:用95%以上的丙酮对产品进行脱水，再真空干燥。3. 根据权利要求1所述的的方法，其特征在于:在乙醇沉淀之前，先用超声波手段处理， 再用高岭土和活性炭吸附。4. 根据权利要求1所述的的方法，其特征在于:在碱解过程中，按原料(干质量)与8%的 氢氧化钠溶液的比例为1:7.52的量加入氢氧化钠溶液以提取猪鼻骨中的硫酸软骨素，并且 提取温度为35°C。5. 根据权利要求1所述的的方法，其特征在于:在超声过程中，用39854赫兹的超声波处 理滤液，用双层纱布过滤后，再用超声波二次处理使杂蛋白解离。6. 根据权利要求1所述的的方法，其特征在于:在纯化过程中，用于溶解硫酸软骨素的 氯化钠溶液浓度为3%(m/v)。
【专利摘要】一种能够从猪鼻骨中提取硫酸软骨素的方法，它采用超声波法，经过碱解、超声、吸附、沉淀、纯化、脱水六个步骤从猪鼻骨中提取硫酸软骨素。结果超声波法与传统提取方法相比较，乙醇用量减少89%左右，纯度提高19％左右，产率提高37%左右。
【IPC分类】C08B37/08
【公开号】CN105440156
【申请号】CN201510879984
【发明人】刘冠男, 姜德志, 迟培升
【申请人】青岛九龙生物医药有限公司
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2015年12月6日