用修饰的嵌合抗原受体靶向肿瘤新生血管的利记博彩app
【专利说明】用修饰的嵌合抗原受体靶向肿瘤新生血管
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求享有于2013年6月14日提交的美国临时申请第61/835147号的优先 权，通过引用将其整体并入本文。
[0003] 政府资助：
[0004] NIH 参考编号 R01CA 132792。
[0005] 发明背景
[0006] 目前正在开发数个有希望的免疫疗法以对抗癌症。例如，一种类型的免疫疗法 是利用抗原特异性T细胞在细胞介导的免疫中的优势。T细胞通过T细胞受体（TCR)来 识别其目标，TCR与由癌细胞表面上的主要组织相容性复合物（MHC)所呈现的抗原肽相 结合。在存在共刺激分子的情况下，这一结合导致T细胞活化，并随后裂解所结合的靶细 胞（Van der Merwe PA, et al. , Molecular interactions mediating T cell antigen recognition, Annu. Rev. Immunol. 21:659-84(2003))。然而，大多数的肿瘤相关抗原是自身 蛋白，且免疫系统已发展出对它们的耐受。因此，癌症免疫疗法所面临的主要挑战之一是， 难以产生足够数量的高结合亲和力的肿瘤特异性T细胞（Kammertoens T, et al.，Making and circumventing tolerance to cancer, Eur. J. Immunol. 39:2345-53(2009))〇
[0007] 研究人员最近试图通过移植用嵌合抗原受体（CAR)来遗传修饰T细胞（被称 为T-CAR)来应对免疫系统对癌细胞抗原的耐受（Jena B，et al.，Redirecting T-cell specificity by introducing a tumor specific chimeric antigen receptor, Blood 116:1035-44(2010))。通常通过将单链抗体（scFv)加到细胞内信号结构域（通常是TCR/ ⑶3复合体的ζ链）以生成CAR。最近构建的CAR还包含共刺激分子如⑶28或41BB，其 能够改善效应细胞的存活和增殖（Carpenito C，et al·，Control of large, established tumor xenografts with genetically retargeted human T cells containing CD28 and CD137 domains, Proc. Natl. Acad. Sci. US A 106:3360-5(2009))。对于癌症疗法，T-CAR 比 天然T细胞受体具有至少三重优势。首先，通常scFv的抗原结合亲和力比大多数TCR的结 合部分更高。高亲和力结合是有效T细胞活化所需要的。其次，由于scFv介导的抗原结合 的性质，T-CAR识别是非-MHC限制性的且独立于抗原加工。这扩大了 T-CAR对具有不同MHC 单倍型的患者的用途。再次，由于T-CAR识别是非-MHC限制性的，它们靶向癌细胞的能力 不受癌细胞下调MHC的能力（肿瘤细胞逃避癌症免疫疗法的重要机制）的限制。
[0008] 之前已经用结合多种肿瘤相关抗原的scFv构建了 CAR (Davies DM, et al., Adoptive T-cell immunotherapy of cancer using chimeric antigen receptor-grafted T cells, Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz) 58:165-78 (2010)) 〇 令人 鼓舞的前临床数据，已促进了一系列的使用移植有这些CAR的T细胞的过继性转移来治 疗不同组织来源的肿瘤（包括黑素瘤、淋巴瘤、神经母细胞瘤和结肠直肠癌）的临床试 验(Davies DM, et al. , Adoptive T-cell immunotherapy of cancer using chimeric antigen receptor-grafted T cells, Arch. Immunol. Ther. Exp. (ffarsz)58:165-78(2010)； Robbins PF, et al. , Tumor regression in patients with metastatic synovial cell sarcoma and melanoma using genetically engineered lymphocytes reactive with NY-ESO-1, J. Clin. Oncol. 29:917-24(2011) ；Kochenderfer JN, et al. , Eradication of B-lineage cells and regression of lymphoma in a patient treated with autologous T cells genetically engineered to recognize CD19, Blood 116:4099-102(2010)； Porter DL，et al. , Chimeric antigen receptormodified T cells in chronic lymphoid leukemia. N. Engl. J. Med. 365:725-33(2011) ；Pule MA, et al. , Virus-specific T cells engineered to coexpress tumor-specific receptors:persistence and antitumor activity in individuals with neuroblastoma, Nat. Med. 14:1264-70(2008) ；Parkhurst MR, et al. , T cells targeting carcinoembryonic antigen can mediate regression of metastatic colorectal cancer but induce severe transient colitis. Mol. Ther. 19:620-6(2011))。这些试验中的许多试验都显示出有希望的结果，在一些情况下甚 至使已确认的肿瘤完全好转。
[0009] 尽管T-CAR相比于天然T效应细胞有着令人印象深刻的改善，但也有显著的缺点。 例如，T-CAR不主动迀移至肿瘤位点，且其缺乏活性机制以渗透至肿瘤组织。开发的规避 细胞迀移问题的一种策略包括将T细胞工程化以表达趋化因子受体，其可以响应肿瘤相关 的趋化因子环境（Jena B, et al. , Redirecting T-cell specificity by introducing a tumor specific chimeric antigen receptor, Blood 116:1035-44(2010) ；Di Stasi A, et al. , T lymphocytes coexpressing CCR4 and a chimeric antigen receptor targeting CD30 have improved homing and antitumor activity in a Hodgkin tumor model, Blood 113:6392-402(2009))。然而，尽管这一策略改善了效应细胞迀移至肿瘤的能力，但其几乎 不能促进其渗透至肿瘤组织的能力。
[0010] 另一种需要改善的治疗形式是纳米颗粒介导的药物递送。在最近几年，纳米颗粒 作为有希望的化疗的递送载体已被广泛研究。纳米颗粒具有超越许多小分子药物的弱生 物制药性质并改变其药代动力学的潜力。然而，尽管它们具备巨大的前景，纳米颗粒介导 的抗肿瘤药物递送还是比预期更不乐观。纳米颗粒对恶性组织的优先生物分布和滞留， 依赖于弱的组织性、经常渗漏的血管和实体瘤内缺乏淋巴管，这一特征被称为增强的渗透 和滞留（EPR)效应（Greish K, Enhanced permeability and retention(EPR)effect for anticancer nanomedicine drug targeting, Methods Mol. Biol. 624:25-37 (2010)) 〇然而， EPR促进纳米颗粒递送至实体肿瘤的能力仍存在争议。可以促进纳米颗粒分布于肿瘤组织， 这一明确限定的机制将大大提高其在临床应用中的用途。
[0011] 因此，本领域需要可以克服血管壁屏障的修饰的T细胞，以使修饰的T细胞可以在 全身施用后进入肿瘤细胞。本领域还需要增加肿瘤血管渗透性的方法和组合物，以允许纳 米颗粒优先沉积至肿瘤组织。
[0012] 发明概述
[0013] 在一个实施方案中，T细胞可被移植有嵌合抗原受体，该受体包括对α ν β 3整合 素具有强结合亲和力的靶向部分。在另一个实施方案中，所述靶向部分可以是锯鳞血抑 肽（echistatin)多肽。在另一个实施方案中，所述革Ε1向部分可以被修饰以具有减小的对 α 5β i整合素的结合亲和力。
[0014] 在一个实施方案中，可将转导有嵌合抗原受体的T细胞施用于宿主以杀伤癌细 胞。嵌合抗原受体可包括对α νβ3整合素具有强结合亲和力的靶向部分，其包括但不限于 锯鳞血抑肽多肽。在一个实施方案中，所述靶向部分可以被修饰以具有减小的对整 合素的结合亲和力。
[0015] 附图简述
[0016] 结合附图将更好地理解前述概述以及下述详细说明。仅出于说明的目的，在此示 出了附图中的某些实施方案。然而，应当理解的是，本文所公开的发明概念并不限于图中所 示的精确安排和手段。
[0017] 图1A根据一个实施方案示出了在逆转录病毒载体构建体中的eCAR的示意图。图 1B根据一个实施方案示出了 eCAR的转导效率。
[0018] 图2A根据一个实施方案示出了 HUVEC上α ν β 3表达的流式细胞术分析。图2B根 据一个实施方案示出了通过T-eCAR