利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法。
【背景技术】
[0002]欧洲越橘为落叶灌木，叶较小，呈卵形，花为球形，为玫瑰色带淡绿色。分布于欧洲。野生欧洲越橘大量分布在斯堪的纳维亚半岛(挪威)。
[0003]欧洲越橘，学名Vaccinium1]171'1:;[11118，在英国称之13；[1匕61^7，1316&匕61.^，wineberry，whortleberries，在美国称之为huckleberries。自远古以来就作为食用植物。在16世纪的欧洲始作为药用植物，叶子习惯上已用于收敛、抗炎、抗菌、强壮，有弱的抗糖尿病活性，已被用作治疗糖尿病的各种植物药合剂中。叶中含一种组分(glucoquinine)实验表明可降低血糖，根据现代研究在德国已建议叶子的制剂用作治疗风湿和痛风的药物。属于杜鹊花科(Ericaceae )，越橘属(Vaccinium spp.)。通常所说的欧洲越橘是包含Vaccinium myrtillus在内的一系列植物品种，如覆盆子(blaeberry)等；当特指单一植物时，即是指Vaccinium myrtillus。
[0004]欧洲越橘含有大量的黄酮类化合物，其中以花青素类为主，包括花青素(cyanidin)、翠雀花素、芍药花素、矮牵牛素、棉葵花素等及其牛乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖苷。
【发明内容】
[0005]本发明采用微波提取，以乙醇为溶剂，大大降低了提取时间，提高了生产效率，方法简单。大孔树脂再生方便迅速，适合大生产，且成本大大降低，水洗脱除去大部分杂质;大孔树脂和硅胶柱层析结合，分离和纯化效果好，所以本发明所得产品纯度高，显著提高有效成分含量，克服了常规提取方法纯度低、时间长等缺点。
[0006]利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法，其步骤如下:
[0007](1)微波逆流提取:
[0008]欧洲越橘粉碎至60-80目，加入60-75%乙醇溶液，在400?600W，时间80min?120min，8?12倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动；
[0009](2)大孔树脂吸附:
[0010]回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为DA201、D101、AB-8树脂中的一种，树脂柱的尚径比为8:1~15: 1 ；
[0011](3)纯水洗脱:
[0012]在常温常压下，以lBV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3-5BV;
[0013](4)乙醇洗脱:
[0014]再用60 % -95 %的乙醇溶液在l_3BV/h流速、洗脱体积为6-8BV下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
[0015](5)得欧洲越橘花青素:
[0016]收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到欧洲越橘花青素半成品粗粉；
[0017](6)硅胶柱层析:
[0018]将所得欧洲越橘花青素粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95?85:2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集欧洲越橘各阶段洗脱液；
[0019](7)洗脱液在压力-0.07?0.08Mpa，60°C条件下，经减压回收乙醇，得到欧洲越橘浓缩液，其比重在1.08?1.12。
[0020](8)浓缩液在70?80°C进行真空干燥，得欧洲越橘花青素成品，含量在25%以上。【具体实施方式】:
[0021]实施例1:利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法，其步骤包括:
[0022](1)微波逆流提取:
[0023]欧洲越橘粉碎至60目，加入75%乙醇溶液，在400W，时间80min，8倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动；
[0024](2)大孔树脂吸附:
[0025]回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为AB-8树脂，树脂柱的高径比为 8:1-15:1;
[0026](3)纯水洗脱:
[0027]在常温常压下，以lBV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为5BV;
[0028](4)乙醇洗脱:
[0029]再用60 %、70 %、75 %、80 %、85 %、95 %的乙醇溶液在lBV/h流速、洗脱体积为6BV下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
[0030](5)得欧洲越橘花青素:
[0031]收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到欧洲越橘花青素半成品粗粉；
[0032](6)硅胶柱层析:
[0033]将所得欧洲越橘花青素粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95: 2或85:2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集欧洲越橘各阶段洗脱液；
[0034](7)洗脱液在压力-0.07?0.08Mpa，60°C条件下，经减压回收乙醇，得到欧洲越橘浓缩液，其比重在1.08?1.12。
[0035](8)浓缩液在70?80°C进行真空干燥，得欧洲越橘花青素成品，含量在25%以上。
[0036]实施例2:利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法，其步骤包括:
[0037](1)微波逆流提取:
[0038]欧洲越橘粉碎至80目，加入60%乙醇溶液，在400W，时间lOOmin，10倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动；
[0039](2)大孔树脂吸附:
[0040]回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为DA201树脂中，树脂柱的高径比为8:1-15:1;
[0041 ] (3)纯水洗脱:
[0042]在常温常压下，以lBV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为5BV;
[0043](4)乙醇洗脱:
[0044]再用60%、70%、75%、80%、85%、95%的乙醇溶液在lBV/h流速、洗脱体积为6BV下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
[0045](5)得欧洲越橘花青素:
[0046]收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到欧洲越橘花青素半成品粗粉；
[0047](6)硅胶柱层析:
[0048]将所得欧洲越橘花青素粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95: 2或85:2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集欧洲越橘各阶段洗脱液；
[0049](7)洗脱液在压力-0.07?0.08Mpa，60°C条件下，经减压回收乙醇，得到欧洲越橘浓缩液，其比重在1.08?1.12。
[0050](8)浓缩液在70?80°C进行真空干燥，得欧洲越橘花青素成品，含量在25%以上。
[0051]实施例3:利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法，其步骤包括:
[0052](1)微波逆流提取:
[0053]欧洲越橘粉碎至80目，加入70%乙醇溶液，在400W，时间lOOmin，12倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动；
[0054](2)大孔树脂吸附:
[0055]回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为D101树脂中，树脂柱的高径比为8:1-15:1;
[0056](3)纯水洗脱:
[0057]在常温常压下，以lBV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为5BV;
[0058](4)乙醇洗脱:
[0059]再用60 %、70 %、75 %、80 %、85 %、95 %的乙醇溶液在lBV/h流速、洗脱体积为6BV下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
[0060](5)得欧洲越橘花青素:
[0061]收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到欧洲越橘花青素半成品粗粉；
[0062](6)娃胶柱层析:
[0063]将所得欧洲越橘花青素粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95: 2或85:2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集欧洲越橘各阶段洗脱液；
[0064](7)洗脱液在压力-0.07?0.08Mpa，60°C条件下，经减压回收乙醇，得到欧洲越橘浓缩液，其比重在1.08?1.12。
[0065] (8)浓缩液在70?80°C进行真空干燥，得欧洲越橘花青素成品，含量在25%以上。
【主权项】
1.利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法，其步骤包括: (1)微波逆流提取: 欧洲越橘粉碎至60-80目，加入60-75 %乙醇溶液，在400?600W，时间80min?120min，8?12倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动； (2)大孔树脂吸附: 回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为DA201、D101、AB-8树脂中的一种，树脂柱的高径比为8:1-15:1; (3)纯水洗脱: 在常温常压下，以lBV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3-5BV; (4)乙醇洗脱: 再用60%-95%的乙醇溶液在1 _3BV/h流速、洗脱体积为6-8BV下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测: (5)得欧洲越橘花青素: 收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到欧洲越橘花青素半成品粗粉； (6)硅胶柱层析: 将所得欧洲越橘花青素粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95?85:2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集欧洲越橘各阶段洗脱液； (7)洗脱液在压力-0.07?0.08Mpa，60°C条件下，经减压回收乙醇，得到欧洲越橘浓缩液，其比重在1.08?1.12。 (8)浓缩液在70?80°C进行真空干燥，得欧洲越橘花青素成品，含量在25%以上。
【专利摘要】本发明涉及一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法。该方法是以微波提取，以乙醇为溶剂，大大降低了提取时间，提高了生产效率，方法简单。大孔树脂再生方便迅速，适合大生产，且成本大大降低，水洗脱除去大部分杂质；大孔树脂和硅胶柱层析结合，分离和纯化效果好，所以本发明所得产品纯度高，显著提高有效成分含量，克服了常规提取方法纯度低、时间长等缺点。
【IPC分类】C07D311/62
【公开号】CN105418572
【申请号】CN201510761429
【发明人】姚德坤, 万莉, 姚德利
【申请人】大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年11月6日