一种微生物细胞简单破壁方法
【技术领域】
[0001]本发明属于微生物培养领域，具体涉及到一种微生物细胞简单破壁方法。
【背景技术】
[0002]微生物种类非常多，不同微生物的细胞构造各不相同，有些微生物细胞壁较厚，如革兰氏阳性微生物，有些微生物细胞细胞壁较薄，但组成成分较为复杂，如革兰氏隐形微生物。如何找到一种能够快速、简单地破除微生物细胞壁是微生物学领域不少研究者一直在研究的问题。
【发明内容】
[0003]针对上述现有技术存在的问题，本发明提供了一种微生物细胞简单破壁方法，操作简单，能够快速获取原生质体。
[0004]为了解决上述问题，本发明采用的技术方案:一种微生物细胞简单破壁方法，其特征在于包括如下步骤:菌体冲洗、冷激、热激、酶解以及原生质体收集；
所述菌体冲洗步骤具体操作为取l_2ml微生物培养液，4000-5000rpm离心2_3min，获取菌体沉淀后，使用l_2ml等渗溶液进行反复吹打，重复离心2-3次获得菌体溶液；
所述冷激、热激步骤具体操作为分别先后将菌体溶液置于-20-0°C、40-5(rC环境中处理 5-10min ；
所述酶解步骤具体操作为向热激处理后的菌体溶液加入5-20ul的5-10ug/ml的溶菌酶溶液，置于37°C环境中处理5-8min ；
所述原生质体收集步骤具体操作为将酶解后的菌体溶液进行3000-4000rpm离心2-3min，收集沉淀即得到破壁细胞。
[0005]本发明公开的微生物细胞破壁方法，操作简单，无需繁琐步骤，能够快速去除细胞壁，获得原生质体，同时能够适用于革兰氏阳性、阴性微生物细胞破壁。
【具体实施方式】
[0006]以下将结合具体实施例对本发明提供的技术方案进行详细说明，应理解下述【具体实施方式】仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
[0007]实施例1
一种微生物细胞简单破壁方法，包括菌体冲洗、冷激、热激、酶解以及原生质体收集步骤，取2ml微生物培养液，5000rpm离心3min，获取菌体沉淀后，使用2ml等渗溶液进行反复吹打，重复离心3次获得菌体溶液；然后分别先后将菌体溶液置于0°C、50°C环境中处理5min ;然后向菌体溶液加入20ul的5ug/ml的溶菌酶溶液，置于37°C环境中处理8min ;将酶解后的菌体溶液进行3000rpm离心3min，收集沉淀即得到破壁细胞。本发明公开的微生物细胞破壁方法，操作简单，无需繁琐步骤，能够快速去除细胞壁，获得原生质体，同时能够适用于革兰氏阳性、阴性微生物细胞破壁。
[0008]需要强调的是:以上仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化与修饰，均乃属于本发明技术方案的范围内。
【主权项】
1.一种微生物细胞简单破壁方法，其特征在于包括如下步骤:菌体冲洗、冷激、热激、酶解以及原生质体收集。2.根据权利要求书1中所述的一种微生物细胞简单破壁方法，所述菌体冲洗步骤具体操作为取l_2ml微生物培养液，4000-5000rpm离心2_3min，获取菌体沉淀后，使用l_2ml等渗溶液进行反复吹打，重复离心2-3次获得菌体溶液。3.根据权利要求书1中所述的一种微生物细胞简单破壁方法，所述冷激、热激步骤具体操作为分别先后将菌体溶液置于-20-0 °C、40-50 °C环境中处理5-10min。4.根据权利要求书1中所述的一种微生物细胞简单破壁方法，所述酶解步骤具体操作为向热激处理后的菌体溶液加入5-20ul的5-10ug/ml的溶菌酶溶液，置于37°C环境中处理5_8min05.根据权利要求书1中所述的一种微生物细胞简单破壁方法，所述原生质体收集步骤具体操作为将酶解后的菌体溶液进行3000-4000rpm离心2_3min，收集沉淀即得到破壁细胞。
【专利摘要】本发明公开一种微生物细胞简单破壁方法，其特征在于包括如下步骤：菌体冲洗、冷激、热激、酶解以及原生质体收集。本发明公开的微生物细胞破壁方法，操作简单，无需繁琐步骤，能够快速去除细胞壁，获得原生质体，同时能够适用于革兰氏阳性、阴性微生物细胞破壁。
【IPC分类】C12N1/06
【公开号】CN105349427
【申请号】CN201510899294
【发明人】高梅珍
【申请人】高梅珍
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年12月9日