一株刀孢轮枝菌LpTS01及其在防治烟粉虱中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物农药技术领域，具体地，涉及一株刀孢轮枝菌LpTSOI及其在防治 烟粉虱中的应用。
【背景技术】
[0002] 烟粉虱ifeazisiaiaAaci(Gennadius)属于半翅目Hemiptera粉虱科 Aleyrodidae小粉虱属及azisia，烟粉虱的B与Q生物型是世界性的大害虫，严重危害全球 农业生产，造成严重经济损失。在我国，广东、广西、海南、福建、云南、上海、浙江、江西、湖 北、四川、陕西、北京、台湾、新疆、河北、天津、山东、山西、安徽、贵州等20个省份均有发生 烟粉虱虫害。烟粉虱成、若虫均以口针刺吸取食植物韧皮部汁液，其大量取食可造成植株衰 弱，取食过程中分泌的大量蜜露可诱发煤污病，造成植物光合作用下降及果实等商品价值 降低。更为严重的是，烟粉虱还能传播双生病毒的菜豆金色花叶病毒属的 病毒，以番茄黄卷叶病毒（TYLCV)以代表，引发番茄黄化曲叶病毒病，给农业生产造成巨大 经济损失。
[0003] 烟粉虱的防治主要有农业防治、物理防治、化学防治、生物防治等方法，化学防治 是主要方法。长期使用化学防治会导致害虫产生抗药性问题，在防治过程中需要不断加 大化学药剂使用量，从而使防治成本不断提高。另外化学农药的过度使用影响环境安全与 生物多样性，化学农药防治的安全性已成为限制农业害虫防治的关键因素，而开展和利用 生物防治方法防治烟粉虱成为一种趋势。真菌杀虫剂具有寄主范围广、对环境安全、防治 害虫不产生抗药性等优点，近来国内外对烟粉虱的生物防治进行了大量研究，研究包括利 用天敌昆虫和昆虫病原微生物(主要有虫生真菌）进行防治、野生虫生真菌的开发、生物工 程重组、新型剂型的研究开发等。有多种虫生真菌可侵染烟粉虱，如玫烟色棒束孢/saria 孢白僵菌万eai/Keria 等，并已有一些相关发明专利公开： 专利申请号201310392214. 3公开一种玫烟色棒束孢菌菌株的分离及培养方法； 专利申请号201410449469. 3公开一种球孢白僵菌菌株SCWJ-2及其应用，其生防制剂 可用于烟粉虱、西花蓟马、葱蚜和/或桃蚜的防治； 专利申请号201410449467. 4公开一种球孢白僵菌菌株GZGY-1-3及其应用，其生防制 剂可用于烟粉虱、西花蓟马、葱蚜和/或桃蚜的防治； 专利申请号201410255857. 8公开一株渐狭蜡蚧菌(保藏号为CGMCCNo. 9220)及其在防 治作物线虫和粉虱中的应用； 专利申请号201210449949. 0公开公开了一种玫烟色棒孢霉菌株(保藏号CCTCCN0 :M2012400)及其在防治烟粉虱方面的应用； 专利申请号201410317110. 0公开一种基因重组玫烟色棒孢霉菌IfOlGM(保藏号CCTCCN0 :M2014199)及其防治烟粉虱的应用； 专利申请号201310635374. 6公开了一种球孢白僵菌与噻嗪酮的复配杀虫剂及其防治 烟粉虱和白粉虱等粉虱类、茶小绿叶蝉等害虫的应用； 专利申请号201010125937. 3公开一种球孢白僵菌Bb-Nl菌株(保藏号为CCTCCNO:B201005)及其制备方法和应用，可防治烟粉虱等害虫； 专利申请号200910037747. 3公开了一种蜡蚧轮枝菌与阿维菌素复配的杀虫主剂及杀 虫剂，该复配杀虫剂对温室白粉虱、烟粉虱、蚜虫、小菜蛾、蓟马等害虫有很好的防治效果； 专利申请号200810220002. 6公开了一种球孢白僵菌真菌与绿僵菌素混配杀虫剂，对 烟粉虱毒杀作用显著； 专利申请号200810220003. 0公开了一种绿僵菌素与噻嗪酮复配的杀虫主剂及杀虫 剂，有效解决烟粉虱对噻嗪酮的抗药性问题； 专利申请号200810029163. 7公开了 一种蜡蚧轮枝菌菌株VL-N6 (菌株保藏号：CCTCCNO:M208086)，该菌株对粉虱、蚜虫等多种刺吸式口器害虫和蓟马等害虫具有很强的 侵染杀虫效果； 专利申请号200710031516. 2公开了一种粉虱座壳孢菌菌株AA01-N8 (菌株保藏号：CCTCCNO:M207087)及其应用，其对粉虱、蚜虫等多种刺吸式口器害虫具有很强的侵染杀虫 效果； 专利申请号200710031511.X公开了一种玫烟色拟青霉菌菌株PF01-N10 (菌株保藏号CCTCCNO:M207088)，其对粉虱、蚜虫等多种刺吸式口器害虫和小菜蛾等咀嚼式口器害虫具 有很强的侵染杀虫效果； 专利申请号200710187638. 0 -株高效菌株蜡蚧轮枝菌CA190404 (保藏号CGMCCN0 : 1126)及其制剂，可用于防治温室刺吸式害虫一粉虱(烟粉虱和白粉虱)、蚜虫和蓟马； 专利申请号200610132314. 2公开了一种绿僵菌素与阿维菌素的复配杀虫剂，对烟粉 虱具有良好防治效果，并有显著增效作用； 专利申请号200810089529.X公开了一种球孢白僵菌HFW-05菌株(保藏号CGMCCN0 : 2356)，对烟粉虱、小菜蛾和蚜虫等害虫具有很高的毒力效果。
[0004] 但是，截至目前为止，尚未发现刀孢轮枝菌用于防治烟粉虱的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是为开发新的真菌杀虫剂提供材料，提供一株高毒力且 稳定的刀孢轮枝菌菌株。
[0006] 本发明的另一个目的是提供所述刀孢轮枝菌菌株在防治烟粉虱方面的应用。
[0007] 为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的： 一株刀抱轮枝菌（Lecanicilliumpsalliotae)菌株LpTSOl，所述菌株于2015年3月 26日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC)，保藏编号为CCTCCNO.M2015166,保藏地 址：中国湖北省武汉市武汉大学。
[0008] LpTSOl菌株是从甘肃省永登县中川镇的土壤中分离纯化获得，该菌株在察氏培养 基上培养14d，菌落近圆形，直径45± 1mm;菌落正面白色，圆心处菌丝紧实，呈轮辐射状向 连缘扩散，菌落边缘菌丝疏松，整齐；菌落背面呈红色，自圆心始由内而外逐渐变浅，边缘也 能明显看出轮辐射状菌丝。在显微镜下观察，菌丝生长初期白色，棉絮状，气生菌丝发达。菌 丝有间隔，有分枝，分枝向顶端逐渐变细，在顶端着生分生孢子。分生孢子单生，易脱落、圆 形、椭圆形、卵圆形或短梭形，无色或微带色泽。分生孢子梗基部膨大，向上变成锥形，单生、 对生或轮生于气生菌丝，轮状在同一位置长出3~4个瓶梗，气生菌丝顶部轮状瓶梗可达4~6 个。分生孢子单生，椭圆形或卵形，长1.46±0. 14μπι，宽0. 97±0.ΙΟμπι。
[0009] LpTSOl菌株的ITS1-5. 8S-ITS4rDNA序列如SEQIDNO:1 所示，将该序列与NCBI 数据库中已知序列比对，构建系统发育树，结果表明，LpTSOl菌株与一株刀孢轮枝菌(登入 号为AB160994)同属一支，支持率达到97%。
[0010] 通过上述生物学性状及生理生化和分子鉴定可知，LpTSOl菌株分类地位属于真菌 门（Eumycota)、有丝分裂孢子真菌类（Mitosporic fungi)、丝孢纲（Hyphomycetes)、丝孢 目（Hyphomycetales)、丝抱科（Hyphomycetaceae)、轮枝抱属
[0011] 本发明同时提供了所述刀孢轮枝菌菌株对烟粉虱的防治应用。
[0012] 在实验室条件下，刀孢轮枝菌分生孢子悬浮液设置1. 1X106个/mL、3. 3X10 6个/ mL、10X106个/mL、30X10 6个/mL、90X10 6个/mL5个浓度，采用浸渍法处理受2龄烟粉 虱若虫侵害的扶桑叶片，药后2d、4d、6d、8d、10d调查死亡率。结果表明，刀孢轮枝菌分生孢 子对为害扶桑的烟粉虱2龄若虫毒力很高，30X106分生孢子/mL浓度时，药后2d、4d、6d、 8d、10d累计校正死亡率分别达到 14. 84%、50. 66%、74. 37%、85. 07%、87. 75% ;90X106分生孢 子/mL浓度时，药后2d、4d、6d、8d、lOd累计校正死亡率分别达到18. 28%、56. 54%、79. 17%、 88. 41%、91. 29%。
[0013] 用SPSS7. 0软件对累计校正死亡率、死亡时间与烟粉虱累计死亡率进行回归分 析，处理后6天半致死浓度（LC5。)为0. 36X106分生孢子/mL;分生孢子浓度10X10 6个/mL 时，致死中时（LT5。）为4. 23d，孢子浓度9. 0X107个/mL时，LT5。值最小，仅为3. 61d。
[0014] 本发明还对刀孢轮枝菌侵染烟粉虱进行了观察，刀孢轮枝菌分生孢子悬浮液浸渍 扶桑叶片后第2-3d，在荧光倒置显微镜下，可观察到白色菌丝侵染烟粉虱2龄若虫，若虫颜 色变枯黄、干瘪死亡；第5d(侵染中期)，大量白色菌丝入侵烟粉虱若虫，大量2-3龄若虫虫 体干瘪死亡；还发现烟粉虱卵受菌丝侵染并被包围，直到叶片干枯(第12d)，一直未见其孵 化为幼虫，说明其菌丝能够抑制烟粉虱虫卵孵化，但不确定其是否对烟粉虱虫卵有直接毒 杀作用。
[0015] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果： 本发明新开发了一株毒力高且稳定的刀孢轮枝菌，该菌株是一种昆虫病原真菌，作为 一种生物活体农药，具有对环境无污染，对人畜无毒性的特征，适用于有机农产品生产需 求。
【附图说明】
[0016] 图1为菌株在察氏培养基上培养14天的菌落形态。
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