一种高f值金枪鱼寡肽制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于寡肽制备技术领域，具体设计一种成本低、工艺简单、产品风味好、F值高，水解度高的高F值金枪鱼寡肽制备方法。
【背景技术】
[0002]金枪鱼(Tunas)又叫鲔鱼、吞拿鱼，属鲈形目鲭科，作为一种深海鱼类，金枪鱼不仅肉味鲜美，而且营养价值非常高，富含蛋白质，不饱和脂肪酸和维生素，以纯天然，营养价值高而享誉国际市场。金枪鱼的主要加工种类有蓝鳍金枪鱼，长鳍金枪鱼，黄鳍金枪鱼和大眼金枪鱼。浙江省是我国金枪鱼加工中心，拥有全国最大的金枪鱼加工基地，金枪鱼除了鲜销夕卜，其加工产品的附加值非常高，一般经过冷冻处理用于制作寿司及罐装食品。金枪鱼在加工过程中产生大量碎肉，这些碎肉同金枪鱼的鱼肉主体一样营养丰富，而目前尚无有效的工业化深加工方法。
[0003]高F值寡肽是由3?7个氨基酸残基所组成的混合小肽混合物，F值是指混合物中支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸，简称BCAA)和芳香族氨基酸(苯丙氨酸、酪氨酸，简称AAA)的摩尔比值。小肽分子与游离氨基酸相比具有渗透压低、抗原性低等优点，所以更容易被吸收。研究表明高F值寡肽能够改进肝脏疾病(肝硬化、肝性脑病)，常被用于辅助治疗肝性脑病以及改善手术后和卧床病人的蛋白质营养状况。另外，高F值寡肽还具有抗疲劳和醒酒等多种生物活性。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于为了解决现有金枪鱼加工过程中碎肉多余浪费的缺陷而提供一种成本低、工艺简单、产品风味好、F值高，水解度高的高F值金枪鱼寡肽制备方法。
[0005]为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案:
一种高F值金枪鱼寡肽制备方法，所述制备方法包括以下步骤:
a)取解冻后的金枪鱼碎肉，于浸泡液中浸泡12_16h，捞出后以去离子水洗净后匀浆，加入蒸馏水与果糖并在50°C下保温，得到金枪鱼浆料；
b)向步骤a)的金枪鱼浆料中加入复合酶A，酶解条件为酶解温度55°C，保持pH值
2.3-3.3，酶解时间4.5h，然后灭酶活，冷却12000-15000r/min离心2_4min，收集上清液；调节上清液pH至6.5-7.2，加入复合酶B，反应温度保持在45-55°C，保持pH值6.5-7.2，酶解时间2-3h，灭酶活，12000-15000r/min离心2_4min，收集上清液，得到酶解液；
c)将步骤b)得到的酶解液经6500Da微滤膜微滤，压力为45_65psi，温度40_50°C，得到微滤液；
d)在玻璃吸附柱中装填质量比为1:2:1.5的活性炭、石墨粉与纳米银，将步骤c)得到微滤液以50-85mL/min的流速进行循环层析，层析次数10-20次，然后以12000_15000r/min离心2-4min，收集上清液即为高F值金枪鱼寡肽溶液。在本技术方案中，由于现有活性炭吸附法都采用活性炭静态吸附，这种方法洗脱效果有限，而本发明采用循环层析，可使酶解液与活性炭、石墨粉与纳米银之间充分接触，同时使得酶解液中残留的活性炭、石墨粉与纳米银减少；
而在预处理中使用浸泡液浸泡，使的金枪鱼碎肉更易于酶解，同时提高其口感。
[0006]作为优选，浸泡液由以下重量份的原料蒸煮而成:仙草45-50份、甘草20-25份、蜂巢14-26份、野菊花1-5份、黄秋葵30-40份与水200-255份，金枪鱼碎肉与浸泡液的质量比为1:10。在本技术方案中，蜂蜡中主要含有酯类、游离酸类、游离醇类和烃类，还含有微量的挥发油及色素，具有消炎抑菌、局部麻醉、降血脂和预防动脉粥样硬化的功效。
[0007]作为优选，步骤a)中金枪鱼与蒸馏水、果糖的质量比为1:8:3。
[0008]作为优选，步骤b)中复合酶A为胃蛋白酶与胰蛋白酶的混合物，质量比为1:2.2，复合酶B为风味蛋白酶与菠萝蛋白酶的混合物，质量比为1:1.7，复合酶A的加入量为金枪鱼浆料重量的0.2-0.7%，复合酶B的加入量为第一次得到的上清液质量的0.5-0.9%。
[0009]作为优选，活性炭的粒度为400目、比表面积1450 m2，石墨粉的粒径为15-25 μ m。
[0010]作为优选，步骤d)中循环层析时在外部施加磁场，磁场的强度为0.2-1.8T。
[0011]作为优选，步骤b)中酶解时在外部施加超声波振动，超声波功率为55_65kw。
[0012]本发明的有益效果是:
1)本发明产品制备方法简单，便于工业化生产；
2)本发明不仅具有抗疲劳作用，不污染环境，特别适合疲劳人群食用，且符合绿色保护要求；
3)制备过程简单，简化工艺，同时提高产品得率，产品得率75-88%，易于工业生产，F值高，在25-35之间。
【具体实施方式】
[0013]以下结合具体实施例，对本发明作进一步的解释:
若未特指，其工艺为现有工艺；本发明所用原料均可从市场购得。
[0014]胰蛋白酶，胃蛋白酶购自国药集团化学试剂有限公司；风味蛋白酶、菠萝蛋白酶购自广西南宁庞博生物工程有限公司。
[0015]实施例1
一种高F值金枪鱼寡肽制备方法，所述制备方法包括以下步骤:
a)取解冻后的金枪鱼碎肉，于浸泡液中浸泡12h，捞出后以去离子水洗净后匀浆，加入蒸馏水与果糖并在50°C下保温，得到金枪鱼浆料；浸泡液由以下重量份的原料蒸煮而成:仙草45份、甘草20份、蜂巢14份、野菊花I份、黄秋葵30份与水200份，金枪鱼碎肉与浸泡液的质量比为1:10 ;金枪鱼与蒸馏水、果糖的质量比为1:8:3 ;
b)向步骤a)的金枪鱼浆料中加入复合酶A，酶解条件为酶解温度55°C，保持pH值2.3，酶解时间4.5h，然后灭酶活，冷却12000r/min离心2min，收集上清液；调节上清液pH至
6.5，加入复合酶B，反应温度保持在45°C，保持pH值6.5，酶解时间2h，灭酶活，12000r/min离心2min，收集上清液，得到酶解液；复合酶A为胃蛋白酶与胰蛋白酶的混合物，质量比为1:2.2，复合酶B为风味蛋白酶与菠萝蛋白酶的混合物，质量比为1:1.7，复合酶A的加入量为金枪鱼浆料重量的0.2%，复合酶B的加入量为第一次得到的上清液质量的0.5% ;酶解时在外部施加超声波振动，超声波功率为55kw ; c)将步骤b)得到的酶解液经6500Da微滤膜微滤，压力为45psi，温度40°C，得到微滤液；
d)在玻璃吸附柱中装填质量比为1:2:1.5的活性炭、石墨粉与纳米银，将步骤c)得到微滤液以50mL/min的流速进行循环层析，层析次数10次，然后以12000r/min离心2_4min，收集上清液即为高F值金枪鱼寡肽溶液；活性炭的粒度为400目、比表面积1450 m2，石墨粉的粒径为15 μ m ;循环层析时在外部施加磁场，磁场的强度为0.2T。
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