新型钠离子牛磺胆酸共转运多肽抑制剂的利记博彩app
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及生物素-胆酸/熊去氧胆酸化合物的合成及其对NTCP的抑制作用。
【背景技术】：
[0002] 在肝细胞上发现的钠离子牛磺胆酸共转运多肽（sodium-taurocholate co-transportingpolypeptide,NTCP)，是由SLC10A1基因编码的分布于肝细胞表面基底膜 的转运蛋白，是钠盐胆汁酸肝肠循环中的重要通道蛋白。人NTCP蛋白含有349氨基酸，分 子量56KDa，与大鼠NTCP蛋白有77%的同源性，含有9个跨膜区。人的NTCP蛋白绝大部分 表达在肝脏，定位于肝细胞基底侧。NTCP对结合型胆酸盐有很高的转运亲和力，是肝脏从血 液中摄取胆酸盐的主要通道蛋白，同时能够使血中的胆酸盐维持在很低的水平。
[0003] 多个研究表明，NTCP的抑制可以影响胆酸的肝肠循环，抑制胆酸从血液中进入 肝脏，从而缓解胆汁淤积，降低代谢水平。2015年报道了一例NTCP点突变的病例，所涉女 婴由于携带NTCP的突变蛋白NTCPR252H，导致胆酸转运活性降低，血清中的胆酸浓度达到了 445yM(正常〈16yM)，并出现了多种代谢相关调节因子含量低和生长迟缓等症状，但肝脏 发育正常。因此，NTCP的抑制可以阻滞胆酸回收进入肝脏，在抗胆汁淤积及代谢调节中可 以起到潜在的应用价值。
[0004] 2012年，李文辉课题组还发现NTCP是乙型肝炎病毒HBV进入肝细胞的受体，这也 是HBV研究的重大突破。后续的研究表明，NTCP抑制剂可以抑制HBV感染肝细胞，为乙肝 治疗的药物研发提供了很好的理论基础。
[0005] 而且，肝脏中除了NTCP之外，还有大量钠离子非依赖性胆酸盐转运蛋白，如有机 阴离子转运蛋白家族（OATPs)，可以执行与NTCP相类似的功能，从血液中将胆酸盐转运到 肝脏中，因此NTCP的缺失不会造成临床上的病变。基于此，抑制NTCP理论上应该不会引起 明显的副作用。
[0006] JamesE.Pol1i对胆酸衍生物进行研究发现，该类化合物具有NTCP抑制活 性(InternationalJournalofPharmaceutics396(2010)111 - 118；Journalof PharmaceuticalSciences, 2011. 100 (3)，1184-1195)，2013年JamesE.Polli及其团队 成员采用药效团模型和贝叶斯模型，对胆酸衍生物进行NTCP抑制剂的虚拟筛选，结果发现 31个药物分子作为先导化合物分子，其中27个抑制剂是以前没有报道抑制NTCP活性的化 合物，并且其中的几个抑制剂经过测活发现，分别具有抗真菌、抗高血脂、抗高血压等疗效 (MolPharm. 2013, 10(3):1008 - 1019) 〇
[0007] 本发明涉及的新型生物素-胆酸/熊去氧胆酸类化合物，具有很强的NTCP抑制活 性，且该类化合物作为NTCP抑制剂，迄今尚未见有国内外的相关报道。本发明涉及的新型 NTCP抑制剂，为抗胆汁酸转运药物的抗病毒、抗胆汁淤积及代谢调节作用指明了方向。
【发明内容】
：
[0008] 本发明的目的之一是，提供新型生物素-胆酸/熊去氧胆酸类钠离子牛磺胆酸共 转运多肽抑制剂。
[0009] 本发明的目的之二是，提供制备所述化合物的方法。
[0010] 本发明的目的之三是，提供所述化合物在抑制NTCP中的应用。
[0011] 本发明的目的之四是，提供所述化合物为有效成份与药学上可接受的载体组成的 药物组合物及其对NTCP的抑制作用。
[0012] 本发明所述化合物的结构如式（1)所示：
[0013]
[0014] 本发明所述化合物（I)的合成方法是，通过生物素（II)与N，N-二取代二乙胺的 缩合反应制备化合物（IV)，化合物（IV)溶解于二氯甲烷中，通入盐酸气体脱Boc保护基，制 得化合物（V)，化合物（V)与胆酸或熊去氧胆酸反应制备相应的目标化合物（I)。
[0015]
【附图说明】：
[0016] 图1 :化合物对NTCP活性检测结果
[0017] 其中：BCA:化合物1-1;BUDCA:化合物1-2
【具体实施方式】：
[0018] 以下实施例仅为帮助本领域技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本 发明。
[0019] 《实施例1》N-Boc-N-甲基乙二胺-生物素（IV)的合成
[0020] 将生物素（II，11.68g，47.82mM)，1.5eqH0Bt(9.69g)，2.0eqEDCI(18.34g)加入 25mL无水干燥的DMF中，电磁搅拌2h。然后加入2.OeqDIEA(15. 78mL)和N-Boc-N-甲基 乙二胺（III，10. 0g，57. 38mM)，搅拌过夜。加入500ml水淬灭。反应液用DCM(3X150mL)萃 取，INHC1 (3X100mL)，INNa0H(3X100mL)和饱和食盐水（2X100mL)洗涤。有机层用无水 Mg2S04干燥，过滤，旋干，得白色固体IV(14. 52g)，产率：75. 82%。
[0021] 《实施例2》N-甲基乙二胺-生物素的（V)合成
[0022] 将IV(10. 01g，25mM)溶于二氯甲烷（60mL)中，在室温下通干燥的盐酸气2. 5h，继 续搅拌1. 5h。将反应液旋干，真空干燥，得白色固体V(8. 34g)，产率：99. 1%。
[0023] 《实施例3》CA-N-甲基乙二胺-生物素（1-1)的合成
[0024] 将胆酸（2. 04g, 5mM)，1. 5eqHOBt(1. 08g)，2.OeqEDCI(1. 98g)加入 10mL无水干 燥的DMF中，电磁搅拌2h。然后加入3. 6eqDBU(2. 79g)和V(l. 52g，4. 51mM)，搅拌过夜。
[0025] 加入500ml水淬灭。反应液分别用DCM(3X30mL)萃取，INHC1 (3X30mL)， lNNa0H(3X30mL)，和饱和食盐水（2X40mL)洗涤。有机层用无水Mg2S04干燥，过滤，旋干， 得黄色油状液体，用硅胶柱纯化得1-1白色固体（1. 76g)，产率：51. 2%。
[0026] 《实施例4》UDCA-N-甲基乙二胺-生物素（1-2)的合成
[0027] 将熊去氧胆酸（2.99g，7.61mM)，1.5eqH0Bt(1.64g)，2.0eqEDCI(3.01g)加入 lOmL无水干燥的DMF中，电磁搅拌2h。然后加入3. 6eqDBU(4. 24g)和V(2. 32g，6. 87mM)， 搅拌过夜。加入lOOmL水淬灭。反应液分别用DCM(3X30mL)萃取，INHCl(3X30mL)，lN Na0H(3X30mL)，和饱和食盐水（2X40mL)洗涤。有机层用无水Mg2S04干燥，过滤，旋干，得 黄色油状液体，用硅胶柱纯化得白色固体1-2 (2. 35g)，产率：45. 8%。
[0028] 《实施例5》生物活性检测结果
[0029] NTCP的主要生理功能是运输胆酸，可以用抑制NTCP的胆酸转运效率来检测化合 物对NTCP的抑制作用。鼠肝脏实质细胞高表达NTCP后，采用H3摄入法测定化合物对NTCP 的抑制作用。用缓冲液配制H3标记的牛磺胆酸至10yM，并将不同浓度的1-1或1-2与其 混合，同时处理细胞10分钟，然后弃去培养液，用不含H3标记的牛磺胆酸3次清洗细胞，然 后裂解细胞进行H3的测定。结果见图1，表明1-1和1-2均能够很明显地抑制NTCP的活 性。
[0030] 初步研究结果表明，新型生物素-胆酸/熊去氧胆酸化合物具有良好的NTCP抑制 活性，作为一类具有潜力的NTCP抑制剂值得进行更深入的研究与开发，为抗胆汁酸转运药 物的抗病毒作用指明了研究方向。
【主权项】
1. 新型钠离子牛磺胆酸共转运多肽抑制剂，其结构如通式（I)所示：R2,R3=H，CfCs烷基n= 1-102. 制备权利要求1所述抑制剂的方法，其特征是，本发明所述化合物（I)的合成方法， 通过生物素（II)与N，N-二取代二乙胺的缩合反应制备化合物（IV);，化合物（IV)溶解于 二氯甲烷中，通入盐酸气体脱Boc保护基，制得到化合物（V);，化合物（V)与胆酸或熊去氧 胆酸反应制备得到相应的目标化合物（I)。3. 权利要求1所述化合物在制备对NTCP的抑制剂中的作应用。4. 以权利要求1提供所述化合物为有效成份与药学上可接受的一种或多种载体组成 的药物组合物。对NTCP的抑制作用。5. 权利要求4所述组合物在制备NTCP抑制剂中的应用。
【专利摘要】本发明涉及新型钠离子牛磺胆酸共转运多肽抑制剂的合成及其对NTCP的抑制作用，实验研究表明，所述化合物对NTCP具有较强的抑制活性，为抗胆汁酸转运药物的抗病毒、抗胆汁淤积及代谢调节作用指明了方向，该类化合物或其组合物，有望开发成为一类具有潜力的新型NTCP抑制剂。
【IPC分类】A61K31/58, C07J43/00, A61P31/20
【公开号】CN105037477
【申请号】CN201510290719
【发明人】邵荣光, 蔡仕英, 王玉成, 王菊仙, 詹姆斯波义耳, 何红伟, 任金凤, 白晓光
【申请人】中国医学科学院医药生物技术研究所, 耶鲁大学医学院
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年5月30日