一种恩拉霉素的精制方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种恩拉霉素（Enramycin)的精制方法。
【背景技术】
[0002] 恩拉霉素（Enramycin)是从土壤中分离出来的放线菌Streptomyces fungicidious NO. B5477发酵产生的一种由不饱和脂肪酸和十几种氨基酸结合成的多肽类 抗生素。其中氨基酸分子构成环状多肽结构，脂肪酸位于多肽结构末端，根据其末端脂肪酸 种类不同，分为恩拉霉素 A(Cltl7H138Cl2N26O31)和恩拉霉素 B(Cltl8H14tlCl2N26O 31)。通常提及的恩 拉霉素则是主要由这两种成分组成的混合物（结构见式1)。该药于1966年由日本武田药 品工业株式会社研发，1974年在日本正式注册，其后在许多国家被注册和广泛使用。其中， 1993年，该药在我国成功注册，用于药物饲料添加剂。恩拉霉素对革兰氏阳性菌有很强的抑 制作用，长期使用后不易产生抗药性而且恩拉霉素内服极不易被吸收，药物主要通过粪便 排出体外，残留畜禽体内较少。除此之外，它还能改变肠道内的细菌群落分布，有利于饲料 营养成份的消化吸收，促进动物增重和提高饲料利用率，因此被世界上许多国家推荐作为 抗生素促生长剂，是一种优良的饲料添加剂。
[0003]
[0004]目前，市场上使用的恩拉霉素都是恩拉霉素预混剂，其中恩拉霉素都未经过纯化。 如专利ZL201010198230. 5和CN201210120843. 6公开的方法，其都是由含有恩拉霉素的发 酵液直接进行预混剂的制备。随着生产技术的不断发展，科研工作者正在不断的对恩拉霉 素的产品质量进行提高。如专利CN201210433028. 5公开了一种恩拉霉素粗品的制备方法， 其产品纯度可达到70%左右；CN201210153458. 1公开了一种通过大孔吸附树脂纯化得到 90%以上纯度恩拉霉素的方法；专利ZL201010213986. 2涉及一种利用大孔弱酸性阳离子 交换树脂分离提取恩拉霉素的方法，该方法可以使得恩拉霉素的纯度达到95%以上；专利 ZL201110344875. X涉及一种从恩拉霉素发酵液种提取、分离和纯化恩拉霉素的方法，该方 法的流程为将恩拉霉素发酵液进过热处理后，过滤，离心，收集菌体；向菌体加入甲醇溶液 后，超声，过滤；滤液先酸化后碱化，然后脱色，脱色液过大孔吸附树脂进行吸附，用甲醇洗 脱，收集洗脱液，经浓缩结晶后，冷冻干燥得到恩拉霉素，该方法得到的恩拉霉素的纯度达 到95%左右；CN201310730536. 4公开了一种通过弱酸性和弱碱性大孔吸附树脂联用的方 法纯化得到99%以上的恩拉霉素的方法。除此之外，ZL201210433029. X涉及一种反相层析 制备高纯度恩拉霉素 A和B的方法，ZL201210159394. 6涉及一种高压液相制备恩拉霉素标 准品的方法。
[0005] 就目前已有的技术来看，对恩拉霉素的精制方法有的采用调酸（pH为2. 0以下） 沉淀后加热烘干的方法以致其收率太低；有的采用冷冻干燥的方法以致其生产成本过高； 有的采用柱层析方法增加了操作步骤，这些方法都不适合工业化生产。为此，本发明提供了 一种恩拉霉素的精制方法，本发明的方法具有工艺简单，可操作性强，成本低廉等特点，得 到产品的纯度高、收率高，更适于工业化生产。
【发明内容】
[0006] 针对现有恩拉霉素精制工艺中存在的技术缺陷，本发明的目的在于提供一种适合 工业化生产的恩拉霉素的精制方法。
[0007] 本发明涉及一种恩拉霉素的精制方法，本发明的方法通过调整恩拉霉素溶液中恩 拉霉素的浓度、有机溶剂的体积百分含量及溶液的PH值使恩拉霉素产生沉淀，从而得到高 纯度的恩拉霉素产品。
[0008] 本发明的方法是通过以下技术方案实现的：
[0009] -种恩拉霉素的精制方法，所述方法包括：
[0010] (a)使恩拉霉素溶解在含有有机溶剂的酸性水溶液中；或者
[0011] (a'）使恩拉霉素溶解在含有有机溶剂和水的混合溶剂中，接着将所得溶液的pH 值用酸调节至酸性；以及
[0012] (b)用碱调节步骤（a)或（a'）所得溶液的pH值，从而得到恩拉霉素的沉淀物。
[0013] 其中，步骤（a)所述酸性水溶液的pH值为2. 0-5. 0,优选2. 0-4. 0,更优选 2. 5-3. 5〇
[0014] 其中，将步骤（a'）所得溶液的pH值调节至2. 0-5. 0，优选2. 0-4. 0，更优选 2. 5-3. 5〇
[0015] 其中，步骤（b)中，用碱调节步骤（a)或（a'）所得溶液的pH值至6. 5-9. 0,优选 7. O-8. 5 〇
[0016] 其中，步骤（a)或（a'）所得溶液中恩拉霉素的浓度为100_150g/L，优选为 110-140g/L〇
[0017] 其中，步骤（a)或（a'）所述的有机溶剂为醇类溶剂，包括但不限于甲醇，乙醇或 异丙醇，优选为甲醇或乙醇，更优选为甲醇，所述混合溶剂中醇类溶剂的体积百分含量为 60 % -90 %，优选 65 % -88 %，更优选 70-85 %。
[0018] 其中，步骤（a'）所述的酸选自盐酸，硝酸或硫酸，优选盐酸。
[0019] 其中，步骤（b)所述的碱选自氢氧化钠或氢氧化钾，优选氢氧化钠。
[0020] 在本发明一个优选的实施方案中，步骤（a)或（a'）将溶液的pH值控制在 2. 0-5. 0,优选2. 0-4. 0,更优选2. 5-3. 5范围，一方面是为了增加恩拉霉素的溶解度，另一 方面，也是为了提高恩拉霉素的稳定性。
[0021] 本发明中，醇类溶剂的含量对沉淀的影响实验证明，当醇类溶剂的体积百分含量 在50% -90%，优选65% -88%，更优选70% -85%时，有利于工艺操作及产品纯度的提高。
[0022] 采用本发明的方法，最后得到的产品纯度和收率都很高，而且本发明的方法操作 简单，重复性好，成本低，非常适合工业化生产。
【附图说明】
[0023] 图1实施例1中80 %的甲醇水溶液制备所得恩拉霉素的XRPD图谱
【具体实施方式】
[0024] 以下通过实施例进一步解释说明本发明，但是，对本发明并不构成限定。
[0025] 本发明所涉及的X-射线粉末衍射仪器及测试条件为：X-衍射仪器型号Rigaku D/ max-2200Cu靶；操作方法：扫描速度4° /min，扫描步宽0. 0Γ。
[0026] 本发明涉及的液相测试条件为：色谱柱为：Agilnet HC-C184.6X250mm 5 μπι; 流动相为：缓冲液（3. Oml磷酸+500ml水，用NaOH调节pH = 3. 8)/甲醇/乙腈= 500/300/200 ;检测波长：232nm ;流速：1.0 ml/min ;柱温：35°C。
[0027] 实施例1
[0028] 取3份恩拉霉素粗品（HPLC纯度88. 6% )各450g，分别用80%的甲醇水溶液、80% 的乙醇水溶液和80 %的异丙醇水溶液（pH值都是3)各500mL溶解，接着用氢氧化钠调节各 溶液的PH值至7. 5,析出恩拉霉素固体，过滤，收集所得固体并干燥，得到的恩拉霉素纯度 和收率如表1所示。其中用80%的甲醇水溶液制备得到的恩拉霉素的XRPD图谱如图1所 不O
[0029] 表 1
[0030]
[0031] 实施例2
[0032] 取8份恩拉霉素粗品（HPLC纯度88.6%)各450g，分别用50%，60%，65%，70%， 80 %，85 %，88 %和90 %的甲醇水溶液各500mL溶解，然后用盐酸调节各溶液的pH值至 3. 0,接着用氢氧化钠调节各溶液的pH值至7. 5,析出恩拉霉素固体，过滤，收集所得固体并 干燥，得到的恩拉霉素纯度和收率如表2所示。
[0033] 表 2
[0034]
[0035] 实施例3
[0036] 取恩拉霉素粗品（HPLC纯度88. 6 % )用80 %的甲醇水溶液（pH值为3)分别配制 成表3所示浓度的溶液各500mL，接着用氢氧化钠调节各溶液的pH值至7. 5,析出恩拉霉素 固体，过滤，收集所得固体并干燥，得到的恩拉霉素纯度和收率如表3所示。
[0037] 表 3
[0038]
[0039] 实施例4
[0040] 取12份恩拉霉素粗品（HPLC纯度88. 6% )各450g，分别用80%的甲醇水溶液（pH 值为3)溶解配成溶液500mL，然后按照下表4调节各溶液的pH值，结果如下表4所示。
[0041] 表 4
[0042]
[0043]
【主权项】
1. 一种恩拉霉素的精制方法，其特征在于，所述方法包括： (a) 使恩拉霉素溶解在含有有机溶剂的酸性水溶液中；或者 (a'）使恩拉霉素溶解在含有有机溶剂和水的混合溶剂中，接着将所得溶液的pH值用 酸调节至酸性；以及 (b) 用碱调节步骤（a)或（a'）所得溶液的pH值，从而得到恩拉霉素的沉淀物。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（a)所述酸性水溶液的pH值为 2. 0-5.O，优选 2. 0-4.O，更优选 2. 5-3. 5。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将步骤（a'）所得溶液的pH值调节至 2. 0-5. 0，优选 2. 0-4. 0，更优选 2. 5-3. 5。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（b)中，用碱调节步骤（a)或（a'） 所得溶液的pH值至6. 5-9. 0,优选L0-8. 5。5. 根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤（a)或（a'）所得溶液中恩 拉霉素的浓度为100_150g/L，优选为110-140g/L。6. 根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤（a)或（a'）所述的有机溶 剂为醇类溶剂。7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述混合溶剂中醇类溶剂的体积百分含 量为 60 % -90 %，优选 65 % -88 %，更优选 70-85 %。8. 根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述醇类溶剂为甲醇，乙醇或异丙醇， 优选为甲醇或乙醇，更优选甲醇。9. 根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，步骤（a'）所述的酸选自盐酸、 硝酸或硫酸，优选盐酸。10. 根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，步骤（b)所述的碱选自氢氧化 钠或氢氧化钾，优选氢氧化钠。
【专利摘要】本发明涉及一种恩拉霉素(Enramycin)的精制方法，所述方法包括将恩拉霉素粗品配制成一定浓度的溶液，然后调节其pH值并最终实现沉淀，从而得到高纯度的恩拉霉素。该方法工艺简单，可操作性强，得到的产品纯度和收率高，非常适于工业化生产。
【IPC分类】C07K1/14, C07K7/08
【公开号】CN104926926
【申请号】CN201510078756
【发明人】张勇军, 王继栋, 张辉, 熊正军, 吴志卿, 陈正杰, 陈姣, 白骅
【申请人】浙江海正药业股份有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年2月13日