一种橄榄苦苷的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于天然植物提取技术领域，涉及一种橄榄苦苷的制备方法。
【背景技术】
[0002]橄榄苦苷是一种重要的苯酚类裂环烯醚萜苷，属于植物多酚。裂环烯醚萜类化合物是环戊烷单萜衍生物中的一类化合物，一直被认为是木樨榄属植物化合物分类学上的标记化合物，在多种天然产物生成途径中显得尤为重要。橄榄苦苷因含有多个酚羟基，所以具有极强的抗氧化能力，能减轻低密度脂蛋白的氧化程度，预防冠心病、动脉粥样硬化的发生，也能舒缓血管平滑肌和降低血压，并有很强的抗菌抗病毒的效果。橄榄苦苷还多用于护肤品中保持肌肤的弹性和柔嫩，防止老化现象，重现肌肤的光滑，抵御由氧化导致的肌肤破坏，国外已有很多知名化妆品中均有添加。
[0003]目前国内研宄橄榄苦苷提取方面的报道较少，主要集中在从植物小叶丁香中提取橄榄苦苷，提取方法多为有机溶剂萃取。国内工业化生产，主要是利用木犀榄属植物油橄榄叶，采用传统水提醇沉得到苦苷粗制品。由于物种和环境的差异，橄榄叶中橄榄苦苷含量相差较大，加上传统提取工艺，有机溶剂消耗大，产品含量低，生产成本较高。
[0004]本发明采用超临界萃取法提取、大孔吸附树脂富集与高效逆流色谱分离纯化相结合的方法制备橄榄苦苷。该方法溶剂用量少、提取率高，无污染，且工艺简单、操作方便。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题是提供一种橄榄苦苷的制备方法。
[0006]本发明的目的是通过如下技术方案实现的:
(1)取油橄榄叶干燥、粉碎，置于萃取釜中，以总溶剂体积5%的乙醇为夹带剂，设置萃取温度为50~60°C，待温度稳定后通入CO2气体，流量为20~30L/h，并调节压力到30~40MPa，进行萃取2~3h后，收集萃取物；
(2)将所得萃取物浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂，先用2~3BV的蒸馏水洗脱，再用2-3BV的20~30%的乙醇洗脱，后用4~6BV的70~80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得浓缩物；
(3)将浓缩物采用高速逆流色谱法分离纯化，以氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，取上相做固定相、下相为流动相，主机转速800-1000rpm，流速为3~4mL/min，收集目标流分，回收试剂，真空干燥得产品。
[0007]步骤(2)中所述的大孔吸附树脂类型为AB-8、D-101、XDA-1中的任意一种。
[0008]步骤(2)中所述的树脂用量与原料的质量比为1:1。
[0009]步骤(3)中所述的氯仿-甲醇-水体积比为10:5:7。
[0010]本发明的有益效果在于:采用超临界流体提取，提取时间短、提取效率高，无毒、无味，廉价易得；采用大孔树脂柱层析富集纯化，可除去多种杂质，减轻了后面工序的工作量；采用高速逆流色谱分离效果好，产品纯度高。
【具体实施方式】
[0011]实施例1:
取油橄榄叶干燥、粉碎，置于萃取釜中，以总溶剂体积5%的乙醇为夹带剂，设置萃取温度为50°C，待温度稳定后通入CO2气体，流量为20L/h，并调节压力到30MPa，进行萃取2h后，收集萃取物；将所得萃取物浓缩至无醇味，上与原料等质量的AB-8大孔吸附树脂，先用2BV的蒸馏水洗脱，再用2BV的20%的乙醇洗脱，后用4BV的70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，得浓缩液；以氯仿-甲醇-水(10:5:7)为两相溶剂系统，置于分液漏斗中混合均匀，取上相为固定相，下相为流动相，取上述浓缩物溶于流动相中备用，开启高速逆流色谱仪，设定流动相流速为3mL/min，同时开启主机电机，自流动相流出时开始进样，转速控制为800rpm，通过检测器收集橄榄苦苷流分，浓缩并干燥得橄榄苦苷，高效液相检测含量为88.9%。
[0012]实施例2:
取油橄榄叶干燥、粉碎，置于萃取釜中，以总溶剂体积5%的乙醇为夹带剂，设置萃取温度为60°C，待温度稳定后通入CO2气体，流量为25L/h，并调节压力到35MPa，进行萃取3h后，收集萃取物；将所得萃取物浓缩至无醇味，上与原料等质量的XDA-1大孔吸附树脂，先用3BV的蒸馏水洗脱，再用3BV的25%的乙醇洗脱，后用5BV的75%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，得浓缩液；以氯仿-甲醇-水(10:5:7)为两相溶剂系统，置于分液漏斗中混合均匀，取上相为固定相，下相为流动相，取上述浓缩物溶于流动相中备用，开启高速逆流色谱仪，设定流动相流速为3.5mL/min,同时开启主机电机，自流动相流出时开始进样，转速控制为lOOOrpm，通过检测器收集橄榄苦苷流分，浓缩并干燥得橄榄苦苷，高效液相检测含量为92.3%。
[0013]实施例3:
取油橄榄叶干燥、粉碎，置于萃取釜中，以总溶剂体积5%的乙醇为夹带剂，设置萃取温度为55°C，待温度稳定后通入CO2气体，流量为30L/h，并调节压力到40MPa，进行萃取3h后，收集萃取物；将所得萃取物浓缩至无醇味，上与原料等质量的D-101大孔吸附树脂，先用3BV的蒸馏水洗脱，再用3BV的30%的乙醇洗脱，后用6BV的80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，得浓缩液；以氯仿-甲醇-水(10:5:7)为两相溶剂系统，置于分液漏斗中混合均匀，取上相为固定相，下相为流动相，取上述浓缩物溶于流动相中备用，开启高速逆流色谱仪，设定流动相流速为4mL/min，同时开启主机电机，自流动相流出时开始进样，转速控制为900rpm，通过检测器收集橄榄苦苷流分，浓缩并干燥得橄榄苦苷，高效液相检测含量为87.4%。
【主权项】
1.一种橄榄苦苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取油橄榄叶干燥、粉碎，置于萃取釜中，以总溶剂体积5%的乙醇为夹带剂，设置萃取温度为50~60°C，待温度稳定后通入CO2气体，流量为20~30L/h，并调节压力到30~40MPa，进行萃取2~3h后，收集萃取物； (2)将所得萃取物浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂，先用2~3BV的蒸馏水洗脱，再用2-3BV的20~30%的乙醇洗脱，后用4~6BV的70~80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得浓缩物； (3)将浓缩物采用高速逆流色谱法分离纯化，以氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，取上相做固定相、下相为流动相，主机转速800-1000rpm，流速为3~4mL/min，收集目标流分，回收试剂，真空干燥得产品。2.根据权利要求1所述的一种橄榄苦苷的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的大孔吸附树脂类型为AB-8、D-101、XDA-1中的任意一种。3.根据权利要求1所述的一种橄榄苦苷的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的树脂用量与原料的质量比为1:1。4.根据权利要求1所述的一种橄榄苦苷的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的氯仿-甲醇-水体积比为10:5:7。
【专利摘要】本发明涉及一种橄榄苦苷的制备方法，其步骤如下：1）取油橄榄叶干燥、粉碎，置于萃取釜中，以总溶剂体积5%的乙醇为夹带剂，设置萃取温度为50~60℃，待温度稳定后通入CO2气体，流量为20~30L/h，并调节压力到30~40MPa，进行萃取2~3h后，收集萃取物；2）将所得萃取物浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂，乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，得浓缩物；3）将浓缩物进行高效逆流色谱分离，得高含量橄榄苦苷。本发明方法样品损耗少，分离效果好，成本低廉，能得到含量高、品质好的橄榄苦苷。
【IPC分类】C07H17/04, C07H1/08
【公开号】CN104910223
【申请号】CN201510270831
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月26日