一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭iii的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III (10-DAB III) 的方法，特别是利用10-DAB III粗品与咪唑类化合物结晶纯化获得高纯度10-DAB III的 分离方法。
【背景技术】
[0002] 多西紫杉醇被认为是迄今疗效最显著的抗癌药物之一，1996年经FDA确认开始用 于肺癌、乳腺癌、结肠癌等方面的临床药物。多西紫杉醇和紫杉醇（Taxol) -样具有广谱 的抗白血病和抗实体肿瘤活性，结构复杂，多官能团和多手性中心等，全合成成本高、难度 较大。当发现欧洲红豆杉的针叶中提取到浓度较高的紫杉烷类似物10-去乙酰基巴卡亭 (10-deacetyl baccatin III，简称10-DAB III)中间体后，多西紫杉醇的合成及规模化生 产才成为可能。10-DAB III的结构式如下：
[0003]
[0004] 10-DAB III主要分布在红豆杉的枝叶中，其含量可高达0. 1 %以上，而在多年生的 树皮含量最少。其分布与紫杉醇的分布刚好相反，紫杉醇主要分布在多年生的红豆杉树皮 中，含量多在〇. 03%以下，而在叶中含量极低，大多不及树皮中含量的十分之一。枝叶是可 再生资源，因此生产10-DAB III不象生产紫杉醇以牺牲有限的红豆杉资源为代价，因此，研 宄10-DAB III的提取和纯化工艺具有十分重要的意义。
[0005]目前，关于10-DAB III的提取分离已有大量文献和专利报道，基本上都是采取提 取、分离、结晶三个步骤，其中分离和结晶是影响得率和纯度的关键步骤。常规采用甲 醇或酒精进行浸泡提取，萃取浓缩，然后多次硅胶柱层析分离，重结晶得到一定纯度的 10-DABIII。多次柱层析分离和重结晶过程不仅费时费力，增加溶剂成本，还会降低得率。因 而如何简化分离纯化工艺，尽可能少的利用有机溶剂方便的获得高质量的10-DABIII成为 该领域研宄的重点。
[0006] 中国专利公开号CN1473821A公开了一种提取10-DABIII的方法，采用常规硅胶柱 层析分离提取处理出的半成品10-DABIII，该方法较耗费时间，溶剂消耗量也大，容易造成 得率的损失。中国专利公开号CN1398859A公开了一种从种植红豆杉枝叶用后残渣中提取 10-DABIII的方法，该方法涉及制备液相色谱分离过程，但所用溶剂体系和梯度洗脱手段在 规模化生产中显得工艺复杂，溶剂消耗量大。中国专利公开号CN101045719A公开了一种利 用制备液相色谱分离纯化10-DABIII的半成品，用分析纯四氢呋喃、正己烷和甲醇混合溶 剂为洗脱流动相，制备工艺较为复杂，更适合于实验室小批量生产。
【发明内容】
[0007] 针对10-DABIII的提取纯化需要使用多次柱层析及重结晶，或者使用复杂的制备 色谱技术来实现的现状，本发明提出将10-DABIII粗品经一次柱层析和一次添加咪唑类 化合物进行结晶纯化获得高纯度精品的简化分离方法。考虑到10-DAB III的结构中含有 多羟基，如果加入含氮有机化合物，则两者之间可能通过氢键形成结晶化合物，我们研宄 发现，10-DAB III易与咪唑形成结晶配合物，而不受其它杂质影响，更为重要的是，形成的结 晶配合物加水后可以方便的用有机溶剂提取出来，这样的结晶分离过程为获得高纯度的 10-DAB III提供了方便。
[0008] 本发明的目的在于提供一种简易高效分离纯化10-DABIII粗品，获得高纯度 10-DABIII 的方法。
[0009] 本发明的目的通过以下技术方案实现：
[0010] (1)将红豆杉枝叶粉碎烘干后，按固液比1:10的比例用体积分数为80%的乙醇水 溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤液，减压浓缩后得到10-DABIII提取物，其中 10-DABIII的质量含量为8-20% ;
[0011] (2)将10-DABIII提取物用溶剂溶解后干法上样，用洗脱液洗脱，收集含 10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品；
[0012] (3)将上述10-DABIII半成品用二氯甲烷溶解后，按摩尔比为10-DABIII半成品： 咪唑类化合物=I :1. 5-4. 0的比例加入咪唑类化合物，室温搅拌30min后，静置，(TC冷却， 将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合物；
[0013] (4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并 有机相，再用无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DAB III纯品。
[0014] 步骤（2)所述溶解10-DABIII提取物的溶剂为四氢呋喃、二氯甲烷、甲醇中的一种 或几种；
[0015] 步骤（2)所述的洗脱液选自下述混合溶剂中的任意一种：乙酸乙酯-石油醚、甲 醇-四氢呋喃-正己烷、乙酸乙酯-环己烷；
[0016] 步骤（3)所述的咪唑类化合物为咪唑、1-甲基咪唑、2-甲基咪唑中的一种或几种。
[0017] 本发明具有以下优点：
[0018] (1)利用10-DAB III易与咪唑类化合物形成结晶配合物的特点，方便的实现了 10-DAB III与其它紫杉烷类化合物进行分离的目的；
[0019] (2) 10-DAB III与咪唑类化合物形成结晶配合物后，可以方便的用有机溶剂提取分 离，从而获得高纯度产品；
[0020] (3)分离过程仅需一次柱层析和一次结晶分离过程，避免了连续多次的柱层析及 重结晶操作，大大减少了人力、物力耗费；
[0021] (4)与10-DAB III形成结晶配合物的咪唑类化合物可以回收，循环使用，成本更低 也更环保。
【具体实施方式】
[0022] 实施例1 :
[0023] (1)将红豆杉枝叶烘干后粉碎成100目的细粉，取Ikg细粉按固液比1:10的比例 用体积分数为80%的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤液，减压浓缩后得 10-DABIII 提取物 120g。
[0024] (2)将10-DABIII提取物用300mL四氢呋喃溶解后干法上样，用乙酸乙酯-石 油醚（体积比乙酸乙酯：石油醚=2:1)洗脱，收集含10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂得 10-DABIII 半成品 L 85g。
[0025] (3)将上述10-DABIII半成品用20mL二氯甲烷溶解后，加入咪唑0. 20g，室温搅拌 30min后，静置，0°C冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合 物 1.08g。
[0026] (4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并 有机相，无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DAB III纯品0. 896g，纯度99. 2%。
[0027] 实施例2 :
[0028] (1)将红豆杉枝叶烘干后粉碎成100目的细粉，取IOkg粉末按固液比1:10的比例 用体积分数为80%的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤液，减压浓缩后得 10-DABIII 提取物 1350g。
[0029] (2)将10-DABIII提取物用3000mL四氢呋喃溶解后多次干法上样，用乙酸乙 酯-环己烷（体积比乙酸乙酯：环己烷=2:1)洗脱，收集含10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂 得 10-DABIII 半成品 22. 8g。
[0030] (3)将上述10-DABIII半成品用200mL二氯甲烷溶解后，加入咪唑3. 0g，室温搅拌 30min后，静置，0°C冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合 物 11.9g。
[0031] (4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并 有机相，无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DAB III纯品9. 35g，纯度99. 4%。
[0032] 实施例3 :
[0033] (1)将红豆杉枝叶烘干后粉碎成100目的细粉，取5kg粉末按固液比1:10的比例 用体积分数为80%的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤液，减压浓缩后得 10-DABIII 提取物 680g。
[0034] (2)将10-DABIII提取物用1200mL二氯甲烷溶解后多次干法上样，用乙酸乙 酯-石油醚（体积比乙酸乙酯：石油醚=2:1)洗脱，收集含10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂 得 10-DABIII 半成品 10. 9g。
[0035] (3)将上述10-DABIII半成品用IOOmL二氯甲烷溶解后，加入咪唑2. 0g，室温搅拌 30min后，静置，0°C冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合 物 5. 8g。
[0036] (4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并 有机相，无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DAB III纯品4. 38g，纯度99. 5%。
【主权项】
1. 一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法，其特征在于包 括如下步骤： (1) 将红豆杉枝叶粉碎烘干后，按固液比1:10的比例用体积分数为80%的乙醇水 溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤液，减压浓缩后得到10-DABIII提取物，其中 10-DABIII的质量含量为8-20% ; (2) 将10-DABIII提取物用溶剂溶解后干法上样，用洗脱液洗脱，收集含10-DABIII的 洗脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品； (3) 将上述10-DABIII半成品用二氯甲烷溶解后，按摩尔比为10-DABIII半成品：咪唑 类化合物=I:1.5-4.0的比例加入咪唑类化合物，室温搅拌30min后，静置，(TC冷却，将所 得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合物； (4) 将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并有机 相，再用无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DABIII纯品。2. 如权利要求1所述的一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的 方法，其特征在于：步骤（2)中溶解10-DABIII提取物的溶剂为四氢呋喃、二氯甲烷、甲醇中 的一种或几种。3. 如权利要求1所述的一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的 方法，其特征在于：步骤（2)中的洗脱液选自下述混合溶剂中的一种：乙酸乙酯-石油醚、 甲醇-四氢呋喃-正己烷、乙酸乙酯-环己烷。4. 如权利要求1所述的一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的 方法，其特征在于：步骤（3)中的咪唑类化合物为咪唑、1-甲基咪唑、2-甲基咪唑中的一种 或几种。5. 如权利要求1所述的一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III 的方法，其特征在于：经过一次柱层析和一次添加咪唑类化合物进行结晶纯化获得高纯度 10-DABIII〇6. 如权利要求1所述的一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的 方法，其特征在于：所得10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水分离，有机溶剂萃取得纯品。
【专利摘要】本发明公开了一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法。它包含以下工艺过程1)将红豆杉枝叶粉碎烘干后，用80％乙醇回流提取5小时，连续提取3次，滤液减压浓缩后得10-DABIII提取物。2)将10-DABIII提取物溶解后干法上样，收集含10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品。3)将10-DABIII半成品溶解后，按1：1.5-4的摩尔比加入咪唑类化合物，搅拌30min后静置，0℃冷却，过滤，干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合物。4)将10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，萃取，干燥，去除溶剂后得10-DABⅢ纯品含量在99％以上。
【IPC分类】C07D305/14
【公开号】CN104892551
【申请号】CN201510357296
【发明人】隋岩, 罗志刚, 陈丽
【申请人】井冈山大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月25日