一种足分支菌病诊断用培养基的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种足分支菌病诊断用培养基。
【背景技术】
[0002] 足分枝菌病（mycetoma)，又称足菌病、足菌肿，系皮肤和皮下组织的一种慢性化脓 性肉芽肿性疾病，伴有瘘管形成和流出带有颗粒的脓液。足菌肿好发足部，其症状为丘瘆、 脓疱或结节，重复结节、化脓和纤维化。其致病病原体为两大类：放线菌属和真菌菌属，而放 线菌性足菌肿多由奴卡菌属引发。该病的治疗需要根据菌属不同进行针对性的抗菌或者抗 真菌治疗。
[0003] 该病临床诊断简单，但是菌属鉴别非常困难。目前对于诺卡氏菌属诊断的金标准 是PCR鉴定，但并不是所有的临床医院都具有分子生物实验室，因此临床诊断多依据细菌 培养，所用的培养基多为普通血琼脂培养板（BAP)，由于奴卡菌属属于苛养菌，即对生长环 境、营养要求较苛刻的细菌，在普通环境中不能或难以生长，需要培养96小时方可有阳性 表现，1周左右方能较准确地做出鉴定，结果延误时间，甚至导致患者被迫截肢或出现肺脑 转移。
[0004] 此外，对于混合感染或者标本被真菌污染时，由于奴卡菌属的苛养属性，混入的真 菌在目前的培养基上比奴卡菌生长更快，很快就覆盖了培养基，导致奴卡菌属无法生长，阳 性率低。对于混合感染的漏检率高达61~70%。因此作为基层医院确诊唯一依据的临床细 菌检查的正确与快速鉴定极为重要。
【发明内容】
[0005] 本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种能够确保奴卡菌阳性检 出率的足分支菌病诊断用培养基。
[0006] 本发明解决其技术问题的技术方案是：一种足分支菌病诊断用培养基，其特征 在，每升中含有牛肝粉10. 〇g ;麦芽浸粉2. 0g ;酵母浸出粉5. 0g ;氯化钠5. 0g ;磷酸氢二钠 3. 0g ;琼脂15. 0g ;焦磷酸铁0. lg ;乳酸钙0. 05g ;萘啶酮酸0. 05g ;毛子草酮0. 001g ;维生 素I 0. lg ;无菌脱纤维绵羊血100ml ;;蒸馏水加至1000ml。
[0007] 上述培养基的制备方法为：称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；磷酸 氢二钠；琼脂；焦磷酸铁；乳酸钙；毛子草酮混匀蒸馏水溶解，210°C，灭菌15min，冷却 到45°C，加入灭菌萘啶酮酸；灭菌维生素K 1;无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到 1000ml后分装。
[0008] 其中：所述的牛肝粉、麦芽浸粉提供碳源、氮源，酵母浸出粉富含蛋白质、氨基酸、 多肽、核苷酸、维生素、生长因子、微量元素等营养成分，为微生物提供均衡营养，这些物质 对促进奴卡菌的繁殖和生长都是很重要的因素；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠为 缓冲剂；琼脂为培养基的凝固剂；焦磷酸铁为营养剂，为奴卡菌繁殖生长提供必需的铁元 素，且该浓度下，由于焦磷酸铁的参与，导致真菌生长不良；乳酸钙除了做营养增强剂外，还 可以抑制革兰氏阳性菌生长；萘啶酮酸抑制革兰氏阴性菌的生长；毛子草酮（2-Ethoxymet hylene-3, 5-dihydroxy-y-pyrone)，实验室研宄表明毛子草酮可以抑制葡萄球菌、链球菌、 变形杆菌、肠炎杆菌、多种真菌等杂菌的生长，但该浓度下由于对诺卡氏菌属无抗菌抑菌作 用，因此提高了奴卡菌的分离率。通过实验将同一奴卡菌接种到2个BAP培养基上，其中一 个BAP培养基添加0. 1%灭菌维生素匕于37°C下培养，48小时后观察菌株，发现添加维生素 匕的BAP培养基有小的奴卡菌菌落，没有添加维生素k :的BAP培养基未发现奴卡菌菌落，维 生素h促进细胞生长、分化，是奴卡菌的生长促进因子，有助于缩短培养时间；无菌脱纤维 绵羊血提供能量环境；酪蛋白磷酸肽为激活剂，可以促进奴卡菌对铁元素、钙元素的摄取； 天冬酰胺为营养强化剂，促进奴卡菌对氨基酸的摄取；生地黄为玄参科植物生地黄的新鲜 或干燥块根，现代医学研宄表明，生地黄根茎中含有20多种苷类；8种糖类；20余种氨基酸 和20余种无机元素，生地黄水提液是良好的营养强化剂，并且有抑制金黄色葡萄球菌生长 的作用。
[0009] 本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、奴卡菌分离率高的特点。
【具体实施方式】
[0010] 以下结合实际情况，对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0011] 实施例1，配方为：牛肝粉l〇. 〇g ;麦芽浸粉2. 0g ;酵母浸出粉5. 0g ;氯化钠5. 0g ; 磷酸氢二钠3. 0g ;琼脂15. 0g ;焦磷酸铁0. lg ;乳酸钙0. 05g ;萘啶酮酸0. 05g ;毛子草酮 0. 001g ;维生素& 0. lg ;无菌脱纤维绵羊血100ml ;;蒸馏水加至1000ml。制备方法称取 牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；磷酸氢二钠；琼脂；焦磷酸铁；乳酸钙；毛子草酮 混匀蒸馏水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌灭菌萘啶酮酸；灭菌维生素K 1; 无菌脱纤维绵羊血混勾，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0012] 实施例2,配方为：牛肝粉10. 0g ;麦芽浸粉5. 0g ;酵母浸出粉5. 0g ;氯化钠5. 0g ; 磷酸氢二钠3. 0g ;琼脂15. 0g ;焦磷酸铁0. 3g ;乳酸钙0. 03g ;萘啶酮酸0. 03g ;毛子草酮 0. 003g;维生素& 0. 01g;络蛋白磷酸肽0. lg;无菌脱纤维绵羊血80ml;;蒸馏水加至 1000ml。制备方法称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；磷酸氢二钠；琼脂；焦磷 酸铁；乳酸钙；毛子草酮混匀，蒸馏水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌灭菌 萘啶酮酸；灭菌维生素k 1;灭菌络蛋白磷酸肽；无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到 1000ml后分装。
[0013] 实施例3,配方为：牛肝粉5. 0g ;麦芽浸粉3. 0g ;酵母浸出粉10. 0g ;氯化钠5. 0g ; 磷酸氢二钠3. 0g ;琼脂20. 0g ;焦磷酸铁0. 2g ;乳酸钙0. 03g ;萘啶酮酸0. 01g ;毛子草酮 0. 001g ;维生素& 0. 03g ;络蛋白磷酸肽0. 3g ;无菌脱纤维绵羊血90ml ;浓度200g / L的生 地黄水提液250ml;;蒸馏水加至1000ml。制备方法制备方法：（1)取50g生地黄加水煮沸 45min，过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得生地 黄水提液250ml ; (2)称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；磷酸氢二钠；琼脂；焦磷 酸铁；乳酸钙；毛子草酮混匀溶于步骤（1)所得的生地黄提取液中混匀，210°C灭菌15min， 冷却到45°C，加入灭菌灭菌萘啶酮酸；灭菌络蛋白磷酸肽；灭菌维生素K1;无菌脱纤维绵羊 血混匀，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0014] 实施例4,配方为：牛肝粉8. 0g ;麦芽浸粉3. 0g ;酵母浸出粉8. 0g ;氯化钠5. 0g ; 磷酸氢二钠3. Og ;琼脂20.0 g ;焦磷酸铁0. lg ;乳酸钙0.0 lg ;萘啶酮酸0. 05g ;毛子草酮 0. 005g ;维生素Ki 0. 05g ;络蛋白磷酸肽0. 3g ;天冬酰胺0.0 lg ;无菌脱纤维绵羊血100ml ; 浓度200g / L的生地黄水提液300ml ;;蒸馏水加至1000ml。制备方法：（1)取60g生地黄 加水煮沸60min，过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/ L，得生地黄水提液300ml ; (2)称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；磷酸氢二钠； 琼脂；焦磷酸铁；乳酸钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀溶于步骤（1)所得的生地黄提取液中混 匀，210°C灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌灭菌萘啶酮酸；灭菌络蛋白磷酸肽；灭菌维生 素K 1;无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。所述生地黄水提液浓度 200g/L指的是每升含有生药200g。
[0015] 临床试验资料如下。
[0016] 1对象与方法。
[0017] 1. 1培养基制备：实验组共设4组，分别为实施例1方案组；实施例2方案组、实 施例3方案组、实施例4方案组和对照组，对照组为普通血琼脂培养板（BAP)培养基，其配 方为：牛肉粉5g / L、蛋白胨12g / L、琼脂15g / L、氯化钠5g / L、无菌脱纤维绵羊血 100ml / L〇
[0018] 1. 2痰液采集培养方法：临床诊断为足分支菌病患者39例，取脓液用接种环分区 划线接种于实施例1方案组；实施例2方案组；实施例3方案组；实施例4方案组和对照组 培养基。37°C保温，保温箱培养48h、96h挑取细小菌落进行菌属鉴定。各样本编号送检PCR 做分子生物学鉴定。
[0019] 1. 3细菌培养阳性检出标准：取出培养皿，观察培养基上菌落生长情况，依据《临 床微生物学诊断与图解》挑选奴卡氏菌属目标菌涂片，并行革兰氏染色和显微镜镜检，阳性 标准依从《临床微生物学诊断与图解》。最终结果金标准为PCR鉴定。
[0020] 2结果：39份样本中经PCR最后鉴定为奴卡菌阳性的为19例，按照标号选出上述 19例标本，统计细菌培养结果。48h、96h各组检出阳性菌株例数见下表，
【主权项】
1.一种足分支菌病诊断用培养基，其特征在于，每升中含有牛肝粉10.Og;麦芽浸粉2.Og;酵母浸出粉5.Og;氯化钠5.Og;磷酸氢二钠3.Og;琼脂15.Og;焦磷酸铁0.Ig;乳酸 妈0. 05g;萘啶酮酸0. 05g;毛子草酮0.OOlg;维生素K1 0.Ig;无菌脱纤维绵羊血100mL;; 蒸馏水加至1000ml。
【专利摘要】本发明公开了一种足分支菌病诊断用培养基。属于检验微生物培养领域，其特征在于，配方含有牛肝粉、麦芽浸粉、酵母浸出粉、氯化钠、磷酸氢二钠、琼脂、焦磷酸铁、乳酸钙、萘啶酮酸、毛子草酮、维生素K1、无菌脱纤维绵羊血、蒸馏水。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠，分离率高、培养时间短的特点。
【IPC分类】C12Q1-04
【公开号】CN104846055
【申请号】CN201510298115
【发明人】李进红, 江菲菲
【申请人】李进红
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月4日