河北白术pcr鉴定试剂盒及鉴定方法
【专利说明】巧北白术PCR鉴定试剂盒及鉴定方法 (-)技术领域
[000。本发明设及一种DNA分子鉴定方法，特别设及中药河北白术PCR鉴定试剂盒、特异 性引物、模板及鉴定方法。 (二）【背景技术】
[0002] 白术是为菊科植物白术Atract}dodes macrocephala Koidz.的干燥根茎，具有健 脾益气，燥湿利水，止汗，安胎等多种药用功能，在临床上应用较为广泛。白术品种较多，主 要品种包括河北白术、浙白术、湖南平术、安徽徽术，分别产自河北、浙江、湖南和安徽。其中 河北白术又名"小白术"，产量最高，且药用成分与其他品种有些差异。由于近年来河北白术 种植基地不断的扩大，种质资源混乱W及W次充好现象较为严重，对白术品种做出准确的 鉴定有利于白术的扩种和中药质量监管。
[0003]现今对不同产地白术的鉴定方法主要包括外观鉴定，利用化学试剂、光谱、核磁共 振等技术进行理化性质鉴定，但由于不同产地白术的亲缘关系较近，致使形态和理化性质 较相似，利用传统中药鉴定方法较难鉴定。随着生物学技术的发展，应用分子生物学手段， 利用中药基因序列的差异性对中药进行分子鉴定，具有准确、简便、重复性好、耗时短等诸 多等优点。
[0004] 性好的诸多优点，鉴定的结果不受样品产地、生长环境和来源的影响。本发明提供 的PCR检测法就是一种河北白术的DNA分子鉴定方法，能够准确鉴定河北白术。目前文献 报道的对河北白术做出准确鉴定的方法均为传统的中药鉴定手段，利用PCR检测法对河北 白术进行鉴定尚未见报道。 (H)
【发明内容】
[0005]本发明目的是提供一种能够准确鉴定中药河北白术的PCR鉴定试剂盒和检测方 法，包括PCR检测法关键试剂PCR引物、模板和PCR检测法的检测步骤。
[0006]本发明采用的技术方案是；
[0007] 本发明提供一种河北白术PCR鉴定试剂盒，所述试剂盒中的特异性引物为 皿Z1 (SEQ ID NO. 2)和皿Z2(SEQ ID NO. 3);
[0008]皿Z1 ; 5 ' -GGACATGACAGAAGTATG-3'，
[0009]皿Z2 ; 5 ' -TGCTGAGAGAAGCAAATC-3'。
[0010]进一步，所述的河北白术PCR鉴定试剂盒的组成为：
[0011]
【主权项】
1. 一种河北白术PCR鉴定试剂盒，其特征在于所述试剂盒中的特异性引物为HBZ1和 HBZ2,HBZ1和HBZ2的序列如下： HBZ1 :5' -GGACATGACAGAAGTATG-3' ； HBZ2 :5' -TGCTGAGAGAAGCAAATC-3'。
2. 如权利要求1所述河北白术PCR鉴定试剂盒，其特征在于所述的河北白术PCR鉴定 试剂盒的组成为：
3. -种利用权利要求1所述河北白术PCR鉴定试剂盒对河北白术进行鉴定的方法，其 特征在于所述方法为： (1) 模板DNA的提取和质量鉴定：提取供试品DNA作为PCR的模板；以电泳法检测模板 DNA的质量，条带清晰无弥散的，即为符合PCR反应的模板DNA; (2) PCR鉴定：利用河北白术PCR鉴定试剂盒中的特异性引物HBZ1和HBZ2,进行PCR扩 增：
将PCR反应溶液放入PCR自动扩增仪器中进行PCR扩增反应，反应程序设置为：94°C预变性3min，94°C变性45s，60~65°C复性45s，72°C延伸lmin，35个循环，最后72°C延伸 7min； (3) PCR产物进行电泳检测：取出PCR扩增产物5yL与加样缓冲液1yL混合，用1. 2% 琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果，在778bp处出现扩增条带的为河北白术。
【专利摘要】本发明公开了一种河北白术PCR鉴定试剂盒及鉴定方法，所述试剂盒中的特异性引物为HBZ1和HBZ2。其中HBZ1的序列为：5’-GGACATGACAGAAGTATG-3’；HBZ2的序列为：5’-TGCTGAGAGAAGCAAATC-3’；本发明提供了一种快速、准确鉴定河北白术的方法，可以广泛应用于河北白术中药选种育种、种植、采收储存、销售、临床应用各环节的品种鉴定，在鉴别中药真伪，打击伪品，加强中药质量监管，促进中药现代化发展方面具有重大意义。
【IPC分类】C12Q1-68
【公开号】CN104774948
【申请号】CN201510181371
【发明人】李敏, 陈强, 茅学群, 黄龙妹
【申请人】浙江工业大学
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年4月16日