用于生产重组肽的方法及所得到的肽的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物化学领域，并与生产肽的重组方法和生成的肽相关。特别地，本发 明涉及具有下列通式的肽：
[0002] A-Thr-Lys-Pro-B-C-D-X，其中：
[0003]A_0、Met、Met(0)、Thr、Ala、His、Phe、Lys、Gly
[0004] B_0、Gly、Asp、Trp、Gin、Asn、Tyr、Pro、Arg
[0005] C_0、Arg、Phe、Tyr、Gly、His、Pro、Lys
[0006] D_0、Val、Gly、Tyr、Trp、Phe、His
[0007] x-oh、och3、nh2，
[0008] 其中0是没有氨基酸残基，条件是如果A尹0,则B和/或C和/或D尹0,如 果B尹 0，则C和 / 或D尹 0，不包括肤Phe-Thr-Lys-Pro-Gly、Thr-Lys-Pro-Pro-Arg、 Thr-Lys_Pr〇-Arg-Gly〇
【背景技术】
[0009] 已知小肽显示极高的活性，在发生紊乱的器官中刺激自我愈合。众所周知，较小的 肽最初来源于动物组织，随后人们在实验室条件下学会了生产它们。
[0010] 含肽的医药产品能够再生受损体细胞，使丧失的功能恢复到受影响器官，并使其 恢复活力。三十多年前已开发含肽的医药产品；自此以后，已进行了数百次试验，证明了肽 在治疗和预防各种全身系统疾病以及单一器官-和全身-恢复活力中的效力。
[0011] 在体内，肽充当信息使者：它们将信息由一个细胞转移到另一细胞，从而使所有事 件能够良好并及时完成。如果一个细胞正常运行，则相应器官运转良好。如果发生失调，则 影响整个器官，导致疾病。显然，通过将缺失物质导入身体能够治疗疾病，但是该方法会完 全"宠坏"细胞，细胞会适当地终止正常运行。因此，需要使肽使者（peptidemessengers) 输送到细胞，使其发挥功能，从而身体将自我愈合。各器官具有储备干细胞的供应库。如果 该供应库完全耗尽，人存活100-110岁。肽对于所有哺乳动物是一样的。因此，如果将牛肽 (calfpeptide)导入到人类，人类身体将把其当作天然分子。主要的问题是发现如何从动 物器官分离肤。早在1971年由VladimirMorozov教授和VyacheslavHavinson教授在 MilitaryMedicalAcademy中发明了该技术。开发了医药产品，然后，基于此，制造了食物 增补剂，这是因为食物增补剂使用方便。在他们对老化过程及其影响方法的研究中，圣彼得 堡老年学研究所（St.PetersburgInstituteofGerontology)的员工得出结论：将肽导入 到小鼠实验组饮食使它们的预期寿命（lifeexpectancy)增加30-38%。随后，在老年学基 辅研究所（KievInstituteofGerontology)和圣彼得堡进行了对老年人的肽研究。这显 示死亡率几乎降低2倍，表现出肽的高老化保护（geroprotective)活性。肽医药产品的长 期研究和使用显示它们在不同年龄组患者中的效力高；然而，在老人（50多岁）中观察到特 别的效力。肽生物调节物的绝对优势为没有任何不良反应。26年来，超过1500万患有各种 病理的人接受该产品。它们的效力平均为75-95%。随着年龄和病理变化肽缺乏显著地加 快组织消耗和身体老化。事实上，细胞和组织充分发挥功能需要充足量的肽，这反过来，支 持基因发挥最佳功能。在对其特异性的细胞中发挥功能的肽在该处合成。因此，在病理变 化以及老化时，细胞功能被破坏；因而，同样地影响肽的再生。相应地，继而影响细胞功能。 因此，组织进程的退化，最终表现于临床。所以，在医学中小肽的应用是主要的创新之一，并 且通过刺激细胞增殖和组织再生可显著地减慢老化速度，并且延长细胞寿命。肽的另一重 要优点是它们的抗肿瘤作用。目前，在康复（身体恢复活力）和癌症预防中使用肽是最好 的不二之选，因为其不仅通过调节和同步化所有周期过程，而且通过提高细胞分裂的能力 使细胞和组织恢复活力，而没有异型（异型（atypia)为不正常的细胞结构，或异常）。 [0012] 当然，现阶段的技术中，由动物组织生产小肽是不切实际的，因为该方法非常昂 贵，更不用说生产方法的人道性。
[0013] 现代先进的生产方法包括使用重组微生物。最方便的微生物为大肠杆菌 (E.coli)。现有技术中已知适于实验室条件的大肠杆菌的商用菌株，例如大肠杆菌K12、大 肠杆菌0104。这些及类似的已知大肠杆菌菌株可用于获得生产请求保护的小肽的菌株。编 码相应靶标小肽的核酸可整合到适于实验室条件的任何已知菌株中。载体，例如细菌质粒、 病毒、病毒体、含噬菌体DNA的杂合载体、和质粒用于将DNA插入到宿主细胞中。这些载体 包括，比如粘粒和噬粒。
[0014] 此外，通过常规化学合成可生产肽。
[0015] 提出的肽解决了扩展用于刺激生殖功能和性功能以及治疗生殖功能障碍和性功 能障碍的工具范围的问题，该问题目前仍然适用。当前，使用心理疗法、抗抑郁药、抗焦虑 药、适应原（Adaptogens)以及维生素、一般植物类刺激物和饮食增补剂进行该病理的发病 机理治疗。该治疗长期、低效并伴随许多副作用。
[0016] 适于生殖功能和性功能的刺激物产生的最有效类型的生理活性物质之一为作为 内源性物质的，实质上不具有消极副作用的肽。
[0017] 我们自己的研究显示具有通式Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro的七肽Selank(内 源性产生的肽Tuftsin的合成类似物）可用作预防和治疗生殖功能障碍及性功能障碍的工 具（俄罗斯联邦专利第2404793号）。然而，七肽Selank的合成是多阶段的，这大大增加了 基于此的医药产品的成本；另外，在体内其受到强烈的蛋白水解，这降低了其对预防和治疗 生殖功能障碍及性功能障碍的刺激作用。
【发明内容】
[0018] 发明的目的是扩展具有生殖功能和性功能刺激活性的工具的范围。
[0019] 当实施本发明时实现的技术结果是增强预防和治疗生殖功能障碍及性功能障碍 的效力，降低疗程持续时间和药疗法的成本降低，其中提出具有下列通式的肽作为医药产 品：
[0020] A-Thr-Lys-Pro-B-C-D-X，其中：
[0021] A_0、Met、Met(0)、Thr、Ala、His、Phe、Lys、Gly
[0022] B_0、Gly、Asp、Trp、Gin、Asn、Tyr、Pro、Arg
[0023] C_0、Arg、Phe、Tyr、Gly、His、Pro、Lys
[0024] D_0、Val、Gly、Tyr、Trp、Phe、His
[0025] X-0H、0CH3、NH2，
[0026] 其中0指没有氨基酸残基。
[0027] 条件是如果A尹0,则B和/或C和/或D尹0 ;如果B尹0,则C和/或D尹0,不 包括肤Phe-Thr-Lys-Pro-Gly、Thr-Lys-Pro-Pro-Arg、Thr-Lys-Pro-Arg-Gly。
[0028] 在位置A、B、C、D和X的氨基酸残基的选择基于数据库rEROP-Moscow(http:// erop.inbi.ras.ru/)ZamyatinA.A.]中N末端和C末端氨基酸残基的相应位置上氨基酸残 基频率的生物信息学分析。基于在此位置上氨基酸残基大于50%发生率的标准进行这些 氨基酸残基的选择。该氨基酸残基样品通过单个肽的合成以及它们在活体模型中生殖功能 活性和性功能活性的刺激试验来试验性证实。通过试验确定药效团在肽中位置。已知任何 肽暴露于肽酶并降解为特定片段。为此，在合成Selank七肽片段：Thr-Lys、Thr-Lys-Pro、 Pro-Gly-Pro、Arg-Pro-Gly-Pro、Pro-Arg-Pro-Gly-Pro后，研究它们的活性。结果提供于 表4中。在该分析中，确定药效团：其为Thr-Lys-Pro。如研究（表5,实施例10)所示，显 示将单独试验性鉴定的氨基酸残基附加到C末端保持肽活性（刺激生殖功能和性功能），假 定肽中氨基酸残基数为3或大于4。四肽不具有生殖功能和性功能刺激活性。
[0029] 通过具有通式A-Thr-Lys-Pro-B-C-D-X的各种肽（不包括四肽）的定向合 成并通过使用这些肽作为用于预防和治疗生殖功能障碍及性功能障碍的生殖功能 及性功能刺激物实现提到的技术结果。我们自己的研究显示可将合成肽，即对应于 通式A-Thr-Lys-Pro-B-C-D-X的Thr-Lys-Pro三肤、Thr-Lys-Pro-Arg-Pro五肤和 Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Phe六肽推荐为生殖功能和性功能刺激物。
[0030] 具有通式A-Thr-Lys-Pro-B-C-D-X的全部肽（不包括四肽）推荐为生殖功能和性 功能刺激物，具有共同的模式，即在其分子结构中存在Thr-Lys-Pro三肽分子。
[0031] Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro七肤（Selank)用作对照。
[0032] 进行研究的结果显示具有通式A-Thr-Lys-Pro-B-C-D-X的肽（不包括四肽）具有 生殖功能和性功能刺激活性，并且可用作用于预防和治疗生殖功能障碍及性功能障碍的医 药产品。
[0033] 通式A-Thr-Lys-Pro-B-C-D-X的某些肽示于表1中。
[0034] 表 1
[0035]
【主权项】
1. 一种用于生产具有下述通式的重组肽的方法： A-Thr-Lys-Pro-B-C-D-X，其中 A_0、Met、Met (0)、Thr、Ala、His、Phe、Lys、Gly B_0、Gly、Asp、Trp、Gin、Asn、Tyr、Pro、Arg C_0、Arg、Phe、Tyr、Gly、His、Pro、Lys D_0、Val、Gly、Tyr、Trp、Phe、His x-oh、och3、nh2， 其中〇是没有氨基酸残基，条件是如果A#0,则B和/或C和/或D#0,如果B#0， 则C和/或D # 0,所述方法使用基于商用亲株获得的大肠杆菌菌株，其中插入适于在此类 细菌细胞中使用的商用载体，培养获得的菌株和分离所述肽，所述载体包含编码任意所述 肽的核酸。
2. -种具有下述通式的肽： A-Thr-Lys-Pro-B-C-D-X，其中 A_0、Met、Met (0)、Thr、Ala、His、Phe、Lys、Gly B_0、Gly、Asp、Trp、Gin、Asn、Tyr、Pro、Arg C_0、Arg、Phe、Tyr、Gly、His、Pro、Lys D_0、Val、Gly、Tyr、Trp、Phe、His X-OH、0CH 3、NH2， 其中〇是没有氨基酸残基，条件是如果A尹0,则B和/或C和/或D尹0,如果 B # 0，则 C 和 / 或 D # 0，不包括肤 Phe-Thr-Lys-Pro-Gly、Thr-Lys-Pro-Pro-Arg、 Thr-Lys-Pro-Arg-Gly，其中所述肽具有生殖功能和性功能刺激活性。
【专利摘要】本发明涉及生物化学及生物技术并且涉及生产具有性功能及生殖功能刺激活性的肽，所述肽具有下述通式：A-Thr-Lys-Pro-B-C-D-X，其中A为0、Met、Met(0)、Thr、Ala、His、Phe、Lys、Gly，B为0、Gly、Asp、Trp、Gln、Asn、Tyr、Pro、Arg，C为0、Arg、Phe、Tyr、Gly、His、Pro、Lys，D为0、Val、Gly、Tyr、Trp、Phe、His，X为OH、OCH3、NH2，其中0是没有氨基酸残基，条件是如果A≠0，则B和/或C和/或D≠0，且如果B≠0，则C和/或D≠0，不包括肽Phe-Thr-Lys-Pro-Gly、Thr-Lys-Pro-Pro-Arg、Thr-Lys-Pro-Arg-Gly。本发明还涉及通过基因工程方法生产所述肽的方法。
【IPC分类】C12R1-185, C12N15-63, C07K7-06, C07K5-10, C07K5-08, A61P15-12, A61P15-10
【公开号】CN104662034
【申请号】CN201380028491
【发明人】N·F·麦索多夫, L·A·安德烈耶娃, D·V·格里科夫
【申请人】"Ivix"有限公司
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2013年5月28日