一种依替巴肽线性肽树脂裂解的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及多肽化合物的裂解方法，具体地说，本发明是一种依替巴肽线性肽树 脂裂解的方法。 技术背景
[0002] 依替巴肽是人工合成的环状七肽，具有抗血小板凝集作用的糖蛋白II b/IIIa受体 拮抗剂、纤维蛋白元受体拮抗剂。本品选择性阻断粘着蛋白与糖蛋白II b/ III a的结合，同 时是大多数有关受体的相对弱的抑制，主要功能为抗血小板聚集，可用于急性冠脉综合症 中的抗血栓治疗。依替巴肽的分子式=C35H49N11O9S2，它的序列是：
【主权项】
1. 一种依替巴肽线性肽树脂的裂解方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：在Rink AM Resin树脂载体上使用经典固相合成方法，依此按照氨基酸顺序进行氨基酸缩合，得到依替 巴肽线性肽树脂，使用裂解液对依替巴肽线性肽树脂进行裂解，裂解温度为室温，裂解时间 为1-2小时，裂解反应完毕后，将裂解液倒入3-7倍体积的无水乙醚中，析出依替巴肽线性 肽粗肽，过滤得依替巴肽线性肽粗肽。
2. 根据权利要求1所述的裂解方法，其特征在于，裂解液为：TFA:TA:TIS:苯酚：EDT: 水=75-85:4-6:3-5:1-3:4-6:3-5。
3. 根据权利要求1所述的裂解方法，其特征在于，裂解液为：TFA:TA:TIS:苯酚：EDT: 水=80:5:4:2:5:4。
4. 根据权利要求1所述的裂解方法，其特征在于，本发明的方法，其中所述使用裂解液 对依替巴肽线性肽树脂进行裂解，两者的重量比例为：5ml :lg。
5. 根据权利要求1所述的裂解方法，其特征在于，裂解液的配制方法如下：首先称取 TFA放入容器中，开启搅拌后，依次加入相应比例的TA、TIS、苯酚、EDT、水，搅拌均匀后待 用。
6. 根据权利要求1所述的裂解方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：以Rink AM Resin树脂为载体，使用固相合成的方法依此顺序连接Fmoc-Cys (Trt)-OH、Fmoc-Pro-OH、 Fmoc-Trp (Boc) -OH、Fmoc-Asp (OtBu) -OH、Fmoc-Gly-〇H、Fmoc-HomoArg-〇H、Mpa (Trt)，连接 完毕后使用甲醇对依替巴肽线性肽树脂进行收缩并干燥，将干燥好的依替巴肽线性肽树脂 倒入配置好的裂解液中（TFA:TA:TIS:苯酚：EDT:水=80:5:4:2:5:4)进行裂解，得到依替 巴肽线性肽粗肽，裂解时间为1-2小时为最佳，反应温度为室温，反应结束后，将裂解液倒 入3-7倍乙醚当中析出粗肽，抽滤，使用少量乙醚洗涤滤饼5次后，抽干，得依替巴肽线性肽 粗肽。
7. 根据权利要求1所述的裂解方法，其特征在于，所述方法，步骤如下： 制备依替巴肽线性肽树脂 将60克0. 85mmol/g的Rink AM Resin树脂倒入固相合成仪中，加入200ml的DMF， 溶胀10分钟后，排掉溶液，再次加入200ml的DMF，再次溶胀10分钟，排掉溶液后，加入 200ml脱保护溶液（哌啶：DMF = 1:3)，搅拌15分钟后排掉溶液，再次加入200ml脱保护 溶液，搅拌15分钟后排掉脱保护液，使用DMF洗涤树脂3次，每次使用DMF200ml，洗涤完 成后排干溶液，将 89. 6 克 Fmoc-Cys(Trt)-OH、20. 7 克 Hobt，19. 3 克 DIC 加入 500ml 的 烧杯中，加入200mlDMF，搅拌溶解后，倒入固相合成仪中，反应3小时后，排掉溶液，使用 200mlDMF洗涤树脂两次后，加入200ml脱保护溶液（哌啶：DMF = 1:3)，搅拌15分钟后 排掉溶液，再次加入200ml脱保护溶液，搅拌15分钟后排掉脱保护液，使用DMF洗涤树 脂 3 次，按照 Fmoc-Cys(Trt)-OH 的连接方法依此连接 Fmoc-Pr〇-OH、Fmoc-Trp (Boc)-OH、 Fmoc-Asp (OtBu)-〇H、Fmoc-Gly-〇H、Fmoc-HomoArg-〇H、Mpa(Trt)，连接完毕后，加入 300ml 甲醇，对依替巴肽线性肽树脂进行收缩，重复该操作4遍，使依替巴肽线性肽树脂收缩彻底 后，取出后对其真空干燥，得到干燥的树脂138. 6g， 依替巴肽线性肽肽树脂裂解（TFA:TA:TIS:苯酚：EDT:水=80:5:4:2:5:4, KTC ) 分别称取80毫升TFA、5毫升TA、4毫升TIS、2毫升苯酚、5毫升EDT、水4ml倒入500ml 的烧瓶中，将烧瓶置于低温恒温反应浴中，设定温度为25°C，将13. Sg干燥好的树脂倒入烧 瓶中，搅拌反应1小时后，取除20ml的反应液抽滤，去除树脂得到滤液，将滤液倒入IOOml 无水乙醚中，析出大量白色固体，抽滤，使用少量乙醚洗涤滤饼5次后，抽干，得依替巴肽线 性肽粗肽，剩余裂解液继续反应1小时后，取出20ml的裂解液，过滤，除去树脂，将滤液倒 入IOOml无水乙醚中，析出大量白色固体，抽滤，使用少量乙醚洗涤滤饼5次后，抽干，得依 替巴肽线性肽粗肽，剩余的裂解液继续反应2小时后，取出20ml的裂解液，过滤，除去树脂， 将滤液倒入IOOml无水乙醚中，析出大量白色固体，抽滤，使用少量乙醚洗涤滤饼5次后，抽 干，得依替巴肽线性肽粗肽，剩余的裂解液继续反应2小时后，取出20ml的裂解液，过滤，除 去树脂，将滤液倒入IOOml无水乙醚中，析出大量白色固体，抽滤，使用少量乙醚洗涤滤饼5 次后，抽干，得依替巴肽线性肽粗肽。
【专利摘要】本发明公开了一种依替巴肽线性肽树脂的裂解方法，所述方法步骤如下：以Rink AM Resin树脂为载体，使用固相合成的经典方法依此顺序连接Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HomoArg-OH、Mpa(Trt)，连接完毕后使用甲醇对依替巴肽线性肽树脂进行收缩并干燥，将干燥好的依替巴肽线性肽树脂倒入配置好的裂解液中(TFA:TA:TIS:苯酚：EDT:水＝80:5:4:2:5:4)进行裂解，在室温下，裂解1-2小时得到依替巴肽线性肽粗肽。
【IPC分类】C07K1-06, C07K1-04, C07K7-06
【公开号】CN104610426
【申请号】CN201510005405
【发明人】冷国庆, 刘新宇, 王丽莉, 王彤, 徐馨, 秦研, 田辉, 张琪, 李迎新
【申请人】哈尔滨吉象隆生物技术有限公司
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年1月7日