胃液幽门螺旋杆菌感染检测方法
【技术领域】
[0001]一种胃液幽门螺旋杆菌感染检测试剂及其制备方法，属于酶分析技术领域。
【背景技术】
[0002]幽门螺杆菌或幽门螺旋菌，英文名Helicobacterpylori，简称Hp，革兰氏阴性、微需氧的细菌，生存于胃部及十二指肠的各区域内，它会引起胃黏膜轻微的慢性发炎，甚或导致胃及十二指肠溃疡与胃癌，是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌，长2.5?4.0 μπι，宽0.5?1.0 μπι。环境氧要求5?8%，在大气或绝对厌氧环境下不能生长，主要包括:使幽门螺杆菌穿透粘液层在胃上皮细胞表面定居的因素，对胃上皮细胞等起破坏作用的毒素因子，各种炎症细胞及炎症介质，免疫反应物质等。这些因素构成幽门螺旋杆菌感染途径的基本病理变化，即各种类型的急、慢性胃炎。幽门螺杆菌感染的症状主要是反酸、烧心以及胃痛、口臭。这主要是由于幽门螺杆菌诱发胃泌素大量分泌，而发生发酸烧心，而具有胃溃疡疾病的患者，幽门螺杆菌更是引起了主要症状胃痛的发生，口臭最直接的病菌之一就是幽门螺杆菌了。所发生的主要临床表现有:上腹部不适、隐痛，有时发生嗳气、反酸、恶心、呕吐的症状，病程较为缓慢，但是容易反复发作。患者感染幽门螺杆菌后产生多种致病因子，从而引起胃黏膜损害，临床疾病的发生呈现多样性，而且患者多会出现反酸、嗳气、饱胀感等等，均是感染幽门螺杆菌的患者比没有感染幽门螺杆菌的患者多数倍。幽门螺杆菌感染一般有时没有特别明显的症状，这时一般是通过检查来判断有无幽门螺杆菌感染的，幽门螺杆菌这种致病菌，幽门螺旋杆菌阳性的治疗方案包括两大类，一类是铋制剂为主的方案，如质子泵抑制剂。另一类是卫舒元复合益生菌的微生物学新方案，再加上两种抗菌素，最常用的是阿莫西林，甲硝唑。
[0003]卡式呼气试验自1983年通过胃镜取活检标本分离培养成功以来，对Hp感染的诊断已发展出了许多方法，包括有细菌学、病理学、血清学、同位素示踪、分子生物学等，如活组织镜检、幽门螺旋杆菌的分离培养、快速尿素酶试验、尿素呼气试验、尿氨排出试验、Hp金标法、血清学试验以及多聚酶链反应等。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种样品前处理简单，提取后可直接测定，简便、快速、灵敏、准确的胃液幽门螺旋杆菌检测试剂及其制备方法。
[0005]本发明反应装置由左侧对照区为醋纤维薄膜(1)，中间为过滤装置(2)，右侧测试区为浸有尿素溶液的醋纤维薄膜(3)，酚试剂(4)，碱性次氯酸钠试剂(5)，前处理液(6)组成。
[0006]本发明测定原理是通过前处理液中盐酸氨溴索使胃液粘稠物分解成可溶性液体，盐酸氨溴索为粘液溶解剂，临床上用于呼吸病人能增加呼吸道粘膜浆液腺的分泌，从而降低痰液粘度，促进肺表面活性物质的分泌，增加支气管纤毛运动，使痰液易于咳出，本品的巯基(-SH)结构可使粘蛋白的双硫(-S-S-)结构断裂，降低胃液粘稠度，碳酸氢钠也可以降低分泌物的粘稠度，使胃液内的幽门螺旋杆菌解离出来，加入到反应装置过滤器上，从反应装置上取下过滤器，游离的幽门螺旋杆菌随液体进入到反应孔上，幽门螺旋杆菌有强尿素酶作用，在与反应孔上醋纤维薄膜上尿素反应后，分解尿素产生二分子氨和一分子二氧化碳，加入酚试剂和碱性次氯酸钠溶液，氨在碱性介质中与苯酚及次氯酸反应，生成蓝色的吲哚酚，蓝色的吲哚酚与幽门螺旋杆菌的含量成正比。本发明前处理简单，快速、灵敏、准确、廉价的检测方法，适用于胃液幽门螺旋杆菌检测，可以作为幽门螺旋杆菌的重要检查指标。
【具体实施方式】
[0007]一、反应装置的制作
[0008]在长方形塑料模板上形成三个凹孔，凹孔分别覆盖有醋纤维薄膜，在左侧对照区薄膜上不浸润尿素溶液，在右侧薄膜上浸润有尿素溶液，并已干燥化处理，在塑料模板中央放置有过滤器，过滤器中央由粗海绵纤维制成，并覆盖在反应装置中间孔上。
[0009]二、试剂的配置
[0010]1.酸试剂:苯酸1g,亚硝基铁氰化钠(含2分子水)0.05g，溶于100ml去氨蒸馏水中。
[0011]2.碱性次氯酸钠溶液:氢氧化钠5g溶于去氨蒸馏水中，加安替福民8ml，再加蒸馏水1000ml，置棕色瓶内保存。
[0012]3.前处理液:含有30mg/L盐酸氨溴索、10克/L碳酸氢钠的磷酸盐-吐温20缓冲液，调节pH至8.0o
【附图说明】
[0013]图1反应装置示意图。
[0014]图2过滤装置示意图。
[0015]图3酚试剂示意图。
[0016]图4碱性次氯酸钠溶液试剂示意图。
[0017]图5前处理液示意图。
[0018]【具体实施方式】:
[0019]实施例1
[0020]1.取待检患者胃液200 μ 1，加入到2ml前处理液中剧烈震荡，静至lOmin，分别取300 μ I经前处理液处理的溶液加入到反应装置过滤孔中，待过滤完成后取下过滤装置，液体进入反应区，加入酚试剂和碱性次氯酸钠溶液，5分钟后观察颜色变化。
[0021]2.结果判定:如测定孔为蓝色，对照孔为无色或未改变颜色，说明幽门螺旋杆菌阳性；如测定孔、对照孔均为无色或未改变颜色，说明幽门螺旋杆菌阴性。
【主权项】
1.一种胃液幽门螺旋杆菌感染检测方法，其特征在于取待检患者胃液200 μ 1，加入到2ml前处理液中剧烈震荡，静至lOmin，取300 μ I经前处理液溶解的胃液加入到反应装置过滤器孔中，待完全过滤后取下过滤装置，液体进入反应区，加入酚试剂和碱性次氯酸钠溶液，观察反应区颜色变化。
2.按照权利要求1所述的胃液幽门螺旋杆菌感染检测方法，其特征在于所述反应装置，中间为过滤装置，左侧对照区为醋纤维薄膜，右侧测试区为浸有尿素溶液的醋纤维薄膜。
3.按照权利要求1所述的胃液幽门螺旋杆菌感染检测方法，其特征在于所述的前处理液为含有30mg/L盐酸氨溴索、10克/L碳酸氢钠的磷酸盐-吐温20缓冲液。
4.按照权利要求1所述的胃液幽门螺旋杆菌感染检测方法，其特征在于所述的酚试剂为苯酚10g，亚硝基铁氰化钠(含2分子水)0.05g，溶于100ml去氨蒸馏水中制成。
5.按照权利要求1所述的胃液幽门螺旋杆菌感染检测方法，其特征在于所述的碱性次氯酸钠溶液为氢氧化钠5g溶于去氨蒸馏水中，加安替福民8ml，再加蒸馏水100ml，置棕色瓶内保存。
【专利摘要】本发明公开了一种胃液幽门螺旋杆菌检测试剂及其检测方法，属于酶分析技术领域，本发明配制的试剂，通过盐酸氨溴索使胃液粘稠物分解成可溶性液体，使胃液内的幽门螺旋杆菌解离出来，加入到过滤器上，从反应装置上取下过滤器，游离的幽门螺旋杆菌随前处理液流到反应孔上，加入酚试剂和碱性次氯酸钠溶液，幽门螺旋杆菌有强尿素酶作用，在与醋纤维薄膜上的尿素反应后，分解尿素产生二分子氨和一分子二氧化碳，氨在碱性介质中与苯酚及次氯酸反应，生成蓝色的吲哚酚，蓝色的吲哚酚与幽门螺旋杆菌的含量成正比。本发明前处理简单，快速、灵敏、准确、廉价的检测方法，适用于胃液幽门螺旋杆菌检测，可以作为胃液幽门螺旋杆菌检测的重要检查指标。
【IPC分类】C12Q1-04, C12Q1-58, C12R1-01
【公开号】CN104561241
【申请号】CN201510011403
【发明人】李立和, 王彦平, 常玉芝
【申请人】天津市宝坻区人民医院
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月9日