一种氯胺酮人工抗原的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种氯胺酮人工抗原的制备方法。
【背景技术】
[0002] 氯胺酮（KET)是苯环己哌陡（phencyclidine)的衍生物，属于非鸦片系麻醉科药 物，临床上用作手术麻醉剂或麻醉诱导剂，具有一定的精神依赖性潜力。由韦恩州立大学克 雷格教授研发。于1962年交由派克-戴维斯药厂开发，作为较安全的麻醉药，以取代当年 副作用大的的天使尘（phencyclidine,PCP)，除了麻醉作用外，氯胺酮亦因其镇痛作用强， 直至目前仍广泛应用。目前本药也被兽医广泛使用，并在发展中国家被用作麻醉剂，其结构 式为：
[0003]
【主权项】
1. 一种氯胺酮人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 制备人工半抗原： (a) 将盐酸氯胺酮溶于纯化水，滴加氨水，使之变混；用二氯甲烷萃取，转干，得到白色 固体产物I ;TLC:层析液为乙酸乙酯：石油醚=I: I (v/v)，产物Rf =0.8; (b) 将产物I溶于无水丙酮中，加入300mg无水碳酸钾、363ul溴乙酸乙酯，加热至 70-75°C回流搅拌反应22小时以上；反应结束后，过滤，将滤液减压蒸馏，转干得黄色油状 液体11;!1(： :石油醚=1:1(>八），产物1^==0.9; (c) 加入的四氢呋喃,油状液体II溶解,然后再加入甲醇、IN氢氧化钠，（反应比例为油 状液体II :四氢呋喃：甲醇：IN氢氧化钠=IOOmg : I. 93ml :2. 43ml :9. 65ml )，室温反应16小 时以上；反应结束后用IN盐酸调pH=3. 57-3. 59 ;用乙酸乙酯萃取，合并所有有机相，用无水 硫酸镁干燥，过滤，滤入圆底烧瓶中，转干，得黄色油状氯胺酮半抗原II ;TLC :层析液为95% 乙醇：氨水：二氯甲烧：1，4_二氧六环=8: 1: 10: I (v/v)，产物Rf =0.4?0.5; (2) 制备氯胺酮人工抗原： (d) 将氯胺酮半抗原II溶于N，N-二甲基甲酰胺中（DMF)，加入N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS)、环己基碳酰二亚胺（DCC)，（反应比例为氯胺酮半抗原II :DMF:NHS:DCC= 20mg:lml: llmg: 19mg),室温搅拌反应18小时以上,反应结束后离心取上清液记为A液； (e) 将氯化钠与十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠以摩尔比为78. 3:4. 2:1溶于双 蒸水中，制备钠离子浓度为〇. lmol/L的PBS缓冲液，pH为7. 2~7. 4 ; ⑴将牛丙种球蛋白（BGG)溶于PBS缓冲液中，得到浓度为5mg/ml的B液； (g) 将A液缓慢滴加到B液，A液与B液的体积比为1:5,得到的混合液在2-8°C条件 下静置保存过夜，得到人工抗原混合液； (h) 将人工抗原混合液于PBS缓冲液中透析，透析结束后离心取上清液即得到人工抗 原：氯胺酮-牛丙种球蛋白。
【专利摘要】本发明提供了一种氯胺酮人工抗原的制备方法，第一步为半抗原的制备及检测：以盐酸氯胺酮与溴乙酸乙酯为原料通过游离，接臂，水解，反应得到含羧基的半抗原；第二步为人工抗原的制备与检测：通过碳二亚胺法使之与牛丙种球蛋白(BGG)结合制备氯胺酮的人工抗原即氯胺酮-牛丙种球蛋白。所制备的氯胺酮人工抗原可进行动物免疫，取得相应的氯胺酮抗体，可用于各种氯胺酮类免疫分析法的研究，为氯胺酮的检测提供更加方便快速准确的途径。
【IPC分类】C07K14-47, C07K1-107
【公开号】CN104558140
【申请号】CN201310522215
【发明人】董媛媛, 韩洁茹
【申请人】艾博生物医药(杭州)有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月29日