一种大花还亮草生物碱甲和大花还亮草生物碱乙的制备工艺及其对肿瘤细胞的细胞毒作用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及天然药物化学领域。具体的，涉及一种大花还亮草生物碱甲和大花还 亮草生物碱乙的生产工艺及其对肿瘤细胞的细胞毒作用。
【背景技术】
[0002] 肿瘤是危害人类健康的主要疾病之一，目前，化疗、放疗、手术是当今治疗肿瘤的 常规手段，但毒副反应较大。随着对肿瘤研宄的深人，传统中草药在肿瘤治疗方面已经得 到广泛应用，特别是随着细胞生物技术的不断发展，一些常用抗癌中草药作用机制的研宄 取得了突破性进展。据统计，我国当前已对药用植物中28个科（属）的3000多种以上中 草药进行了抗癌筛选，其中含有抗癌活性成分的中草药有200种左右。发明人在民间习 用草药调查时，发现了草药'大花还亮草'。大花还亮草为毛莨科翠雀属植物Delphinium anthriscifoliumvar.majus的干燥全草，《中国植物志》记载分布于贵州，四川东部，陕西 南部，湖北及安徽等地。为我国特有植物，全草可入药，有清热解毒，祛痰止咳之功效 [1]。我 们在广西隆林、贺州、金秀、凌云等地都发现了该植物的分布，当地壮族群众主要将其用于 治疗风湿痹痛，各种痈疮癣癞等症，效果显著。发明人对该药材开展了系统的化学分离工 作，并从中提取分离制备了新化合物大花还亮草生物碱甲（AnthriscifolconeA)和大花还 亮草生物碱乙（AnthriscifolconeB)，通过细胞学实验，发现这两种化合物对多个肿瘤细 胞具有一定的细胞毒作用，可以作为开发抗肿瘤药物的潜在化合物，故提出此发明。
【发明内容】
[0003] 本发明化合物大花还亮草生物碱甲（AnthriscifolconeA)和大花还亮草生物碱 乙（AnthriscifolconeB)为新发现的18C降二猫生物碱，可以从大花还亮草Delphinium anthriscifolium中提取分离制备。具体步骤如下：药材干燥全草粉碎成粗粉，采用0. 05? 0. 15mol无机酸水溶液（盐酸、硫酸、磷酸）提取，在静态或动态下，室温或加热（包括浸渍、 渗漉、回流、微波、煎煮等）提取，提取溶剂用量为药材的5?15倍，提取次数为1?3次，酸 水提取液过滤合并后，采用无机碱（浓氨水、氢氧化钠或氢氧化钾水溶液）调节pH= 9? 10后，采用乙酸乙酯或氯仿萃取多次（3次以上）萃取的有机液浓缩后，回收去除有机溶剂， 得有机溶剂萃取物。有机溶剂萃取物用适量甲醇溶解后，用适量硅胶（200?300目）拌样， 进行硅胶柱层析，以氯仿-甲醇（含1%二乙胺）溶液进行洗脱，根据组分的分布和流出顺 序，初步分成A、B、C、D四个镏分。
[0004]A镏分采用反向硅胶（ODS)中压柱层析，以甲醇-水（5%-95%)为洗脱剂，开展 梯度洗脱，以TLC斑点指导合并分离，得大花还亮草生物碱甲（AnthriscifolconeA)。
[0005] B馏分首先采用凝胶柱层析（SephadexLH-20)甲醇洗脱，收集无黄酮类成分部 分，去除溶剂后，进行硅胶柱层析，采用环己烷-丙酮混合溶液洗脱（10 : 1)，以TLC斑点指 导合并分离得大花还亮草生物碱乙（AnthriscifolconeB)。
[0006] 分离获得的大花还亮草生物碱甲（AnthriscifolconeA)和大花还亮草生物碱乙 (AnthriscifolconeB)结构式如下：
[0007]
【主权项】
1. 从大花还亮草Delphiniumanthriseifolium中提取制备大花还亮草生物碱甲 (AnthriscifolconeA)和大花还亮草生物碱乙（AnthriscifolconeB)的制备工艺；且大 花还亮草生物喊甲（AnthriscifolconeA)和大花还亮草生物喊乙（AnthriscifolconeB) 对人肿瘤细胞PC3,PC3-RTX，SUNE1，H0NE1，A549均有一定的细胞毒作用，具有开发成抗肿 瘤药物的潜在价值。
2. 权利要求1所述的两化合物的结构式如下：
结构式：大花还亮草生物碱甲（&)，大花还亮草生物碱乙（R2)。
3. 权利要求1所述的两个化合物的提取工艺为： 3. 1 大花还亮草（Delphiniumanthriscifoliumvar.Majus)全草粗粉，米用 0? 05 ? 0. 15mol无机酸水溶液（盐酸、硫酸、磷酸）提取； 3. 2酸水提取液采用无机碱调节pH= 9?10后，采用乙酸乙酯或氯仿等有机溶剂萃 取，萃取溶液减压回收去除溶剂后，首先采用硅胶柱层析，用氯仿-甲醇（含1 %二乙胺）溶 液进行洗脱，洗脱液回收去除溶剂后，按流出先后分成A、B、C、D，4个馏分；A馏分采用反向 硅胶（0DS)中压柱层析，以甲醇-水（5%?95%)为洗脱剂，梯度洗脱，分离得大花还亮草 生物碱甲（AnthriscifolconeA) ;B馏分首先采用凝胶柱层析（SephadexLH-20)甲醇洗 脱，去除黄酮类成分，收集无黄酮反应馏分上硅胶柱层析，采用环己烷-丙酮（10 : 1)溶液 洗脱，分离得到大花还亮草生物碱乙（AnthriscifolconeB); 3. 3有关上述提取工艺的说明： 1) 3. 1所述提取方法可为：浸渍、渗漉、超声、回流、微波、煎煮提取等多种方法； 2) 3. 2所述调节pH的无机碱为：浓氨水、氢氧化钠或氢氧化钾水溶液。
4. 权利发求1所述的大花还亮草生物碱甲（AnthriscifolconeA)和大花还亮草生物 碱乙（AnthriscifolconeB)具有对肿瘤细胞的细胞毒作用，上述化合物有开发成抗肿瘤药 物的潜力。
【专利摘要】一种大花还亮草生物碱甲和大花还亮草生物碱乙的制备工艺及其对肿瘤细胞的细胞毒作用。属医药技术领域，发明公开了种从大花还亮草Delphinium anthriscifolium中提取制备新化合物大花还亮草生物碱甲(Anthriscifolcone A)和大花还亮草生物碱乙(Anthriscifolcone B)的制备工艺，大花还亮草生物碱甲(Anthriscifolcone A)和大花还亮草生物碱乙(Anthriscifolcone B)对人肿瘤细胞PC3，PC3-RTX，SUNE1，HONE1，A549均有定的细胞毒作用，具有开发成抗肿瘤药物的潜在价值。
【IPC分类】A61P35-00, C07D491-113
【公开号】CN104557958
【申请号】CN201510034092
【发明人】蓝鸣生, 王硕, 周小雷, 陈路
【申请人】广西壮族自治区药用植物园
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月23日